人参皂苷溶血测定的实验条件研究
人参皂甙药理作用研究进展
人参皂甙药理作用研究进展刘睿;李迪;李勇【摘要】人参是我国传统名贵中草药,皂甙为其主要活性成分.近年对人参皂甙的研究进展及成果颇多,揭示了其在抗肿瘤、抗衰老、增加免疫、防治心血管疾病等方面的作用,本文将以近年来国内外研究人参皂苷的报道为基础,对其药理作用等研究进展进行综述,为进一步深入研究人参皂苷类药物提供思路.%Ginseng is a representative crude drug in traditional Chinese medicine,and its main active component is ginsenoside.There are great progress and many outcomes of the studies about ginsenoside,which indicates its effects in immune system,anti-tumor,anti-aging,resistance to oxidation,anti-virus and other pharmacological effects.According to domestic and foreign research reports of ginsenoside in recent years,this article reviewed main pharmacological effects of ginsenosides,and provided relevant information for its further development and utilization.【期刊名称】《中国食物与营养》【年(卷),期】2017(023)010【总页数】5页(P68-72)【关键词】人参皂苷;药理作用;研究进展【作者】刘睿;李迪;李勇【作者单位】北京大学医学部营养与食品卫生学系,北京100191;北京大学医学部营养与食品卫生学系,北京100191;北京大学医学部营养与食品卫生学系,北京100191【正文语种】中文作为一种名贵中草药，人参在我国已有几千年的应用历史，人参具有增强免疫力、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗疲劳等多种药理活性，研究证实，这与人参含有的多种生物活性物质有关，如人参皂甙、肽类、氨基酸、植物甾醇类、有机酸等，其中人参皂甙是迄今为止研究最多的活性物质，有着显著的生理活性[1]。
保健食品中总皂苷的测定
1 总皂苷的测定（来源于《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版））1.1 试剂1.1.1 Amberlite-XAD-2大孔树脂，Sigma化学公司、U.S.A.。
1.1.2 正丁醇：分析纯。
1.1.3 乙醇：分析纯。
1.1.4 中性氧化铝：层析用，100-200目。
1.1.5 人参皂甙Re：购自中国药品生物制品检定所。
1.1.6 香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。
1.1.7 高氯酸：分析纯。
1.1.8 冰乙酸：分析纯。
1.1.9 人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品0.020g，用甲醇溶解并定容至10.0mL，即每毫升含人参皂苷Re2.0 mg1.2 仪器1.2.1 比色计1.2.2 层析柱1.3 实验步骤1.3.1 试样处理1.3.1.1 固体试样：称取1.000 g左右的试样（根据试样含人参量定），置于100 mL 容量瓶中，加少量水，超声30 min，再用水定容至100 mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0 mL进行柱层析。
1.3.1.2 液体试样：含乙醇的补酒类保健食品，吸取1.0 mL试样放水浴挥干，用水浴溶解残渣，用此液进行柱层析。
非乙醇类的液体试样：吸取1.0 mL试样（假如浓度高、或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）进行柱层析。
1.3.2 柱层析：用10mL注射器作层吸管，内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。
先用25mL70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0mL已处理好的试样溶液（见1.3.1），用25mL水洗柱，弃去洗脱液，用25mL70%乙醇洗脱人参皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。
以此作显色用。
1.3.3 显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.8mL 高氯酸，混匀后移入5mL 带塞刻度离心管中，60℃水浴上加入10min ，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0mL ，摇匀后，以1cm 比色池于560nm 波长处与标准管一起进行比色测定。
人参皂苷Rg1的药效学和药代动力学研究进展
284
学 报 Journal of China Pharmaceutical University
第 38 卷
1 人参皂苷 Rg1 的主要药理作用
111 Rg1 对中枢神经系统的作用 Rg1 对中枢神经系统的药理作用主要集中在对神经元
的营养 、保护[2] ,延缓神经元的凋亡 ,故用于治疗脑部疾病 的研究 。研究主要采用细胞模型 ,通过生化分析和分子生 物学手段进行检测 。 11111 治疗帕金森病 ( Parkinson′s Disease , PD) 多巴胺能 神经元的退化丢失是 PD 的发病机制之一 。为了模拟这一 机制 ,目前以 12甲基242苯基21 ,2 ,3 ,62四氢吡啶 (12methyl242 phenyl21 ,2 ,3 ,62tetrahydropyridine ,MPTP) 、多巴胺 、谷氨酸等 作为诱导物建立了多种 PD 病理模型[3- 5] 。在对上述病理 模型的研究中发现 ,Rg1 可以减少 、延缓神经元的凋亡 。其 机理主要是 Rg1 通过增强超氧化物歧化酶的活性和 Bcl22 基因的表达 (Bcl22 蛋白可以去除活性氧基团 、阻断 caspase2 3 的产生和活化) ,以去除活性氧 ,从而达到抗氧化 、阻断 c2 Jun 氨基末端激酶 (c2jun N2terminal kinase ,JNK) 信号通路 、阻 断活化的 caspase23 的产生 ,以及阻断 Ca2 + 内流 ,最终延缓 神经元的凋亡 ,达到保护神经的作用[3 ,5- 7] 。 11112 治疗阿尔茨海默病 (Alzheirmer′s Disease ,AD) AD 是常见的脑部疾病之一 ,在其众多的发病机制中 ,最被广泛 接受的是β淀粉样蛋白 (β2amyloid ,Aβ) 的大量沉淀聚集导 致了 AD。而 Rg1 可 降 低 脑 内 Aβ 含 量[8] , 这 可 能 是 由 于 Rg1 可以提高脑啡肽酶的表达 ,脑啡肽酶是脑内 Aβ的主要 降解酶 ,AD 病人脑内脑啡肽酶含量降低 ,因此该酶是治疗 AD 的靶点 ,对治疗 AD 有积极意义[9] 。在活体小鼠病理模 型上研究发现 ,Rg1 还可以提高胆碱合成所需的胆碱乙酰 转移酶的活性 ,并抑制胆碱灭活所需的乙酰胆碱酯酶的活 性 ,提高脑内胆碱含量 ,从另一角度治疗 AD[10] 。
人参片的鉴定实验报告
人参片的鉴定实验报告实验目的：本实验旨在通过对人参片的鉴定，了解其化学成分和药理作用，以及评价其质量。
实验原理：人参片是以生晒、砂炒或红参为原料，经过处理和加工而制得的片状制剂。
人参片含有多种活性成分，如人参皂苷、人参多糖、挥发油和人参酮等。
其中，人参皂苷是药理活性最为明显的成分，具有兴奋中枢神经、增强机体免疫功能、抗氧化、改善记忆力和抗肿瘤等作用。
实验步骤：1. 人参片外观检查：观察人参片的形状、颜色和气味，记录其外观特征。
2. 酸不溶性灰分测定：取一定量的人参片，将其加热至灰烬并在550℃±25℃下灼烧2小时，冷却后称重，计算酸不溶性灰分的含量。
3. 总皂苷含量测定：按照适当的方法，提取人参片中的总皂苷，并用紫外分光光度法测定总皂苷的含量。
4. 薄层色谱鉴别：取一定量的人参片，进行薄层色谱检测，比较色谱图与标准品的相似度。
5. 老年式药材指纹图谱鉴别：采用高效液相色谱和质谱技术，建立人参片的指纹图谱，并与标准品进行比对。
6. 药理效应观察：利用适当的方法，评价人参片的药理效应，如中枢兴奋作用、免疫调节作用和抗氧化能力等。
实验结果及分析：根据人参片的外观特征和气味，清晰地观察到片状、棕黄色且具有独特的人参味道。
经过酸不溶性灰分测定，测得其酸不溶性灰分的含量为X%。
通过紫外分光光度法测定，得到人参片中的总皂苷含量为X mg/g。
经过薄层色谱和老年式药材指纹图谱鉴别，证实人参片的组成与标准品相似度高。
在药理效应观察中发现，人参片具有明显的中枢兴奋作用、免疫调节作用和抗氧化能力。
结论：通过本实验的鉴定，可以得出以下结论：1. 根据外观特征和气味，判断人参片为片状、棕黄色且具有人参味道。
2. 经过酸不溶性灰分测定，确定人参片的酸不溶性灰分含量。
3. 利用紫外分光光度法测定了人参片中的总皂苷含量。
4. 通过薄层色谱和老年式药材指纹图谱鉴别，验证了人参片的质量。
5. 在药理效应观察中，人参片表现出中枢兴奋作用、免疫调节作用和抗氧化能力等。
人参皂苷具有很高的抗肿瘤作用
人参皂苷具有很高的抗肿瘤作用肿瘤严重危害人类健康，目前肿瘤的主要治疗方法包括手术、放疗、化疗和生物治疗。
肿瘤化疗的目的在于通过化疗药物杀伤肿瘤细胞，促进肿瘤细胞的死亡或阻止其增殖。
但绝大多数药物其细胞毒性缺乏特异性，造成正常细胞的死亡，特别是增生活跃的造血干细胞，导致骨髓移植及全身毒性等并发症，影响治疗效果和患者依从性。
因而近年来从天然药物中寻找高效低毒的抗肿瘤药物成为研究热点。
人参皂苷Rh2是从人参中提取的天然活性成分，众多研究表明，其具有很高的抗肿瘤活性，而对正常细胞无毒副作用，与其它化疗药物（如顺铂）联合应用有协同作用。
人参皂苷Rh2抗肿瘤机制非常广泛，但主要通过调控肿瘤细胞增殖周期、诱导细胞分化和凋亡来发挥抗肿瘤作用。
将肿瘤细胞诱导分化成正常细胞有利于控制肿瘤发展，诱导肿瘤细胞凋亡使细胞解体后形成凋亡小体，不引起周围组织炎症反应。
人参皂苷Rh2也可以通过调节和增强机体免疫功能，发挥其抗肿瘤作用。
1、人参皂苷Rh2对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导分化作用。
曾小莉等以MTT法、光镜、电子显微镜观察人参皂苷Rh2对SMMC-7721细胞增殖、形态、超微结构的影响。
用免疫组化染色和ELISA法检测细胞浆中甲胎蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）合成情况，酶促反应试剂盒检测细胞浆中碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）和γ谷氨酰转肽酶（γ-glutamyltranspeptidase, γ-CT）活性，放射免疫法检测细胞AFP和白蛋白（albumin,Alb）分泌量，并观察人参皂苷Rh2对以上指标的影响。
结果表明人参皂苷Rh2以时间依赖性和浓度依赖性抑制SMMC-7721细胞增殖，10μg/ml人参皂苷Rh2作用6天抑制率达50%；而20μg/ml人参皂苷Rh2作用4天抑制率近50%。
经20μg/ml人参皂苷Rh2作用4天，肝癌细胞形态及亚细胞结构向正常肝细胞方向逆转。
人参皂苷水溶液热稳定性研究
水溶液在常压受热条件下，热稳定性差。受热时 间对人参皂苷水溶液的主要组分有何影响，影响 有多大，关系着人参皂苷提取物制备过程中提取、 浓缩等重要环节。本实验以红参须为研究对象， 二醇型人参皂苷 Rb1、Rc 和 Rd、三醇型人参皂苷 Rg1 和 Re 为检测指标， 采用 HPLC 测定其含量
[4-6]
作者简介： 余潇苓，女，硕士，研究实习员 Tel: (0571)87071670
5 种人参皂苷在加热 6 h 内，发生 在常压受热条件下，人参皂苷水溶
不同程度的降解反应，二醇类人参皂苷 Rb1、Rc 和 Rd 在加热 2~3 h 时，含量呈明显下降趋势，人参皂苷 Rd 降解速率最 液主要成分人参皂苷 Rg1、Re、Rb1、Rc 和 Rd 的含量，随加热时间延长而不断下降，3 h 后下降速率减缓。三醇类人参
表 2 回收率试验结果(n=6) Tab 2 Results of recovery tests(n=6)
人参 皂苷 Rg1 已知量 / mg 0.617 0 0.617 0 0.617 0 加入量 / mg 0.637 5 0.637 5 0.637 5 0.637 5 0.637 5 0.637 5 0.743 5 0.743 5 0.743 5 0.743 5 0.743 5 0.743 5 1.657 1.657 1.657 1.657 1.657 1.657 1.272 1.272 1.272 1.272 1.272 1.272 0.804 0 0.804 0 0.804 0 0.804 0 0.804 0 0.804 0 测得量 / mg 1.268 9 1.247 0 1.263 9 1.253 7 1.265 9 1.278 7 1.471 3 1.468 8 1.476 6 1.474 6 1.496 6 1.483 5 3.449 3.407 3.412 3.435 3.395 3.422 2.467 2.455 2.444 2.434 2.448 2.426 1.562 5 1.567 0 1.577 0 1.555 5 1.559 5 1.571 8 回收率 / % 102.26 103.51 101.48 99.87 101.78 103.79 98.43 98.10 99.16 98.88 101.84 100.08 102.51 99.96 100.28 101.70 99.29 100.89 102.53 101.61 100.77 99.95 101.10 99.36 99.18 99.75 100.98 98.31 98.81 100.33 99.6 1.00 100.9 1.13 100.8 1.17 99.4 1.38 102.1 1.41 平均回 收率 /% RSD/ %
HPLC法测定西洋参口服液中人参皂苷Re的含量
序号 浓度(pg/mL)
峰面积
1 11.7247 17698
2 23.4494 35156
3
35.1741 52557
4 58.6235 88126
5 93.7976 140968
6 117.2470 176590
回归方程为:A=1506.3C-176.15
R= 1.00000
结果表明，人参皂昔 Re 在 11.7247 M，g/mL - 117.2470 p. g/mL
III级电磁环境条件下，工作频带内信噪比或信干比完全基 本能够满足系统性能要求，装备基本能够完全发挥其作战效
能。以通信系统为例，通信距离满足指标要求，话音质量达到
3 ~ 4级，数传正确率达到80%o 结束语
随着高技术航电武器装备的发展和运用，当前和未来战场
的电磁环境正变得越来越复杂，对机载电子设备的威胁日益增
2.4线性关系考察 称取约15mg人参皂昔Re对照品，置50ml容量瓶，用甲醇 溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。然后精密量取对照品溶
液不同体积，置适当的容量瓶中，用甲醇稀释制成不同浓度的
对照品溶液，采用上述色谱条件，注入液相色谱仪，分别精密量
取IOjiL,并记录色谱图。纵坐标是峰面积(A)为,横坐标是浓度 (C),进行线性回归,并计算R,下表2为测定结果。
范围内线性关系很好。
2.5精密度试验 取IOjxL线性下浓度为58.6235 口g/mL的人参皂昔Re对 照品溶液注入液相色谱仪，重复进样6次测定，考察色谱图峰面
积，下表3为结果。Biblioteka 表3测定结果(精密度试验)
序号 峰面积
1 88131
2 88234
3 88267
人参药理活性的研究进展
人参药理活性的研究进展药科学院摘要：人参是驰名中外的名贵药材,其研究和应用已受到国内外的普遍重视。
随着对人参研究的深入和发展,人参的其药理作用已逐渐被发现。
对人参主要活性成分及药理作用研究进展做了简要概述,为其研究开发提供有价值的参考。
关键词：人参，药理活性，研究进展人参味五加科植物人参panax ginseny C.A.Meyer的干燥根。
味甘微苦、性温，有大补元气、生津止渴、安神等功效。
主治劳伤虚损、食少倦怠、反胃吐食、眩晕头痛、阳痿、尿频、清渴、妇女崩漏、小儿悸惊及久虚不复等一切气血津液不足之症。
1 化学成分1.1人参皂甙医学和药理研究证明,人参皂甙为人参的主要有效成分之一,它是人参根的主要生理活性物质。
我国科技人员现已从国产人参根中分离出10种人参皂甙：Ro、Rbl、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rgl、Rg2、Rg3。
从人参茎叶中分离鉴定出Rbl、Rb2、Rc、Rd、Re、20—glc—Rf、Rgl、Rg2、Rg3、Rhl、Rh2、Rh3、OR--人参皂甙Rh2和人参皂甙F2等14种单体，从人参果实中分离出Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2、20--（R）--Rg2等8种人参皂甙。
按其甙元的化学结构，人参皂甙可分为三类：原人参二醇( PPD) 类,包括Rb1 、Rb2 、RC、Rd、Rh2 等；原人参三醇(PPT) 类,包括Re 、Rf 、Rg1 、Rg2 、Rhr 等；齐墩果酸(OA) 类,如Ro。
1.2 人参多糖人参含有的糖类成分主要有单糖、低聚糖和多糖，有一定生理活性的人参糖类成分为人参多糖。
人参多糖主要含酸性杂多糖和葡萄糖。
这些人参多糖都会有一定量的多肽，所以实际上人参糖肽为人参中天然存在的生物活性物质。
1.3 其他人参中还含有大量挥发油、某些氨基酸和微量元素、维生素及酶类物、人参炔醇、麦芽酚、腺嘌呤核苷等活性物质。
由于人参的重要药用价值及经济意义, 故人参的研究早已为各国所重视。
人参皂苷的提取
第一章综述人参皂苷的简介人参为五加科植物人参(Panax ginseng)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。
其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。
人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。
人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。
经现代医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。
人参皂苷（ginsenoside，GS)是人参的主要有效成分，现已明确结果的GS单体约有40余种；在人参中的含量在4%左右。
其中研究最多且与肿瘤细胞凋亡最为相关的为Rg3与Rh2。
众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活性，对正常细胞无毒副作用，与其他化疗药物（如顺铂）联合应用有协同作用。
人参皂苷通过调控肿瘤细胞增殖周期、诱导细胞分化和凋亡来发挥抗肿瘤作用。
将肿瘤细胞诱导分化成正常细胞有利于控制肿瘤发展，诱导肿瘤细胞凋亡使细胞解体后形成凋亡小体，不引起周围组织炎症反应。
Popovich等研究认为，人参皂苷可以促进人白血病细胞的凋亡，其途径与地塞米松相识，均为受体依赖性。
目前我国对人参皂苷的提取分离方法、制剂工艺、抗肿瘤作用机制以及临床应用等方面做了大量研究，而且已经有人参皂苷的新产品推向市场。
人参皂苷成分人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。
到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50余种人参皂苷。
Rh2：具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用。
对癌细胞具有明显的抗转移作用，可配合手术服用增强手术后伤口的愈合及体力的恢复.Rg：具有兴奋中枢神经，抗疲劳、改善记忆与学习能力、促进DNA、RNA合成的作用。
健康教育在老年慢性阻塞性肺疾病中的应用
践 中， 加强对 Ｃ Ｐ Ｏ Ｄ患者 的健 康教育 对预 防并发 症 、 延缓 病情 发展 、 改善肺功能 、 提高生活质量具有重要意义 ， 现报道如下 。
１ 资 料 与 方 法 选取 ２０ ０ ８年 ５月 一 ０９年 １ 我 院 收 治 的住 院 患 者 ３ ２０ ２月 ０ 例 ， 符合 Ｃ Ｐ 的诊断 标准 ，度 溶 血 率 与 空 白 辅 料 组 比 较 ， 异 无 统 计 学 意 义 （ ＞ 差 Ｐ
００ ） ．５ 。见 表 １ 。
浓 度 药 物 对 红 细胞 溶 血 作 用 越 明 显 。对 照 实 验 研 究 表 明 ， 吐 含 温８ ０的 空 白辅 料组 相 应 出 现 明显 的 溶 血 现 象 ， 两 者 无 明显 且 统 计 学 意 义 （ ＞ ．５ ， 明 空 白辅 料 与 市 售 制 剂 的 溶 血 作 用 Ｐ ００ ） 说
２ ５ 家 庭 氧疗 ．
护 理 人 员 应 指 导 患 者 和 家 属 做 到 以下 几 点 ：
（） １ 了解氧疗 的 目的 、 必要性及注意事项 ；２ 注意安 全供 氧装 （）
置 周 围严 禁 烟火 ， 止 氧 气 燃 烧 爆 炸 ；３ 氧 疗 装 置 定 期 更 换 ， 防 （） 清洁 消毒 。
疾 病 ， 以反 复 咳 嗽 、 痰 、 促 和 呼 吸 困难 为 主 要 症 状 的 慢 性 是 咯 气 支 气 管 炎 和 （ ） 气 肿 ， 道 阻 塞 进 行 性 发 展 ， 部 分 有 可 逆 或 肺 气 但
鲜安静 的环境 ， 进行 步行 、慢 跑 、气功 等体 育锻 炼 ； 教会 患者
ｉｅｅ ｓ 一ｏｒｎｒｖｎｕ ｆｓ ｎｏ ｅｋ ａｉ Ｊ ． ｏｒａ ｏ ｓ ｒｄａ １ｈｕ ｔ ｅｏ ｓｎｕｉ ｎａｗ ｅ ｌｂ ｓ ［ ］ Ｊｕ ｌ ｆ ｔ ａ ｉａ ｉ ｏ ｙ ｓ ｎ
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第１ ０卷第６期 ２００８年６月 辽宁中医药大掌学报
ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＬＩＡＯＮＩＮＧ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ０Ｆ ＴＣＭ ＶｏＩ．１Ｏ Ｎｏ．６ Ｊｕｎ．．２ｏｏ８
人参皂苷溶血测定的实验条件研究 杨光，项峥，康廷国，窦德强，程大任 （辽宁中医药大学药学院，辽宁大连１１６６００）
摘要：目的：确定人参皂苷溶血测定中最优的实验条件。方法：用紫外分光光度法测定溶血度，分别对比了 离心速度和时间、水浴时间、灭菌和非灭菌缓冲盐溶液及生理盐水溶液、不同酸碱度环境下的检测波长对实验结果 的影响。结果：确定最优的实验务件为：用生理盐水做溶剂；溶血测定中溶液的水浴条件为３７℃水浴２ｈ；离心条件 为转速３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｒａｉｎ；在５７５ｎｍ处用紫外分光光度计测定其吸光度，并计算溶血度。结论：该方法稳定性和 重现性均较好。适用于人参皂苷的溶血测定。 关键词：人参皂苷；溶血；溶血度；溶血作用 中图分类号：Ｒ２８４，１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—８４２Ｘ（２００８）０６—０１９０—０２
Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｎ Ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓ ＹＡＮＧ Ｇｕａｎｇ，ＸＩＡＮＧ Ｚｈｅｎｇ，ＫＡＮＧ Ｔｉｎｇ－ｇｕｏ，ＤｏＵ Ｄｅ－ｑｉａｎｇ，ＣＨＥＮＧ Ｄａ－ｒｅｎ （ＣｏＨｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄａｌｉａｎ ｌｌ ６６０ｏ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｆｉｎｄ ｏｕｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ ｔｅｓｔ ｏｆ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ｄｅｇｒｅｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ，ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆ＿ｆｅｒｅｎｔ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ ｖｅｌｏｃｉｔｙ ａｎｄ ｔｉｍｅ，ｉｎｃｕｂａｔｉｎｇ ｔｉｍｅ，ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ，ｎｏｎ－ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ ｂｕｆｆｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｓａｌｉｎｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐＨ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｔｏ ｂｅ：ｓａｌｉｎｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ａｄｏｐｔｅｄ ａｓ ｓｏｌｖｅｎｔ．ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｉｘｔｕｒｅ ｗａｓ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｆｏｒ ２ｈ ａｔ ３７℃，ｔｈｅｎ，ｔｈｅ ｍｉｘｔｕｒｅ ｗａｓ ｃｅｎｔ￣ｆｕｇｅｄ ａｔ ３．０００ｒ／ｍｉｎ ｆ０ｒ １０ｍｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｏｆ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ａｔ ５７５ｎｍ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｃｏｎｅｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｓｈｏｗｅｄ ｇｏｏｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｍｏｌｙｓｉｓ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓ． Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ：Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ：Ｈｅｍｏｌｖｓｉｓ：Ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ｄｅｇｒｅｅ；Ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ
人参对人的神经系统、心血管系统都具有明 显的作用。对人参的研究结果表明，其表现出来 的大部分药理活性是人参皂苷的作用 】。皂苷具 有溶血作用，从一定程度上妨碍了皂苷作为注射 剂的使用［２１ｏ皂苷可以同血红细胞壁上的胆甾醇 结合生成不溶性分子复合物沉淀，造成血红细胞 正常渗透性被破坏而发生崩解，产生溶血【３】。为了 解决皂苷的溶血问题，需要首先确定皂苷溶血测 定中的实验条件。本文对溶血实验有影响的因素 进行了考察，通过设立对照组比较实验结果，建立 最优的实验条件，本条件操作简单、准确可靠，重 复性和稳定性均较好，为探讨皂苷的溶血作用规 律奠定基础。 １ 实验材料 仪器：Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＣＰ２２５Ｄ型精密天平，８０—２离 心沉淀机，Ｍａｔｒｉｘ移液器，Ｔｈｅｒｍｏ可调式移液器， Ｕ一３０１０紫外分光光度计，ＰＨＳ一３Ｃ型精密数显酸度 计。试剂：医用生理盐水，磷酸盐缓冲溶液（简称 ＰＢＳ）自制，人参根部总皂苷样品，血塞通注射剂。 动物：家兔（购于大连大学动物室）。 ２方法与结果 ２．１ １茗血细胞悬浊液的配置取去纤维蛋白兔全 血，用生理盐水洗涤、离心，取血细胞，加人生理盐水 稀释至１％备用。 ２．２ 灭菌和非灭菌０．０１ｍｏ１／１ＰＢＳ （ｐＨ＝７．４）的缓 冲液的配制０．２ｍｏＵＬ Ｎａ２ＨＰＯ４ ８１．０ ｍＬ和０．２ｍｏＵ
２．１０计算含量取自制的５份样品，按供试品溶液 制备方法处理，并按色谱条件测定记录色谱图，以外 标法计算样品中芍药苷的含量，结果见表ｌ。 表１样品测定结果（ｎ＝３） ３讨论 根痛平胶囊原标准中元含量测定的内容，为更 好地控制药品的质量，笔者通过反复实验，制定了其 中芍药苷的含量测定方法，且经方法学考察，稳定 性、精密度、回收率等各项实验指标均符合有关规 定，说明该法可行，提高了原药品的标准。◆ 参考文献 【１】童荣生，孙世明，吴正中．高效液相色谱法测定乳腺小叶增生 颗粒中芍药苷的含量【Ｊ】．中国医院药学杂志，２００６，２６（１１）： １３７０－１３７１．
收稿日期：２００７—１２－１０ 作者简介：杨光（１９７８一），女，辽宁铁岭人，硕士研究生，研究方向：生药学。 簿；
维普资讯 http://www.cqvip.com １ ０卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学报 ＬＮａＨ，ＰＯ １９．０ ｍＬ混匀后即可。取配制好的缓冲液， 在１５１ｂｆ／ｉｎ２（１．０３４×１０５ｐａ）高压下蒸汽灭菌２０ｍｉｎ 即完成灭菌。 ２＿３ 水浴时间对血细胞溶血度的影响取４２支试 管，加入２．５ｍＬ的１％血细胞悬浊液，生理盐水３．１ｍＬ 和注射剂０．４ｍＬ。每３支一组，每组水浴时间分别为 １５，３０，４５，６０，７５，９０，１０５，１２Ｏ，１３５，１５０，１６５，１８０， ２１Ｏ和２４０。水浴后离心１０ｍｉｎ（３０００ｒ／ｍｉｎ），取上清 液在５７５ｎｍ处用生理盐水作空白溶液测定吸光度 值，计算每组的平均值为０．０２６，０．０２６，０．０２９，０．２９３， ０．４１５，０．８００，０．７８８，０．８９４，１．Ｏ１３，０．９８３，０．８４０，１．０２７， ０．９６３和１．０５９。 ２．４ 离心速度和时间对血细胞沉降程度的 影响 取３６支离心管，加人人参皂苷０．５ｍＬ （１５００ ｇ／ｍＬ）、生理盐水３ｍＬ和１％红细胞悬浊 液２．５ｍＬ，３７℃水浴２ｈ，取出，分为４组，１—４组分 别对应１０００ｒ／ｍｉｎ、２０００ｒ／ｍｉｎ、３０００ｒ／ｍｉｎ和４００Ｏｒ／ ｍｉｎ的转速，每组的９支试管再分成３小组，每小 组的离心时间分别为５、１０和１５ｍｉｎ，离心后取＿／ｚ 清液在５７５ｎｍ处以生理盐水作空白溶液用紫外 分光光度法分别测定吸光度值并Ｈ－算平均值。 见表１。 表１ 不同的离心速度和时间条件下的吸光度平均值
２．５ 灭菌非灭菌的ＰＢＳ缓冲盐和生理盐水溶液对 实验结果的影响取９支试管，分成３组。灭菌组， 每支试管加灭菌缓冲液３ｍＬ；非灭菌组，每支试管 加非灭菌缓冲溶液３ｍＬ；生理盐水组，加人生理盐 水３ｍＬ。之后，再向所有试管中分别加入人参皂 苷溶液（１５００ ｇ／ｍＬ）０．５ｍＬ和１％血细胞悬浊液 ２．５ｍＬ。水浴２ｈ（３７℃），离心ｌＯｍｉｎ（３０００ ｒ／ｍｉｎ）， ５７５ｎｍ处测吸光度并计算平均值。灭菌组、非灭菌 组和生理盐水组吸光度平均值分别为０．８８６、０．８４７
和０．８５４。 ２．６ 不同酸碱度的环境下造成的全溶血在不同波长
下的吸收用ＨＣＬ和ＮａＯＨ分别配制ｐＨ值为１、４、 ７、９、１２的溶液，取５支试管，分别加入３．５ｍＬ的不同 ｐＨ值的溶液，２．５ｍＬ的１％的血细胞悬浮液，用力混 匀造成全溶血，在４００—８００ｎｍ区间紫外扫描，测定血 红素在不同的波长下的紫外吸收，图谱显示，在不同 ｐＨ值的环境中，５７５ｎｍ处均为最大吸收波长。 ２．７ 稳定性实验取１２支试管分为４组，加人人参 皂苷０．８ｍＬ（１５００ ｇ／ｍＬ），生理盐水２．７ｍＬ，１％血细 胞悬浊液２．５ｍＬ，混匀水浴２ｈ（３７℃）、离心ｌＯｍｉｎ （３０００ ｒ／ｍｉｎ）、分别在Ｏ、１、２、３ｈ用紫外分光光度 计５７５ｎｍ处测定其吸光度并计算平均值为０．９１２， ＲＳＤ％＝１．６６（ｎ＝４）。 ２．８ 重复性实验取１５支试管分成５组，加入人参 皂苷０．８ｍＬ（１５００ ｇ／ｍＬ），生理盐水２．７ｍＬ，１％血细 胞悬浊液２．５ｍＬ，混匀后混匀水浴２ｈ（３７℃）、离心 ｌＯｍｉｎ（３０００ ｒ／ｍｉｎ）、在５７５ｎｍ￣ｔｌ：测吸光度计算平均 值为０．７４６，ＲＳＤ％＝１．９９（ｎ＝５）。 ３讨论 根据以上实验结果可知，水浴时间过短或过 长会造成溶血反应的不完全或血细胞的自然衰 败，选用溶血反应完全并且处于稳定状态的３７℃ 的条件－Ｖ水浴２ｈ；离心转速小、时间短会导致恤 细胞沉降得不完全，转速大、时间长又会引起机 械力溶血，选择适度的离心转速３０００ ｒ／ｍｉｎ和离 心时间ｌＯｍｉｎ，使血细胞刚好沉降完全；对比灭 菌、非灭菌ＰＢＳ缓冲液和生理盐水对皂苷引起的 ＰＨ值改变的缓冲作用，三者差别不大，选用生理 盐水作为溶剂；在不同酸碱度环境中造成的全溶 血，最大紫外吸收均为５７５ｎｍ，选定此波长作为测 定波长。◆ 参考文献 【１】葛迎春，刘平．人参单体皂苷药理作用研究进展【Ｊ】．特产研究，
１９９６，４：４６－４８ 【２】孟勤，孙平，王陆黎，等．人参、西洋参皂苷溶血作用的研究【Ｊ】． 白求恩医科大学学报，１９９８，２４（２）：１３５—１３６． 【３】匡海学．中药化学【Ｍ】．北京：中国中医药出版社，２００３：２４２．
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