原位杂交技术检测HPV-DNA的应用及体会
荧光原位杂交技术的临床应用_概述及说明
荧光原位杂交技术的临床应用概述及说明1. 引言1.1 概述荧光原位杂交技术是一种重要的分子生物学方法，可以通过使用荧光探针与待测DNA序列特异性结合，实现对目标DNA的检测和定位。
该技术的广泛应用使其成为基因诊断、细胞生物学以及遗传学研究的关键工具。
本文将对荧光原位杂交技术进行全面概述，并讨论其在临床诊断和生命科学研究中的重要应用。
1.2 文章结构本文将按照以下结构进行介绍和讨论：首先，我们将简要介绍荧光原位杂交技术的基本原理和相关概念；接着，我们将详细阐述该技术在临床诊断中的应用，包括癌症相关染色体异常的检测与定位、遗传疾病的分子诊断与遗传咨询以及微生物检测和感染性疾病的诊断；然后，我们将探讨该技术在生命科学研究领域中的重要应用，包括基因组和染色体结构分析、基因表达调控机制研究以及细胞核内事件及细胞过程动态观察与实时监测；最后，我们将对荧光原位杂交技术进行总结和评价，并展望其未来发展趋势。
1.3 目的本文的目的是全面概述荧光原位杂交技术的临床应用，并介绍该技术在生命科学研究中的重要性。
通过阐述其基本原理和应用案例，旨在增进读者对该技术的了解，并为相关领域的研究人员提供指导和启示。
同时，我们还将对该技术的优势和局限性进行评价，以便读者更好地理解并运用荧光原位杂交技术。
2. 荧光原位杂交技术概述2.1 原位杂交技术简介荧光原位杂交技术是一种用于分析染色体、基因组和RNA等核酸序列的强有力的方法。
它基于亲和性结合原理，利用荧光标记的探针与待测样品中的靶序列进行特异性杂交，通过可见光或荧光显微镜观察探针与样品是否杂交成功，从而实现对目标序列的定位和检测。
2.2 荧光原位杂交技术的基本原理荧光原位杂交技术主要包括以下几个步骤：首先，利用DNA合成或PCR扩增方法得到所需的荧光标记探针；然后，通过氨基化反应将这些探针连接到具有亲和性活性分子（如尾牙肌动蛋白）上，形成完整的荧光标记探针；接下来，在待测样品上进行脱氧核苷酸（dNTP）逆转录DNA合成反应，并在此过程中引入树酰胺（digoxigenin）－标记或生物素－标记dUTP等标记探针；然后，对样品进行固定处理，并与探针进行杂交，使探针与样品中的互补序列结合；最后，利用可见光或荧光显微镜观察并分析杂交信号，实现对目标序列的检测和定位。
HPV临床常用检测方法
由于HPV不能在体外细胞培养，故不能用简便的血清血检测进行HPV的诊断和分型.临床上用于检测HPV的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和PCR 等,其中以PCR方法的敏感性最高，是目前应用最多感染的HPV型别、含量、持续时间决定病变的发展与预后,是进行HPV检测的主要内容.目前主要是通过应用分子生物学方法进行HPV DNA的检测.1、现有的HPV实验室主要检测手段:①聚合酶链反应（PCR, Polymerase Chain Reaction):扩增位于两段已知序列之间的DNA片断的方法。
该法有较高的敏感度，可进行HPV分型,缺点是对实验室环境要求较高，容易发生样本间的交叉污染，从而导致假阳性率高。
②核酸杂交检测有较好的特异性和敏感度，还可以进行HPV DNA的分型，各种核酸杂交检测方法有一定的优缺点.A核酸印迹原位杂交适用于HPV分型和HPV DNA分子量鉴定，虽然灵敏度高,但因操作复杂，需要新鲜组织标本,不便在临床上大规模使用。
B斑点印迹其敏感度和特异性均低于核酸印迹原位杂交法,虽然经济实用，但实验过程存在有放射性污染，是环保所不能轻视的问题.C原位杂交（in situ hybridization,一种核酸杂交技术，可用来测定基因或特定核苷酸序列在核酸分子的所在部位，检测重组体DNA）通过非放射性探针对石蜡组织进行检测，能作定位检测，假阳性率低,但灵敏度不高,大大降低了临床使用价值。
D杂交捕获法(Hybrid Capture）杂交捕获试验是利用化学发光对抗体捕获的信号加以放大.首先使DNA双链释放并分解成为可以杂交的核苷酸单链，DNA单链与RNA组合探针结合为RNA-DNA杂合体,特异性抗体将RNA—DNA杂合体捕获，偶联有碱性磷酸酶的第二抗体与RNA—DNA杂合体结合,碱性磷酸酶使酶底物发光，根据光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNA—DNA杂合体的含量。
能检测13种高危型HPV,包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68.各种检测方法的比较各种检测方法的比较HPV基因分型检测试剂盒（PCR—反向点杂交法）【产品用途】对人乳头瘤病毒（HPV）的感染情况进行定性检测并加以分型,能够检测23种HPV基因型，直接提示感染HPV的基因型;包括18种高危和5种低危型,可用于临床HPV感染的辅助诊断。
hpv 检测标准
hpv 检测标准
HPV（人类乳头瘤病毒）检测标准通常是指用于检测人体样本中HPV感染的方法和标准。
HPV感染是一种常见的性传播疾病，与宫颈癌等多种癌症相关联。
因此，HPV检测对于宫颈癌筛查和预防具有重要意义。
以下是一些常见的HPV检测标准和方法：
1. HPV-DNA检测：这是目前最常用的HPV检测方法之一。
它通过分析样本中的DNA，检测HPV病毒的存在。
HPV-DNA检测可以使用多种技术，包括聚合酶链反应（PCR）、原位杂交（ISH）等。
2. HPV病毒亚型检测：HPV病毒有多个亚型，其中一些与宫颈癌的风险相关性较高。
因此，HPV检测通常包括对不同HPV亚型的检测和鉴定。
3. HPV RNA检测：与HPV-DNA检测相比，HPV RNA检测可以更好地区分活跃的、正在感染宿主的病毒与已经被清除的病毒。
4. HPV病毒载量检测：有些检测方法可以估计样本中HPV病毒的数量，这对评估感染的严重程度和预后具有重要意义。
HPV检测标准通常由专业医学组织或政府卫生机构制定，以确保检测方法的准确性、可靠性和临床意义。
在进行HPV检测时，必须遵循适用的标准和指南，以确保检测结果的准确性和临床意义。
1/ 1。
液基细胞学和HPV原位杂交检测及其联合应用在子宫颈癌筛查中的作用
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HPV-DNA分型联合TCT检测在宫颈癌早期诊断中的价值
HPV-DNA分型联合TCT检测在宫颈癌早期诊断中的价值宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一，占据全球女性癌症患者的前列。
宫颈癌的早期诊断对于提高治愈率、降低病死率具有重要意义。
HPV（Human Papillomavirus，人乳头瘤病毒）是宫颈癌的主要致病因素之一，其感染与宫颈上皮的异常增生和恶变有着密切关系。
对HPV感染进行及时、准确的检测，对于宫颈癌的早期诊断具有重要意义。
HPV-DNA分型联合TCT检测作为宫颈癌早期诊断的一种新技术，其在临床上具有较高的应用价值。
本文将从HPV-DNA分型联合TCT检测的原理、优势及其在宫颈癌早期诊断中的价值方面进行详细阐述。
一、HPV-DNA分型联合TCT检测的原理HPV-DNA分型联合TCT检测是通过检测宫颈分泌物中的HPV-DNA和细胞学改变来进行宫颈癌的早期筛查和诊断。
其检测原理是利用PCR扩增技术检测宫颈分泌物中的HPV-DNA，通过对HPV亚型的评估来判断感染类型，从而为临床提供准确的诊断信息。
结合TCT检测来观察宫颈上皮细胞的形态学改变，可以更加全面地评估宫颈癌的风险。
HPV-DNA分型联合TCT检测相较于传统的宫颈癌筛查方法，具有以下几个显著的优势。
1、准确性高：HPV-DNA分型联合TCT检测通过对HPV亚型的评估，可以更加准确地判断感染类型，提高了诊断的准确性。
同时结合TCT检测，能够从形态学层面全面评估宫颈癌的风险，使宫颈癌的早期诊断更加准确可靠。
2、早期发现：HPV-DNA分型联合TCT检测可以早期发现宫颈病变，对于宫颈癌的早期筛查和诊断具有明显的优势。
及时发现宫颈病变，有利于早期治疗，提高了治愈率。
3、方便快捷：HPV-DNA分型联合TCT检测的操作简便、结果快速，可以为临床提供及时有效的诊断信息。
这对于提高宫颈癌的早期诊断率具有积极的意义。
2、个性化诊疗：HPV-DNA分型联合TCT检测可以根据不同的HPV感染类型和宫颈病变程度，为患者提供个性化的诊疗方案。
菌落原位杂交技术在环境微生物检测中的应用
菌落原位杂交技术在环境微生物检测中的应用菌落原位杂交技术是一种分子生物学检测方法，可用于检测环境中的微生物。
该技术利用特异性探针与靶菌的RNA或DNA结合，形成荧光信号，从而可定位靶菌的位置。
菌落原位杂交技术具有高灵敏度和高特异性，且不受环境干扰和培养条件的限制。
因此，它在环境微生物检测中具有广泛应用，如检测水体和土壤中的细菌、真菌、病毒等微生物，以及环境中的污染物降解菌等。
菌落原位杂交技术的发展，为环境微生物检测提供了一种快速、准确、可靠的方法。
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杂交捕获法HPV检测评估多种抗HPV干预与疗效相关进展2023
杂交捕获法HPV检测评估多种抗HPV干预与疗效相关进展2023高危型HPV感染为宫颈癌发病的重要因素，需引起临床工作者的高度关注。
在发现宫颈高危型HPV感染后需积极干预，以减缓疾病进展，起到防止宫颈癌发生的效果。
对于宫颈高危型HPV感染但液基细胞正常者，可使用多种手段进行干预治疗，治疗原理主要是修复炎症创面阻断病毒复制或吸附病毒或免疫原理抗体中和病毒等⑴。
目前，普遍在疗程中评价效果的指标是HPV阳性感染是否转阴，但是如何对于一个疗程后未转阴的患者如何客观评价疗效？HPV检测诸多方法学中，杂交捕获法是一种非扩增方法，采用WHO指南推荐的阳性CUtOff值(1.0pg∕ml ),并可同时报告该样本中含有的病毒载量值。
基于大样本的研究显示宫颈病变与高危型HPV病毒载量存在相关性，病毒载量值＜1pg∕ml的人群患CIN3 +的风险非常低(0.05% )病毒载量值＞ 10pg/ml的人群患CIN3 +的风险是14.1% , 远远高于病毒载量在I-IOPg/ml的样本。
单睫DNA捕获微孔板捕获微孔板下面三篇文献使用了不同的抗HPV干预手段，并在评价疗效时也同时参考了杂交捕获法HPV检测报告数值结果，希望对各位同道在临床使用抗HPV干预手段评价疗效时给与一定的参考。
01、文献1A randomized open-label clinical trial of an anti-HPV biological dressing (JB01 -BD) administered intravaginally to treat high-risk HPV infection^期刊:Microbes and Infection , IF=9.57结论：使用JB01-BD抗HPV生物蛋白辅料，此次临床实验共有77 名30-60岁的女性患者，均感染高危型HPV病毒但无高级别宫颈病变。
其中38名HPV高危阳性患者被随机分到了实验组，通过阴道使用JB01-BD ,每次3克，隔天使用一次，连续使用三个月(月经期除外)，停用三个月后检测。
HPV原位杂交检测步骤
HPV原位杂交检测步骤
步骤1：搜集样本
首先，需要从病人体内采集合适的样本。
常用的样本包括宫颈细胞刮片、尿液、唾液、阴道液等，取样前需确保病人不要进行洗涤阴道、尿生
理清洗等活动。
步骤2：样本处理
将采集到的样本进行处理，以获取细胞纤毛。
对于宫颈细胞刮片样本，使用生理盐水或细胞培养液等缓冲溶液进行细胞纤毛的脱落和悬浮。
步骤3：固定细胞
将样本中的细胞固定在载玻片上，通常使用95%的乙醇或乙醚固定细胞。
步骤4：去除细胞膜
通过去除细胞膜，使得封闭DNA在细胞核内。
步骤5：杂交反应
将HPVDNA探针与上述固定的样本进行杂交反应。
该探针通常使用标
记有荧光物质的HPVDNA特异性引物，使其与样本中的HPVDNA发生特异性
的结合。
步骤6：洗涤
对杂交后的载玻片进行洗涤，去除探针杂交过程中的非特异性结合。
步骤7：显微镜观察
使用显微镜观察载玻片上的细胞，看是否有荧光标记。
在有荧光标记的细胞中，说明有HPV感染。
步骤8：结果分析
根据显微镜观察的结果，进行结果的分析和判读。
根据荧光标记的程度和分布情况，可以对HPV感染的类型进行初步的判定。
通常，分析人员需要有经验才能准确判断。
步骤9：结果报告
根据分析结果，写出报告。
报告中应包括所检测的HPV类型、感染程度以及可能的临床推断等信息。
步骤10：质控。
dna检验个人工作总结
dna检验个人工作总结在过去的一年里，我一直在进行DNA检验个人工作。
在这段时间里，我学习了很多关于DNA检验的知识，掌握了一些重要的技能，也获得了丰富的工作经验。
下面是我在这段时间里的工作总结：首先，我对DNA检验的基本原理和流程有了更深入的了解。
我学会了如何提取DNA样本、进行PCR扩增、电泳分析和测序等技术。
这些技能让我能够独立开展DNA检验工作，并且准确地解读和分析实验结果。
其次，我参与了多个项目，对各种不同类型的DNA检验都有所涉猎。
我曾经进行了亲子鉴定、犯罪嫌疑人DNA检验、遗传疾病基因分析等工作。
通过这些项目，我提升了自己的实验操作能力，也提高了对不同案例的判断和分析能力。
此外，我还利用新的技术手段，提升了我的工作效率和结果质量。
比如，我学会了使用自动化设备进行DNA提取和扩增，减少了实验操作的人为误差。
我还学习了如何利用生物信息学工具进行基因组数据的分析和解读，为项目结果的进一步应用提供了重要的支持。
最后，我在与团队合作中学到了很多。
我们相互协助、交流经验、共同解决问题，在合作中提升了自己的专业水平，也为项目的顺利进行做出了贡献。
总的来说，我在过去的一年里通过DNA检验个人工作，收获了很多。
我对DNA检验技术和方法有了更深入的了解，也积累了丰富的实践经验。
我相信，这些经验和能力将为我今后的工作打下坚实的基础，也肯定会在未来的工作中继续发挥重要的作用。
在DNA检验个人工作中，我深刻体会到了这项工作的重要性和挑战性。
通过对大量的DNA样本进行分析和解读，我们可以为生物学研究、医学诊断和法律司法等领域提供重要的数据支持。
而在这个过程中，需要保证实验的准确性、结果的可靠性和数据的保密性，这对实验人员的专业知识和严谨态度有着极高的要求。
在进行DNA检验个人工作的过程中，我所做的工作重点主要分三个方面。
首先是样本的准备和提取。
在DNA分子检测过程中，高品质、纯净的DNA提取是整个检测过程的关键，直接影响到后续的PCR扩增和测序结果。
女性hpv有几种检查方法
女性hpv有几种检查方法当代社会女性的身体疾病越来越严重，种类也越来越多，女人总是先想着怎么照顾好家人以及孩子，却很少给自己做一个健康检查的计划。
有时候为了家庭为了孩子就是身体有一点不舒服也没有放在心上，毕竟去趟医院就是就是一大笔的开销。
今天小编就为您简单的说明一下女性疾病重的一种hpv那么女性hpv有几种检查方法呢？女性hpv有几种检查方法首先要给您说明一下的是什么是hpv？hpv人乳头瘤病毒的简称。
是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。
第一种，原位杂交法（ISH）。
这种方法可以检测出细胞内的hpv的DNA，可以准确定位感染病毒的细胞位置，特异性也很好，但是由于太准确了，每种类型的hpv都需要特定的探针和试剂，所以临床上并不能大面积开展使用，因为太贵了。
第二种，聚合酶链反应检测（PCR）中文可能并不熟悉，但是如果查过hpv病毒的人，检查单上估计也可以看见PCR的这三个字母，这是国内最常见，最广泛的一种检查。
它的作用，就是通过检查hpv的DNA，来确定病毒的型号，也就是流传最广的hpv分型检测。
但这种检测的方法缺点，就是不能检查病毒的量，只能查出分型。
第三种第二代杂交捕获实验检测（HC-2）这个也是很熟悉的了吧，在某些地区也是很盛行的，一来就HC-2的。
但是这种检测法的缺点，就是只能检测高危组和低危组这2组一共含有的病毒数量，也就是说只有一个值，无法看出病毒的分型和具体哪种型号的载量多少。
女性感染HPV就会得癌症吗虽然当今社会好多宫颈癌患者都是因为感染了hpv，但是并不代表感染了hpv就一定会得癌症，只是高危hpv患者持续感染才会引发宫颈癌，一般多数人会被人体的免疫系统自动清除的。
每个人的身体机制都是不一样的，就连医生有时候也无法坚定的给出一个不变的答案，很多的时候我们不能一概而论。
如今社会的科技在发展，我们高科技的产品越来越多，面对很多疾病也会游刃有余的。
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2016 年8月C 第3卷/第10期Aug.C 2016 V
ol.3 No.10
实用妇科内分泌杂志
Journal Of Practical Gynecologic Endocrinology
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原位杂交技术检测HPV-DNA 的应用及体会
李维前，季红菊，王玉莹，刘 霞
（徐州医科大学（原医学院）附属第三医院，江苏 徐州 221003）
【摘要】目的 通过对活检标本检测HPV-DNA ，得出原位杂交的应用体会。
方法 通过原位杂交检测，结合其组织病理镜下形态特点作出总结分析。
结果 降低了原位杂交假阳性和假阴性，得出一系列体会。
结论 值得借鉴推广在原位杂交操作中的各个细节步骤中，应用这些体会提高原位杂交结果满意度。
【关键词】原位杂交；技术；HPV-DNA ；应用；体会
【中图分类号】R373 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8803.2016.10.029.02随着改革开放，人们一些不良生活方式的流入及社会经济水平的提高，一些疾病如妇科宫颈癌及癌前病变、女阴尖锐湿疣；男性阴茎尖锐湿疣、阴茎癌等在临床大量出现，这些疾病如果未经过系统规范的治疗，而造成病程反复,常常会给患者带来精神和身体的痛苦，也浪费了金钱时间。
所以对这些疾病首先要明确诊断.现已证明这些疾病往往由人类乳头瘤病毒(HPV)感染而导致。
原位杂交技术是目前国内检测HPV 较先进的检测方法,该法是基于分子水平，检测人类乳头瘤病毒DNA 。
1 资料与方法
1.1 一般资料
我科39例活检标本，其中宫颈12例，女阴部5例；男外生殖器16例，男阴部4例；其它部位2例。
HPV 试剂盒购自福建泰普生物科技公司。
主要使用仪器有：上海森信实验有限公司的GRP-9080型隔水式恒温培养箱；泰普国际生物科学有限公司的M10061型杂交仪。
1.2 方法
1.2.1 杂交前处理：4um 厚的组织切片经APES 处理，65℃漂烘仪上烤片2h ，经二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10分钟脱蜡，100％乙醇、95％乙醇、80％乙醇各5分钟脱水处理，蒸馏水洗涤3分钟，然后移入盛有杂交增强液的塑料染色盒内、加盖微波炉高温处理15min （每隔5min 补充杂交增强液，确保有足够的液体浸没组织），自然冷却至室温，蒸馏水洗涤1min2次，小心擦干组织周围液体。
1.2.2 原位杂交：（1）每张切片滴加适量杂交液50ul ，加盖玻片于其上（配备专用，以防干片）（2）将切片放于原位杂交仪上95℃变性5min （3）取出切片放入含有30增效液的湿盒中37℃培养箱中过夜（>16 h ）。
（4）取出切片，经48℃PBS 液浸泡，轻微振荡自动脱掉盖玻片，再经48℃PBS 液洗涤5分钟3次。
1.2.3 信号放大与显色：（1）在切片上加一抗50ul37℃水湿盒中孵育30min, 37℃PBS 洗涤2 min3次（2）加二抗50ul 室温水湿盒中孵育20min, PBS 洗涤2 min3次（3）加50ulHRP 聚合物室温水湿盒中孵育30 min ，PBS 洗涤2 min3次（4）加50ulDAB 显色液，室温镜下控制显色，PBS 洗涤2 min3次（5）流水充分洗涤，苏木精复染，盐酸乙醇分化，返蓝，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
2 结 果
阳性信号为上皮细胞核呈棕褐色。
39例标本（宫颈12例，女阴部5例；男外生殖器16例，男阴部4例；其它部位2例）HPV 检测结果：阳性27例(阳性率69%)，阴性12例。
其中宫颈标本阳性9例（阳性率75%），男生殖器阳性10例（阳性率62.5%）。
女阴部阳性3例（阳性率60%），男阴部阳性2例（阳性率50%）。
其它部位阳性2例（阳性率100%)。
3 讨 论
HPV 属于乳多孔病毒科的乳头瘤病毒属，是无包膜的20面体对称的核衣壳结构，表面有72个壳微粒。
病毒基因组呈双股环状DNA ，主要通过直接或间接污染物品或性传播感染人类，引起人类皮肤黏膜的多种良性乳头状瘤或疣，某些个别感染具有致癌性。
根据病毒促进细胞癌变能力分为2种：低危型和高危型。
低危型主要引起良性外生疣、低度宫颈上皮内瘤变；高危型主要引起高度宫颈上皮内瘤变、外生殖器癌、宫颈浸润型鳞癌等。
HPV 检测现有多种方法，其中最常用的免疫组化法根据抗原抗体免疫反应的原理检测抗原，只能有助于确定有无感染；而原位杂交法根据核酸变性、复性原理可确定宫颈上皮内瘤变的级别，并且准确定位待测物，兼具半定量的功能[1]，具有敏感性高、特异性强的优点，因此，分子水平的原位杂交检测法优于蛋白水平的免疫组化法。
但原位杂交技术检测HPV 步骤多，操作要求高，常常出现掉片，假阴性、假阳性、背景染色过重等现象。
对此，（1）用防脱片捞取切片并65℃烤片2h ，使组织与玻片充分粘附，时间不能过短，并且操作每一步都要动作轻轻，做到谨小慎微以防掉片。
（2）切片脱蜡、脱水、杂交增强液微波炉高温处理要充分彻底；一抗、二抗、HRP 聚合物、DAB 量要足够，时间和温度要达要求，以免假阴性或阳性不足（3）切片要保证4um 厚，不能过厚,否则易脱片或者染色过强；杂交液、一抗、二抗、HRP 聚合物、DAB 等的量不能多，反应时间不能过长，否者造成假阳性或背景深阳性过强；并严格洗涤时间和次数，保证洗涤干净以免非特异性着色造成染色过重甚至假阳性。
（4）切片经过高温处理，多次洗涤等许多步骤容易掉片。
（5）杂交过程使用30%增强液的湿盒而不是盛有水的湿盒，目的是降低水分对探针稀释的可能，同时避免了因水分蒸发而致浓度过高
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造成背景染色过重[2]（6）杂交后PBS洗涤温度不能过低，应保证48℃，否则不能充分去除非特异性杂交。
建议用恒温箱，保证洗涤温度[3]恒温箱设定温度应大于48℃，温箱里放置温度计以便测量实际箱温，保证切片不低于48℃。
（7）盖玻片大小要匹配，加杂交液不能过多或过少，过多盖玻片会滑动而使杂交液蒸发；过少会产生气泡，不能完全覆盖组织，杂交效果不理想。
（8）杂交前预处理非常重要，微波处理中应保持足够的杂交增强液幷加盖，每隔5min添加增强液防止干片。
（9）DAB显色时，应现用现配，镜下控制显色时间，达到最佳效果。
（10）杂交后的切片经48℃PBS液浸泡，轻微振荡自动脱掉盖玻片，不得用镊子剥掉以防组织脱掉。
（11）切片不能厚于4um，否则易脱片或者染色太重。
[4]（12）苏木精复染要淡染，以免染色深遮盖了DAB的显色。
（13）操作人员带一次性手套、口罩等，避免RNA酶污染。
[5]（14）标本固定及时充分，越早固定越好，防止标本变性自溶、HPV-DNA丢失而致假阴性或阳性减弱。
新鲜标本立即入4%中性缓冲甲醛内固定，防止基因降解，出现无杂交信号或信号微弱。
原位杂交技术检测HPV可以明确病变组织是否是由HPV感染引起，如果是HPV感染，临床就必须有针对性的对患者长期、系统、规范治疗，以便于患者了解疾病情况做好有针对性的配合，避免治疗的盲目性和花冤枉钱，更为重要的是有效切断癌变进程，防止进一步发展成癌症（如阴茎癌、宫颈癌等）。
因为人乳头瘤病毒（HPV)与一些良性疾病（如生殖器疣，尖锐湿疣）和肿瘤性病变（如上皮内瘤变，宫颈癌、阴茎癌）密切相关[1]，HPV感染是这些疾病发生的必要条件。
而不是不问青红皂白，见疣、见瘤一烧了之，或切掉大吉，不做常规病理，更不查HPV，等疣复发后再切，对患者不负责任，造成患者不必要的痛苦[4]。
但也不要见HPV色变，如果只是一过性的感染或者低危型HPV感染且个人身体免疫力强经过规范治疗则会康复，因为只有HPV多次长期持续感染则会致瘤致癌。
但该项目要以常规病理的形态学为基础，根据细胞内是否有空泡等形态异常来确定是否做原位杂交检测HPV，以防滥用原位杂交而增加患者不必要的经济负担。
本法是基于病因学，是查疾病的致病源。
常规病理和原位杂交检测HPV要相结合，有时还要进行DNA倍体分析等检测来诊断。
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