酪蛋白-葡萄糖-PGG纳米复合物的制备及其延缓线虫衰老能力的研究
离子型和非离子型表面活性剂

离子型和非离子型表面活性剂,氧化应激和胆碱酯酶活性的涡虫的影响摘要八广泛使用的表面活性剂(十六烷基三甲基溴化铵CTAB法,氯化苄甲乙氧铵; Hyamine1622,4 - 壬基酚,NP,辛基苯酚乙氧基化物;的Triton X-100,十二烷基苯磺酸钠; LAS,月桂基硫酸钠; SDS,pentadecafluorooctanoic酸,全氟辛酸铵,全氟辛烷磺酸,全氟辛烷磺酸)重新审视自己的急性毒性和氧化应激的影响和胆碱酯酶(CHE)在日本三角涡虫的活动。
8的表面活性剂,以涡虫急性毒性之间的差异是至少在范围3个数量级。
据估计,48小时LC50表面活性剂的毒性等级SDS> NP> LAS> Hyamine1622> CTAB>的Triton X-100>全氟辛烷磺酸PFOA。
根据96小时LC50表面活性剂的毒性排名如下:SDS> CTAB> NP> LAS> Hyamine1622>的Triton X-100>全氟辛烷磺酸PFOA。
有过氧化氢酶的活性显着增加涡虫暴露在LAS名义浓度的0.5或1毫克升?1和1 after48小时暴露在5年或10毫克升的名义浓度的全氟辛烷磺酸。
车活动中发现的抑制作用Hyamine1622涡虫暴露在所有浓度测试,标称浓度为10毫克升?PFOS,PFOA的名义浓度50毫克或100毫克升?和NP标称浓度为0.5 ?1毫克升。
在标称浓度的Triton X-100涡虫暴露在车活动中也观察到显著增加5毫克升1。
暗示的胆碱酯酶抑制NP,PFOS和PFOA在水产动物的神经和行为的影响,需要进一步调查。
介绍-introduction表面活性剂广泛使用在日常生活中的个人护理和家用产品,以及在各种工业应用。
其结果是,大量的表面活性剂通常排出大量污水处理厂或直接向水生环境中有没有污水处理的地方。
事实上,很多表面活性剂及其降解产物已遍布世界各地,在污水排放,污水处理厂的污水,天然水和沉积物(英,2006年)。
新型微生物胞外多糖_韦兰胶的研究进展

JIW u-ke, ZHAO Shuang-zh,i DONG Xue-q ian, ZHANG Y an-hao
( Shandong Food Ferm ent Industry Research & Design Institu te, Shandong F ood and Ferm entat ion Eng ineering M ajor Laboratory, Jinan 250013)
1 前言
微生物多糖包括某些细菌、真菌和蓝藻类产
生的多糖, 许多微生物在生长代谢过程中, 在不 同的外部条件下都能产生一定量的各种多糖, 微 生物多糖因其安全无毒且具有独特的理化性质而
收稿日期: 2010 - 10- 26 作者简介: 吉武科
210
倍受关注, 且与植物和动物多糖相比, 微生物多 糖的生产受地理环境、气候、自然灾害等因素的 影响较小, 产量及质量都很稳定 [ 1] 。因此, 近年 来它们 已 作为 乳化 剂、悬 浮剂、增 稠剂、稳 定 剂、胶凝 剂、成 膜剂 和润 滑剂 等广泛 应用 于 食 品、制药、石油、化工等多个领域 [ 2] 。微生物多 糖包括胞内多糖、胞壁多糖和胞外多糖。微生物 胞外多糖 ( M icrobio l Exopo lysaccharoride) 是某些 微生物在各种碳源生长过程中产生的、存在于发 酵培养基中的可溶性或不溶性多糖, 胞外多糖易 与菌体分离, 可通 过深层发酵实 现工业化生产。 近年来, 世界上微生物多糖的产量其年增长率均 在 10% 以上。一些新型多糖如结冷胶、热凝胶及 韦兰胶的年增长量大于 30% 。目前, 已经进行工 业化生产的微生物多糖有黄原胶 ( xanthan gum ) 、 结冷胶 ( gellan )、右 旋葡聚 糖 ( dextran )、普 鲁 兰 ( pu llu lan )、 可 得 然 胶 ( curd lan ) 等。据 估
微生物学实验复习提纲

微生物学实验复习提纲微生物学实验复习提纲1.研究微生物学的基本技术有哪些(显微镜技术、无菌技术、纯种分离技术和纯种培养技术)2.光学显微镜又称“复式显微镜”,由哪两部分组成?显微镜的什么最为关键?为什么?答:由机械装置和光学系统组成物镜的性能最为关键,因为它直接影响着显微镜的分辨率3.油镜的放大倍数为多少?与其他物镜相比,油镜的使用比较特殊,需在载玻片与镜头间滴加什么?其什么作用?答:10*100 需要滴加镜油增加照明亮度和增加显微镜的分辨率4.影响显微镜分辨率的因素有哪些?(光源的波长、物镜的镜口角和镜头间介质的折射率)5.油镜使用后应怎样处理?镜油擦拭的正确方法是怎样的?答:用擦镜纸拭去镜头上的镜油,然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹,最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯6.制造接种环、接种针的金属常用铂或镍,原因是软硬适度,能经受火焰反复灼烧,又易冷却.7.培养皿的包装一般以多少套作一包比较合适?5~8套。
8.灭菌吸管的包装的注意事项:(1)吸管必须干燥;(2)在距其粗头顶端约0.5cm处,塞一小段约1.5cm 长的棉花(不能用脱脂棉)。
作用是避免外界及口中杂菌吸入管内,并防止菌液等吸入口中。
9.空的玻璃器皿一般用干热灭菌,若用湿热灭菌。
则要多用几层报纸包扎,外面最好加一层牛皮纸或铝箔。
10.接种环在用前必须烧灼灭菌,用后也应立即烧灼。
11.简单染色的原理是什么?其主要操作步骤是什么?固定的作用是什么?染色过程中应注意哪些环节?答:原理及步骤健实验课本71页。
固定作用:使细胞质凝固,使细胞固定在载玻片上12. 革兰氏染的原理及步骤是什么?革兰氏染色后的正确结果是什么颜色?答:原理见实验课本82页步骤:初染、媒染、脱色、复染结果颜色:阳性:菌体保持原有的蓝紫色阴性:洗脱后菌体变为无色,用复染剂染色后又变为复染剂颜色13.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?其中最关键的环节是什么?答:(1)涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性;(2)脱色,此环节最关键。
包涵体纯化全过程

一、包涵体的纯化和复性总结(二)关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题,包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈,关于包涵体的处理一般包括这么几步:菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化,内容比较庞杂。
一、菌体的裂解1、怎样裂解细菌?细胞的破碎方法1。
高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度.此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等.2.玻璃匀浆器匀浆:先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于量少和动物脏器组织。
3.超声波处理法:用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂,此法多适用于微生物材料,用大肠杆菌制备各种酶,常选用50—100毫克菌体/毫升浓度,在1KG至10KG 频率下处理10—15分钟,此法的缺点是在处理过程会产生大量的热,应采取相应降温措施,时间以及超声间歇时间、超声时间可以自己调整,超声完全了菌液应该变清亮,如果不放心可以在显微镜下观察。
对超声波及热敏感的蛋白和核酸应慎用.4。
反复冻融法:将细胞在—20度以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎。
5.化学处理法:有些动物细胞,例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠(SDS)、去氧胆酸钠等细胞膜破坏,细菌细胞壁较厚,可采用溶菌酶处理效果更好,我用的浓度一般为1mg/ml。
无论用哪一种方法破碎组织细胞,都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中,使大分子生物降解,导致天然物质量的减少,加入二异丙基氟磷酸(DFP)可以抑制或减慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺酰氟化物(PMSF)也能清除蛋白水解酶活力,但不是全部,而且应该在破碎的同时多加几次;另外,还可通过选择pH、温度或离子强度等,使这些条件都要适合于目的物质的提取.这是标准配方:裂解液:50mM Tris—HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml 溶菌酶。
盐爪爪根际产ACC脱氨酶菌株筛选及促生特性研究

核农学报2023,37(11):2151~2157Journal of Nuclear Agricultural Sciences盐爪爪根际产ACC脱氨酶菌株筛选及促生特性研究李明源*王继莲田世梅(喀什大学生命与地理科学学院/新疆帕米尔高原生物资源与生态重点实验室,新疆喀什844000)摘要:为探究盐碱区生态环境改良方式,丰富产1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶菌种资源,从新疆克孜勒苏柯尔克孜自治州盐碱地盐爪爪(Kalidium foliatum)根际土壤中筛选产ACC脱氨酶菌株,结合16S rRNA基因测序对优良菌株鉴定,通过盆栽接种试验验证其促生效果。
结果从盐爪爪根际分离到26株产ACC脱氨酶菌株,酶活性为0.4~5.6 U·mg-1,以PM14、PM16和PM24活性最高。
经鉴定,菌株PM14、PM16和PM24分别归属肠杆菌属(Enterobacter)、赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus)和假单胞菌属(Pseudomonas)。
盆栽试验表明,接种3株菌对非盐碱胁迫下拟南芥地上(株高、地上干重)和地下(根长、根干重)部分生长均有明显促进作用;对盐碱土栽培小麦的地上部分(株高、茎粗、鲜重和干重、叶绿素含量)和根干重也有积极影响,尤以PM16最显著。
PM14和PM16兼具解磷、固氮和分泌吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)的能力,PM24兼具固氮和分泌IAA的能力,均具有多种促生功能。
本研究结果为盐碱区微生物菌肥的开发提供了菌种资源和理论支持。
关键词:盐碱区;盐爪爪; ACC脱氨酶;根际;促生效果DOI:10.11869/j.issn.1000‑8551.2023.11.2151土壤盐碱化是典型的非生物胁迫之一,严重影响植物养分运转和分布,使植物的生殖生理过程受到抑制[1]。
我国盐碱土地面积大、分布广,大多植物无法生长导致植被稀少,土地资源浪费的同时还伴随严重的生态问题。
1科技立项的很多主题,课题,项目

端茂军
李国芬
土木院
顾训荣王达
张翔
2000
200970
粉煤灰滤料对污染物的吸附性能研究
李飞
薛红琴
范旭红
土木院
皇大勇徐德龙
吴斌刘景龙
2000
200971
基于WEBGIS的校园地图信息发布
纪志鹏
陈红华
史玉峰
土木院
占小康王海宽
刘立聪王李
2000
200972
收费公路通行费率调整模型的研究
张文婷
李洁
土木院
钱林波
研究生院
颜桃为乐宜春
杨晓飞
3000
200990
黄山市森林资源动态预测模型的研究
蒋涵彬
刘应安
理学院
贺佳绩
3000
200991
木质素磺酸钠改性氨基系高效减水剂的研制
吴达会
罗振扬
理学院
季栋曹杨冯腾
2000
200992
硅烷偶联剂改性夜光粉最佳条件及其机理的研究
徐杰
郭斌
理学院
2000
200993
p-CoO/n-CdS/TiO2可见光催化剂及其降解室内有机污染物装置的研究
于月招
3000
200980
自动挂壁式床
张雅沁
居荣华
金冬
家具院
张雅沁张茜茜
周微虞乔
吴朝阳
3000
200981
家具文物的三维动态虚拟展示形式的探讨
李小彤
袁雨仲夏
吕九芳
周橙旻
家具院
李小彤袁雨
仲夏
2000
200982
核桃壳室内装饰品开发
郑红萍
陈于书
食品工艺学练习题
食品工艺学练习题一名词解释(3′*5)酶促褐变真空吸收:真空封口时,某些食品会出现真空度下降的现象,即真空封罐后的罐头静置20—30分钟,其真空度下降的现象。
肉的成熟:在动物体死亡后,体内发生一系列的生物化学和物理化学变化,由于这些变化,肉质嫩而多汁,肉汤透明,并具有特殊的鲜香风味,这些变化是在细胞酶的影响下完成的。
冷冻升华干燥面筋二填空(1′*15)1. 饮料用水中的藻类、泥沙和胶体物质会影响水的和;而和会影响水的硬度。
2.保险粉的学名低亚硫酸钠或连二亚硫酸钠,是一种还原型杀菌剂。
3.非糖性甜味剂有、、等。
4.半衰期越短的放射性同位素其衰变越。
5.杀菌时番茄酱罐头主要靠传导方式传热,红烧肉罐头以传导方式传热。
6.饼干色泽的形成来自于棕黄色反应反应和焦糖化反应。
7.罐头杀菌一般以肉毒梭状芽孢杆菌为对象菌。
三判断并说明理由(3′*10)1.罐头杀菌后应立即冷却到室温。
(×)38----40℃2.面粉中存在面筋。
3.密闭储藏食品的环境中气体组成是恒定的。
()4.酥性饼干面团调制时应先将面粉、水混合,再加入油、糖等。
错5.软化后的畜禽、鱼肉适于贮存。
(×)食用6.相同杀菌温度下,葱烤鱼的杀菌时间比清蒸鱼的短。
(×)长7.C2H4可促进果实的生长与成熟。
()8.香蕉应在0℃左右的温度贮存。
(x )9.针叶树木材含树脂成分多,烟熏时对食品色泽不利。
(对)10.辐射处理对食品本身的营养价值有很大影响。
()四问答题(5′*5)1.青豆罐头如何护色?2.淀粉老化受哪些因素影响?3.为什么罐头杀菌后要尽快冷却?4.冷冻升华干燥食品有何优点?5.硫化处理有何作用?五论述题1.解冻时汁液流失的原因及影响因素?(7′)2.清蒸猪肉罐头的加工工艺及易出现的质量问题和预防措施?(8′)姓名班级分数一名词解释(3′*5)均质淀粉老化哈变临界压力差: 加热杀菌时,罐内压力增大而引起罐头变形和跳盖的罐内外压力差。
产N-乙酰氨基葡萄糖的工程菌构建、发酵及应用研究进展
产N-乙酰氨基葡萄糖的工程菌构建、发酵及应用研究进展秦志杰;岳秋林;刘新利【摘要】N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)是一种氨基葡萄糖(GlcN)衍生物,属于功能性氨糖类化合物,广泛应用于食品、医药及化妆品领域,市场前景非常广阔.传统的GlcNAc生产方法主要采用甲壳素水解法,该方法在原料供应、环境保护及产品安全方面存在许多潜在问题,构建高效生产GlcNAc的基因工程菌可以解决这些问题.该文着重综述了生产GlcNAc基因工程菌的构建及发酵方面的研究进展,并对GlcNAc的应用进展进行了介绍,并对如何利用工程菌提升GlcNAc产量进行了展望.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2018(037)006【总页数】4页(P6-9)【关键词】N-乙酰氨基葡萄糖;氨基葡萄糖衍生物;功能性氨糖类化合物;基因工程菌【作者】秦志杰;岳秋林;刘新利【作者单位】齐鲁工业大学(山东省科学院)生物工程学院,山东济南250353;齐鲁工业大学(山东省科学院)生物工程学院,山东济南250353;齐鲁工业大学(山东省科学院)生物工程学院,山东济南250353【正文语种】中文【中图分类】Q815N-乙酰氨基葡萄糖(N-acetyleneglucosamine,GlcNAc)是一种氨基葡萄糖(glucosamine,GlcN)的衍生物,是生物体内多种多糖的基本组成单位,也是合成双歧因子的重要前体,易溶于水,具有还原性,在生物体内具有重要的生理功能。
GlcNAc广泛存在于自然界中,于动物体、植物体、细菌和真菌中均有存在,是几丁质和壳聚糖的主要成分[1-3]。
GlcNAc主要应用于食品保健、医药、化妆品等领域,需求量大,市场广阔。
作为膳食补充剂,GlcNAc具有保护软骨组织及骨关节作用;作为药品,GlcNAc在治疗炎症性肠病方面表现出明显功效。
同样因其能够提高内质网蛋白内稳态的作用,可起到延长细胞寿命的作用[4]。
在欧美等发达国家,GlcNAc己经作为膳食补充剂而被广泛应用[5]。
食品化学名词解释
食品化学:是从化学角度和分子水平上研究食品的化学组成、架构、理化性质、营养和安全性质以及食品在加工、储藏和运销过程中发生的变化及对食品品质和安全性影响的科学。
1.水分活度:食品中水分逸出的程度,可以近似地用食品中水的蒸汽分压与同温度下纯水饱和蒸汽压之比表示,也可以用平衡相对湿度表示。
2.吸湿等温线:在恒定温度下,食品水分含量(每单位质量干物质中水的质量)对Aw作图得到水分吸着等温线。
3.滞后现象:对于食品体系,水分回吸等温线很少与解吸等温线重叠,一般不能从水分回吸等温线预测解吸现象(解析过程中试样的水分含量大于回吸过程中的水分含量)。
水分回吸等温线和解吸等温线之间的不一致性被称为滞后现象。
1.焦糖化褐变:糖类物质在没有氨基化合物存在下加热到熔点以上时,会变成黑褐色的色素物质,这作用称为焦糖化褐变。
2.美拉德反应:羰基与氨基经缩合,聚合生成类黑色素的反应称为羰氨反应。
又称美拉德反应。
甲壳低聚糖:是一类由N-乙酰-D氨基葡萄糖或D-氨基葡萄糖通过β-1,4糖苷键连接起来的低聚合度水溶性氨基葡聚糖。
4.转化糖:蔗糖水解产物为葡萄糖和果糖的混合物,称为转化糖(旋光发生改变)5.预糊化淀粉:由淀粉浆料糊化后及尚未老化前,立即进行滚筒干燥,最终产品即为冷水溶的预糊化淀粉。
特性:易于溶解,似亲水胶体。
6.变性淀粉:为适应食品加工的需要,将天然淀粉经物理、化学、酶等处理,使淀粉原有的物理性质,如水溶性、粘度、色泽、味道、流动性等发生变化,这样经过处理的淀粉称为变性淀粉。
过氧化值:表示油脂氧化程度的指标。
按规定方法,用硫代硫酸钠滴定油脂试样中加入碘化钾后的碘量,每公斤油样所需硫代硫酸钠的毫克当量数。
也可用1Kg油脂中的活性氧毫摩尔量表示。
2.油脂的可塑性:在一定外力范围内,油脂具有抗变形的能力,在较大外力的作用下,可改变形状的性质,在较小力的作用下不流动,较大力下可流动。
3.油脂的改性:油脂的改性就是借助于物理化学手段,通过对动物、植物油的加工,改变甘油三酸酯的组成和结构,使油脂的物理性质和化学性质发生改变使之适应某种用途。
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酪蛋白-葡萄糖-PGG纳米复合物的制备及其延缓线虫衰老能力的研究陈运娇1,2,李伟1,2,陈洪璋1,黄庆荣3,曹庸1,2(1.华南农业大学食品学院,广东广州 510642)(2.广东省天然活性物工程技术研究中心,广东广州 510642)(3.美国罗特格斯大学,美国新泽西 08901)摘要:本文采用凝胶电泳、红外光谱和荧光光谱研究酪蛋白与葡萄糖美拉德接枝物的相互作用方式,接着用溶剂蒸发法制备酪蛋白-葡萄糖-PGG(1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖)纳米复合物,以期提高PGG的水溶性及延缓秀丽隐杆线虫衰老能力。
结果表明,生成的接枝物分子量大于116 ku。
糖末端的羰基与蛋白的氨基以化学共价键相连,酪蛋白中引入的糖分子具有D-吡喃葡萄糖环结构。
PGG与酪蛋白或酪蛋白-葡萄糖作用力主要为疏水力。
PGG与酪蛋白-葡萄糖接枝共聚物在疏水力诱导下协同组装得到酪蛋白-葡萄糖-PGG纳米复合物,纳米粒子包埋率为62.27%,粒径为265 nm。
该纳米粒子外观呈淡黄色。
当浓度为10 mg/mL时,该纳米粒子在水中溶解度较好。
酪蛋白-葡萄糖-PGG纳米复合物组线虫平均寿命比PGG组延长了13.00%,因此酪蛋白-葡萄糖接枝共聚物的包埋能有效增强PGG的延缓线虫衰老能力。
关键词:1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖;美拉德反应;纳米复合物;秀丽隐杆线虫文章篇号:1673-9078(2016)8-21-27 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.8.004 Preparation and Anti-aging Effect of Casein-g-glucose-PGGNanocomplexesCHEN Yun-jiao1,2, LI Wei1,2, CHEN Hong-zhang1,HUANG Qing-rong3,CAO Yong1,2(1.College of Food Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)(2.Guangdong Province Engineering Research Center for Bioactive Natural Products, Guangzhou 510642, China)(3.Rutgers university, New Jersey 08901, USA)Abstract: A casein and glucose copolymer was prepared by Maillard reaction and its properties investigated by gel electrophoresis, Fourier transform infrared spectroscopy, and fluorescence spectroscopy. Casein-g-glucose-PGG nanocomplexes were prepared using the solvent evaporation method to improve the water solubility and anti-aging effects of PGG in Caenorhabditis elegans. The results showed that the molecular weight of the conjugate product (casein-g-glucose) was larger than 11 ku. The reducing end of the glucose was covalently linked with the amino group of the protein, and the sugar molecule introduced into the casein had a d-glucopyranose ring structure. The binding force between PGG and casein, or casein-g-glucose, was mainly hydrophobic interaction, which induced the self-assembly of PGG and casein-g-glucose to form casein-g-glucose-PGG nanocomplexes. The encapsulation efficiency of the nanocomplex reached up to 62.27%, the particle size of the nanocomplexes was 265 nm, and the nanocomplexes were light-yellow powders. Nanocomplexes showed good solubility in water at a concentration of 10 mg / mL. Compared with PGG treatment, treatment with the nanocomplexes could significantly extend the mean worm lifespan by 13.00%. In conclusion, the nanocomplex can effectively increase the anti-aging effect of PGG in C. elegans.Key words: pentagalloyl glucose; Maillard reaction; nanocomplex; Caenorhabditis elegans收稿日期:2016-06-25基金项目:广东省自然科学基金博士启动项目(2015A030310118);广东省教育厅科研项目(平台)(2013gjhz0003);广东省自然科学基金自由申请项目(2016A030313394)作者简介:陈运娇(1984-),女,博士,讲师,主要从事天然活性物质抗氧化、抗衰老方面研究通讯作者:曹庸(1966-),男,博士,教授,主要从事天然活性物质提取、分离、鉴定及活性评价211,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖(PGG )是一种天然的单宁多酚类化合物,具有抗癌活性、抗氧化、抗炎症、抗过敏、抗病毒和抗菌及延缓线虫衰老等多种生物学活性[1,2]。
但PGG 是疏水性化合物,在水中的溶解性差,而且PGG 是一类单宁,具有螯合金属离子,结合和/或沉淀蛋白的共性[3],这些性质降低了其稳定性、生物利用度和生物活性,限制了其应用。
酪蛋白是牛奶中的主要组成成分,占牛奶蛋白含量的80%左右。
酪蛋白是由一类结构较近似的蛋白质组成的,包括ɑs 1-酪蛋白,ɑs 2-酪蛋白,β-酪蛋白,和к-酪蛋白,其重量比约为4:1:4:1。
酪蛋白有许多优良的功能特性,如与人体有很好的生物相容性,是生物活性肽的主要来源等。
这些优良的功能特性使得酪蛋白可以作为理想的基材来构造活性物质载体。
目前,一些两亲性共聚物已经被开发用作水相体系中的疏水药物载体[4]。
美拉德反应是在加工、烹调和存储食品过程中都会发生的无毒反应。
美拉德反应能生成一个新的包括亲水性和疏水性链段的两亲性生物聚合物,与蛋白质相比,改善了溶解性和乳化性[5]。
由两亲性纳米粒子形成的疏水性药物载体通常是自发地形成纳米复合物。
作为国际上衰老研究的优秀模式生物,秀丽隐杆线虫因其寿命短,培养简单,遗传操作灵活,在研究延缓衰老方面有明显的优势[2]。
因此,本文采用凝胶电泳、红外光谱和荧光光谱研究酪蛋白与葡萄糖美拉德接枝物的相互作用方式,然后用溶剂蒸发法制备酪蛋白-葡萄糖-PGG 纳米复合物,以期通过酪蛋白-葡萄糖接枝共聚物的包埋作用提高PGG 的水溶性及延缓线虫衰老能力,为PGG 实际应用提供新的参考。
1 材料与方法 1.1 试剂酪蛋白和葡萄糖(technical grade)购自Sigma 公司。
线虫生长固体培养基(NGM )配制:NaCl ,蛋白胨,琼脂,链霉素,胆固醇,CaCl 2,MgSO 4,制霉菌素。
线虫裂解液配制:NaOH ,家用漂白剂(Clorox ,USA)。
其它试剂购自美国VWR 公司。
样品溶液都用去离子水配制。
1.2 美拉德反应制备酪蛋白-葡萄糖共聚物将酪蛋白溶于去离子水中配成溶液(10 mg/mL),并用1.0 M 的NaOH 溶液调节酪蛋白溶液的pH 值至11。
然后将葡萄糖溶液(15 mg/mL)逐滴加入温和搅拌下的酪蛋白溶液中直至酪蛋白与葡萄糖的重量比达到1:2。
当混合溶液搅拌均匀后,将其冻干并将冻干粉末在放置了饱和KBr 的密封干燥器中加热一定时间。
反应温度为60 ℃,反应相对湿度为78.9%。
反应结束后,将产物置于-20 ℃的冰箱中保存备用。
1.3 酪蛋白-葡萄糖接枝共聚物/PGG 纳米粒子的制备将PGG 溶于无水乙醇配成溶液。
将相同体积的PGG 无水乙醇溶液和酪蛋白-葡萄糖接枝共聚物水溶液混合,并在室温、避光下搅拌24 h ,然后在旋转蒸发仪下将混合液的溶剂抽干(20 ℃)。
将样品在水中重新分散后再次抽干溶剂。
最后将样品溶于少量的水中,冻干后放置-20 ℃的冰箱中备用。
1.4 粒径大小的测定将样品溶于蒸馏水,配制成浓度为1 mg/mL 的溶液以用于检测样品在水溶液中的水合直径和多分散系数。
测试所用的仪器为美国DLS-based BIC 90plus 粒度分析仪,仪器配置有Brookhaven BI-9000AT 数字相关器和激光光源,该激光光源在波长为658 nm 时的输出功率30 mW 。
所有的测试均在25 ℃下进行,散射角度为90 o 。
信号由高灵敏度雪崩光电二极管检测,测量到的时间相关函数由相关器自带的自动程序进行分析。
结果表示为平均值±标准偏差(n=3)。
1.5 高效液相色谱美国戴安HPLC 仪(UltiMate 3000 HPLC 系统,25D UV 紫外吸收检测仪);分析条件如下:色谱柱为Diamonsil C18色谱柱(250×4.6 mm ,5 µm );检测波长270 nm ,色谱洗脱条件0%~90%甲醇(含有0.2%乙酸)梯度洗脱1 h ,流速为1 mL/min ;进样量:20 µL 。
1.6 PGG 包埋率的测定PGG 在酪蛋白-葡萄糖接枝物中的包埋率测定方法参考文献[6]并作适当修改。