常用乳酸菌培养基 (2)
东北传统酱腌菜中耐盐乳酸菌的筛选、鉴定及其发酵特性研究
东北传统酱腌菜中耐盐乳酸菌的筛选、鉴定及其发酵特性研究目录一、内容概述 (2)1. 研究背景与意义 (2)2. 国内外研究现状 (3)3. 研究内容与方法 (4)二、材料与方法 (6)1. 材料选取 (6)东北传统酱腌菜样品采集 (7)耐盐乳酸菌分离纯化 (8)2. 实验室培养条件 (9)培养基选择与制备 (10)培养方法与步骤 (11)3. 耐盐乳酸菌筛选 (12)斜面初筛 (13)耐盐性测试 (14)4. 耐盐乳酸菌鉴定 (15)16S rDNA序列分析 (16)准备好凝胶电泳 (17)5. 发酵特性研究 (18)发酵条件优化 (19)产物分析 (20)三、结果与讨论 (21)1. 耐盐乳酸菌的筛选结果 (22)不同样品中的耐盐乳酸菌数量对比 (23)耐盐乳酸菌的生理生化特征 (24)2. 耐盐乳酸菌鉴定结果 (25)16S rDNA序列比对与分析 (26)准备好凝胶电泳图谱 (27)3. 发酵特性分析 (28)四、结论与展望 (29)1. 研究结论 (30)2. 研究创新点 (31)3. 研究不足与展望 (32)一、内容概述本研究聚焦于东北传统酱腌菜中耐盐乳酸菌的筛选、鉴定及其发酵特性，旨在深入挖掘和利用这一宝贵资源。
在筛选阶段，我们采集了多种东北传统酱腌菜样品，并经过严格筛选，成功分离出多株具有耐盐特性的乳酸菌。
这些乳酸菌在高盐环境中仍能保持旺盛的生长势头，显示出出色的耐盐能力。
我们运用先进的生理生化鉴定方法和分子生物学技术对这些乳酸菌进行了鉴定。
通过对比分析，确定这些菌株的分类地位及遗传特性，为东北传统酱腌菜的发酵剂提供科学依据。
在探究其发酵特性的过程中，我们对这些乳酸菌的生长曲线、产酸能力、耐盐能力等关键指标进行了系统研究。
这些研究结果不仅揭示了乳酸菌在酱腌菜发酵过程中的重要作用，还为其在工业生产中的应用提供了理论支持。
本研究不仅全面了解了东北传统酱腌菜中耐盐乳酸菌的种类和特性，还为优化酱腌菜生产工艺、提升产品质量提供了新的思路和方向。
乳酸菌发酵培养基（MRS）中各成分的作用
乳酸菌发酵培养基（MRS）中各成分的作⽤
试题研究：2017年4⽉考试中，有乳酸菌发酵培养基（MRS），MRS培养基是⽤于⾷品中乳酸菌检测的。
成分是什么？各成分有什么作⽤？
1．成分
蛋⽩陈 10.0g
⽜⾁粉 5.0g
酵母粉 4.0g
吐温80 1.0mL
磷酸氢⼆钾 2.0g
⼄酸钠 5.0g
柠檬酸三铵 2.0g
硫酸镁 0.2g
硫酸锰 0.05g
琼脂粉 15.0g
蒸馏⽔ 1000mL
2．制法
将上述成分加⼈蒸馏⽔中，加热溶解，校正pH 6.2，分装后121℃⾼压灭菌15min—20min。
3．各成分的作⽤
蛋⽩胨、⽜⾁浸粉、酵母浸粉提供氮源、维⽣素、⽣长因⼦；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢⼆钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸氢⼆铵、硫酸镁、硫酸锰、吐温-80和⼄酸钠为培养各种乳酸菌提供⽣长因⼦，其成分还能抑制某些杂菌；琼脂是培养基的凝固剂。
酸乳中乳酸菌的测定
实验乳及乳制品中乳酸菌的测定一、目的1、解酸乳中乳酸菌分离原理2、学习并掌握酸乳中乳酸菌菌数的检测方法。
二、原理活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量的依据。
由于乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等，一般的肉汤培养基难以满足其要求。
测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。
要提高检出率，关键是选用特定良好的培养基。
采用稀释平板菌落计数法，检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。
三、材料1、培养基改良MC培养基（MRS培养基，改良CHALMERS培养基，M17培养基）。
2、仪器和器具无菌移液管（25ml,1ml），无菌水（225ml带玻璃珠三角瓶，9ml试管），无菌培养皿，旋涡均匀器，恒温培养箱。
四、流程酸奶→稀释→制平板→培养→检查计数五、方法1、样品稀释先将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25ml加入盛有225ml无菌水的三角瓶中，在旋涡均匀器上充分振摇，务必使样品均匀分散，即为10-1的样品稀释液，然后根据对样品含菌量的估计，将样品稀释至适当的稀释度。
2、制平板选用2~3个适合的稀释度，培养皿贴上相应的标签，分别吸取不同稀释度的稀释液1ml 置于平皿内，每个稀释度作2个重复。
然后用溶化冷却至45℃左右的MC培养基倒平皿，迅速转动平皿使之混合均匀，冷却成平板。
3、培养和计数将平皿倒置于37℃恒温箱内培养72h，观察长出的细小菌落，计菌落数目，按常规方法选择30~300个菌落平皿进行计算。
六、结果1、指示剂显色反应乳酸菌的菌落很小，1~3mm，圆形隆起，表面光滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黄色。
由于产酸菌落周围能使CaCO3产生溶解圈，酸碱指示剂呈酸性显色反应。
2、镜检形态必要时，可挑取不同形态菌落制片镜检确定是乳杆菌或乳链球菌。
保加利亚乳杆菌呈杆状，成单杆、或双杆菌或长丝状。
实验室常用培养基大全及配方
枝毛霉、两型孢毛霉、直立毛霉、球孢毛霉、丝球毛霉、大毛霉、多型孢毛霉、总状
毛霉、鲁氏毛霉、五通桥毛霉、黑球漆斑菌、露湿漆斑菌、玫烟色拟青霉、棉铃虫拟
青霉、拟青霉、球形阜孢、白腐菌、少根根霉、华根霉、科恩根霉、戴尔根霉、日本根霉、爪哇根霉、米根霉、点头根霉、绿穂霉、簇孢匍柄霉、雅致枝霉、康宁木霉、绿色木霉、黄萎轮枝孢、大丽花轮枝孢
大豆酪蛋白琼脂培养基(含卵磷脂)
哥伦比亚CNA琼脂
SLB培养基
胰酪胨大豆琼脂
大豆酪蛋白琼脂（灌装生产用）
血琼脂基础2号
酪胨琼脂（G.A）
三糖铁（TSI）琼脂
含0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化钠-蛋白液
3%氯化钠碱性蛋白胨水
TCBS琼脂
3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂
3%氯化钠三糖铁琼脂
氯化钠三糖铁琼脂
适用范围：大豆根瘤菌（慢生型）、豇豆慢生根瘤菌、花生根瘤菌、紫云英根瘤菌、
大豆根瘤菌（快生型）、大豆根瘤菌、豌豆根瘤菌、苜蓿根瘤菌、田菁根瘤菌
10. Mannitol Agar (甘露醇琼脂)
Yeast extract (酵母膏)5gPeptone (蛋白胨)3g
Mannitol (甘露醇)25gAgar (琼脂)15g
适用范围：植物乳杆菌（胚芽乳杆菌）、嗜热乳酸链球菌
6. Lactic-bacteria MidiumⅡ(乳酸菌培养基Ⅱ)
Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨)10gBeef extract (蛋白胨)10g
Yeast extract (酵母膏)5gGlucose (葡萄糖)5g
Tween (吐温) 801gK2HPO42g
146种常见培养基的配方
146种常用培养基配方THE COMPOSITION OF MEDIA培养基及成分1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基)Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10gCaCO3 20g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂)Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30gNaCl 5g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2[Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation .适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基)KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8gMgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O 0.1gNa2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5gMannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量)Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15gAdjust (调) pH to 7.2适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基)Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1gGlucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml[Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃ for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the liquid , then autoclave at 121℃ for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。
146种常见微生物培养基配方(可打印版)
146种培养基配方1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠10g琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼脂20g水1000mLpH 7.2～7.4配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。
121℃灭菌20min。
3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红（rose bengal，玫瑰红水溶液）100mL琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15—20gpH 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
酸奶中微生物
⑴酸奶中有哪些微生物？酸奶中有乳酸菌，如双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌等都是乳酸菌。
⑵乳酸菌培养基配方：MRS（寒天）培养基一般是用来培养乳酸菌的，使用发明者的名字来命名的。
mrs培养基的组织成分：组成成重量(g)牛肉蛋白粉10鱼肉汁10酵母浸出汁粉 5葡萄糖20醋酸钠 5柠檬酸二铵 2吐温80 0.1硫酸镁0.58硫酸锰0.28蒸溜水 1 000ml备注：用高压锅在121℃灭菌15min，调节pH6.2～6.4LC培养基只能计数干酪乳杆菌，MRS—水杨素（或山梨醇）培养基可以计数嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌；而MRS培养基可以计数这3种益生菌，通过减法原则从嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌和双歧杆菌混合物中单独计数。
另外，MRS—NNLP培养基也可用于选择性计数双歧杆菌。
蛋白胨10g牛肉浸膏10g酵母提取物5g葡萄糖20g吐温80 1 g柠檬酸氢二铵2 gMnSO4·H2O 0.05gMgSO4·7H2O 0.20 gK2HPO4 2g琼脂20g蒸馏水1000ml5 Lactic-bacteria Medium I (乳酸菌培养基I )Yeast extract (酵母膏) 7.5g Peptone (蛋白胨) 7.5gGlucose (葡萄糖) 10g KH2PO4 2gTomato juice (西红柿汁) 100ml Tween (吐温) 80 0.5mlDistilled water (蒸馏水) 900ml pH 7.0适用范围：植物乳杆菌（胚芽乳杆菌）、嗜热乳酸链球菌6. Lactic-bacteria Midium Ⅱ(乳酸菌培养基Ⅱ)Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract (蛋白胨) 10gYeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5gTween (吐温) 80 1g K2HPO4 2gNa-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2gMgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05gDistilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8适用范围：植物乳杆菌（胚芽乳杆菌）文- 汉语汉字编辑词条文，wen，从玄从爻。
各种培养基配方
146种培养基配方1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠10g琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼脂20g水1000mLpH 7.2～7.4配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。
121℃灭菌20min。
查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红（rose100mLbengal，玫瑰红水溶液）琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15—20gpH 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
乳酸菌常用培养基M17
M17 Agar • M17 BrothIntended UseM17 Agar is used for isolating and enumerating lactic strepto-cocci in yogurt, cheese starters and other dairy products.M17 Broth is used for isolating lactic streptococci from yogurt, cheese starters and other dairy products. Summary and ExplanationLactic streptococci are acid-producing bacteria. They are nutritionally fastidious and require complex culture media for optimum growth. One study showed that in a synthetic medium, all strains had an obligate requirement for at least six amino acids and three vitamins.1 These homofermentative lactic streptococci produce large amounts of acid and, in a culture medium without an adequate buffering system, the pH decreases and adversely affects growth. Lowrie and Pearce2 developed M16 Medium but it lacked a strong buffering system. Terzaghi and Sandine3worked with M16 Medium and demonstrated that the rapid drop in pH that accompanies lactic streptococcal growth can adversely affect colony size and phage plaque formation. They modified M16 Medium using disodium-β-glycerophosphate as a buffer and called it M17. Shankar and Davies4 found that disodium-β-glycerophosphate in M17 Broth suppressed Lactobacillus bulgaricus and selectively isolated Streptococcus thermophilus from yogurt. Similar results were achieved using M17 Broth solidified with agar. The International Dairy Federation recommends M17 Agar for isolating S. thermophilus from yogurt.5 M17 Agar is a standard methods medium for isolating lactic streptococci.6 Principles of the ProcedureM17 Agar and M17 Broth contain peptones and meat derivatives as sources of carbon, nitrogen, vitamins and minerals. Yeast extract supplies B-complex vitamins which stimulate bacterial growth. Disodium-β-glycerophosphate buffers the medium as acid is produced from fermentation of lactose. Ascorbic acid stimulates growth of lactic streptococci. Magnesium sulfate provides essential ions for growth. Agar is the solidifying agent in M17 Agar.FormulaeDifco™ M17 AgarApproximate Formula* Per 950 mLPancreatic Digest of Casein .........................................5.0 g Soy Peptone ................................................................5.0 g Beef Extract .................................................................5.0 g Yeast Extract ...............................................................2.5 g Ascorbic Acid ..............................................................0.5 g Magnesium Sulfate .....................................................0.25 g Disodium-β-glycerophosphate ...................................19.0 g Agar .........................................................................11.0 g Difco™ M17 BrothConsists of the same ingredients without the agar.*Adjusted and/or supplemented as required to meet performance criteria. Directions for Preparation from Dehydrated Product1. Suspend the powder in 950 mL of purified water.Difco™ M17 Agar – 48.25 g;Difco™ M17 Broth – 37.25 g.Mix thoroughly.2. Heat with frequent agitation and boil for 1 minute to com-pletely dissolve the powder.3. Autoclave at 121°C for 15 minutes. Cool to 50°C.4. Add 50 mL sterile 10% lactose solution and mix well.5. Test samples of the finished product for performance usingstable, typical control cultures.Difco™ & BBL™ Manual, 2nd EditionDifco™ & BBL™ Manual, 2nd EditionProcedureSee appropriate references for specific procedures.Expected resultsRefer to appropriate references and procedures for results.references1. Reiter and Oram. 1962. J. Dairy Res. 29:63.2. Lowrie and Pearce. 1971. J. Dairy Sci. Technol. 6:166.3. Terzaghi and Sandine. 1975. Appl. Microbiol. 29:807.4. Shankar and Davies. 1977. J. Soc. Dairy Tech. 30:28.5.International Dairy Federation. 1981. Identification and enumeration of microorganisms in fermented milks. Joint IDF/ISO/AOAC Group E44.6. Richter and Vedamuthu 2001. In Downes and Ito (ed.), Compendium of methods for the microbiologi-cal examination of foods, 4th ed. American Public Health Association, Washington, D.C.Availability™Dehydrated – 500 gDifco ™ M17 BrothCat. No. 218561 Dehydrated – 500 g。
酸奶菌种的分离及鉴定
酸奶菌种的分离及鉴定乳酸菌是指一群通过发酵糖类，产生大量乳酸的细菌总称。
乳酸从形态上可分为球菌和杆菌，并且均为革兰氏染色阳性、在缺少氧气的环境中生长良好的兼性厌氧性或厌氧性细菌。
目前，对乳酸菌的应用研究，着重于食品（如发酵乳制品、发酵肉制品和泡菜）和医药工业等人类生活密切相关的领域。
目前市售的各种酸奶制品中, 作为发酵剂的乳酸菌, 通常为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌这两株菌。
用嗜热链球菌和保加利亚乳酸杆菌混合培养发酵的乳酸饮品能补充人体肠道内的有益菌，维持肠道的微生态平衡，且含有易于吸收的营养素，具有抑制腐败菌、提高消化率、防癌及预防一些传染病等功效，并能为食品提供芳香风味，使食品拥有良好的质地。
保加利亚乳杆菌（L.Bulgarius）:长杆形，直径1-3mm左右,能产生大量的乳酸。
酸碱度方面,为耐酸或嗜酸性,因低 pH能防止一些微生物的生长;温度方面,为嗜温至少许嗜热,最适生长温度在37-45℃之间,对低温非常敏感。
嗜热链球菌（S.thermophilus）：卵圆形，直径0.7－0.9微米，呈对或链状排列，无运动性。
为健康人肠道正常菌群，可在人体肠道中生长、繁殖。
可直接补充人体正常生理细菌，调整肠道菌群平衡，抑制并清除肠道中对人具有潜在危害的细菌。
本研究对市售主要品牌酸奶中（河南花花乳业生产的酸奶）乳酸菌进行了分离鉴定，并进一步探讨制备酸奶条件（温度、时间等），以达到最佳的天然酸奶质量效果。
一、实验内容（1）乳酸菌的分离纯化1．无菌操作倒平板、十倍稀释、划线分离，恒温培养2．菌落观察与镜检3．筛选生产用菌株（2）优化酸奶制作条件1．制备发酵液2．不同条件下，接种发酵菌剂并发酵生产3．观察发酵情况4．品尝发酵产品，进行质量评价5．记录结果二、实验器材1）菌种：新鲜乳酸饮料（标记只含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）2）试剂：脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙；0.4gNaOH固体、4.2ml浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g；3）仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培养箱、pH 试纸、酸乳瓶、培养皿（φ9或φ12）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针（环）、擦镜纸四、实验方法4.1乳酸菌的分离纯化4.1.1分离(1)配制BCG牛乳培养基，分装三角瓶，包扎，灭菌备用。
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常用乳酸菌培养基
MRS培养基的组织成分：
组成成 重量(g)
牛肉蛋白粉 10
鱼肉汁 10
酵母浸出汁粉 5
葡萄糖 20
醋酸钠 5
柠檬酸二铵 2
吐温80 0.1
硫酸镁 0.58
硫酸锰 0.28
蒸溜水 1000ml 备注：用高压锅在121℃灭菌15min，调节pH6.2～6.4
1．改良的MRS培养基（用于保加利亚乳杆菌的生长繁殖）：
胰陈10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、吐温80ml、K2HPO4 2g、乙酸钠5g、
柠檬酸胺2g、MgSO4·7H2O 0.02g、MgSO4·4H2O 0.05g、蒸馏水1000ml、pH(5.6～5.8)。
3. 葡萄糖-酵母膏培养基（用于嗜热链球菌的生长繁殖）：
酵母膏 2.5g, 蛋白胨5g, 葡萄糖1g, 蒸馏水1000ml ,pH7.0。
4. 改良M17基础培养基(用于嗜热链球菌的平板计数):
胰陈10g、牛肉膏5g、酵母膏2.5g、磷酸甘油二钠10g、MgSO4·7H2O 0. 25g、异维C0.5g、
琼脂15g、蒸馏水950ml、pH(7.1～7.2)。
5. M17培养基(2号)：
大豆胨5g；蛋白胨2.5g；酪蛋白胨2.5g；酵母浸粉2.5g；牛肉粉5g；乳糖5g；抗坏血
酸钠0.5g；β-甘油磷酸钠19g；MgSO 4 0.25g；琼脂12.75g；蒸馏水1000ml，pH7.0～7.4；
121℃，15min灭菌。
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6. LBS培养基(5号)：酵母浸粉5g；胰酪蛋白胨10g；葡萄糖20g；柠檬酸铵2g； KH2 PO4 6g；
FeSO4 0.034g；MgSO4 0.575g；CH3COONa 25g；MnSO4 0.12g； Tween80 1ml；冰乙酸1.3ml；
蒸馏水1000ml，pH5.5±0.2；118℃，15min灭菌。
7. 改良MC琼脂（g/l）：用于乳酸菌的培养和计数。大豆蛋白胨5.0，牛肉膏粉 5.0，酵母粉
5.0，葡萄糖20.0，乳糖20.0，碳酸钙10.0，琼脂粉14.0，中 性红0.05，pH6.0±0.1，121℃、
15分钟灭菌
8. SL培养基：蛋白胨 10g；酵母粉 5g；葡萄糖 20g；柠檬酸二铵 2g；醋酸钠 25g；硫酸镁
0.58g；硫酸锰 0.15g；吐温-80 ml；磷酸二氢钾 6g；硫酸亚铁 0.03；琼脂 15——20g
9. Elliker琼脂培养基（用于乳球菌的分离）：胰蛋白胨 20g；蔗糖 5.0g；酵母粉 5g；氯化钠
4.0g；明胶 2.5g；乙酸钠 1.5g；葡萄糖 5g；抗坏血酸 0.5g；乳糖 5.0g；琼脂 15—20g
10.明串球菌的分离和培养，选择性培养基：
1）. HP培养基 植物蛋白胨 20g；柠檬酸铵 5g；酵母粉 6g；硫酸亚铁 0.04g；牛肉膏 10g
硫酸镁 0.2g；吐温80 1ml；硫酸锰 0.05g；葡萄糖10g
2）. 蔗糖硫胺培养基 蔗糖 100g ；磷酸氢二钾 5g；酵母粉 2.5g；硫酸镁 0.2g；硫酸铵
0.2g；氯化钠 0.6g；琼脂 15—20g 。