制药工程专业毕业论文
制药工程毕业论文方案怎么写

制药工程毕业论文方案怎么写1. 论文题目“利用先进技术在制药工程中的应用及其影响分析”2. 研究背景随着科学技术的不断发展,制药工程领域也在不断创新和进步。
尤其是近年来,先进技术在制药工程中的应用日益广泛,为制药行业带来了巨大的变革和影响。
因此,本研究旨在深入探讨先进技术在制药工程中的应用情况及其对制药行业的影响,为制药工程领域的发展提供参考和建议。
3. 研究目的通过对先进技术在制药工程中的应用及其影响进行深入研究,旨在探讨以下问题:•先进技术在制药工程中的应用情况;•先进技术对制药工程的生产效率和质量提升有何影响;•先进技术对制药工程领域的竞争格局和产业结构的影响;•为制药工程领域的发展提供参考和建议。
4. 研究内容本研究将围绕先进技术在制药工程中的应用及其影响展开研究,具体内容包括:•先进技术在制药工程中的应用情况调研;•先进技术对制药工程的生产效率和质量提升的影响分析;•先进技术对制药工程领域的竞争格局和产业结构的影响分析;•对制药工程领域的发展提出参考和建议。
5. 研究方法本研究将采用实证研究方法,包括调研、实地观察、案例分析等方法,通过收集大量的案例和实例数据,分析先进技术在制药工程中的应用情况和对制药行业的影响,为研究提供有力的依据。
6. 预期成果通过对先进技术在制药工程中的应用及其影响的深入研究,本研究预期可以得出以下成果:•全面深入地了解先进技术在制药工程中的应用情况;•分析先进技术对制药工程的生产效率和质量提升的影响;•探究先进技术对制药工程领域的竞争格局和产业结构的影响;•为制药工程领域的发展提出参考和建议。
7. 参考文献•王鹤,李志远.工程制药学[M]. 第二版.北京:中国医药科技出版社,2016.•戴振国,张书民. 药物制剂工程原理与实践[M]. 北京:人民卫生出版社,2018.•张丽. 制药工程原理与实践[M]. 北京:科学出版社,2019.8. 研究进度安排本研究拟于2022年9月开题,通过1年时间完成,具体进度安排如下:•2022年9月-2022年12月:文献调研和学术讨论;•2023年1月-2023年4月:案例收集和分析;•2023年5月-2023年8月:撰写论文和准备答辩。
药学毕业论文优秀3篇

药学毕业论文优秀3篇药学是连接健康科学和化学科学的医疗保健行业,它承担着确保药品的安全和有效使用的职责。
那么要是要写药学的论文3000字该怎么写?为了帮助大家更好的写作药学毕业论文3000字,山草香整理分享了3篇药学毕业论文。
摘要:药学实验教学是理论教学的重要补充,对培养学生的创新思维和动手能力都具有十分重要的作用。
为了提高人才培养质量,培养更多的高级应用型药学人才,吉林医药学院在四年制本科生中探索开展药学综合实验教学,对应用型人才的培养起到了良好的促进作用。
关键词:药学;综合实验;教学一、引言药学是以现代医学、化学为主要理论指导,研究、开发和生产用于治病防病药物的一门科学,涉及药物化学、药剂学、药理学、药物分析学、生药学及微生物与生化制药学等多门学科[1]。
近年来,随着药学行业的飞速发展,药品企业对于应用型、复合型和创新型人才的需求日益增加,而传统的药学教学模式下的实验教学多伴随各自的理论课开设,实验内容以验证性实验为主,不利于学生自主学习能力和创新意识的培养,已不能满足当代人才培养的需要[2]。
面对这一新的变化、新的形势,吉林医药学院从2023年开始对传统的药用植物学、生药学、药物化学、天然药物化学、药剂学和药物分析等课程内容进行精选和整合,在药学、药物制剂和临床药学本科学生中开设药学综合实验,培养了学生的动手能力和综合分析和解决问题的能力,取得了较好的教学效果。
二、药学综合实验课程的基本构建第一,药学综合实验内容的选择。
药学综合实验在实验设计上按照从天然药用植物中开发新药和通过化学合成研发新药两条主线进行。
吉林医药学院组织相关课程专家、教授对现有实验教学现状进行分析研究和反复论证,最终选取“三黄药片的制备与质量检查;对乙酰氨基酚的合成、鉴定、含量测定及其制剂的制备和质量检查;盐酸小檗碱控释片的制备及释放度的测定”三个实验作为药学综合实验的教学内容。
[3]第二,药学综合实验的教学安排。
其一,开设时间。
制药工程本科毕业论文

制药工程本科毕业论文点击化学法合成芳香二脒类化合物摘要:传统的合成脒的反应产量很低,从而限制了对其进行一步的研究与开发。
因此,选用以炔基与叠氮基加成链接的点击化学法高产量合成脒类化合物有着非常重要的意义。
本实验研究以对氰基苯酚、氢氧化钠、3-溴基丙炔、叠氮化钠、二溴代烷、氨化物等物质为底物,经过搅拌、回流、过滤重结晶等反应过程,利用点击化学法最终得到脒类化合物。
其结构均经红外分析仪分析后,均有脒的结构。
关键词:点击化学法;对氰基苯基丙炔醚;芳基二脒类化合物;合成Abstract: The traditional synthesis of amidine reaction yield is very low, thus limiting step in its research and development.Therefore, the Synthesis of high-yield aromatic diamidines compounds via click chemistry has very important significance. The experimental studyof p-Cyano Phenol Catalyzed, Sodium Hydroxide and 3 - propargyl bromine, NaN3, Dibromoalkane, ammonium compound and other substances asthe substrate, after stirring, reflux, filtration recrystallization reactions,click to finally get using amidine chemical compounds.Keywords:clickchemistry;p-cyanophenolpropargylether;aromatic;diamidines;Synthesis1.前言1.1脒类化合物简介:1.1.1脒类化合物概述脒类化合物是非常重要的化合物,广泛应用于抗生素、利尿剂、消炎药、驱虫剂、杀菌剂和广谱杀螨剂。
制药工程导论论文

制药工程导论论文前言:通过半个多学期的制药工程导论的学习,我对于制药工程这门专业有了初步的认识。
制药工程是指以药物的研究、开发、生产、效能分析为主要内容工程技术领域,是一个化学、药学(中药学)和工程学交叉的工科类专业,以培养从事药品制造,新工艺、新设备、新品种的开发、放大和设计人才为目标。
尽管制药工程专业在名称上是新的,但是从学科沿革来看它的产生并不是全新的,是相近专业的延续,也是我国科学技术发展到一定时期的产物。
现代制药工业体系是随着十九世纪中期以后化学,生物学,医学等现代科学的发展而逐步形成的,根据生产性质分为原材料药生产和制剂生产两大类。
在原料药生产中,又根据药物来源与生产性质的不同,分为化学合成制药,天然药物,微生物发酵制药及生化和现代生物技术制药几大类。
化学合成制药是由化工原料通过化学合成的方法制取药物。
天然药物生产主要是从动植物中分离和提取有效成分,微生物发酵时通过微生物发酵的方法生产抗生素和其他药物,生化和现代生物技术制药是通过生物化学方法和现代生物工程技术生产药物,这是近年来迅速发展起来的一个新的制药领域,一些用化学合成难以制取的复杂结构药物,已能用现代生物技术方便的制取,具有广阔的前景。
在制剂生产中,按药物的来源可分为西药制剂,中药制剂和中西复方制剂。
一、制药工程专业所涉及的领域制药工程技术是奠定在药学,生物技术,化学,工程学以及管理学等基础上的交叉学科,是化学工程和制药类的前沿学科领域,是应用化学、生物技术,药学、工程学、管理学及相关科学理论和技术手段的解决制造药物的实践工程等的一门交叉类学科。
其主要涉及的领域包括有化学工程与技术、生物制药工程与技术、中药制药工程与技术、药物制剂工程与技术、药品生产质量管理系统工程、新药的的研究与开发。
其中的中药制药工程技术是我国独有的特色,也是我国更具有优势,有责任发展的学科。
1.化学工程与技术化学制药工程的研究范围涵盖了药物从无到有,从设计到生产出成品原料药的整个过程。
我国制药企业毕业论文论文

我国制药企业毕业论文论文一、指导教师的选择学生对毕业论文的选题必须要有浓厚的兴趣才能促使其积极主动完成相关研究,才有可能产生创新结果。
目前国内很多大学采用双向选择的方式确定指导教师和选题,学生可以选择自己感兴趣的课题,然后指导教师根据选题情况及学生的基本情况进一步确定论文题目,该办法的好处是可以调动学生的积极性,且可以实现教与学的互动,不足之处是容易出现“扎堆”现象。
日本的东京工业大学、东京农工大学、神奈川大学和京都大学等却采用单向选择的方式,即只有学生选择指导教师,而指导教师需无条件接受,学生可以根据自己的意愿和指导教师的研究方向选择自己感兴趣的研究课题,然后与指导老师协商进而确定选题。
目前我校制药工程专业毕业论文的选题也是双向选择,指导教师先填写信息表,包括近年承担的项目情况和毕业论文题目、本年度拟开展的论文题目等内容,学生根据信息表选择指导老师和论文题目,这种方法极易出现“扎堆”现象,并且指导教师在信息表中提供的信息有限,无法实现面对面的及时交流,老师与学生、学生与课题之间的了解不够深入。
因此,建议指导教师与学生的选择采取双向选择和单向选择相结合的办法,即以学生的选择为主要考虑要素,除非是因为选择的学生太多、实验室面积限制或课题经费困难等因素,指导教师可以婉拒学生。
在毕业论文选题前专门组织指导教师与学生的见面会,每位教师都要详细、全面地向学生介绍自己的课题及目前研究进展情况,尤其是学生毕业论文时参与的具体内容,这样才能让学生根据自己的兴趣实现真正的双向选择。
二、毕业论文的选题本科毕业论文的选题一般不宜要求过高,该环节的重点是培养学生严肃的科学态度、严谨的科学作风和严密的科学思维,引导学生动脑动手,加强实验基本技能的训练,提升学生的基本科研素质和综合素质,进而实现创新能力的培养。
目前我校制药工程专业毕业论文的选题存在的主要问题有以下几点。
1.选题脱离本专业实际,缺乏理论价值和实际应用价值。
2.缺乏创新,墨守成规,没有独到的见解。
生物制药毕业论文(精选多篇)

生物制药毕业论文(精选多篇)第一篇:生物制药论文生物制药论文利用转基因植物生产药用蛋白的研究进展冯小雨(陕西理工学院生物学院生物科学071班,陕西汉中 723001)指导教师:冯自立[摘要]简要评述了利用转基因植物生产的药用蛋白种类和表达系统,利用转基因植物生产药用蛋白的研究现状、发展趋势,以及转基因植物生产药用蛋白的基本方法、应用研究等。
尽管目前植物作为药用蛋白的生物反应器受到诸多因素限制,优点与问题并存,但利用转基因植物生产药用蛋白是植物基因工程研究领域的一个新的发展趋势。
[关键词]转基因植物;药用蛋白;生物反应器引言传统的生物医药基因工程常利用动物病毒、细菌、酵母等为生物反应器进行药用蛋白的生产,存在一些不足之处,如,细菌细胞不能进行许多病毒蛋白质的转录后的修饰作用,不利于蛋白质的正确折叠,导致其免疫性通常较弱;酵母菌对有些蛋白质的过分糖基化可能影响针对特定蛋白质的免疫反应,妨碍着酵母菌在一些疫苗生产中的应用;多数动物培养系统表达水平低,需要昂贵的生长培养基,且培养基需要特殊处理,因此疫苗成本很高,限制了其商品化应用。
利用转基因植物作为生物反应器,把外源基因导入植物核基因组或叶绿体基因组中可以生产出在医学上有生物活性的药用蛋白,且可以克服其他反应系统的缺陷,成为药用蛋白生产的又一新途径。
1问题的提出现代基因工程技术最初是建立在结构简单的微生物,尤其是大肠杆菌的基础之上的,最初都以大肠杆菌为受体表达外源蛋白,用转基因植物生产药用蛋白的思路出自偶然。
八十年代末,比利时pgs公司的科学家将一个神经肽(enkephalin,脑啡肽)编码基因转入烟草中表达,用意在于让瘾君子们不用抽烟,只需拿烟叶闻一闻或放在口中嚼一嚼即可过烟瘾,以此减少尼古丁对人体的危害及减少空气污染。
他们把这个小肽基因两端设计了两个蛋白酶的酶切位点,将改造后的基因串联导入烟草细胞并成功获得再生植株,结果小肽以多聚体的形式表达存在,用胰蛋白酶和羧肽酶作用后获得了神经肽,每粒种子在200nmol,然而,他们的目的最终没能达到,因为神经肽要经血液运输而起作用,在口腔及消化道内会被降解掉,但他们却意外地找到了一条转基植物生产神经肽的途径,引起人们对此领域的关注。
中药制药专业毕业论文范文

中药制药专业毕业论⽂范⽂ 升级传统的中药制药装备,提升中药制药产业科技⽔平是当前祖国医药产业振兴的前提。
下⾯是店铺为⼤家整理的中药制药专业毕业论⽂范⽂,供⼤家参考。
中药制药专业毕业论⽂范⽂篇⼀ 摘要:进⼊⼆⼗⼀世纪以来,我国的科学技术不断进步,现代制药技术不断深⼊。
由于传统的思想,在药品的选择上,⼈们偏向于中药,所以对中药的⽣产和研究提出更⾼的要求。
中药作为我国传统医学的精髓,对其进⾏现代化的发展是必然的选择。
⼀般来说,中药研究的过程是采⽤先进的科学技术,对中药成分中有毒有害物质的去除,⽣产出副作⽤⼩、质量稳定的药品。
⽬前,⼤多数的医药研究员都引⼊了现代制药技术,来提升我国传统中药的质量和作⽤,提⾼中药⽣产的效率。
关键词:现代制药技术中药⽣产应⽤分析 ⼀、引⾔ ⽬前,我国中药⽣产技术明显落后于其他制药技术,中药产业在我国制药市场中呈现下滑趋势。
中药产业若想在激烈的制药市场中⽴⾜和发展,就必须不断的引⼊现代新技术,向⾼科技制药技术的⽔平和⽅向发展。
随着我国加⼊世界贸易组织,我国的中药产业得到了较好的发展,⼤多数中药企业都投⼊⼤量资⾦,引⼊了现代化⾼新技术,这刺激和影响着传统的中药产业。
现代化科学制药技术和各种制药新⼯艺、新设备的应⽤,使我国中药产业取得了举世瞩⽬的成就,也推进了中药制药剂量和药效稳定发展。
⼆、现代化中药制药技术实例概况分析 进⼊⼆⼗⼀世纪以来,中航建发在医药⽅⾯形成了⾃⼰的特⾊,拥有了⼀⽀专业的设计队伍。
其医药⼯程项⽬设计主要涵盖⽣物制药、中药提取和医药制剂以及配套的设施等。
特别是中药提取车间的⼯程项⽬设计,把国内外的先进制药技术和我国传统中药制药技术联系起来,不断的改⾰和完善,形成了⼀套全⾯的中药现代化⽣产技术体系,被国家发改委员会评为“⾼技术产业化⽰范⼯程项⽬”。
此制药项⽬占地⾯积达到3000多平⽅⽶,⼚区分为两期⼯程进⾏规划和整理,⼀期⼯程建筑⾯积达到8000平⽅⽶,为双层,⾼度为18.75⽶,结构形式为钢筋混凝⼟结构。
药学专业毕业论文范文三篇

范文一:中西药配伍禁忌探讨摘要:中西医结合发展的今天,怎样联用中西药才能增强疗效、避免产生不良反应,达到合理用药的目的,已经成为困扰临床医师的问题,也是临床药师研究的重要内容.本文将就不恰当的中西药联用时药物所发生的理化性质的改变、药理变化,导致药物的治疗效果的降低、毒性反应的增加等问题进行总结讨论.关键词:药物不良反应合理配伍用药安全引言:中西药配伍,已成为当今临床治疗的一个手段,中西药配伍,有此能提高疗效,降低毒副作用,但有些却降低疗效或产生毒副反应,中药的应用和发展有着悠久的历史,经过长期实践有了一定的认识,而中西药的配伍禁总在临床上却重视不够,常存在不合理用药现象。
现从药理化学和药理学两方面讨论中西药的配伍禁忌。
一、理化性质改变.导致疗效降低或毒性增加1、形成沉淀含有鞣质的地榆、石榴皮、五倍子、大黄等中药以及麻仁丸、利胆片等中成药与某些西药制剂联用会使其理化性质发生改变:如与四环素类、红霉素等甙类,麻黄素、阿托品等生物碱以及亚铁盐制剂、碳酸氢钠制剂联用会产生沉淀,影响吸收.2、形成络合物含有槲皮素的中药柴胡、桑叶、槐角及含有这些中药的制剂与含各种金属离子的西药合用会形成络合物,影响吸收。
3、酸碱中和五昧子、女贞子等酸性中药与氧氧化铝、氨茶碱等碱性西药合用,煅龙骨、煅牡蛎、硼砂等碱性中药与胃蛋白酶合剂、乙酰水杨酸等酸性西药合用都会起中和反应,使药效降低甚至失去药效。
二、药理变化.导致疗效降低或毒性增加1、药动学变化(1)硼砂、海螵蛸、瓦楞子、皂角等碱性中药及其制剂与心得安、氯丙嗪、硫酸亚铁等联用会使其吸收降低,与奎宁、氯奎、强力霉素、新斯的明联用会使其从尿排出,促使血药浓度降低,与奎尼丁联用会导致排出减少,血药浓度增加而引起中毒。
(2)碱性中药如硼砂、煅牡蛎等,使尿液酸化药等解离增多,排泄加快,使作用时间和作用强度降低。
(3)中西药配伍后,不同药物的血浆蛋白结合率不同,使药物的血药浓度有所变化,从而影响其组织结合。
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中国医科大学毕业设计(论文)猪心中细胞色素C的提取工艺研究学院XX学院专业制药工程班级20XX级X班学生姓名学生姓名学号12345678指导教师X教授202X年3月猪心中细胞色素C的提取工艺研究摘要目的:细胞色素C是一种细胞呼吸激活剂,细胞色素C与细胞凋亡有密切关系,它广泛存在于各种动物、植物组织和微生物中,以猪心为原料来提取纯化细胞色素C并将细胞色素C进行纯化。
方法:取猪心在酸性条件下提取细胞色素C粗品后通过吸附法将细胞色素C进行提纯,并对比不同条件下的提取率。
结论:测定其含量为2.85%关键词细胞色素C;提取;提纯The pig heart in extraction and purification of cytochrome CAbstractObjective:Cytochrome C is a kind of cell respiration activator, cytochrome C has close relationship with cell apoptosis, it widely exists in various kinds of animal, plant and microbe, with pig heart as raw material to extract purified cytochrome C and cytochrome C and purification.Methods:The pig's heart was extracted under acidic conditions, and the cell pigment C was purified by adsorption method, and the extraction rate was compared under different conditions.Results:Determination of its content is 2.85%Key wordsCytochrome C;extract ;purification1 前言细胞色素C溶液用于各种组织缺氧急救的辅助治疗[1]。
目前很多高发的疾病和难以治愈的慢性疾病都和细胞色素C有关。
细胞色素C对细胞的凋亡,细胞组织的生长,对细胞器官的发育都有着很大的影响。
细胞色素C广泛存在于人体细胞中所以细胞色素C对人体机能的平衡影响也非常大,因此细胞色素C的研究对生物学有着重大的意义。
可以说细胞色素C的价值很高应用前景非常的广泛,细胞色素C在不仅临床急救的应用很广而且细胞色素C对很多慢性病的治疗也十分有效。
想要得到细胞色素C也十分简单,我们可以从动物体内提取细胞色素C,动物心脏中含有丰富的细胞色素C,本实验正是从猪心中提取细胞色素C。
细胞色素是呼吸链中重要的电子传递体,细胞色素包含很多种,细胞色素C只是细胞色素的一种,细胞色素C主要存在于线粒体中,需氧最多的组织及酵母细胞和心肌细胞中,细胞色素C的含量非常的丰富。
目前来看,心血管疾病、脑组织损伤、癌症、败血症、糖尿病和神经性的疾病在全球的发病率非常高,在这些疾病中细胞色素C均表现出不同程度的代谢紊乱。
细胞色素C是由两个无活性的前体分子合成的,即前细胞色素C和亚铁血红素[2]。
硫酸铵盐析可明显提高细胞色素C 纯度,主要为去除杂蛋白。
另外三氯乙酸可引起细胞色素 C 变性和聚合,必须严格控制三氯乙酸用量。
细胞色素C(Cytochrome C)是从猪心中提取的细胞呼吸激活剂,是含铁卟啉的色蛋白质[3]。
在心肌与其他做剧烈运动的肌肉中含量最为丰富。
细胞色素C主要作为电子载体或者氧化还原酶参与细胞的能量传递过程[4]。
硫酸铵盐析可明显提高细胞色素 C 纯度,主要为去除杂蛋白。
另外三氯乙酸可引起细胞色素C 变性和聚合,必须严格控制三氯乙酸用量[5]。
细胞色素C是细胞凋亡的重要信息物质之一。
发展简单、快速的细胞色素C的检测方法对于临床检测和生物学研究具有重要意义[6-7]。
它在多细胞生物的组织分化、器官发育、机体稳态的维持中有着非常重要的意义[8-10]外源性细胞色素C是不能进入健康细胞[11-12]从线粒体中泄露出的细胞色素C有诱导细胞凋亡的作用[13-15]。
在生物氧化过程传递电子中细胞色素C起到了重要的作用[16-18]。
细胞色素C的研究对现代生物药物的研究有着很重要的意义,生物制药是近几十年来研究的热门。
而且细胞色素C在临床上应用十分广泛,在抢救患者生命中也扮演者非常重要的角色。
细胞色素C能用于各种组织细胞缺氧的治疗,比如一氧化碳中毒的患者还有心肌缺氧的患者都可以通过注射细胞色素C来得到及时的抢救。
同时细胞色素C的提取工艺也非常的简单利用其易溶于酸的特性通过简单的吸附法能简单有效的得到细胞色素C提取物,原料的来源也非常多,动物的心脏含有非常丰富的细胞色素C。
所以细胞色素C的药物制品是一种非常廉价又使用效果很好的药物,非常值得研究和发展。
通过本实验的研究希望能更好的利用细胞色素C来防治疾病。
2 材料与方法2.1 实验材料与仪器2.1.1 实验材料猪心(市场购买的新鲜猪心);2mol/L H2SO4溶液;1mol/LNH4OH(氨水)溶液;0.2%NaCl溶液;25%(NH4)2SO4溶液:100ml溶液中含25g(NH4)2SO4,约为25摄氏度时40%的饱和度;BaCl2试剂(称BaCl212g溶于100ml蒸馏水中);20%三氯乙酸(TCA)溶液;人造沸石(Na2O·Al2O3·xSiO2·yH2O):白色颗粒,不溶于水,溶于酸,选用60-80目:联二硫酸钠。
2.1.2 实验仪器绞肉机;电磁搅拌器;电动搅拌器;离心机;722型分光光度计;玻璃柱(2.5cm*30cm)一根;烧杯不同容量若干;500ml下口瓶;量筒,移液管,玻棒,抽滤机,透析纸,滤纸,纱布,玻璃漏斗。
2.2实验方法2.2.1细胞色素C的提取取新鲜的猪心一颗,去除血块、肌腱和脂肪,切成条块状洗掉血液,用绞肉机将其绞碎。
称取心肌碎肉,加入1到2倍量的蒸馏水搅拌均匀,用1mol/L的硫酸调整PH到4左右,在常温条件下搅拌提取两个小时,然后进行压滤,滤液用1mol/L 的氨水调节PH至6.2,离心,得到提取液。
滤渣再加等量蒸馏水同上方法重复提取一次,合并两次提取液。
提取液加入2mol/L氨水调节PH至7.5,再在冰浴中静置沉淀杂蛋白,吸取上层清液,每升提取液加入10g人造沸石,搅拌吸附40分钟,静置去掉上层清液。
收集吸附细胞色素C的人造沸石,再用蒸馏水洗涤三次,2g/L 的氯化钠洗涤4次,再用蒸馏水洗至洗液澄清为止。
过滤抽干,装入柱内用25%硫酸铵溶液进行洗脱,得到洗脱液。
2.2.2细胞色素C的纯化将洗脱液加入固体硫酸铵达到45%的饱和度(相对密度1.21到1.23),使杂志蛋白析出,然后过滤。
收集透明液体,然后慢慢加入20%的三氯乙酸(25ml/L,按体积计算),边加边搅拌使细胞色素C沉淀析出,离心收集沉淀。
将沉淀溶于蒸馏水,装入透析袋中,用常水和蒸馏水透析至无硫酸根为止,最后过滤得到细胞色素C粗品溶液。
粗品溶液通过处理好的Amberlite IRC-50(NH4+)树脂柱吸附,然后将树脂移入大烧杯中,用水洗到澄清为止,再分别上柱,用0.6mol/L磷酸氢二钠-0.4mol/L 氯化钠混合溶液洗脱,流速2ml/min。
洗脱液用蒸馏水透析去离子,得到细胞色素C精致液。
2.3细胞色素C的含量测定本实验得到的细胞色素C是氧化型和还原型的混合物,因此在测定含量时,要加入联二亚硫酸钠,使混合物中的氧化型细胞色素C转变为还原型。
还原型的细胞色素C水溶液在波长520mm处有最大吸收值,根据这一特性,用国产722型分光光度计选一标准品,做出细胞色素C浓度和对应的光吸吸收值的标准曲线,然后根据所测溶液的光吸收值,由标准曲线的斜率求出所测样品的含量。
3 结果与分析3.1细胞色素C提取纯化试验结果3.1.1细胞色素C提取时料液比对结果的影响分别称取50g取绞碎后的猪心肌肉糜,用蒸馏水浸提,分别加入蒸馏水为50mL、100mL、150mL、200mL,在pH为4.0条件下30℃浸提2小时,提取液采用人造沸石吸附,(NH4)2SO4洗脱,三氯乙酸沉淀法纯化得到细胞色素C粗品。
5mL 蒸馏水溶解细胞色素C粗品后,520nm处测吸光值考察料液比对提取效果的影响。
结果图1表明随着水量的增大吸光值越大,料液比为1:2时为最佳提取条件。
图1 吸光度随蒸馏水量的变化3.1.2细胞色素C 提取时PH 对结果的影响100mL 蒸馏水,温度为30℃,选择提取 pH 分别为 3.0、4.0、5.0、6.0,浸提 2h ,提取液采用人造沸石吸附,(NH 4)2SO 4洗脱,三氯乙酸沉淀法纯化得到细胞色素C 粗品。
5mL 蒸馏水溶解细胞色素C 粗品后,20nm 处测吸光值,考察pH 对提取效果的影响。
图2表明PH 为4.0时吸光值最大,所以PH 为4.0时为最佳的提取条件。
图2 吸光度随PH 的变化3.1.3细胞色素C 提取时温度对结果的影响分别称取 50g 取绞碎后的猪心肌肉糜,加入100mL 蒸馏水,分别在 25℃、30℃、35℃、和 40℃条件下,pH 为4.0,浸提 2h ,提取液采用人造沸石吸附,(NH 4)2SO 4 洗脱,三氯乙酸沉淀法纯化得到细胞色素 C 粗品。
5mL 蒸馏水溶解细胞色素C 粗品后,520nm 处测吸光值,考察浸提温度对提取效果的影响。
图3表明温度在30℃时吸光值最大,所以最佳的提取温度条件为30℃。
图3 吸光度随温度的变化3.2 细胞色素C 得率的测定0.050.10.150.20.250.30.35202530354045吸光度温度℃取1ml标准品(80mg/ml),稀释至25ml,从中分别取得0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml,分别放置在5个试管当中,每管补加蒸馏水到4ml,并加入少许联二亚硫酸钠作为还原剂,然后在520mm处测得吸光值分别为0.177,0.328,0.517,0.699,0.867。
以浓度为横坐标,吸光值为纵坐标,作出标准曲线图4。
图4 细胞色素C浓度吸光值标准曲线图反复实验结果得知520mm处测平均吸光值为0.305。
据图4得知浓度测得得率为2.85%4 讨论本次实验主要利用了细胞色素C在酸性条件下溶解度大,利用吸附法将细胞色素C吸附并提取纯化。
吸附法设备简单操作方便,廉价安全,吸附洗脱过程中PH变化小,较少引起生物活性物质失活。
本实验以新鲜猪心为材料,经过酸溶液提取,人造沸石吸附,硫酸铵溶液洗脱和三氯乙酸沉淀等步骤制备细胞色素C,并测定其含量的操作简单方便。