14.2标准菌株购入与保存记录表
检定菌保存、传代、使用、销毁标准操作规程
检定菌保存、传代、使用、销毁标准操作规程一、前言简要介绍微生物检定的重要性以及制定标准操作规程的目的。
二、适用范围明确本规程适用的微生物种类和使用场景。
三、术语和定义列出本规程中使用的专业术语及其定义，如菌种、传代、检定等。
四、菌种的检定4.1 检定目的确保菌种的纯度和特性4.2 检定方法形态学检定生化特性检定分子生物学检定4.3 检定记录记录检定结果和相关数据五、菌种的保存5.1 保存条件温度控制湿度控制光照控制5.2 保存方法冷冻干燥保存低温保存液体培养基保存5.3 保存记录记录保存条件和时间六、菌种的传代6.1 传代目的维持菌种活性和特性6.2 传代方法液体培养基传代固体培养基传代6.3 传代周期规定传代的时间间隔6.4 传代记录记录传代过程和结果七、菌种的使用7.1 使用前的准备环境消毒个人防护7.2 使用方法接种培养观察和记录7.3 使用记录记录使用过程和结果八、菌种的销毁8.1 销毁条件菌种不再需要菌种污染或变异8.2 销毁方法高温灭菌化学消毒8.3 销毁记录记录销毁过程和结果九、安全和生物防护9.1 安全操作规程实验室安全个人防护装备使用9.2 生物防护级别根据菌种危险性确定防护级别9.3 应急预案制定微生物事故应急预案十、质量控制10.1 质量控制标准制定菌种质量控制标准10.2 质量控制检查定期进行质量控制检查10.3 质量控制记录记录质量控制结果十一、附录包括菌种检定记录表、保存记录表、传代记录表、使用记录表、销毁记录表等。
十二、参考文献列出编写本规程时参考的文献或标准。
14.1微生物菌种及样本管理规定及流程
微生物菌种及样本管理规定及流程1.目的规范菌种管理，保证菌种鉴定、抗菌药物药效学评价等临床微生物室研究工作中所有涉及有关微生物学部分的结果溯源性。
2.范围临床微生物室保存的标准菌株和来自临床标本的菌株3.职责科主任：负责菌种出入库、标准菌株的申购、菌种使用以及销毁等申请报告的审核。
菌种保管员：负责标准菌株的申购报告、菌种的登记、出入库、传代、保管和使用以及销毁等日常管理，并对所做工作形成记录。
检验人员：负责菌种的收集、登记、鉴定、使用、销毁，并对所做工作形成记录。
4.工作程序菌种的入库保存4.1.1制表《菌种管理登记表》；内容包括贮存菌种的名称、来源、生物学特性、入库/出库的数量、剩余量、使用日期、领用人、保管员，以及溯源证明。
4.1.2购买的ATCC标准菌种以及收集的临床菌株均需由专人收集和登记，统一编号，登记在《菌种管理登记表》内，入库管理，并保留溯源证明等。
4.1.3 ATCC标准菌株购买后，登记并需按标准菌株要求做好菌种牛奶冻干复制及准入库；同时作标准菌株质量控制性能检查，合格后正式入库，可室温保存，有效期10年。
并对所做工作形成记录。
4.1.4 临床菌株经收集后，登记，菌种复核合格后以Micreobank冷冻管或40%甘油-肉汤管做好菌种复制及入库，≤-80℃保存，有效期3年。
使用中的ATCC标准菌株也可以该种保存方式保存。
并对所做工作形成记录。
4.1.5 工作菌株因工作需要，从菌种库内领用的菌种经复制后生成工作菌株，此工作菌种可以营养琼脂斜面4℃～10℃冷藏保存，保存时间约2周。
并对所做工作形成记录。
菌种的日常管理4.2.1菌种保管由专人负责，实行双保管员保管；4.2.2保存菌种的冰箱加锁，钥匙由菌种保管员持有；菌种的使用4.3.1菌种使用者必须持主任签字的《菌种使用审核表》与保管人员预约菌种领用时间；4.3.2菌种领用时必须在两位保管员同时在场时，才能进行；4.3.3菌种使用完毕后及时归还；使用过程中的工作菌株一律不得外流，需妥善保管菌种的销毁4.4.1待研究工作结束后及时销毁并由菌种保管员监督执行；4.4.2 菌种销毁时必须装在专用容器内高压灭菌销毁，并做好销毁记录。
标准菌株使用说明
标准菌株使用说明
1、菌株批号说明：菌名称简称的拼音首字母+转种日期-代数-编号，例：金黄色葡萄球
菌（简称：金葡），2014年5月15日转种，转种后为二代菌株，其批号为：JP20140515-2-**。
2、菌株每转种一次即增加一代，实验用应控制在五代以内。
3、购买菌株后，最好立即进行转种，不宜长期冷藏保存。
4、转种方式：
普通菌斜面：用接种环挑取斜面上的菌落，转种至适宜的液体培养基中，按药典规定的时间培养后，将液体培养物分装至无菌冻存管中，每支1.5～2.0ml，冰箱冷冻（-20℃）保存。
每次实验取一支转种后使用。
生孢梭菌：将小管中液体培养物接入硫乙醇酸盐液体培养基中，按药典规定的时间培养后，将液体培养物分装至无菌冻存管中，每支1.5～2.0ml，冰箱冷冻（-20℃）保存。
每次实验取一支转种后使用。
黑曲霉：用接种环蘸取小管中孢子悬液，并涂布至改良马丁琼脂斜面上，培养1周后，按药典方法将孢子洗下，孢子悬液冰箱冷藏（4℃）保存。
实验时可直接取该悬液稀释至合适的级别后使用。
5、转种的液体培养基体积推荐为100ml，可分装约40～50支无菌冻存管，平时使用时
应定期进行菌株的鉴定，若菌落形态不典型或特征反应不明显，说明该菌株已不适宜继续使用，应销毁后购买新菌株。
标准菌株保藏要求
标准菌株保藏要求
标准菌株是指在国际上公认的、具有代表性的、已经鉴定过的、保存在国际公认的菌种保藏中心的菌株。
标准菌株的保藏对于科学研究、医学诊断、药物研发等领域都具有重要意义。
因此，标准菌株的保藏要求也非常严格。
标准菌株的保藏应该在国际公认的菌种保藏中心进行。
这些保藏中心应该具有完善的设施和管理制度，能够确保菌株的安全保存和鉴定。
同时，这些保藏中心应该能够提供菌株的详细信息，包括菌株的来源、鉴定方法、保存条件等。
标准菌株的保藏应该采用适当的保存方法。
不同的菌株有不同的保存要求，一般来说，菌株的保存温度应该在-80℃以下，保存液应该是适当的冷冻保护剂。
同时，菌株的保存容器应该是无菌的，并且能够防止冻融循环和氧化。
标准菌株的保藏应该定期进行鉴定和更新。
菌株的鉴定应该采用国际公认的方法，确保菌株的准确性和稳定性。
同时，菌株的更新也非常重要，因为长期保存可能会导致菌株的变异或者失活。
标准菌株的保藏要求非常严格，这是为了确保菌株的准确性和稳定性，以及保证菌株在科学研究、医学诊断、药物研发等领域的应用价值。
因此，我们应该重视标准菌株的保藏工作，确保菌株的安全保存和鉴定。
列一列实验室日常所需的微生物记录表格吧！
列一列实验室日常所需的微生物记录表格吧！食品实验室服务对于在实验室工作的小伙伴们来说，除了应对各种检测项目、异常处理之外，实验室的记录表格填写也是检测工作的重要组成部分。
那么在微生物检测过程中会用到哪些记录表格呢？一起来看下食品论坛网友们的支招吧！网友yy_185：今天心血来潮，想统计下实验室认证认可所需的食品微生物各项表格程序什么的，我简单列下我们现有的，不足的大家补充，原始记录就算了。
一、记录类1. 环境温湿度记录（个人认为不需要，后来跟X专家商讨，各执己见，她是专家，她赢了）2. 各种设备温度记录、使用记录（使用记录要求详细到所有样品的编号）3.无菌室监测记录（包括超净台、安全柜的洁净度监测，我只做了沉降菌监测，安全柜风速风量采用定期核查的方式）4、无菌室、洁净台、安全柜紫外线照射记录（要求明确紫外灯使用总时间或者定期监测紫外灯照度）5、灭菌器灭菌效果验证（灭菌变色胶带纸每批都要，生物验证定期进行）6、关键培养基技术性验收记录（仅做了致病菌选择性培养基，计数培养基还没开始）7、培养基验收记录8、菌种验收记录9、菌种传代记录10、菌种技术性验收记录11、菌种保存一览表12、菌种领用记录13、菌种使用记录（外借及科研用途）14、菌种、实验室废弃物处置记录15、应急设备定期核查记录（包括洗眼器、急救箱、应急喷淋）16、菌株、标准物质购买申请表二、程序类程序和表格不同，一个程序可以对应一堆表格，所以程序较少1.生物安全实验室管理程序2. 标准菌株管理程序3. 消耗品及培养基验收程序4. 仪器设备管理程序5. 应急设备定期核查程序三、作业指导书类1. 记录填写作业指导书2. 培养基验收作业指导书3. 菌株传代作业指导书4. 灭菌器灭菌效果验证作业指导书另外，设备检定及期间核查不在此列，另有一套单独规定及表格网友cherrychen11：补充两个：培养基配制记录培养物等污染物处理的SOP网友yy_185：培养基配制记录归类到了检测原始记录中，污染物SOP没做，认为太简单了，没必要。
菌株传代记录纯度
菌株传代记录纯度
标准菌株传代记录：
（1）菌株供应商的选择
选择有资质的标准菌株合格供应商，每批标准菌株必须附带有供应商的合格证或检测报告或说明书，来证明所采购的标准菌株是合格的。
（2）标准菌株和验收
实验室收到标准菌株，首先应进行符合性感官检查，记录菌株号和标准菌株来源途径信息，确保溯源性清楚。
同时还应记录标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等情况。
（3）冻干标准菌株的复苏
购回的标准菌株一般为冻干粉剂，依照随产品附有的菌种复活方法，在相应的生物安全水平下打开包装，选择合适的培养基和培养条件（根据生产商说明或有关技术通则）进行复活。
冻干菌株的传代次数不得超过5代。
（4）菌株性能的确认
①菌株传代记录纯度检查（观察菌落形态）：取复活后的培养物，在相应的鉴别平板或非选择平板上划线分离，培养出单菌落，观察菌落形态是否符合该菌株要求，同一平板上的单菌落大小、形状、颜色、质地和光泽是否相似，对于出现两种以上形态的菌株，应再分别挑取单菌落划线，检测是否出现相同特征。
②细胞形态：取划线平板上的单菌落，革兰染色反应应符合要求，且呈现一致性。
③必要时进行生化鉴定。
④污染处理：如发现菌株有污染，挑选目标菌培养成功后，将培养物灭菌销毁（121℃，30分钟）。
菌种传代与保藏作业指导书
菌种传代与保藏作业指导书1.标准菌的来源标准菌株必须购买具备资质的菌种保藏中心提供的冷冻干燥菌种（0代）（提供菌种证书）。
2.标准菌的验收从菌种保藏中心购买的原始菌种管是玻璃安瓿装的冻干菌，接收同时应检查是否有随菌种附有的相关资料。
接收菌种时应检查安瓿的数量和名称，和每一支安瓿的完整性。
在相应的菌种接收记录上记上所有的关于菌种的信息，如名称、数量和接收日期等。
在菌种安瓿及菌种管上粘贴标签，内容包括：菌种名称、菌种代号、代次、接收日期、接收人、贮存条件、有效期至。
新购入的0代原始菌种储存于－20℃，有效期为三年。
购买的已接种好的菌种斜面（3代）应检查菌种管是否完好。
储存于2〜8℃,有效期为3个月。
3.标准菌的复苏、复壮及标准储备菌株的制备3.1物品及试剂：接种针、酒精灯、移液管、75%酒精及75%酒精棉球3.2培养基改良马丁琼脂培养基:用于霉菌复苏、复壮.营养肉汤培养基:用于金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单胞菌复苏、复壮。
3.3操作步骤：a.打开洁净工作台。
氏在安瓿的外表面用75%的酒精擦拭并让其自然风干。
c.用一小砂轮在安瓿的上部划一条线，用手轻轻将安瓿掰开（开启安瓿时必须小心，因为安瓿遇热时可能会破裂）。
d.以无菌方法用一无菌吸管从已准备好的上述液体培养基中移取0.5〜0.8ml到安瓿中。
e.轻轻地旋转安瓿以使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解。
f.用无菌吸管将安瓿内菌液全部转接到相应的液体培养基。
g.根据安瓿上所标明的不同菌种类型而将其培养于相应的温度（细菌培养温度30〜35℃,培养18〜24小时；真菌培养温度23〜28℃,培养3〜5天。
观察是否浑浊，浑浊说明菌种复苏生长；若不浑浊，细菌应延长培养时间至7天，真菌应延长培养时间至14天，若仍未浑浊，灭菌处理。
h.取经复苏后的上述细菌菌液8-10ml至液体培养基中按g项操作对菌种进行复壮。
以无菌技术向复壮后的菌种中加入100ml20%的无菌甘油混匀，1-2ml/管分装于冻存管。
检定菌种相关记录
4.4．附则：本标准附件二份，附表六份：
附件1：《传代用菌种保存方法、保存温度、保存期限》附件2：《菌种复活、划线用培养基、培养条件》
附表1：《检定菌接收记录》
附表2：《检定菌种传代、分离记录》
附表3：《检定菌种保存、领用登记台账》
附表4：《检定菌种观察记录》
附表5：《检定菌种鉴定记录》
附表6：《检定菌种使用登记台账》
附表7：《废弃菌种（物品）销毁处理记录》
附件1：传代用菌种保存方法、保存温度、保存期限
附件2：菌种复活、划线用培养基、培养条件
附表1：《检定菌接收记录》
附表2：《检定菌种传代、分离、保存记录》
附表3：《检定菌种使用登记台账》
附表4：《检定菌种观察记录》
附表5：《检定菌种鉴定记录》
附表6：《检定菌种使用登记台账》
附表7：《废弃菌种（物品）销毁记录》。
储存菌株管理制度
储存菌株管理制度一、储存菌株的方式1. 冻存法冻存法是目前常用的菌株储存方法之一，可以有效地保持菌株的活力和纯度。
具体操作步骤为：将菌株接种在含有保护剂（如甘油、DMSO等）的培养基中，培养至对数生长期，分装于离心管中，然后将离心管置于-80℃或液氮中保存。
在使用时，取出离心管，快速解冻并接种于适当的培养基中。
2. 干燥法干燥法是另一种常用的菌株储存方法，主要适用于需长期保存的真菌和细菌。
具体操作步骤为：将菌株接种在含有凝胶剂（如明胶、葡聚糖等）的培养基上，培养至对数生长期，然后将培养基置于通风干燥的环境中，待干燥后保存于密封容器中。
在使用时，将培养基复苏后接种于适当的培养基中。
3. 液氮冷冻法液氮冷冻法是一种较为高效的菌株储存方法，可以有效地保持菌株的活力和纯度。
具体操作步骤为：将菌株接种在含有保护剂（如甘油、DMSO等）的培养基中，培养至对数生长期，分装于液氮罐中保存。
在使用时，取出分装罐，快速解冻并接种于适当的培养基中。
二、菌株信息记录1. 菌株编号每个储存的菌株都应有清晰的编号，以便于管理和追溯。
编号可以采用数字、字母或组合形式，应确保唯一性。
2. 菌株来源菌株的来源记录对于菌株的合法性和溯源至关重要，应详细记录菌株来源的机构、时间、来源文献等信息。
3. 菌株性状菌株的性状记录应包括细胞形态、生长特性、代谢特性等信息，以便于区分和鉴定。
4. 菌株保存方式记录菌株的储存方式和条件，确保菌株的保存质量和活力。
5. 菌株保存期限记录菌株的保存期限，定期检查菌株的活力和纯度，确保菌株的可用性。
三、菌株领用审批1. 菌株领用申请科研人员需提前填写菌株领用申请表，说明领用的目的和使用计划，经主持人审核同意后才能领用菌株。
2. 菌株领用程序领用菌株应按程序进行，包括菌株信息核对、签字确认、冷链运输等环节，确保菌株的安全性和纯度。
3. 菌株领用记录对每次菌株领用进行详细记录，包括领用人、领用时间、领用用途等信息，建立领用档案。
质控菌株的保存与保管制度0304.24
《文件已阅声明表》《Procedure Circulation Form》文件名称（File Name）:质控菌株的保存与保管制度《文件本次修改记录表》《Procedure Amendment Form》《文件信息表》《Procedure Information Form》目录1、目的(purpose)： (4)2、范围(circumsciption)： (4)3、职责(responsibility)： (4)4、流程说明(flow-sheet caption)： (5)4.1菌种的采购、复苏、鉴定 (5)4.2菌种的保存和使用 (5)4.3保存菌种的注意事项 (5)4.4菌种的保管 (5)5.安全防范（Safety Precautions）： (6)6、支持性文件: (6)7.文档历史（Document History） (6)8.相关文件及表格（Documentations） (6)质控菌株的保存与保管制度1、目的(purpose)：保证质控菌株长时间存活、性状稳定、不污染、少变异，从而使质控结果准确,以满足工作需要；保证菌株不外泄、不造成环境污染。
2、范围(circumsciption)：微生物实验室所有ATCC标准菌株及卫生部临检中心的室间质控菌株。
3、职责(responsibility)：3.1微生物室负责人和生物安全员负责质控菌株保存与保管制度的制定、实施和监督。
3.2微生物室全体人员负责执行质控菌株保存与保管制度。
4、流程说明(flow-sheet caption)：4.1菌种的采购、复苏、鉴定4.1.1根据需要拟定质控菌株的采购计划，呈质量负责人审核，报部门经理批准后开始采购。
4.1.2采购回的菌株由申购人签收，按照要求完成复苏、鉴定工作，并作好记录。
4.2菌种的保存和使用4.2.1标准菌株来源于广州微生物室的ATCC标准菌株。
标准菌株复苏后获得的单个菌落接种于相应平板上（营养琼脂平皿或血平皿、巧克力平皿、淋球菌平皿等），培养18小时左右，然后将纯菌落以无菌技术接种于12支40%甘油肉汤中，置-20℃低温冰箱保存。