利用SSR分子标记建立辣椒纯度鉴定体系

水稻杂交 种的纯度体系 ， 并注册 国家专利 ， 产生 了巨大 的经济效 益 。 我国辣椒每年采用传统种子纯度鉴定方法需要
土地 ５４８ ５ ．ｈ ２费用 ２０ ５ ．～６ ５ ｍ ， ２ ５０～２０ ９０万元 ， 如果 利用 Ｓ Ｒ分子 标记 技 术 只需 ２ ２ 元 即可 完成 Ｓ ２ ６万
较均一 ， 提供的遗传信息多 ， 且具有重复性好 ， 稳定 性高 ， 成本较低廉和易于操作等优点， 建立辣椒杂交 种 纯度 快速 鉴 定 ＳＲ分 子标 记 技术 体 系 ， Ｓ 为辣椒 种
子纯度 鉴定 工作 者 提供 参 考 ， 同 时 为 辣 椒 种 子 指 纹 图谱的建立 奠定基础 。
２ １ 年第 １ ００ 期
◆试验研究◆
２ １兴 蔬 ３ １ 兴 蔬 ２ １兴 蔬 绿 燕 、 湘 秀 丽 、 ０、 ０、 ０、 福 福湘
１ ． Ｐ Ｒ 产 物 的检 测 扩 增 完成 后 在 ８ ．４ Ｃ ２ ％聚丙 烯 酰胺 凝 胶 上 电 泳 （６Ｖ，４ｍｉ） 电泳 完 成 后 观 察 １０ １０ ｎ ，
纯度鉴定 。因此 ， 辣椒种子纯度鉴定 Ｓ Ｒ技术体系 Ｓ 的建立不但为种子企业节约了种子纯度鉴定成本 、
为市 场 提供 了优 质 的种 子 ， 缓减 我 国人 多 地少 的 还 矛盾 ， 我 国辣 椒杂 交种 种 业 的可 持续 性 发 展具 有 对
重要 意义 。
本 研 究 旨在 利 用 Ｓ Ｒ在辣 椒 基 因组 中分 布 比 Ｓ
建 立奠定 了基 础。
关键 词
辣椒 ；Ｓ 纯度 Ｓ Ｒ；
辣 椒 （ ａｓ ｕ ｎｕ ．是我 国重 要 的蔬 菜 ， Ｃｐｉ ｍａ ｕｍＬ） ｃ Ｈ 也 是 重 要 的 调 味 品 ， 目前 我 国辣 椒 年 种 植 面 积 １０ １０万 ｈ 总 产值 ２０ ３０亿元 ，５ １ ０ ７ ０ｔ ２ 。随着育 种进 程 的加 快 ， 椒 品种急 辣 剧 增 多 ，优 质 杂交 种 的种类 和需 求 量 的 日益增 加 ，
记 录并 照相 。
碧 秀、 湘 佳 玉 、 湘探 春 及 其 它 们 的 父母 本 ， 福 福
共计 ３ ６份 。
１２方 法 ．
１ ． 辣椒总 Ｄ ．１ ２ ＮＡ 的提 取
纯 度 鉴 定 由于 样 本 较
２ 结 果 与分 析
２１ 引物筛选 与鉴 定 ．
大 ，如 何快 速 低成 本 提取 大 批 量 的 Ｄ Ａ成 为 本 实 Ｎ 验 的重点 和难点 ，本 文采 用简化 Ｃ Ａ Ｔ Ｂ法 提取 辣椒 的总 Ｄ Ａ， 只需 倒换 试 管一 次 ， 可 以获 得 高纯 Ｎ 且 便 度 、 产量 的 Ｄ Ａ。 高 Ｎ １ ． Ｐ Ｒ 反 应体 系 １ ．２ Ｃ ２ ０×Ｂ ｆｒ含 Ｍｇ ）． ｌ ｕ ｅ（ ｆ ２ １ ， ＋ ５
◆试验研究◆
２ １ 年第 １ ００ 期
辣椒杂志（ 季刊 ）
利用 Ｓ Ｒ分子标记建立辣椒纯度鉴定体 系 Ｓ
白 占兵 李 雪 峰 戴 雄 泽 ， ， ，
（ 湖南省蔬菜研 究所 湖南长沙 ４ ０２ ２湖南省蔬菜工程技 术研 究中心 湖南长沙 ４０ ２ ） １ １１５ １ １５
摘 要 从 １０对 辣椒 Ｓ Ｒ引物 中筛选 出 １ ６对 多态性较 好 的引物 ，对 兴蔬 种 业 的 １ ５ Ｓ １ ２个推 广辣 椒 品种 的 父本 、 本及 其 Ｆ 代 共 ３ 母 ６份材 料进 行 Ｐ Ｒ 差异 性筛选 ， 中 ６对 引物 能够 区分每 个 品种 的父本 、 Ｃ 其 母本 及其 Ｆ代 ； 同时对辣 椒 大群体 Ｄ Ａ 的快速 提取 、Ｃ Ｎ Ｐ Ｒ扩增 以及 制 胶 电泳 等进 行 了优 化 ， 步建立 了基 于 Ｓ Ｒ分 初 Ｓ 子标 记技 术 的辣椒 种 子纯度 鉴 定体 系。 为辣 椒 种 子纯度 鉴定 工 作者 提 供 了参考 ， 为 辣椒 种 子指 纹 图谱 的 也
１ 材料 与方 法
１１ 材 料 ．
Ｓ Ｒ分子标记可以鉴定掖单 ｌ 号种子纯度。 Ｓ ３ 利用分
子 标 记 鉴 定 水 稻 杂 交 种 的 纯 度 在 日本 已推 广 ； 目 前， 湖南农 业科 学 院已经 完善 建 立 了 Ｓ Ｒ分 子鉴 定 Ｓ
材料全部来 自于湖南兴蔬种业有限公司，分别 为： 博辣娇红 、 博辣红玉 、 博辣红牛、 博辣红秀 、 兴蔬
收稿 日期 ：０ ０ ０ — ８ ２ １— ２ ０
基 金项 目： 湖南省科技公共平 台建设 专项 “ 春夏蔬菜产业提升关键技术研究 ”项 目编号 Ｋ ８ ２ ７— １ （ ０ ０ １２ ６ ） 作者简介 ： 白占兵（９ ７ ）男 ， １７ 一 ， 主要从事分子标记辅助育种
３ ２
辣椒杂志（ 季刊 ）
１ ｏ Ｌ ｄ Ｔ ．８ ５ １１ ｚ ｏ／ ０ｍｍ ｌ Ｎ Ｐ ０１ ７ ￣ ，０ Ｉ ｌ ／ ， Ｌ引 物 ０６ ｌ ｍ ． ，
使辣椒杂交种质量鉴定研究工作显得极其重要 。传 统鉴定一般采用 田间鉴定法 ， 其依赖于品种表型差 异 ， 大多 数形 态性 状 易受 环境 影 响 ， 而 地点 、 度 间 年
也 会表 现 出一 定程 度 的差 异 ， 重 的影 响 了 品种 纯 严 度 鉴定 的准确 性 ， 实性 。 真 随着分 子生 物学 技 术 的飞 速 发展 ， 子标 记 技 分 术 已成 为作 物 品种 真实 性 和纯度 鉴 定 的发 展方 向 。 目前 ，Ｓ Ｓ Ｒ分子 标 记技 术 在鉴 定 种子 纯 度方 面 已得 到广 泛应用 。其技术 原理是 从农 作物 中分离 出位点 特 异微卫 星 Ｓ Ｒ，然 后利用 两端 的独特 序列设 计 一 Ｓ 对 引物 ，利 用 Ｐ Ｒ扩 增微 卫星 的长 度多 态性 片段 ， Ｃ 以达到种子 纯度 鉴定 的 目的。 石海 波等 『 １ １ 报道用 Ｓ Ｒ Ｓ 标 记可 以鉴 别小 麦种 子 的纯 度 。姚凤 霞 等嘲 道用 报