鸡传染性贫血病最新研究进展

鸡传染性贫血病最新研究进展张　宁１　赵博伟２　胡晓悦３　王　珏１　刘晓慧４　王学会４

（１河北省畜牧兽医研究所　保定　０７１０００　２河北省畜牧兽医局　石家庄　０５００３１

３河北省动物疫病预防控制中心　保定　０７１０００　４河北省保定市出入境检验检疫局　保定　０７１０００）

鸡传染性贫血病是由圆环病毒科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉ－ｄａｅ）陀螺病毒（Ｇｙｒｏｖｉｒｕｓ）属的鸡传染性贫血病毒（Ｃｈｉｃｋｅｎ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　ａｎｅｍｉａ　ｖｉｒｕｓ，ＣＩＡＶ）引起的，临床上以贫血、骨髓黄染、全身淋巴组织萎缩和免疫机能损害为主要特征。１９７９年Ｙｕａｓａ等〔１〕首次分离到鸡传染性贫血病毒（Ｇｉｆｕ－１株）。该病呈世界性分布，广泛存在于日本、英国、瑞典、美国、巴西、阿根廷、澳大利亚、新西兰和南非等国家。１９９２年我国崔现兰等〔２〕首次从肉鸡群中分离出该病毒。目前我国山东、河南、江苏、吉林、黑龙江、安徽、广西等多个省市地区有该病的报道。由于ＣＩＡＶ不仅可导致雏鸡再生障碍性贫血和免疫抑制，严重影响雏鸡的生长发育和免疫反应，还可与马立克氏病病毒、传染性法氏囊病病毒等相互作用，给养殖业带来了巨大损失，因此该病已成为当前严重危害我国养鸡业的传染病之一，应引起我们的高度重视。本文就其病原学、流行病学、临床症状与病理组织学变化、检测及防制等方面的研究进展作一综述。１　病原学 ＣＩＡＶ是一种单股环状的ＤＮＡ病毒，无囊膜，平均直径为２５．０～２６．５ｎｍ，二十面体对称。在氯化铯中的浮密度为１．３５～１．３７ｇ／ｍＬ。ＣＩＡＶ只存在１个血清型。ＣＩＡＶ对理化因素的抵抗性很强，对丙酮、氯仿、乙醚均不敏感，耐酸、耐热。该病毒在ｐＨ　３作用３ｈ仍然稳定，碘仿和甲醛可显著降低其活性，１００℃１ｍｉｎ可将其灭活，在０．０５ｇ／ｍＬ的次氯酸钠中３７℃２ｈ失去感染力。１日龄雏鸡、细胞培养和鸡胚能够增殖鸡传染性贫血病毒。ＣＩＡＶ只能在马立克氏病及某些白血病的肿瘤淋巴细胞系中生长，１９８３年Ｙｕａｓａ〔３〕发现Ｔ细胞的淋巴细胞系ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１和ＭＤＣＣ－ＪＰ２及Ｂ细胞成淋巴样细胞系ＬＳＣＣ－１１０４Ｂ１适用于ＣＩＡＶ的增殖和测定。目前，ＭＤＣＣ－ＣＵ１４７细胞系可能是ＣＩＡＶ增殖的最好细胞系。２０１３年崔鹏鹏等〔４〕提取生长状态良好的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１细胞的Ｍｒｎａ，以５′端标记有生物素的Ｏｌｉｇｏ　ｄＴ　ｐｒｉｍｅｒ为引物反转录，合成双链后连接Ａｄａｐｔｅｒ。分级纯化后，通过ＢＰ重组反应构建入门文库，入门文库扩增后提取质粒，通过ＬＲ重组反应转化为表达文库。结果表明，构建的表达文库具有较高的质量，为研究鸡传染性贫血病毒的受体及其细胞嗜性奠定了基础。ＣＩＡＶ基因组有三个部分重叠的开放读码框：

ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３

基因，一个启动子区和一个ＰｏｌｙＡ

信号区。ＶＰｌ为ＣＩＡＶ病毒的衣壳蛋白，是病毒的主要结构蛋白，通常存在于高度纯化的病毒颗粒上。ＶＰ２是ＶＰ１的辅助蛋白，位于感染细胞核内包涵体，是病毒组装过程中的支架蛋白。ＶＰ３是一种凋亡蛋白，是鸡胸腺细胞、成淋巴样细胞系和人的恶性成淋巴样细胞、骨肉瘤细胞凋亡的诱导剂，可诱导ＣＩＡＶ感染细胞程序性死亡。２　

流行病学

鸡是ＣＩＡＶ的唯一自然宿主，肉鸡尤其是公鸡更易感。各年龄鸡都易感，潜伏期为５～９ｄ

，主要

发生在１０日龄以后的雏鸡，随着日龄的增加，其易感性、发病率和死亡率逐渐降低。ＣＩＡＶ主要经卵垂直传播，也可由病毒污染的粪便、房舍及工具等引起水平传播，主要感染途径是消化道，也可通过呼吸道传播。该病死亡率５％～１０％

，最高可

达６０％

。

２周龄后感染的鸡，多没有典型的临床症状，但可引起不同程度的免疫抑制而继发其他细菌感染（如大肠杆菌病、隐孢子虫病、包涵体肝炎），或导致

其他感染病毒症状和病变加重（如马立克氏病病毒、传染性法氏囊病病毒、网状内皮组织增殖病病毒、腺病毒、呼肠孤病毒），导致死亡率增加。鸡传染性贫血病流行非常广泛，日本、英国、瑞典、德国、加拿大、丹麦、美国、荷兰、巴西和阿根廷、南非、澳大利亚等国家都证实了本病的存在。国内调查结果表明：黑龙江、江苏、河南、山东、广西、安徽、珠江三角洲等省、市、地区鸡传染性贫血的感染率分别为３３．６４％

、６９．２％、４６．３％、８３．２％、

２８．３４％、２２．１１％、３８．３１％〔５～９〕。

３　

临床症状及病理变化

感染ＣＩＡＶ的鸡主要表现为贫血，翅膀皮炎或蓝翅，进行性消瘦，肝脏、肾脏肿大，血液稀薄，骨髓黄化，胸腺萎缩呈褐红色，法氏囊外壁呈半透明状、出血或萎缩。感染鸡多在２～６周龄发病，感染后１４～１６ｄ病程达到高峰，死亡率为５％～３０％，如果

本病和法氏囊、马立克、脑脊髓炎疾病混合感染，则死亡率会上升到６０％～８０％

。耐过病的鸡大部分

生长缓慢而成为僵鸡。产蛋种鸡感染后无临床症

·８１·《上海畜牧兽医通讯》

２０１４年第６期

DOI:10.14170/j.cnki.cn31-1278/s.2014.06.007状，产蛋率、受精率和孵化率都不受影响，但可通过种蛋传播病毒。组织学检查，病变主要表现为为骨髓萎缩和全身淋巴组织萎缩。造血组织萎缩，造血细胞被脂肪组织或增生的基质细胞所替代。胸腺、法氏囊、脾脏和盲肠扁桃体以及其它组织淋巴细胞严重缺乏。法氏囊淋巴样滤泡萎缩，偶见网状细胞丧失。肝细胞肿胀，肝窦内皮细胞肿大，肝索紊乱，肝小叶中心坏死。在受害组织中肿大的细胞内，可见到小的、嗜伊红核内包含体，主要存在于胸腺和骨髓。４　

诊断检测

通过感染雏鸡的贫血、发育受阻等临床症状和胸腺萎缩、骨髓黄化等典型病理变化以及红细胞压积值（ＨＣＴ）低于２７％可作出初步诊断。但鸡感染ＣＩＡＶ后可引起免疫抑制，增加机体对其它疫病的易感性，造成其它病毒及细菌的混合感染，而不表现典型的临床症状和病理变化。另外，该病与骨硬化症病毒引起的贫血症、急性ＩＢＤＶ感染、腺病毒引起的包涵体肝炎－再生障碍性贫血综合症、原虫病、黄曲霉毒素中毒、高剂量的磺胺类药物中毒等症状有相似之处，所以确诊需进行实验室检测。目前实验室检测鸡传染性贫血病的主要方法有：病原学检测方法、血清学检测方法、分子生物学检测方法等。目前应用较多的是酶联免疫吸附试验，国内外学者研究较多的是聚合酶链式反应（ＰＣＲ）等分子生物学技术检测方法。４．１　病原学检测方法 鸡传染性贫血病病毒能够在马立克氏病毒（ＭＤＶ）和淋巴白血病淋巴瘤（ＬＬ）所建立的成淋巴样细胞系上生长，最常用的是成淋巴细胞Ｔ－细胞系ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１。ＭＳＢ１被认为是ＣＩＡＶ敏感、适用的宿主细胞，常用于体外病毒分离和病毒滴度的检测。另外，１日龄雏鸡、白血病病毒Ｂ淋巴细胞ＬＳＣＣ－１１０４／Ｘ５Ｂ１、禽成骨髓细胞增生病病毒转化的细胞系ＬＳＣＣ－ＨＤＩＩ和５日龄鸡胚均可用于分离鸡传染性贫血病病毒。可将病料（感染鸡的胸腺、肝脏、骨髓、脾脏等）处理后直接接种ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１细胞，经７～１０代，当细胞肿胀、边缘破裂，死亡细胞逐渐增多，直至最后ＣＡＶ感染细胞大部分死亡，培养液颜色不再发生改变，细胞不能继续传代，即产生细胞病变时，可判定为病毒分离阳性。但有些ＣＩＡＶ毒株在ＭＳＢ１细胞上不能复制或复制很弱，需要用易感雏鸡再分离。也可将病料处理后接种鸡胚，１４ｄ可从整个胚体中获得中等产量的病毒。多数毒株接种鸡胚后观察不到病变，ＧＬ－１毒株可引起鸡胚变小、出血、水肿、死亡。４．２　血清学检测方法 血清学诊断方法主要包括酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、间接荧光抗体试验（ＩＦＡＴ）、中和试验等。病毒中和试验可靠，但成本高、花费时间长，不适用于大批量检测和大规模血清学调查。由于ＣＩＡＶ具有较高的特异性和敏感性，目前应用最广泛的是间接荧光抗体试验和酶联免疫吸附试验。４．２．１　酶联免疫吸附试验：２００２年王莉莉等〔７〕利用竞争ＥＬＩＳＡ对山东５８个鸡场进行了流行病学调查，结果证明ＣＩＡＶ在山东各鸡场广泛存在，且抗体平均阳性率达８３．２％。２００４年王英〔１０〕首次成功表达了ＣＩＡＶ　ＶＰ１蛋白抗原表位优势区，建立了检测鸡传染性贫血病毒血清抗体的间接ＥＬＩＳＡ诊断方法。该方法可检出人工接毒后２０ｄ的血清抗体，直到试验结束１１０ｄ时，仍能检出鸡血清阳性率为８１％，与全病毒包被抗原ＥＬＩＳＡ方法的检测结果符合率达９２％以上，与进口诊断试剂盒的符合率为９７％。２０１２年Ｋｕｒｉａｎ等〔１１〕建立了一种检测ＣＩＡＶ血清抗体的重组抗原ＥＬＩＳＡ检测法，将澳洲株ＶＰ

１

基因克隆到工程菌表达载体中，表达出的ＶＰ１融合

蛋白可以成功地用于鸡ＣＩＡＶ抗体的ＥＬＩＳＡ检测。４．２．２　

间接荧光抗体试验：荧光抗体试验符合率

极高，使用较多。ＣＩＡＶ接种ＭＤＣＣ－ＭＳＢ　３６～４２ｈ

后，收集细胞涂片于载玻片上，风干后用丙酮固定后用作抗原。感染的细胞首先与适当稀释的待检血清反应，然后用荧光素标记的抗鸡ＩｇＧ哺乳动物抗血清作用，用荧光显微镜观察结果，在肿胀的细胞核区出现较小的、形态不规则的荧光染色颗粒或轮环状结构就可以判定待检血清中有抗体。２００１

年胡海清等〔１２〕用ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１细胞增殖鸡传染性贫血病毒（ＣＩＡＶ）ＣｕＸ－１毒株制备抗原，建立了检测ＣＩＡＶ抗体的间接免疫荧光的方法，并用该方法检测了ＣＡＶ基因工程亚单位苗首免、二免和三免后鸡体内的ＣＩＡＶ抗体。２００１年刘岳龙等〔１３〕用ＶＰｌ融合蛋白强化免疫小鼠，制备了抗ＣＩＡＶ　ＶＰｌ

蛋

白的多克隆抗血清，建立了用鼠抗鸡贫血病毒ＶＰ

１

的多抗血清检测病毒感染的间接免疫荧光法，并以

所建立的方法对ＣＩＡＶ田间病料进行了临床检测应用。检测结果中病毒感染细胞为绿色荧光阳性，而同步所做的小鼠阴性血清对ＣＩＡＶ感染的ＭＳＢｌ细胞的反应组则为阴性。４．３　

分子生物学检测方法

４．３．１　聚合酶式反应（ＰＣＲ）：随着分子生物学技术

的发展，国内外一些学者利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对鸡传染性贫血病毒进行了大量的研究。试

验证明，ＰＣＲ试验检测法灵敏度高、特异性强，ＤＮＡ

含量可以精确到１ｆｇ。ＰＣＲ试验可诊断血清、感染

·９１·《上海畜牧兽医通讯》

２０１４年第６期