离子交换高效液相色谱仪MQ-2000PT检测糖化血红蛋白性能评价

离子交换高效液相色谱仪MQ-2000PT检测糖化血红蛋白性

能评价

韩静;彭海林;钱锦;李林;金梅

【摘要】目的:评价离子交换高效液相色谱法(HPLC)全自动糖化血红蛋白分析仪MQ-2000PT性能.方法:计算MQ-2000PT测定HbA1c的精密度、携带污染率、线性,同时通过检测41例健康体检者的HbA1c浓度验证其参考区间的实用性.结果:色谱法测定HbA1c批内变异系数(CV)两水平样品分别为高值0.45％、低值

0.58％,批间变异系数(CV)高值0.92％、低值1.12％;在4.6％～ 15.95％浓度范围内线性良好(R2=0.9998,P＜0.001);高值标本对低值标本的携带污染率为

0.997％;41例健康体检者HbA1c检测结果分布在4.4％～6.2％,95.1％检测结果(39/41)在厂家提供的参考区间(4.0％～6.0％)内.结论:MQ-2000PT色谱法测定HbA1c的性能良好.

【期刊名称】《河北医学》

【年(卷),期】2018(024)004

【总页数】3页(P689-691)

【关键词】携带污染;高效液相色谱;糖化血红蛋白;精密度;线性

【作者】韩静;彭海林;钱锦;李林;金梅

【作者单位】江苏省泰州市人民医院检验科,江苏泰州 225300;江苏省泰州市人民医院检验科,江苏泰州 225300;江苏省泰州市人民医院检验科,江苏泰州 225300;

江苏省泰州市人民医院检验科,江苏泰州 225300;江苏省泰州市人民医院检验科,江苏泰州 225300

【正文语种】中文

糖化血红蛋白(HbA1c)是红细胞中血红蛋白β链N末端缬氨酸残基通过非酶促糖

化作用以共价键与葡萄糖结合形成的稳定化合物。HbA1c反映的是人体检测前近2～3个月的血糖平均水平，血糖的波动对其影响很小，对标本的采集时机也没有

特殊要求，且具有个体内生物学变异小、分析前较为稳定等特点，从20世纪90

年代中期以来，在国际上被逐步推广应用。HbA1c既是糖尿病血糖控制目标，又

是评价糖尿病血糖管理治疗方案的有效指标，还是WHO和许多国家糖尿病学会

推荐的糖尿病诊断标准[1]。本研究评价离子交换高效液相色谱法MQ-2000PT糖

化血红蛋白分析仪测定全血HbA1c的性能。

1 资料与方法

1.1 标本来源:所用全血标本均采用EDTA-2k抗凝，标本量1.5mL以上。参考区间验证所用标本来自我院健康体检者，共41例，其中男23例，女18例，年龄18～65岁，要求血常规、肝、肾功能、肿瘤标志物、空腹血糖、血脂等实验室指标均无异常；心电图、B型超声、胸片无阳性发现；排除有血液、肝肾、心血管、糖尿病病史者；除外服用药者(如乙酰水杨酸、慢性麻醉剂、维生素C和E)及服用保健品者；除外6个月内有手术史或献血/输血史者；排除妊娠人群。批内精密度、线性范围及携带污染率验证标本来自门诊或住院患者。

1.2 仪器及试剂:MQ-2000PT全自动糖化血红蛋白分析仪由上海惠中科技有限公司生产，配套试剂(试剂批号PTHbA1c140102E)、校准品(批号20140609)；室内质控品由美国伯乐公司提供(批号33891、33892)。

1.3 方法

1.3.1 选择新鲜EDTA抗凝全血标本用于批内精密度试验，HbA1c高、低值各一份，同一批次各检测20次，计算均值标准差(s)和变异系数(CV)，进行批内精密度评估;采用HbA1c高、低值质控品，每天测定1次，连续测定30d，计算 )、s 和CV，评估批间精密度。要求批内不精密度≤1.75%; 批间不精密度≤

2.0%[2]。

1.3.2 线性验证试验采用混合样本法:选择高(H)值、低(L)值样本各一份(血红蛋白水平基本一致,分别为135g/L、136g/L)，按4H+1L,3H+2L，2H+3L，1H+4L比

例混合出4份样品，加上原有的高、低值共6份样品，各检测2次，计算均值，

对均值和预期值进行直线回归分析。预期值按照HbA1c预期计算，公式中n、m

分别代表高值和低值样品的份数，要求预期值与实测值差值在±0.3以内。

1.3.3 携带污染率的计算：在线性范围内选取高值(H)样本和低值(L)样本各1份，

参照刘彤等的方法[3]先检测一次高值样本，检测结果舍弃不计，接着检测低值样

本两次，然后检测高值样本两次，这样间隔重复3次，低值样本分别记为L1～L6，高值样本分别记为H1～H6，如果存在携带污染，则奇数次测试的低值L1、L3、

L5是被高值样本污染的测试值，偶数次测试的低值L2、L4、L6是没有被污染的

测试值，偶数次测试的高值H2、H4、H6是没有被污染的高值样本测试值。携带污染率(%)K=，携带污染率要求≤3%。

1.3.4 参考区间的验证：根据方法和材料中的要求在正常体检者中选取41例合格者，利用MQ-2000PT检测其HbA1c水平，计算检测值在拟引用仪器提供的参考区间内的个体数与总参考个体数之比(R)，要求R>90%，引用的参考区间为

4.0%～6.0%。

1.4 统计学方法:采用Microsoft Office EXCEL 2007进行统计分析。

2 结果

2.1 精密度试验:质控品和高、低值全血标本在MQ-2000PT上检测精密度结果见

表1。批内、批间不精密度均在可接受范围内。

表1 MQ-2000PT 精密度实验结果HbA1c(%)批内x±s CV(%)批间x±s CV(%)高值13.39±0.0530.4010.47±0.0970.92低值6.395±0.0370.585.51±0.0621.12 表2 MQ-2000PT线性范围验证实测1实测2实测均值(X)预期值(Y)差值(X-

Y)H15.91615.9515.950H4L113.513.613.6813.550.13H3L211.311.311.4111.30 .11H2L399.19.149.050.09H1L46.86.86.876.80.07L4.64.64.64.60

2.2 线性试验:对线性验证品检测结果的均值(y) 和预期值(x)进行直线回归统计，方程为y=0.9975x-0.0408，R2=0.9998,P<0.001,差值均在要求范围之内，因此MQ-2000PT 测定HbA1c在4.6% ～15.95%范围内线性良好(见表2、图1)。

图1 MQ-2000PT 检测HbA1c线性验证回归分析

2.3 携带污染率:高值标本检测结果H1～H6，分别为：14.6、14.4、14.4、14.5、14.4、14.4；低值标本检测结果L1～L6，分别为： 4.5、4.5、4.5、4.5、4.6、4.5；按上述公式计算，携带污染率( %)K=0.997%，满足要求≤3%，说明MQ-2000PT测定HbA1c标本之间无明显携带污染。

2.4 参考区间验证:41例健康人群的HbA1c测定结果为4.4%～6.2%，检测值在拟引用参考区间(4.0%～6.0%)内的个体数(39例)占总参考个体数(41例)的95.1%，大于90%的要求，可以引用厂家提供的参考区间。

3 讨论

与传统的糖尿病诊断“金标准”OGTT试验相比，HbA1c的测定无须在特定时间多次采血，进食及生活方式的短期改变对HbA1c的水平也无明显影响，因此患者更易于接受；此外，HbA1c的检测方便快捷、结果稳定性好、个体内的生物变异小，对长期血糖水平的反映更为客观，与慢性并发症的发生相关性更强。2010年HbA1c≥6.5%被美国ADA指南作为糖尿病诊断新标准；在我国，由于HbA1c的