植物组织培养的类型
植物组织培养
植物组织培养的含义：将植物的离体材料（器官、组织、细胞、原生质体等）无菌培养，使其生长、分化、繁殖，再生出完整植株或生产次生代谢物质的技术。
植物组织培养的理论基础是植物细胞的全能性：指一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息，在适宜条件下具有发育成完整植株的能力。
外植体：在植物组织培养中，在活体植物上提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等均称为外植体。
外植体选择的原则：①、再生能力强；②、遗传稳定性好；③、来源丰富；④、灭菌容易。
植物组织培养的类型：根据培养材料（即外植体）的不同，可将植物组织培养划分为植株、胚胎、器官、组织、细胞和原生质体五个水平上的培养类型。
愈伤组织：原指植物在受伤后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组织培养中，则指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。
植物组织培养的特点：①、培养材料经济；②、培养条件可以人为控制；③、生长周期短，繁殖率高；④、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制。
White（1943）撰写的《植物组织培养》是第一部有关植物组织培养的专著。
PH值最适5.6，高温、高压灭菌后PH值会降低，配制时一般为5.7~5.8，若PH值偏高，培养基会偏硬，会不利于植物材料吸取营养；PH值偏低，培养基凝固不好，不利于植物材料的固定。
MS培养基特点：①、无机盐成分很高，硝酸盐、NH+、K+含量高；②、元素平衡较好；③、缓冲性能也比较好；④、微量元素、有机成分丰富、齐全。
无机盐母液适度冷藏保存。
维生素等有机营养元素在—20℃保存，使用前用温水溶解。
MS培养基母液的成分：大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机物母液。
CuSO4、CuCl2取25mg溶于10mL，制成2.5mg/mL溶液，配制50mL微量元素母液，吸取该溶液0.05mL。
灭菌的条件：培养基的成分：1、水分2、无机盐①、大量元素：指植物生长发育所需浓度大于0.5mmol/L的营养元素。
植物组培点
名词解释：1.愈伤组织：是指在人工培养基上由外植体形成的一团无序生长的薄壁细胞。
2.植物组织培养：指在离体条件下利用人工培养基对植物器官、组织、细胞、原生质体等进行培养，使其长成完整的植株。
3.外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织和原生质体等。
4.愈伤组织培养：将植物外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在儿使其细胞脱分化形成愈伤组织，然后经过再分化形成再生植株。
5.细胞全能性：一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息。
6.外植体接种：在无菌条件下，将消过毒的植物材料在超净工作台上切割、分离成适宜的外植体大小，并将其转移到培养基上的过程。
7.玻璃苗：是生长异常，叶、嫩梢呈透明或半透明的水浸状，整株矮小肿胀，失绿，叶片皱缩成纵向卷伸，脆弱易碎的试管苗。
8.继代培养：愈伤组织在培养基上生长一段时间后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养，这个过程叫做继代培养。
9.细胞分化：一个尚未特化的细胞发育出特征性结构和功能的过程。
10.炼苗：植物组织培养中获得的小植株，完成由异养到自养的转变，需要一个逐渐适应的驯化过程，此过程为炼苗。
11.胚状体：指在组织培养中，由一个非合子细胞(体细胞)，经过胚胎发生和胚胎发育过程形成的具有双极性的胚状结构。
12.胚培养: 是指将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，在进行组织培养，使其生长发育形成幼苗的过程。
13.植物离体授粉：人工控制条件下使离体的胚球或子房完成授粉，受精形成种子的过程。
14.人工种子：是指通过植物组织培养的方法获得的具有正常发育能力的材料，外面还被有特定物质，在适宜条件下可以发芽成苗的植物幼体。
15.微体嫁接：将0.1～0.2mm的茎尖作为接穗，假接到由试管培养，假接到由试管中培养出来的无菌实生的砧木上，继续进行试管培养，愈合成为完整的植株的方法。
16.单倍体：是指具有配子染色体数的个体或组织，即体细胞染色体数为n 。
植物组织培养
植物组织培养一、名词解释1.植物组织培养：在无菌条件下利用人工培养对植物的器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使之再生成完整植株或其他具有经济价值的生物产品技术。
2.外植体：由植物体上切取下来，用于培养的那部分组织、器官等。
3.MS培养液：murashige和skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是比较稳定离子平衡溶液，它的硝酸盐含量较高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围较广多数植物组织培养、快速繁殖用它作为培养的基本培养基。
4.器官发生：离体培养的组织，细胞在诱导条件下经分裂和增殖，再分化形成根和芽等器官的过程。
5.体细胞胚胎发生：单个细胞经反复细胞分裂形成一个细胞团，经历球形期、心形期、鱼雷型期的发育过程之后，最终由细胞胚长成小植株。
6.花粉培养：把花粉从花药中分离出来，以单个花粉粒作为外植体进行离体培养的技术。
7.人工种子：通过植物组织培养技术获得胚芽、胚根、胚轴等结构的植物胚状体，将其包埋在含有营养物质和保护功能的人工薄膜中所得的种子。
8.雄核发育：小孢子沿孢子体途径发育成花粉植株的过程。
9.胚的早熟萌发：在胚培养或发育过程中未经正常的胚胎发育过程而形成的幼苗的现象。
10.细胞悬浮培养：将游离的细胞或细胞团按照一定的细胞密度悬浮在液体培养基中进行培养的方法。
11.条件培养基：曾经培养过一段时间植物组织的培养基。
12.离体授粉的4种方式：1）离体胚珠授粉：将花粉授予离体的胚珠上而结实的方法。
2）离体柱头培养：将花粉授予离体的柱头上进而实现受精作用的方法。
3）离体胎座授粉：将花粉授予连在胎座的胚珠上进而实现受精作用的方法。
4）离体子房授粉：将花粉送入离体子房中进而实现受精作用的方法。
13.细胞密实体积（pcv）每毫升培养液中细胞总体积的毫升数。
14.继代培养：愈伤组织在培养基上生长一段时间后，由于营养物质枯竭，水分散失以及新陈代谢产物积累，必须转移到新鲜培养基上培养的过程。
植物组织培养期末复习题
植物组织培养期末复习题一、填空题每空0.5分1.植物组织培养按培养对象分为__组织培养__、_器官培养_、_胚胎培养_、__细胞培养_、_原生质体培养__等几种类型.2.在分离原生质体的酶溶液内,需要加入一定量的Cacl2·2H2O和葡聚糖硫酸钾_其作用是保持原生质体膜的稳定,避免破裂.3.1902年德国植物生理学家Haberlandt第一次提出植物__细胞具有全能性_____的理论概念；1943年White提出植物细胞“____全能性_____”学说,并出版了植物组织培养手册,从而使植物组织培养成为一门新兴的学科;4.用烘箱迅速干燥洗净后的玻璃器皿时温度可以设在_80_℃的温度范围内,而若用它高温干燥灭菌则需在__150__℃的温度下1-3小时；烘干植物材料的温度是_60_℃.5.细胞全能性是指植物的每个细胞都具有该植物的__全部遗传信息__和___形成完整植株的潜在__的能力;6.1962年,Murashige和Skoog为培养烟草花叶细胞设计了__MS_培养基,其特点是_无机盐_浓度较高,且为较稳定的__________;7. 7.6-BA/NAA的高低决定了外植体的发育方向,比值低时促进_根_的生长,这时_脱分化_占主导地位；比值高促进_芽_的生长,这时_分化占主导地位.9.组织培养的特点是：__无菌_、__人工控制_、_离体_.10.1962年印度Guha等人成功地培养毛叶曼陀罗花药获得__单倍体植株_,这促进了花药和花粉培养的研究;11.在组织培养中,不耐热的物质用__过滤__法灭菌,而培养基常用___湿热灭菌__法灭菌.13.在组织培养中,非洲菊是靠_从生芽的方式进行繁殖的,而蝴蝶兰是以__原球茎_的方式进行快繁的;15.在通过微茎尖培养脱毒时,外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定,一般以__0.3-0.5__mm、带__1-2__个叶原基为好;16.原生质体的分离有_机械法_和__酶解法_两种方法.17.进行植物组织培养最基本的前提条件是__离体_;18.植物组织培养按培养过程中是否需要光,可分为___适光_培养和___嗜光培养;20.组织培养中有三大不易解决的问题,它们分别是__黄化污染、_褐化__、_玻璃化;21.White培养基_无机盐_浓度低,适合生根培养;22.在无毒苗的组织培养中,外植体的大小与其成活率成__正比_,而与脱毒效果成__反比__;23.一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态,并形成未分化的愈伤组织的现象称为"__脱分化___";25.茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为__普通茎尖__培养和_茎尖分生组织_培养两种类型;27.愈伤组织的形态发生有_器官发生__和__体细胞胚发生__两种情况;28.植物组织培养按培养的方式分为__液体_培养和__固体__培养;29.1960年,英国学者Cocking用__真菌纤维素酶酶解_分离原生质体成功,从而创新原生质体的培养技术;30.大多数植物组织培养的适宜温度范围是_23-25__℃,培养基的PH值是__5.8_.32.在组织培养中,ZT和GA必须用_过滤_法灭菌,而接种室空间采用_紫外线照射__或_甲醛熏蒸_法灭菌.33.不同的灭菌剂其灭菌的机理一般不一样,次氯酸钙和次氯酸钠都是利用分解产生_cl离子ClO-_来杀菌的；升汞是靠_汞离子_来达到灭菌目的;34.幼胚培养时,其发育过程有_早熟萌发___、___胚性发育__、_形成愈伤__三种方式;35.植物的胚胎培养,包括__胚胎__培养、幼胚培养、__胚乳__培养、胚珠_培养以及子房的培养.38.一个已停止分裂的成熟细胞转变为__分生_状态,并形成_愈伤组织_的现象称为"脱分化".39.由胚乳培养可以获得__单__倍体植株,经秋水仙素处理可以获得_二_倍体植株.40.去除植物病毒的主要方法是_理化法_和_组培法__两种方法,当把二者结合起来脱毒效果最好.41.花药培养是_器官__培养,花粉培养属于__细胞__培养,但二者的培养目的一样,都是要诱导花粉细胞发育成单倍体细胞,最后发育成__单倍体植株__.43.原生质体的融合可实现_体细胞_的杂交,其融合的方式分为__自然融合_和__人工诱导_两类.二、不定选择题每小题2分1.培养室里的湿度一般保持在_C_.A30~40%；B50~60%；C70~80%；D80~90%2.下列不属于生长素类的是__AD_;AKt；BIAA；CNAA；DZT3.影响培养基凝固程度因素有_ABD_.A琼脂的质量好坏；B高压灭菌的时间；C高压灭菌的温度；D培养基的PH4..活性炭在组织培养中的作用有_ABC_;A吸附有毒物质；B减少褐变,防止玻璃化；C创造黑暗环境,增加培养基的通透性,利于根的生长；D增加培养基中的养分；5.下列具有细胞全能性的细胞是：_ABCD_;A成熟的老细胞；B幼嫩的组织细胞；C愈伤组织细胞D番茄的受精合子6.第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是_B_：.A□Morel；BHaberland；C□Schleiden；D□White7.下列培养基中__C_无机盐的浓度最低;AMS培养基；BB5培养基；CWhite培养基；N6培养基8.高温易被破坏分解的植物激素是__AbD_;AIAA；BGA；CNAA；DZt9.从单个细胞或一块外植体形成典型的愈伤组织,大致经历__ACD三个时期;A诱导期；B潜伏期；C分化期；D分裂期10.下列不属于活性炭在组织培养中作用的是___D_.A吸附有毒物质；B减少褐变,防止玻璃化；C创造黑暗环境,增加培养基的通透性,利于根的生长；D增加培养基中的养分；11.下列不属于细胞分裂素的植物激素是_B_;A6-BA；BNAA；CZt；DKt12.植物组织培养的特点是_ABC_;A培养条件可人为控制；B生长周期短,繁殖率高；C管理方便；D产量大14..下列不属于大量元素的盐是_C_;ANH4NO3；BKNO3；CZnSO4.7H2O；DMgSO4.7H2O15.下面属于处于愈伤组织分裂期的特征是__ABCD_;A细胞分裂加快B正在分裂的细胞体积小,内无液泡C细胞的核和核仁增至最大D细胞中的RNA含量减少,16.在原生质体的培养中,渗透稳定剂的作用是：AA稳定原生质体的形态而不使其被破坏B支持作用C提供营养D调节PH值17.能打破种子休眠,促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发的激素是：ABAGA；BIAA；CNAA；DZt3.下列实验中可能获得单倍体植株的是_BCD_;A小麦的茎尖培养；B番茄花药培养；C玉米胚乳培养；D玉米花粉培养18.在组培条件下,花粉的发育大致有下列几种途径：cdA营养细胞发育途径B生殖细胞发育途径C营养细胞和生殖细胞同时发育途径D花粉的均等分裂19.同一植株下列_B_部位病毒的含量最低.A叶片细胞；B茎尖生长点细胞；C茎节细胞；D根尖生长点细胞20.第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是__B_：.AMorel；BHaberland；CSchleiden；DWhite21.脱落酸ABA需要用__C__法灭菌;A灼烧灭菌；B干热灭菌；C过滤灭菌；D高压湿热灭菌；23.下列实验中可能获得三倍体植株的是__C__.A小麦的茎尖培养；B番茄花药培养；C玉米胚乳培养；D玉米花粉培养24.原生质体纯化步骤大致有如下几步：①将收集到的滤液离心,转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准,一般以500r／min离心15min;用吸管谨慎地吸去上清液;②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中除不含酶外,其他成分和酶液相同,再次离心,去上清液,如此重复三次;③将原生质体混合液经筛孔大小为40~100um的滤网过滤,以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂质,收集滤液;④用培养基清洗一次,最后用培养基将原生质调到一定密度进行培养;一般原生质体的培养密度为104~106／ml;正确的操作步骤是：③①②④CA①②③④B②③①④C③①②④D③②①④25.下列不属于生长素类的植物激素是_A_D_.AKtBIAACNAADABA26.玉米素ZT需要用_C_法灭菌.A灼烧灭菌B干热灭菌C过滤灭菌D高压湿热灭菌三、判断题对的画“√”；错题画“×”,并改正;每小题2分1.一个已分化的细胞若要表现其全能性,首先要经历脱分化过程;√2.由胚乳培养获得的三倍体植株,也一定要进行染色体倍数的检查.√3.一般来说,光照强度较强,幼苗容易徒长,而光照强度较弱幼苗生长的粗壮;×4.经过花药培养所获得的植株都是单倍体;×5.2,4—D可用0．1mol／L的HCl助溶,再加蒸馏水定容.×6.环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发,一般要求80％-90％的相对湿度;√7.幼年细胞和组织比成年细胞和组织诱导愈伤组织容易.√8.一般的说,PH值高于6.5时,培养基全变硬；低于5时,琼脂不能很好地凝固;√9.在配制6-BA母液时,要先加少量的1mol的HCl溶解,再加蒸馏水定容;√10.未成熟胚较小、较嫩、颜色浅,不易培养；成熟胚较大、较硬、颜色较深,易培养.√11.花器脱分化比茎叶容易；幼嫩的组织比成熟的老组织脱分化难;×12.通过子房的培养,即可能得到单倍体植株,又可能得到二倍体植株..√13.在配制NAA母液时,要先加少量的1mol的HCl溶解,再加蒸馏水定容;×15.环境的相对湿度过低会使培养基丧失大量水分,湿度过高时,易引起棉塞长霉,造成污染;√16.White培养基无机盐浓度低,适合生根培养;√17.由性细胞发育而成的胚叫做胚状体,而由体细胞发育而成的胚叫做合子胚.×18.2,4-D可用0．1mol／L的NaOH或KOH助溶,而后加无菌水定容;√20.二倍体细胞比单倍体细胞容易诱导愈伤组织.×21.在MS的培养基成分中,MgSO4.7H2O属于微量元素.×22.未成熟胚较小、较嫩、颜色浅,易培养；成熟胚较大、较硬、颜色较深,不易培养.×23.固体培养基可加进活性炭来增加通气度,以利于发根;×24.兰花可以通过芽丛分离的组培途径快繁,非洲菊通过原球茎增殖的途径快繁.×25.用于外植体、手、超净台等的表面消毒酒精浓度越大,消毒效果越好.×四、名词解释1.植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下,利用适当的培养基,对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养,使其再生细胞或完整植株的技术;2.细胞全能性：指每一个植物细胞都携带有该植物的全部遗传信息,在适当条件下可表达出该细胞的所有遗传信息,分化出植物有机体所有不同类型的细胞,形成不同类型的器官甚至胚状体,直至形成完整植株的潜在能力;3.脱分化：是指离体培养条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态,形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性的细胞的过程;4.母液：在配制培养基之前,为了使用方便、简化操作、用量准确,减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差,常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液5.驯化：指通过改变其遗传性状以适应新环境的过程6.外植体：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官叫做外植体7.愈伤组织培养：将一个细胞、一块组织或一个器官的细胞,通过去分化形成愈伤组织,并在体外培养使之再分化成植株的技术;8.单细胞培养.:亦称游离细胞培养freecellculfure;是指酵母菌、细菌等单细胞生物的培养,或取多细胞生物体上的一个细胞的无菌培养;9.灭菌：是指用物理或化学的方法杀灭全部微生物,包括致病和非致病微生物以及,使之达到无菌保障水平;10.玻璃化现象：指试管苗的一种生长失调症状,当植物材料进行离体繁殖时,有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状,这种现象称为玻璃化;其苗称为玻璃化苗;11.无病毒苗：指不含该种植物主要危害病毒的苗木;12.胚状体：离体培养条件下,没有经过受精过程,但是经过了过程所形成的胚状类似物,此现象无论在培养还是生殖细胞培养中均可以看到,因而统称为胚或胚状体;在离体、组织或过程中,由一个或一些体细胞,经过和发育过程,形成与相类似的结构13.细胞全能性：指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组,并具有发育成完整植株的潜在能力;14.指示植物：指示植物与被指示对象之间在全部分布区内保持联系的称为普遍指示植物；只在分布区的一定地区内保持联系的则称为地方指示植物;15.消毒：消毒是指杀死病原、但不一定能杀死细菌芽孢的方法;通常用化学的方法来达到消毒的作用;16.植物生长物质：是指一些在低浓度下能调节植物生长发育的微量有机物;植物生长物质包括五大类被公认的植物激素和其他内源植物生长调节物质;17.单倍体：只含有配子体染色体组数的植株;18.无菌操作：用于防止进入人体组织或其它无菌范围的操作技术称为无菌操作19.脱分化：离体培养条件下生长的器官、组织、细胞,经过细胞分裂或不分裂而恢复分生状态,形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性的细胞过程;21.花粉胚：花粉胚就是用花粉经过人工的组织培养而形成的幼胚,发育成的植株就只有正常胚一半的染色体组,所以由花粉胚发育成的植株不会产生种子;22.褐变：饲料在加工过程中或长期贮存于湿热环境下,其所含的氨基化合物如、氨基酸及醛、酮等与还原糖相遇,经过一系列反应生成褐色聚合物的现象称为褐变反应,简称褐变;24.指示植物法：25.再分化：离体培养的植物细胞和组织可以脱分化状态重新进行分化,形成另一种或几种类型的细胞、器官、组织、、甚至完整植株;26．平板培养：亦称平面培养;将琼脂或明胶等凝胶状固体培养基制成平面状,然后在此平面上培养微生物或多细胞生物的细胞、组织或器官,这种培养称为平板培养27．次生代谢产物：植物中一大类并排植物生长发育所需的小分子化合物,其产生和分布通常有种属、器官组织和生长发育期的特异性;次生产物在植物中的合成与分解过程称为此生代谢;28．人工种子：又称合成种子,指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽,被包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中,从而形成能发芽出苗的颗粒状;五、简答题1.植物组织培养有哪些特点答：植物组织培养的主要特点是采用微生物学的实验手段来操作植物离体的器官、组织和细胞;特点：①培养条件可人为控制②植物生长周期短,繁殖系数高③管理方便,不受季节环境条件影响,有利于工厂化生产和自动化控制;2.培养基一般包括哪些基本成分其作用是什么如何配制答：培养基的构成要素通常可分为：水分、无机盐类、有机营养成分、植物生长调节物质、天然物质、Ph、凝固剂等;水分是一切生物生命活动的物质基础,是很多生物化学反应的原料和代谢产物;无机盐类是构成植物细胞中核酸、蛋白质以及生物膜系统等必不可少的营养元素;有机营养成分为植物生命活动提供必不可少的碳源、氮源、能源等物质;植物生长调节剂可以促进植物组织的脱分化和形成愈伤组织,还可以诱导不定芽、不定胚的形成;天然有机添加剂通常富含有机营养成分或生理活性物质;pH过高时,培养基会变硬；pH过低时,则影响培养基的凝固;凝固剂是在配制固体培养基时使用,使培养基凝固;其他添加物是有时为了减少外植体的褐变,需要向培养基中加入一些防止褐化的物质;3.简述愈伤组织细胞分化;4.原生质体融合有哪几种主要方法答：植物原生质体最大特性是去掉细胞壁的裸细胞无论来源如何都具有彼此融合的能力1.自发融合2.诱发融合：a,NaNO处理b,高PH值—高浓度钙离子处理c,聚乙二醇PEG处理d,电融合3.化学融合5.组织培养中,pH值起什么作用如果pH值过高或过低会有什么后果6.植物组织培养技术主要包括哪些环节各环节的主要工作内容是什么答：1培养基配置技术：包括培养基的选择、母液配制、培养基配制、培养基灭菌;2培养材料制备灭菌技术：供体植物材料选择、外植体的选择和处理;3无菌接种技术：包括接种室的消毒、工作人员用工作服、口罩等的消毒、超净工作台的清洁与杀菌、操作工具的灭菌;4培养技术：主要是培养条件的控制,包括温度、光照、湿度等各种物理环境条件及培养基组成、PH、渗透压等各种化学环境条件;7.培养基、培养器皿和植物材料通常怎样灭菌答：1培养基一般采用湿热灭菌,如果培养基中的有些成分高温易分解,则可采用过滤灭菌;2培养器皿可采用湿热灭菌或干热灭菌;3植物材料一般采用药剂浸泡灭菌,具体操作如下：A外植体的预处理,对植物组织进行修整,去掉不需要的部分,并将外植体用流水冲洗干净;B用70%的酒精浸润材料30s左右;C用灭菌剂浸泡灭菌,灭菌时不时搅动,使植物材料与灭菌剂有良好的接触,若灭菌过程中加入数滴吐温,则灭菌效果更好;D植物材料用无菌水冲洗3--5次,以除去灭菌剂;8.由胚乳培养获得的植株,是否一定要进行染色体倍数的检查为什么9.花药培养产生的植株染色体倍性如何其产生的原因是什么10.为什么对脱毒处理后产生的植株必须进行病毒鉴定为什么已通过病毒特定病毒鉴定的无病毒苗还须重复鉴定11.使用植物生长物质应注意些什么12.为什么幼胚比成熟胚培养要求的培养基成分复杂13.胚胎培养技术在育种工作中有哪些应用14.试比较花药培养与花粉培养的异同;15.简述酶法分离原生质体的步骤.答：叶片表面消毒→去除表皮,将叶片切成小块→叶碎片放入含有酶和渗透压稳定剂的溶液中→摇床保温培养→原生质体沉到培养皿底部→除去酶溶液→将原生质体移入CPW清洗→离心→清洗基质两次→重悬浮于培养基16.影响马铃薯茎尖培养脱毒的因素有哪些17．简述人工种子生产步骤答：选取目标植物→从适合的外植体上诱导愈伤组织→将愈伤组织转移到液体培养基→愈伤组织在液体培养基中增生扩大→愈伤组织转移至无激素培养基→产生体细胞胚→包裹人工种皮→炼苗→温室大棚播种→获得目标植物18．愈伤组织的形态发生有哪两种情况并比较各自由此形成完整植株的不同;1、答：愈伤组织的形态发生可通过两种途径实现,一种是根芽器官直接分化形成植株,即器官发生途径；另一种是产生具胚芽、胚根的胚状体结构再形成植株,即体细胞胚胎发生途径;在器官发生途径中,芽或芽原基起源于培养组织中比较表层的细胞,即外起源,而根原基则发生于组织较深处,呈现单向极性,所形成植株的维管组织与外植体的维管组织联在一起;而在胚状体发生途径中,绝大多数体细胞胚起源于单细胞,形成的胚状体有双极性,维管组织与外植体没有联系;19．简述幼胚和成熟胚的区别;20．无病毒原种母株的保存及繁殖中最关键的问题是什么怎样解决21．NAA的中文名称是什么有何作用和特点答：NAA的中文名称叫萘乙酸,是一种人工合成的生长素;其在植物体内有促使茎和节间伸长、向性运动、顶端优势、器官脱落和生根的作用;在组织培养中NAA被用于诱导细胞的分裂和根的分化,并能与细胞分裂素互作促进茎芽的增殖;六、论述题1.请你设计一个组培实验室,说明你设计组培实验室各分室的作用及其所需主要仪器设备;2.请论述非洲菊的无菌苗的诱导、继代快繁、生根培养及其驯化移栽过程;3.某地区的一种马铃薯经多年的种植后,植株变的矮小,产量和品质都下降,怀疑是由病毒所至;请你设计一个病毒的鉴定和脱毒的技术方案;4.请阐述原生质体的分离、纯化和活力鉴定的技术过程;5.请分别列出七种仪器设备和七种玻璃器皿的名称,并说明它们的作用;6.请阐述用大蒜脱毒和快繁的程序;为什么试管苗在经过热处理和茎尖培养等方法脱毒后,还需要进行病毒的鉴定7.请论述非洲菊的无菌苗的诱导、继代快繁、生根培养及其驯化移栽过程;8.请论述香石竹的无菌苗的诱导、继代快繁、生根培养及其驯化移栽过程;9.现在需要你配制3升胡萝卜肉质根愈伤组织诱导培养基,其配方为MS＋2.4-D2mg/L＋KT0.2mg/L＋蔗糖3%＋琼脂0.7%,请你阐述培养基的配制和分装直到灭菌的全部技术过程;。
植物细胞组织培养(PPT)
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06.10.2020
主要有:
➢ 原生质体（Protoplast）培养 ➢ 悬浮细胞培养 ➢ 组织（愈伤组织Callus、茎尖分生组织）培
养 ➢ 器官（胚，花药，子房，根和茎）培养
其中最常见的是愈伤组织培养。
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06.10.2020
植物细胞组织培养范畴：
（广义）又叫离体培养：指从植物体分离出 符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等， 通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养 以获得再生的完整植株或生产具有经济价值 的其他产品的技术。
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三、植物组织培养的生理依据
植物生长调节物质对于植物细胞组织的分化和决定具 有关键性作用。它包括：生长素类、细胞分裂素类、 赤霉素、脱落酸、乙烯等
生长素类主要用于愈伤组织的形成，体细胞胚的产生及试管 苗的生根。常用的有2,4-D、NAA、IBA、IAA等。其作用强 弱为2,4-D>NAA>IBA>IAA。
细胞分裂素类则有促进细胞的分裂与分化，延迟组织的衰老， 促进芽的产生等作用。常用的有Zip(异戊烯腺嘌呤)、KT、6BA、ZT等作用强弱顺序为。Zip>KT>6-BA>ZT。
赤霉素则有促进已分化的芽伸长生长，打破种子休眠的作用。 常用的为GA3。
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四、植物组织培养的原理
★植物细胞全能性（Cellular totipotency）： 任何具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成
种子培养
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3. 组织或愈伤组织培养(tissue， callus culture) ：是对植物体的各部分
组织进行培养，如茎尖分生组织、形成层、 木质部、韧皮部、表皮组织、胚乳组织和薄 壁组织等等；或对由植物器官培养产生的愈 伤组织进行培养，二者均通过再分化诱导形 成植株.
植物组织培养快繁技术—组培苗生根培养
3、植物生长调节剂
对于大多数植物来说，诱导生根需要有适当的生长素，其中最常用的是 NAA和IBA，质量浓度一般为0.1-10mg/L。通常的使用方法是将植物生长调节 剂预先加入到培养基中，然后再接种组培苗诱导生根。
4、培养条件
不同植物对光照和温度的要求不同。光照强度和光照时间对生根影响十 分复杂。
二、影响组培苗生根的因素
1、植物材料 2、培养基 3、植物生长调节剂 4、培养条件
1、植物材料
不同植物、不同基因类型、同一植株不同部位和不同年龄对分化生根都 有影响，一般木本比草本难，成树比幼树难，乔木比灌木难。
2、培养基
一般情况下矿质元素浓度较高时有利于茎、叶生长，浓度较低时有利于 生根，且根多而粗壮，发根也快，加铁盐则更好，因此生根培养可使用1/2MS 或1/3MS培养基；生根培养时通常使用的糖是蔗糖，其浓度一般为1%-3%； 组培苗的生根要求一定的pH值，一般为5.0-6.0。
3、育苗室管理 温度：28℃左右。 湿度：50-60%。 光照：暗培养一周左右，给予1500lux-2000lux光照。
4、注意事项 （1）培养基灭菌彻底。 （2）严守无菌操作规程。 （3）严守生根苗切分及接种要求。
任务三 组培苗生根培养
目录
01 组培苗生根培养的类型 02 影响组培苗生根的因素 03 组培苗生根培养过程
ห้องสมุดไป่ตู้
一、组培苗生根培养的类型
1、瓶内生根 瓶内生根是指将完成壮苗阶段的单苗，转接到生根培养基上，在培养瓶
内生根的方法。 2、瓶外生根
瓶外生根也叫活体生根。瓶外生根是将已完成壮苗培养的小苗，用生根 粉或海藻素处理后栽入疏松透气的基质中，经过合理养护形成根系的方法。
三、组培苗生根的过程
植物组织培养
模块一植物培养实验室的规划设计一、填空：1．目前植物组织培养的农业应用主要是脱毒和器官离体快繁。
2. 组织培养的理论依据是：植物细胞全能性。
3植物组织培养的类型有：愈伤组织培养，悬浮细胞培养，器官培养，茎尖组织培养，原生质体培养4. 1943年，white 提出了植物细胞具有全能性，并出版了《植物组织培养手册》，从而使植物组织培养成为一门新学科。
5组织培养室必要的设备有：天平，冰箱，高压灭菌锅，过滤灭菌器，接种箱，超净工作台，培养架，摇床，等6. 接种室要求室内干爽安静，墙面密闭光滑，门为滑动拉门，并设置空调减少空气对流，防止出入时带进杂菌。
7. 紫外灯灭菌利用200-300nm波长左右的紫外光，他的灭菌强度弱，须离被灭菌物不超过1.2m 。
8. 培养架一般长为 1.3 米，宽为0.5 米。
9. 植物组织培养，从接种到商品苗可以分为五个阶段，他们是初代培养，继代扩繁，诱导出根和芽，炼苗，驯化和包装二、名词解释1. 植物组织培养是指用无菌方法使植物体的离体器官，组织和细胞在人为提供的条件下生长和发育的所有培养技术的总称。
2．细胞全能性正常组物体的每一个细胞，因都含有该物种的全部遗传信息，在一定的条件下都具有发育成一株完整个体的潜能。
三、问答题1.根据你所学的知识和所查阅的文献，综述植物组织培养在生产上的应用，都有哪些成功的例子？植物在生长过程中几乎都要遭受到病毒病不同程度的危害，有的种类甚至同时受到数种病毒病的危害，尤其是很多园艺植物靠无性方法来增殖，若蒙受病毒病，代代相传，越染越重，甚至会造成极严重的后果。
自从Morell952年发现采用微茎尖培养方法可得到无病毒苗(virus free)后，微茎尖培养就成为解决病毒病危害的重要途径之一。
若再与热处理相结合，则可提高脱毒培养的效果。
对于木本植物，茎尖培养得到的植株难以发根生长，则可采用茎尖微体嫁接的方法来培育无病毒苗。
2.你认为植物组织培养在当前的农业生产上有什么价值？为什么？答：价值：保持母本优良性状、实现脱毒和扩繁，培养高价植物和稀有植物。
组织培养技术
第五章组织培养技术第一节植物组织培养所谓植物组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织. 器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
狭义上是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也包括在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植株。
一、概述（一）概念1. 植物组织培养：是指通过无菌操作，把植物的外植体接种于人工配置的培养基上，在人工控制的条件下进行培养，使其成为完整植株的方法。
2. 外植体：是指用于植物组织培养的接种材料，它包括植物体的各个器官、组织、细胞和原生质体等。
3. 愈伤组织（Callus ）:原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。
（二）组织培养类型1. 根据接种的外植体不同分：胚胎培养；器官培养；3组织培养；细胞培养；原生质体培养；2. 根据培养基态相不同分：固体培养；液体培养；3. 根据培养过程不同分：初代培养；继代培养；（三）植物组织培养历史植物组织培养是20 世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的。
有以下过程：思想准备阶段；理论奠基阶段；技术建立阶段；形态发生阶段；应用研究阶段；1902 年德国植物学家Haberlandt 提出了细胞全能性概念。
1939 年White 报道了烟草组培成功。
并提出植物细胞全能性学说。
同年，Gautheret 与Nobecourt 培养胡萝卜成功。
三人被誉为植物组培奠基人。
罗士韦是我国植物组织和细胞培养研究的开拓者和奠基人之一（四）植物组织培养的应用1•植物的快速繁殖：⑴园艺、花卉植物的大规模快速繁殖；⑵抢救濒危珍稀植物⑶进行某些植物的种质资源保存2•培育无病毒的植物，如脱病毒草莓等；3•制造人工种子。
4 突变体的筛选培育5 药用植物的工厂化生产6 花药培养和花粉单倍体育种7 基因工程的应用等二、实验室设计和设备（一）实验室设计一般具有：1. 准备室器皿洗涤，培养基配制、分装、高压灭菌，植物材料的预处理，重蒸馏水的制备以及进行生理、生化因素的分析等各种操作都要在此室中进行2. 缓冲室进入无菌室前需在缓冲室里换上经过灭菌的卫生服、拖鞋，戴上口罩。
植物组织培养作业
2010年植物组织培养作业一、填空题1、组织培养的理论依据是：植物细胞的全能性2、植物组织培养的类型有：植物组织培养分愈伤组织培养、器官培养、细胞培养、原生质体培养。
3、植物快速繁殖的类型无菌短枝型丛生芽增值型器官发生型胚状体发生型原球菌型。
4、1943年， white 提出了植物细胞全能性学说，并出版了《植物组织培养手册》，从而使植物组织培养为一门新兴学科。
5、组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、空调机、天平、显微镜、蒸馏水发生器、酸度计。
6、培养基成分主要包括无机营养成分、有机营养成分、植物生长调节物质、碳水化合物、其它物质。
7、糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的离体组织赖以生长的碳源，而且还能还能维持培养基渗透压。
8、琼脂在固体培养时，是作为培养基的凝固剂和支持物，一般用量为6-10g／L之间。
9、常用的生长素有 IAA(吲哚乙酸) 、 IBA （吲哚丁酸）、NAA （萘乙酸）、 2,4-D （二氯苯氧乙酸）等，常用的细胞分裂素 6-BA 、2ip 、 ZT 。
10、外植体污染原因从病源方面主要有细菌污染和真菌污染两大类。
11、防褐变的措施有取材母株预处理、培养基和培养条件、加入防褐剂、连续继代培养。
12、驯化的目的在于在于提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高其光合作用的能力，促使试健壮，提高苗的移裁成活率。
13、离体叶片在诱导愈伤组织的培养基上培养，一般从叶缘切口或叶脉处容易发生愈伤组织。
14、热处理脱毒有温汤浸渍、热空气处理。
15、脱毒苗的鉴定方法有生物学检测、血清学检测、分子生物学检测。
16、茎尖大小与脱毒效果成反比。
17、病毒在植株体内的分布是不均匀的，其分布规律为随着植物组织的成熟而增加。
18、由愈伤组织再生植株有两条途径脱分化和再分化。
二、选择题1、1902年，（ A ）提出了“细胞的全能性”设想。
A HaberlantB MarshingC StewardD Schwawin2、第1个植物病毒——烟草花叶病毒，是在( A )发现的。
植物组织培养技术
植物组织培养技术第一章绪论第二章植物组织培养实验室组成、仪器设备及无菌操作技术第三章植物组织培养基本原理第四章器官培养技术第五章植物胚胎培养第六章花粉及花药培养第七章细胞及原生质体培养第八章组培培养技术在中药学上的应用第一章绪论一、植物组织培养的概念1. 概念植物组织培养（Plant tissue culture）广义上是指无菌条件下，在特定的培养基上对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体甚至包括完整植株进行培养的技术。
2.主要特征（1）在培养容器中进行；（2）无菌培养环境，排除了微生物如真菌、细菌以及害虫等的侵入；（3）各种环境因子如营养因子、激素因子以及光照、温度等物理因子处于人工控制之下，并可达到最适条件。
（4）通常打破了正常的植物发育过程和格局；（5）随着单细胞和原生质体培养技术的发展，对植物显微结构进行操作成为可能。
二、植物组织培养类型：根据不同分类的依据可以分为不同类型。
1、根据培养材料不同分为：（1）完整植株培养（Plant Culture）：对幼苗和较大植株等的培养。
（2）胚胎培养（Embryo Culture）：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。
（3）器官培养（Organ Culture）：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。
（4）组织培养（Tissue Culture）：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。
（5）细胞培养（Cell Culture）：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。
（6）原生质体培养（Protoplast Culture）：指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。
2、根据再生途径分为：（1）器官发生途径（Organogenesis）：直接器官发生途径：植物器官可以直接由外植体上诱导。
如茎尖培养。
间接器官发生途径：成熟细胞经过脱分化（dedifferentiation）及再分化（redifferentiation）过程而形成新的组织和器官的过程。
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植物组织培养的类型
植物组织培养是一种在无菌条件下，利用植物组织的分裂、分化和再生能力进行体外培养的技术。
通过植物组织培养，可以实现无性繁殖、快速繁殖和遗传改良等目的。
本文将介绍几种常见的植物组织培养类型。
一、愈伤组织培养
愈伤组织是指植物受到外界刺激后产生的异常组织，具有强烈的再生分裂能力。
愈伤组织培养是指通过培养和再生愈伤组织，实现植物的快速繁殖和遗传改良。
愈伤组织培养常用的方法有切割法、刺激法和悬浮培养法等。
通过这些方法，可以获得大量的愈伤组织，并进一步分化为根、茎、叶等不同的植物器官。
二、胚培养
胚培养是指将植物胚或胚乳在适宜培养基上进行培养，促使其发育成为完整植株的技术。
胚培养可以实现无性繁殖、快速繁殖和遗传改良等目的。
胚培养常用的方法有胚轴培养、胚乳培养和胚培养悬浮液法等。
通过这些方法，可以培养出大量的植物胚，进一步发育为完整的植株。
三、单细胞培养
单细胞培养是指将植物体的单个细胞或细胞团在适宜培养基上进行培养，促使其分化为完整植株的技术。
单细胞培养可以实现无性繁
殖、快速繁殖和遗传改良等目的。
单细胞培养常用的方法有悬浮细胞培养、离体培养和原生质体培养等。
通过这些方法，可以培养出大量的植物细胞，进一步发育为完整的植株。
四、花药培养
花药培养是指将植物的花药在适宜培养基上进行培养，促使其分化为花粉或胚囊的技术。
花药培养可以实现花粉无性繁殖和胚囊遗传改良等目的。
花药培养常用的方法有花药切片培养、花药培养悬浮液法和花药离体培养等。
通过这些方法，可以获得大量的花粉或胚囊，进一步进行无性繁殖或遗传改良。
五、根尖培养
根尖培养是指将植物的根尖在适宜培养基上进行培养，促使其分化为根系的技术。
根尖培养可以实现植物的快速繁殖和根系遗传改良等目的。
根尖培养常用的方法有根尖切割培养、根尖培养悬浮液法和根尖离体培养等。
通过这些方法，可以获得大量的根系，进一步进行无性繁殖或遗传改良。
六、叶片培养
叶片培养是指将植物的叶片在适宜培养基上进行培养，促使其分化为植物器官的技术。
叶片培养可以实现无性繁殖、快速繁殖和遗传改良等目的。
叶片培养常用的方法有叶片切割培养、叶片培养悬浮液法和叶片离体培养等。
通过这些方法，可以获得大量的植物器官，
进一步进行无性繁殖或遗传改良。
植物组织培养是一种重要的生物技术手段，可以实现植物的无性繁殖、快速繁殖和遗传改良等目的。
不同类型的植物组织培养方法可以根据具体的应用需求选择，通过合理的培养条件和培养技术，可以获得大量的植物组织和植株，为农业生产和科学研究提供了重要的支持。