实验1-2 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制
马铃薯组织培养
马铃薯组织培养1、繁殖瓶苗将待繁脱毒苗在无菌条件下每叶节切一段，接种在仅含大量元素、微量元素和铁盐的无激素M S固体或液体（可用纸桥）培养基的组培瓶中，置培养室内培养。
培养条件为：光照1000-3000lx,光周期13-16h/d,培养温度（25±2）℃，空气相对湿度50%-60%，自然通风。
叶节段接种30-50d后长成3-5片叶的幼苗。
记录苗芽发生时间，生长状况，污染率。
再按照上述方法重复进行扩繁，直到达到要求繁殖数量为止。
2、繁殖微型薯将上述具有3-5片叶幼苗，加入液体培养基（MS+BA2-10mg/L)或（MS+BA2-10mg/L+IAA1m g/L+CCC100-500mg/L+糖80-100g/L),放入培养室，遮光全黑暗或光照时数少于8h/d，温度（20±2）℃，空气相对湿度50%-60%，自然通风。
经40-70d后，在植株叶腋处长出微型薯。
记录微型薯发生时间，生长状况，污染率。
马铃薯组织培养及原原种生产技术摘要：本文作者根据自己多年的工作经验，详细地介绍了马铃薯组织培养方法和原原种生产技术。
关键词：马铃薯组织培养原原种生产技术病毒和类病毒的累积性感染是引起马铃薯种性退化的重要因素，而通过组织培养获取无病毒种薯来恢复种性的方法已被马铃薯生产地区广泛采用。
现将马铃薯组织培养方法和原原种生产技术介绍如下：1 马铃薯组织培养1.1外植体培养从已催出芽（芽长一般2—4cm）的干净健康马铃薯块茎上掰下芽，用自来水冲洗干净，放入0.1—0.15%的升汞溶液中浸泡8—10分钟，在超净工作台上消毒完后，放入无菌水中浸泡6次，每次5分钟，然后接种到MS＋6－BA1.5mg/L （毫克/升）＋GA30.5mg/L＋IBA0.5mg/L＋琼脂8g/L＋蔗糖30g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种1—5个外植体。
1.2茎尖剥离及初代培养外植体培养20天后，在超净工作台上解剖镜下用解剖针将生长点0.1——0. 5mm部分剥离出来，转接到MS＋肌醇100mg/L+6－BA1.5mg/L＋GA30.5mg/L＋泛酸钙1.5mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂8g/L＋活性炭0.17g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种4—5个生长点。
马铃薯脱毒试管苗快繁技术
马铃薯脱毒试管苗快繁技术一、引言马铃薯是我国重要的粮食作物之一，也是世界上著名的经济植物之一。
然而由于病毒的不断侵袭和疫病的流行，马铃薯的产量和品质不断下降，给农民带来了巨大的经济损失。
因此，繁殖健康无害的马铃薯脱毒试管苗已成为种植业的重要课题。
本文将就马铃薯脱毒试管苗快繁技术进行详细描述。
马铃薯脱毒试管苗快繁技术是指利用组织培养技术，从马铃薯营养组织中培养出无菌结果愈伤组织，然后通过激素处理，使其分化成愈伤组织和根发生体，并再次通过激素培养，使其分化成幼苗。
经过快速繁殖和转移，只需数月就可以获得大量无菌试管苗。
1、原种资料筛选首先要去毒源，选择健康、无病毒的马铃薯株作为原种资料。
2、表型鉴定通过观察和检测，鉴定选定的原种资料是否存在病害。
3、进行消毒处理将所选的马铃薯根茎进行消毒处理，保证原种资料无菌。
4、组织培养将原种资料营养组织分离出来，并进行无菌培养，培养至结果愈伤组织。
5、激素处理将结果愈伤组织分裂成愈伤组织和根发生体，经过激素处理，使愈伤组织分化成为幼苗。
6、快速繁殖和转移幼苗经过快速繁殖和转移，可以在数月时间内获得大量的无菌试管苗。
1、高效快捷马铃薯组织培养技术可以在短时间内获得大量无菌马铃薯苗，极大地提高了马铃薯繁殖的效率。
2、无病毒由于是无菌培养，可以避免病毒的传播和侵袭，从根本上解决了马铃薯病害的问题。
3、一致性强试管苗的形态、生长状态、品种、性状和同一生产人群下的分布均一。
4、推广灵活马铃薯组织培养技术可以根据不同地区和不同需求进行灵活推广和应用。
马铃薯脱毒试管苗快繁技术具有广阔的应用前景，可以成为解决马铃薯病害的重要手段。
同时，随着科技不断发展和创新，马铃薯脱毒试管苗快繁技术将进一步提高繁殖效率和质量，并推动种植业的发展。
食用菌试管培养基配方
食用菌试管培养基配方
答案：
食用菌试管培养基的配方
PDA培养基
配方：土豆200克、葡萄糖18~20克、琼脂18~22克，水1000毫升。
制作方法：土豆去皮切块煮沸20~30分钟，过滤取滤液，加入琼脂加热溶解，再加入葡萄糖，冷却后分装。
综合马铃薯培养基
配方：马铃薯200克、葡萄糖20克、磷酸氢二钾3克、硫酸镁1.5克、维生素B1 10毫克、琼脂20克，水1000毫升。
制作方法：马铃薯煮沸15~20分钟，过滤取滤液，加入其他成分加热溶解。
合成培养基
配方：马铃薯20克、葡萄糖20克、磷酸二氢钾2克、蛋白胨5克、酵母膏5克、硫酸镁1克，水1000毫升。
制作方法：煮沸过滤后加入其他成分加热溶解。
大米培养基
配方：大米适量、磷酸二氢钾10克、硫酸镁5克，水1000毫升。
制作方法：大米加入营养液中，加热灭菌后接种。
制作方法
PDA培养基制作方法
将土豆切块煮沸20~30分钟，过滤取滤液。
加入琼脂加热溶解，再加入葡萄糖搅拌均匀。
冷却后分装，灭菌后制成斜面培养基。
综合马铃薯培养基制作方法
马铃薯煮沸15~20分钟，过滤取滤液。
加入其他成分加热溶解，分装灭菌。
合成培养基制作方法
煮沸过滤后加入其他成分加热溶解，分装灭菌。
大米培养基制作方法
大米加入营养液中，加热灭菌后接种。
马铃薯植物组培
马铃薯的块茎组织培养的研究生命科学学院生物工程132班组长：林伟平组员：温楚婷凌琦雯刘钰荧一,实验目的(1)以马铃薯的块茎为材料，研究经过器官分化或愈伤组织增殖与再分化途径，获得较多的试管苗，掌握植物快速繁殖的基本方法和过程。
(2)观察和分析不同糖类对外植体愈伤组织诱导，增殖和器官分化的影响。
二,实验原理在植物组织培养体系中，从外植体形成再生植株有不同的再分化途径，会受到培养基中不同浓度的糖的影响。
植物的快速无性繁殖是指以合适的外植体为起始材料，在无菌条件下，通过合适的培养技术，在有限的空间，短时间内快速生产大量植株的技术。
三,实验材料，试剂与器具(1)实验材料：马铃薯块茎(2)试剂：实验十一配制的各种培养基母液，蔗糖，葡萄糖，琼脂，蒸馏水，1mol/LHCl,1mol/LNaOH,HgCl或次氯酸钠，吐温20，75%乙醇或20g/L新洁尔灭，无菌水等。
(3)器具：高压灭菌锅，分析天平，酸度计，光照培养箱，微波炉，冰箱，培养架，果酱瓶，烧杯（1000mL,500mL,100mL,50mL）,移液管，量筒，不锈钢镊子，剪刀，解剖刀，脱脂棉，培养皿，称量纸，记号笔，标签纸，药匙，玻璃棒，洗耳球，洗瓶，电炉，酒精灯四,实验内容1,确定培养基配方，MS+2，4-D1.0mg/L+6-BA1.0mg/L+8g/L琼脂+不同浓度的葡萄糖/不同浓度的蔗糖（分别为1%，2%，3%，4%的葡萄糖或蔗糖）3,移液与溶化：将所需的各储存母液按顺序摆放好，将洁净的量筒，烧杯，移液管，玻璃棒，漏斗等放在指定的位置，准备好蒸馏水及瓶盖，包装纸等，取100mL小烧杯一只，用50mL 量筒量取大量元素，用各母液专用移液管分别吸取微量元素母液，铁盐母液，有机附加物母液，2，4-D母液，6-BA母液。
取1000ml烧杯一只，先用量筒取1000mL蒸馏水倒入烧杯中，用记号笔画好液位线，将蒸馏水倒出一半，准确称取8g琼脂倒入烧杯中，置于电炉煮沸，待琼脂完全溶化后，加入10g葡萄糖，充分溶解后，将准备好的含大量元素，微量元素，铁盐，有机附加物和植物生长调节物质的母液混合物倒入烧杯中，用蒸馏水将盛过母液混合物的小烧杯洗三次，一并倒入1000mL烧杯中，加热至沸腾，将烧杯远离火源，并加蒸馏水定容至设定的液位线。
马铃薯脱毒试管苗快繁技术
马铃薯脱毒试管苗快繁技术马铃薯作为我国重要的经济作物之一，是广大农民和经济发展所依靠的重要农业领域。
而随着现代农业发展的不断推进，马铃薯种植也面临着各种各样的困难和问题。
其中，病毒病是马铃薯种植过程中最严重的问题之一。
为了解决这一问题，现在越来越多的科技工作者开始探索马铃薯脱毒试管苗快繁技术。
以下就从马铃薯脱毒试管苗的定义、制备流程、优势及应用等方面进行详细介绍。
马铃薯脱毒试管苗是指利用组织培养和生物学技术手段在无菌条件下，从被病毒污染的母株中取材，经过一系列处理，得到一定数量无菌苗，最终培育成符合生产要求的健康幼苗。
二、制备流程1、材料准备选择健康的马铃薯作为原材料，对其进行外观检查和芽眼筛选。
同时还需准备有较高的生长潜力和再生能力，无菌培养必需的基本培养基、辅助培养基及添加适量激素和营养物质的诱导培养基等。
2、无菌处理将马铃薯进行消毒处理，以确保材料无菌化。
处理方法包括酒精消毒、盐酸消毒、滴定消毒等。
3、切瘤、分化在消毒的基础上，进行切瘤和分化处理，分离出芽鳖、块茎鳖、滋液鳖等预备试管苗材料。
4、根、茎、叶分离通过培养基的诱导，将原始材料中的根、茎、叶进行分离和再生，形成独立的无菌苗，以便进行大规模培养和繁殖。
5、无菌培养得到无菌苗后，进行无菌培养，增殖数量，以期达到无菌苗的快速繁殖和生长。
6、弱化适应繁殖的苗期过长、适应性不足，则会极大地限制试管苗的生长和繁殖。
为此，可以通过加强营养管理、控制温度环境以加强其适应能力。
三、优势及应用1、提高繁殖能力试管苗繁殖效率高，可以在很短时间内繁殖出大量的健康马铃薯苗，提高其生产效益。
2、保证生产质量脱毒试管苗繁殖过程严格按照国家标准执行，每批苗都具有相同的生长特征和品质，可以保证生产质量。
3、有效防控病害通过脱毒试管苗快繁技术，可以有效避免病毒病等病害的传播，提高马铃薯的健康状态，减少生产损失。
4、推动可持续发展脱毒试管苗效益显著，有助于推动现代化农业发展和可持续发展，为农民增收和增加就业构建了良好的平台。
母种培养基的制作及试管菌种的扩制
一、实验目的
1. 了解食用菌母种培养基的配方 2. 熟练掌握母种培养基（PDA）的配制方法 3. 熟练掌握培养基的消毒灭菌技术。 4. 掌握试管菌种的扩制技术
母种培养基配方
1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯（去 皮）200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL，pH 自然。
(三）高压灭菌
121℃高压灭菌30min后摆斜面。
(四）母种接种及试管菌种的扩制
1．将已灭菌的斜面培养基瓶移入事先消毒过 的超净工作台内，同时放入酒精灯、酒精棉 、接种铲等，紫外灭菌20～30min。
2.将母种管、用具及手进行酒精消毒。
3.按无菌操作方法进行接种，用接种铲取菌 种一块放入斜面培养基上，并使菌丝紧贴在 培养基上，塞上试管塞，贴上标签，注明菌 种名称和接种日期。
4.将称好的琼脂加入马铃薯汁中，在电炉上 用文火煮，直至琼脂完全融化（边煮边搅拌 ），再用四层湿纱布（需用热水浸湿后拧干 ）过滤。最后加入葡萄糖等可溶物，搅匀。
5.调节pH值：培养基的酸碱度是影响菌丝生长 的重要因素，因此培养基配好后应根据菌种对 pH值的要求进行调节。马铃薯蔗糖琼脂培养基 配好后，pH值一般为中性，所以不必调节。
4.放入28℃生化培养箱中培养。
注意事项：
PH调节时，应该注意的是培养基的酸碱度在 灭菌前不宜调至pH6.0以下，否则灭菌后培养 基不凝固。有些菇类的培养基要求在pH6.0以 下的，要待灭菌后在无菌条件下滴加盐酸或 乳酸等进行调节。
四、作业
1.试述母种培养基的配制过程。 2.简述培养基分装的要点。
铃薯综合培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g， 琼脂20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生B1 10mg，水1000ml。
马铃薯的培养实验报告
一、实验目的1. 了解马铃薯的生长习性及繁殖方法。
2. 掌握马铃薯的离体培养技术。
3. 观察马铃薯生长过程中的形态变化。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：马铃薯块茎、无菌水、无菌滤纸、无菌刀片、移液枪、培养皿、超净工作台、恒温培养箱、显微镜等。
2. 实验试剂：氯化钠、氯化钙、葡萄糖、琼脂、氢氧化钠、硫酸铜、硝酸钾等。
三、实验方法1. 马铃薯块茎表面消毒：将马铃薯块茎洗净，用无菌刀片切去表面1-2cm，用无菌水清洗3-5次，再用70%酒精浸泡1分钟，最后用无菌滤纸吸干水分。
2. 马铃薯芽尖剥离：用无菌刀片将消毒后的马铃薯块茎切成3cm×3cm的小块，确保芽尖位于小块中央。
3. 培养基制备：按照以下配方制备培养基：- 营养基：马铃薯浸出粉20g，葡萄糖20g，氯化钠1g，氯化钙0.5g，硝酸钾0.5g，硫酸铜0.01g，琼脂10g。
- pH值调至6.0-6.5。
4. 培养基灭菌：将制备好的培养基分装于无菌培养皿中，用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，灭菌时间为20分钟。
5. 马铃薯芽尖接种：将灭菌后的培养基冷却至50℃左右，将马铃薯芽尖接种于培养基上，每皿接种3个芽尖。
6. 培养条件：将接种后的培养皿置于恒温培养箱中，温度控制在25℃左右，光照强度为2000-3000勒克斯，光照时间为12小时/天。
7. 观察与记录：每隔一定时间观察马铃薯芽尖的生长情况，记录芽尖的生长高度、叶色、叶形等形态变化。
四、实验结果与分析1. 马铃薯芽尖生长情况：接种后第5天，芽尖开始生长，表现为芽尖变绿，生长速度逐渐加快。
第10天，芽尖高度可达1cm左右，叶片开始展开，颜色鲜绿。
第15天，芽尖高度可达2cm左右，叶片数量增多，颜色更加鲜绿。
2. 马铃薯芽尖形态变化：接种后第5天，芽尖开始分化出茎和叶，茎逐渐变粗，叶片逐渐展开。
第10天，茎粗约1mm，叶片数量约4片，颜色鲜绿。
第15天，茎粗约2mm，叶片数量约6片，颜色更加鲜绿。
马铃薯脱毒试管苗快繁技术
马铃薯脱毒试管苗快繁技术马铃薯脱毒试管苗快繁技术是近年来在马铃薯生产中得到广泛应用的一项先进技术，通过试管苗快速繁殖可以大幅提高马铃薯的繁殖效率和质量，有效地避免了病毒和病菌的传播，提高了马铃薯的产量和品质。
本文将从马铃薯脱毒试管苗原理、技术流程、应用前景等方面进行介绍。
一、马铃薯脱毒试管苗原理马铃薯脱毒试管苗技术是通过将健康的组织培养在无菌的培养基中，通过适宜的营养和生长条件，使其快速生长和分化为幼苗，然后继续培养和繁殖，最终获得大量无病害的苗种。
其原理主要包括以下几点：1. 选择健康组织：选择健康的马铃薯组织，如叶片、茎芽等，进行无菌处理，去除表面的病菌和病毒。
2. 建立培养基：根据马铃薯生长的特点和营养需求，配置适宜的无菌培养基，提供充足的营养和生长因子。
3. 培养和繁殖：将经过无菌处理的马铃薯组织培养在无菌培养基中，控制适宜的温度、光照和湿度，促进组织的生长和分化为幼苗，然后进行继代培养和繁殖。
通过以上原理，可以有效地实现马铃薯的脱毒繁殖，得到大量无病害的试管苗，为马铃薯生产提供了可靠的种苗资源。
马铃薯脱毒试管苗技术的流程主要包括组织培养、无菌处理、培养基配置、培养和繁殖等步骤，下面将对其具体流程进行介绍。
2. 无菌处理：将经过消毒处理的组织放入无菌工作台中，进行进一步的无菌处理，包括盆栽、割取等操作，确保组织的无菌状态。
3. 培养基配置：按照配方将无菌培养基配置好，包括营养盐、植物生长激素、碳源等成分，确保提供足够的营养和生长因子。
马铃薯脱毒试管苗技术在马铃薯生产中具有广阔的应用前景，主要体现在以下几个方面：1. 提高繁殖效率：传统的马铃薯繁殖方式存在生长周期长、繁殖效率低的问题，而通过试管苗快速繁殖技术可以大大提高繁殖效率，节约时间和成本。
2. 避免病毒传播：马铃薯作为病毒携带者，传统繁殖方式易导致病毒的传播，而试管苗繁殖可以避免病毒的传播，有效保证马铃薯的健康和质量。
3. 提高产量和品质：无病害的试管苗具有较高的生长力和抗逆性，可以提高马铃薯的产量和品质，为种植户带来更好的经济效益。
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（３）调节培养基的酸碱性至pH5.8
由于培养基的pH值直接影响到培养物对离 子的吸收，因而过酸或过碱都对植物材料 的生长有很大影响。此外，琼脂培养基的 pH值还影响到凝固情况。所以，当培养基 配制好后应立即进行pH值的调整。最好用 酸度计测试，既快又准，如无条件也可用 精密pH试纸。培养基若偏酸时用lmol· L-1 NaOH来调节，偏碱则可用lmol· L-1 HCl来 调节。一般来说，当pH值高于6.0时，培 养基将会变硬；pH值低于5.0时，琼脂不能 很好地凝固。
（４）培养基的分装
配制好的培养基要趁培养容器加注量占其容积 的1/4～1/3为宜，果酱瓶每瓶20～30ml， 太多既浪费培养基，又减少了培养材料的 生长空间；太少又会因营养不良影响生长。 培养基分装完后，用封口膜封严瓶口，并 用橡皮筋扎紧。
5 马铃薯试管苗快速繁殖培养基 的配方设计及配制体积
培养基配方设计：（1）根据培养的目的选 择一种培养基为基本培养基。（2）确定培 养基中各种激素的浓度及相对比例 配方： MS基本培养基＋0.7％琼脂＋3％蔗 糖 配制体积：每小组配制0.5L
6 马铃薯试管苗快速繁殖 培养基的配制流程
6.2 培养基的配制步骤
（１）根据需要配制的培养基的量称好所 需的琼脂（0.７～0.８％），撕碎后放入 医用口杯中，加入适量的蒸馏水（估计加 入母液后不超过配制总量）置于电磁炉上 加热溶解，边加热边用玻棒搅动。
（２）待琼脂完全溶解后，加入规定用量 的母液（可事先取好放于一烧杯中），再 加入规定用量的蔗糖，继续加温并不断搅 拌，待琼脂煮透后端离火源，根据培养基 配方及培养基体积加入所需要的生长调节 物质，最后加蒸馏水至所需体积。
3 主要实验用具和仪器
冰箱、普通天平、三角瓶、果酱瓶、移液 管、量筒、烧杯、容量瓶、玻璃棒、医用 口杯、精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、 称量纸、标签纸、封口膜、橡皮筋、棉线、 电炉、高压蒸汽灭菌锅、电磁炉等。
4 药品和试剂
MS培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调 节物质、蒸馏水、1mol· L-1HCl、 1mol· L-1NaOH
6 接种工具准备
分别取枪状镊子2把、眼科手术剪和手术刀 各1把，用牛皮纸和橡皮圈包扎成一套；每 套培养皿内放入合适滤纸2～3张，用牛皮 纸和橡皮圈包扎成一套；然后和培养基一 起统一灭菌。
作业
详细写出马铃薯试管苗快速繁殖培养 基配制的流程及在培养基配制的各环 节应注意的事项。
6.1 药品及用具的准备 6.1.1 MS培养基母液的准备
配制培养基时先将事先配制贮存的母液按 顺序放好，并检查这些母液是否已变色或 产生沉淀或产生结晶，已失效的就不要取 用。 MS培养基母液包括大量元素母液、 微量元素母液、铁盐母液、有机物母液。
6.1.2 用具用品的准备
将洁净的各种用具如三角瓶、果酱瓶、量 筒、烧杯、吸管、玻璃棒、医用口杯、精 密pH试纸、封口膜、橡皮筋、电炉等准备 好放在指定的位置。再将蒸馏水、琼脂、 蔗糖、生长调节物质、1mol· L-1NaOH、 1mol· L-1HCl准备好。
培养基灭菌注意的问题：
（1）灭菌前检查锅内是否有足够的水；
（2）装锅不可过满； （3）培养基消毒灭菌时间不宜过长，也不 可超过灭菌锅规定的压力范围；否则，培 养基中的蔗糖、有机物质，特别是维生素 类物质就会分解，导致培养基变质、变色， 甚至难以凝固。
培养基灭菌注意的问题：
（4）当灭菌完成后，应切断电源或热源， 待灭菌锅内气压接近“0”时，方可打开放 气阀，拧开灭菌锅盖取出培养基。切勿为 急于取出培养基而打开放气阀放气，否则 锅内气压下降太快会引起减压沸腾，导致 灭菌锅内各容器中的培养基溢出，造成浪 费或污染，甚至烫伤工作人员。
实验1-2 马铃薯试管苗快速 繁殖培养基的配制
1 实验目的
通过本次实验，使学生掌握配制培养基的 步骤，能熟练准确配制培养基，并能根据 实验目的设计适合的培养基配方。
2 实验原理
将事先配制好的培养基母液按一定比例稀 释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再 加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备 成符合要求的培养基。
（５）培养基的灭菌
培养基分装后应立即置于高压蒸气灭菌锅内 进行灭菌。消毒灭菌时，压力表读数约为 1.06kgf·cm-2或0.105 MPa （可在 0.105 ～ 0.12MPa间，但不得超过0.14 MPa），温度121℃时保持15～30 min左右即 可。
（５）培养基的灭菌
为了保证灭菌彻底，在蒸气灭菌锅增压前应 先将灭菌锅内的冷空气放尽。排净冷空气的 办法有两种： （1）可以事前打开灭菌锅放气阀，煮沸， 待大量热蒸气排出后再关闭； （2）也可采用先关闭放气阀，待压力升到 约0.04 MPa，温度超过108℃时打开放气阀 排出空气，待压力表指针回到0时再关闭放 气阀。