丹参总酚酸生物黏附漂浮微丸体外释放和大鼠药代动力学研究

丹参总酚酸生物黏附漂浮微丸体外释放和大鼠药代动力学研究目的制备丹参总酚酸生物黏附漂浮微丸，延长其在体内的滞留时间，提高其口服生物利用度。

方法采用挤出滚圆法，分别以壳聚糖、羟丙基甲基纤维素（HPMC）和卡波姆为黏附材料，十八醇为漂浮材料，微晶纤维素为成型剂，制备丹参总酚酸黏附漂浮微丸。

考察制备的2种黏附漂浮微丸的体外释放及其在大鼠体内生物利用度。

结果体外释放试验结果表明，空白微丸中丹酚酸B在4 h 即释放完全，而制备的2种黏附漂浮微丸的体外释放时间达12 h。

大鼠体内药代动力学研究结果表明，大鼠分别灌胃丹参总酚酸原料药、丹参总酚酸壳聚糖微丸、丹参总酚酸HPMC微丸后，丹酚酸B在大鼠体内Tmax分别为（12.00±2.74）min、（17.00±7.58）min、（27.00±12.55）min，丹参总酚酸壳聚糖微丸、丹参总酚酸HPMC微丸相對生物利用度分别为177.08%、172.03%。

结论丹参总酚酸黏附漂浮微丸在体外释放缓慢，黏附漂浮微丸可延长药物在体内的滞留时间，提高丹参总酚酸在大鼠体内的口服生物利用度。

Abstract：Objective To prepare salvianolic acid bioadhesive floating pellets；To prolong its residence time in vivo；To improve the oral bioavailability. Methods Salviae miltiorrhizae total phenolic acid adhering floating pellets were prepared by extrusion-spheronization. Chitosan，HPMC and carbomer were used as adherent material，stearyl alcohol was used as floating material and MCC as forming agent. The in vitro release of two adherent floating pellets were prepared and their bioavailability in rats were investigated. Results The results of in vitro release test showed that the salvianolic acid B in the blank pellets was completely released at 4 h，and the two adherent floating pellets prepared in vitro were released for 12 h. The results of pharmacokinetic studies in rats showed that after intragastric administration of salvianolic acid，salvianolic acid chitosan pellets and salvianolic acid HPMC pellets，Tmax were （12.00±2.74）min，（17.00±7.58）min and （27.00±12.55）min，respectively. The relative bioavailability of salvianolic acid chitosan pellets and salvianolic acid HPMC pellets were 177.08% and 172.03%，respectively. Conclusion Salvia total phenolic acid adherent floating pellets release slowly in vitro，and floating pellets can prolong the retention time in vivo and increase the oral bioavailability of salvianolic acid in rats.Keywords：salvianolic acid；bioadhesive floating；pellets；release in vitro；pharmacokinetics丹参为唇形科鼠尾草属丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，又名大红袍、红根赤参、血丹参等，始载于《神农本草经》，其活性成分主要分为两大类，即脂溶性成分和水溶性成分。

丹参总酚酸是丹参的水溶性提取物[1]，其中以丹酚酸B含量最高。

本课题组在前期对丹参总酚酸理化性质的考察中发现，丹参总酚酸主要成分丹酚酸B的油水分配系数与pH值呈负相关，在胃部pH值条件下的油水分配系数明显高于在肠中。

油水分配系数越高越有利于药物的跨膜转运。

并且丹参总酚酸为酸性物质，其在酸性条件下最稳定。

本课题组前期筛选出菠萝叶提取物和葛根总黄酮生物黏附漂浮微丸的最佳处方，体内外研究表明，制备的菠萝叶提取物和葛根总黄酮黏附漂浮微丸具有良好的胃滞留效果和缓释特性，达到了提高药物口服生物利用度的目的[2-4]。

因此，本研究将菠萝叶提取物和葛根总黄酮黏附漂浮微丸的最佳处方应用于丹参总酚酸，制备2种丹参总酚酸黏附漂浮微丸，延长丹参总酚酸在胃肠道的滞留时间，改善药物吸收，从而提高生物利用度。

1 仪器、试药与动物LC-10AT高效液相色譜仪（日本岛津），包括SPD-10A VP紫外检测器、SCL-10A VP控制器、CTO-10ASV柱温箱、CLASS-VP工作站；MBS-120挤出滚圆机（英国Caleva公司）；盘式干燥烘箱（英国Caleva公司）；HH. SY11-Ni2B 电热恒温水浴锅（北京长风仪器仪表公司）；RC806D溶出试验仪（天津市天大天发科技有限公司）；BSA 224S-CW型天平（德国Sartorius公司）；UGC-12MF 氮吹仪（北京优晟联合科技有限公司）。

丹参总酚酸提取物（西安小草植物科技有限公司，批号XC20170112），丹酚酸B对照品（上海融禾医药科技有限公司，批号160928，HPLC纯度≥98%），对香豆酸对照品（美国Sigma公司，批号1001108036，HPLC纯度≥98%），壳聚糖（CTS，美国Sigma公司，CAS9012-76-4），卡波姆934P（美国BF Goodrich公司），十八醇（北京化学试剂公司），微晶纤维素PH-101（MCC，上海源叶生物科技有限公司），羟丙基甲基纤维素（HPMC K4M，美国卡乐康公司），盐酸、甲醇、乙腈（美国Fisher公司，色谱级），其余试剂均为分析纯。

SPF级6周龄SD雄性大鼠15只，体质量（220±20）g，北京市维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号SDXK（京）2015-0001，饲养于中国医学科学院药用植物研究所SPF级动物房。

2 方法与结果2.1 丹酚酸B体外测定方法2.1.1 色谱条件色谱柱：Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流动相：甲醇∶乙腈∶水（含0.3%磷酸）=30∶10∶60；流速：1 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：286 nm；进样量：20 ?L。

2.1.2 线性关系考察取丹酚酸B对照品2.54 mg，精密称定，置于25 mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。

精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mL置于5 mL 量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，用0.45 ?m微孔滤膜过滤，分别取对照品溶液20 ?L注入高效液相色谱仪，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，作标准曲线，得丹酚酸B回归方程：Y=23 346X-11 043，r2=0.999 9，线性范围为2.032～65.024 ?g/mL。

2.1.3 方法回收率考察精密称取丹酚酸B适量，配制成2.032、16.256、65.024 ?g/mL低、中、高3个浓度的溶液，每个样品配制5份，按上述色谱条件进样检测，计算测得量，以实测值与理论值相比，计算方法回收率。

结果在考察浓度范围内样品回收率在98%～102%之间，表明方法回收率良好。

2.1.4 方法精密度考察配制2.032、16.256、65.024 ?g/mL低、中、高3个浓度的溶液，分别于日内重复测定5次，并连续测定5 d，求得日内、日间RSD。

结果日内和日间精密度RSD均小于2%，表明精密度良好，符合体外分析方法要求。

2.2 微丸的制备方法分别称取丹参总酚酸原料药、MCC、CTS、十八醇、HPMC、卡波姆，按等量递加法混匀，过80目筛，加润湿黏合剂不断捏合，制成软材。

经挤出机筛板以35 r/min转速挤成直径相同、光滑致密的条状物；将条状物置于滚圆机内，1300 r/min滚圆5 min，直至滚制成丸；取出微丸，干燥，过筛，分别制得空白组微丸（MCC和丹参总酚酸原料药）、CTS组微丸和HPMC组微丸。

2.3 微丸产率的测定采用筛分法，经挤出滚圆法制备的微丸干燥后取18～24目筛得到目标微丸，计算产率。

产率（%）=目标微丸质量÷投料量×100%。

壳聚糖组微丸产率为48.39%±1.02%，HPMC组微丸产率为50.98%±1.87%。

2.4 微丸体外释放度测定参照2015年版《中华人民共和国药典》（四部）附录释放度测定方法转篮法：以脱气处理的0.1 mol/L盐酸900 mL为释放介质，转速50 r/min，温度（37±0.5）℃；精密称取微丸约0.9 g，分别于1、2、4、6、8、10、12 h取释放液2.0 mL，同时补加相应释放介质2.0 mL，过0.45 ?m滤膜，弃去初滤液，取续滤液，HPLC 测定药物浓度，计算药物累积释放度。

2.4.1 微丸体外释放曲线与空白组微丸比较，CTS组微丸和HPMC组微丸中丹酚酸B的体外释放无突释现象，释放速度明显减缓，在体外可持续释放12 h。

见图1、图2。

2.4.2 药物释放模型的拟合采用Excel2013软件进行数据分析。

分别采用零级、一级、Higuchi和Ritger-Peppas方程对丹参总酚酸黏附漂浮微丸中丹酚酸B的体外释放曲线进行拟合，结果见表1、表2。

可见，丹参总酚酸黏附漂浮微丸中丹酚酸B的释放曲线经一级释放方程拟合相关性最好。