HPLC测定消旋卡多曲的含量及杂质_赵喆

消旋卡多曲( racecadotril) 是法国 Synkem 公司生 产的原料药 , 用于治疗腹泻 , 厂方质量标准系采用高 效液相梯度洗脱方法测定含量及其杂质 。 但该方法 受到仪器的限制 , 且重现性不好 , 分析时间过长 , 本 实验采用固定比例的流动相测定消旋卡多曲的含量 并在同一色谱条件中分离测定其已知杂质 , 方法简 单 , 快速准确 , 结果与原方法基本一致 。 1 仪器与试药 岛津 LC -10AD 高 效液相色谱仪 , SPD -10AV 紫外可见检测器 , CTO -10A 柱温箱 , C -R6A 数据 处理机 。 消旋卡 多 曲 对 照 品 、原 料 药 样品 3 批 ( 批号 98503 , 98500 , 97503) 及杂 质 对 照 品 benzylthiorphan
材均符合药典标准 , 但不同来源的药材存在较大的 差异 。 超临界流体萃取法提取厚朴药材所得提取物 的总量约为 5 . 2 %, 本 实验测定结果表明超临界流 体萃取法的提取效率是非常高的 。
( 收稿日期 : 1999 -07 -27)
HPLC 测定消旋卡多曲的含量及杂质
天津药品检验所 , 天津 赵吉吉 , 刘树春 ( 300070)
2. 4 原标准方法含量及杂质测定的色谱条件 该法对色谱柱的要求及供试品 、 对照品配制过 程均与本文前述固定比例流动相系统的含量测定及 杂质检查的方法相同 , 仅流动相系统改为如下 : 流动 相A : 乙腈 ; 流动相 B : 磷酸二氢钾溶液( 配制方法同 前所述) 。 按照下列程序进行梯度洗脱 : 0 min 时 , AB( 40
成分与厚朴酚 、和厚朴酚等包裹在一起 , 在甲醇中不 易分散 , 因而影响甲醇对厚朴酚 、 和厚朴酚的溶解和 提取 。 实验证明 : 加少量氢氧化钠可使萃取物的分 散大大改善 , 且不影响被测组分的提取和分离 。 4. 3 中国药典规定按 干燥品计 , 厚朴药材含 厚朴 酚、 和厚朴酚的总量不得少于 3 . 0 %, 本实验所测药
ABSTRACT: OBJECTIVE A HPLC method was established for the determination of racecadotril and its impurities . METHODS A ODS column was used and the mixture of acetonitrile -potassium dihydrogen phosphate ( KH 2PO4)solution ( 70∶ 30)was used as the mobile phase . The detection wavelength was 210 nm . RESULTS The liner range of the racecadotril was 0 . 08 ～ 0 . 24 mg·mL-1 and the regression equation was Y =15847X +3873( r =0 . 9997). The liner range of benzylthiorphan disulphide was 2 . 40 ～ 21 . 56 μ g·mL-1 and the regression equation was Y = 1826 x +46 (r = 0 . The measurable lowest limit was 1 μ g·mL-1 . The average recovery was 100 . 0 %. CONCLUSION The 9999) . method was convenient , accurate and specific . KEY WORDS : HPLC ; racecadotril , impurities
范围内与 峰面积
呈良 好 的 线 性关 系 , 其 回归 方 程 为 Y = 3873 +
2. 3 杂质检查 2. 3. 1 标准曲线 的绘 制 精密 称定杂 质对照 品 benzylthiorphan disulfide 5 mg , 置 50 mL 量瓶中 , 加流 动相 溶解 并稀 释至 刻度 , 摇匀 。 精密 量取 该溶 液 1. 0 ,3 . 0,5. 0,7 . 0, 9. 0 mL 至 50 mL 量瓶中 , 加流动 相溶解并稀释至刻度 , 摇匀 。 分别进样 20 μ L , 以浓 度为横坐标 , 峰面积为纵坐标作图 。 结果表明 , 杂质 benzylthiorphan disulfide 在浓度 2 . 40 ～ 21 . 56 μ g·mL -1 呈良好的线性关系 , 回归方程为 Y = 1826 X +46 , r =0 . 9999 。 2. 3. 2 回收试验 采用加样回收法测定 。 杂质对 照液的制备 : 取杂质对照品 benzylthiorphan disulfide 5 mg , 精密称定 , 置 50 mL 量瓶中 , 加流动相溶解并稀 释至刻度 , 摇匀 , 得到对照储备溶液 。 精密量取该液 5 mL , 至 50 mL 量瓶中 , 加流动相稀释至刻度 , 摇匀 。 供试品溶液的配制与测定 , 精密称定消旋卡多 曲 100 mg , 置 50 mL 量瓶中 , 加流动相溶解 , 然后精 密加杂质对照储备液 5 mL , 用流动相稀释至刻度 , 摇匀 。 此时该溶液中杂质的浓度为 10 μ g ·mL , 主 成分消旋卡多曲浓度为 2 mg ·mL-1 , 恰为质量标准
摘要 : 目的 建立新的高效液相法测定消旋卡多曲的含 量及其杂质 。 方法 采用 C18 色谱柱( 4. 60 cm ×25 cm) , 以乙腈-磷酸 二 氢钾溶液( 取磷酸二氢钾 1 g , 加 85 %磷酸 1 mL , 加水稀释至 1000 mL) ( 70∶ 30) 为流动相 ; 检测波长为 210 nm 。 结 果 含量线 性 范围为 0 . 08 ～ 0 . 24 mg·mL -1 , 回归方程为 Y = 15847X + 3873( 40 r =0 . 9997) , 已知杂质 benzylthiorphan disulphide 线性范围为 2 .
Determination of racecadotril and its impurities by HPLC ZHAO Zhe , LIU Shu -chun ( Tianjin Municipal Institute for Drug Control , Tianjin 300070 , China)
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-1
图 1 有关 物质色谱图
1 -卡多曲 ; 2 , 3 -已知杂质
Fig 1 HPLC chromatogram of impurities
1 -racecadotril ; 2 , 3 -know n impurities
1 ～ 21 . 6μ g·mL , 回归方程为 Y = 1826 X +46( r = 0. 9999), 其最低检测浓度为 1 μ g·mL -1 , 加样平均回收率为 100 . 0 %( n =6) 。
结论 方法简便 、快速准确 。 关键词 : 高效液相色谱法 ; 消旋卡多曲 ; 杂质 中图分类号 : R927 . 11 文献标识码 : A 文章编号 : 1001 -2494( 2001) 04 -0267 -03
表 2 杂质 测定结果 . % Tab 2 Contents in impurities . %
批号 98503 98500 97503 本法 已知杂质 0. 27 0. 08 0. 01 未知杂质 0. 05 0. 10 0. 08 杂质量 0. 3 0. 2 0. 1 已知杂质 0. 15 0. 11 未检出 厂标准法 未知杂质 0. 01 0. 06 0. 10 杂质量 0. 2 0. 2 0. 1
Chin Pharm J , 2001 April , Vol . 36 No . 4 பைடு நூலகம் 267 ·
2. 2 含量测定 2. 2. 1 标准曲线的绘制 精密称定消旋卡多曲对 照品 100 mg , 加流动相溶解并稀释至 100 mL , 摇匀 。 精密量取上述对照品溶液 2 . 0,3 . 0,4. 0,5. 0, 6. 0 mL 至 25 mL 量瓶中 , 加流动相稀释至刻度 , 摇匀 。 按上 述色谱条件分别进样 20 μ L 测定 , 结果表明消旋卡 多曲在浓度 0 . 08 ～ 0 . 24 mg ·mL 15847X , r = 0 . 9997 。 2. 2. 2 重现性与稳定性试验 取标准曲线测定中 心浓度点连续 进样 6 次 , 量取峰面积计 算 RSD 为 0. 33 %, 重现性良好 , 可准确用于含量测定 。 该溶液 6 h 内重复进样 , 峰面积基本不变 , 避光放置 24 h , 峰 面积基本不变 。 2. 2. 3 含量测定 分别精密称取消旋卡多曲对照 品及供试品适量 , 加流动相溶解并制成每 1 mL 中含 0. 16 mg 的溶液 , 分别进样 20 μ L , 量取峰面积按外标 法计算含量 , 并与原厂附标准测定结果相比较 , 结果 见表 1 。
中国药学杂志 2001 年 4 月第 36 卷第 4 期
disulfide( 批号 97761) 均为法国 Synkem 公司提供 。 乙腈为色谱纯 , 磷酸二氢钾 、 磷酸均为分析纯 , 水为重蒸水 。 2 方法与结果 2. 1 色谱条件 色谱柱 : Phenomenex C 18( 250 mm ×4 . 6 mm) ; 流 动相 : 乙腈-磷酸二氢钾溶液( 取磷酸二氢钾 1 g 加水 溶解后 , 加 85 %磷酸 1 mL , 加 水至 1000 mL) ( 70 ∶ 30) ; 流速为 1 . 0 mL· min -1 , 检测波长为 210 nm , 柱温 为 30 ℃, 灵 敏度 0 . 08 AUFS ( 含量 测定) 0. 03 AUFS ( 杂质检查) , 进样量 20 μ L , 理论板数按消旋卡多曲 峰计算不低于 10000 , 卡多曲峰与已知杂质 benzylthiorphan disulfide 色谱峰的分离度为 14 . 0。
表 1 消旋卡多曲含量测定结果 . % Tab 1 Contents in racecadotril . %
批号 98503 98500 97503 本法 100 . 0 100 . 4 99 . 5 厂标准法 99 . 8 99 . 4 99 . 5 -1
中规定的杂质限量 0 . 5 %。 分别取杂质对照液及供 试液 20 μ L 进样 , 按外标法计算杂质的含量 , 得到平 均回收率为 100 . 8% ( n =6) , RSD 为 0 . 78 %, 同时用 不加杂质对照液的消旋卡多曲溶液进样 , 未发现有 已知杂质出现 。 2. 3. 3 供试品杂质检查 对照品溶液的制备 : 精密 称定消旋卡多曲对照品 5 mg , 杂质对照品 25 mg , 置 50 mL 量瓶中 , 加流动相溶解并释释至刻度 , 摇匀 。 精密量取 2 mL 至 100 mL 量瓶中 , 加流动相溶解并 稀释至刻度 。 供试品溶液的制备 : 精密称定供试品 50 mg , 置 25 mL 量瓶中 , 加流动相溶解并稀释至刻度 。 取供试品及对照品溶液各 20 μ L 进样 , 记录色 谱图 , 对于供试品溶液中出现的已知杂质按外标法 计算含量 , 对于供试品溶液中出现的未知杂质 , 则与 对照品溶液中消旋卡多曲峰比较计算含量 , 最后计 算出总的杂质量 。 用本法测定样品 3 批并与厂标准法测定结果进 行比较 , 结果见表 2 , 图 1 。