高效液相色谱法测定动物源性食品中角黄素_虾青素的研究_余孔捷
高效液相串联质谱法测定动物源食品中喹赛多、卡巴氧残留
高效液相串联质谱法测定动物源食品中喹赛多、卡巴氧残留叶松生;吴德峰;刘正才;杨方;李耀平;林永辉;余孔捷;卢声宇【期刊名称】《福建农林大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2008(037)003【摘要】本试验建立了动物源食品中喹喔啉类药物喹赛多、卡巴氧残留量的液相色谱-电喷雾串联质谱测定方法.采用酸性乙腈-甲醇混合溶剂提取样品中的残留物,提取液浓缩后经HLB固相萃取小柱净化,以液相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量.结果表明:喹赛多、卡巴氧质量浓度为1-50 μg·L-1时具有良好的线性范围,相关系数>0.999;在5-20 μg·kg-1 3个添加水平范围内的回收率为69.10%-93.54%,相对标准偏差为2.49%-14.45%,方法检出限分别为3和2 μg·kg-1.可见,本方法适用于动物源性样品中喹喔啉类药物残留的定量测定.【总页数】5页(P307-311)【作者】叶松生;吴德峰;刘正才;杨方;李耀平;林永辉;余孔捷;卢声宇【作者单位】福建农林大学动物科学学院,福建,福州,350002;福建农林大学动物科学学院,福建,福州,350002;福建出入境检验检疫局,福建,福州,350001;福建出入境检验检疫局,福建,福州,350001;福建出入境检验检疫局,福建,福州,350001;福建出入境检验检疫局,福建,福州,350001;福建出入境检验检疫局,福建,福州,350001;福建出入境检验检疫局,福建,福州,350001【正文语种】中文【中图分类】S859.84【相关文献】1.高效液相色谱—串联质谱法测定粪中癸氧喹酯的残留量 [J], 陈瑞清;黄小红;俞道进;陈锋;黄一帆2.高效液相色谱-串联质谱法测定动物源食品中喹乙醇与卡巴氧残留量 [J], 郑玲;吴玉杰;赵永锋;郭蔚;陈智刚3.高效液相色谱-串联质谱法测定动物源食品中3-甲基喹喔啉-2-羧酸和喹喔啉-2-羧酸残留 [J], 郑玲;吴玉杰;李湧;李丽华4.高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉组织中癸氧喹酯残留 [J], 陈瑞清;俞道进;陈锋;黄一帆5.高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中癸氧喹酯的残留 [J], 王中艳;罗浩师;张丽芳;江善祥;费陈忠;张可煜;郑文丽;王霄旸;薛飞群因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
QuEChERS-_超高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑和地美硝唑药物残留量
QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法测定 鸡蛋中甲硝唑和地美硝唑药物残留量王 易（广东省惠州市质量计量监督检测所，广东惠州 516000）摘 要：建立了QuEChERS结合超高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑和地美硝唑残留量的方法。
样品经乙腈提取，QuEChERS净化后，使用Agilent Eclipse Plus C18柱分离，以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相进行洗脱，多反应监测模式下检测，外标法定量。
结果表明，甲硝唑和地美硝唑的质量浓度在0～50 ng·mL-1时线性关系良好（r2＞0.999），检出限分别为0.002 μg·kg-1、0.007 μg·kg-1；在低、中、高3个添加水平下甲硝唑和地美硝唑的加标回收率分别为95.79%～97.80%、95.66%～100.10%。
该方法前处理简单、重现性好、灵敏度高，适用于鸡蛋中甲硝唑、地美硝唑的测定。
关键词：鸡蛋；甲硝唑；地美硝唑；QuEChERS；超高效液相色谱串联质谱法Determination of Metronidazole and Dimetridazole Residues in Eggs by QuEChERS Combined with Ultra-High Performance Liquid Chromatography Tandem-Mass SpectrometryWANG Yi(Guangdong Huizhou Quality and Measuring Supervision Testing Institute, Huizhou 516000, China) Abstract: A QuEChERS combined with ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry method was established to determine the residues of metronidazole and dimetridazole in eggs. The sample was extracted with acetonitrile, purified with QuEChERS, and separated using an Agilent Eclipse Plus C18 column. The mobile phase was eluted with acetonitrile and 0.1% formic acid aqueous solution, and detected under multiple reaction monitoring mode. The external standard method was used for quantification. The results showed that the mass concentrations of metronidazole and dimetridazole were linear in the range of 0～50 ng·mL-1 (r2＞0.999), and the detection limits were 0.002 μg·kg-1 and 0.007 μg·kg-1; under low, medium and high addition levels, the recoveries were 95.79%～97.80%, 95.66%～100.10% respectively. The method is simple, reproducible and sensitive, and is suitable for the determination of metronidazole and dimetridazole in eggs.Keywords: eggs; metronidazole; dimetridazole; QuEChERS; ultra-high performance liquid chromatography tandem-mass spectrometry鸡蛋含有非常丰富的卵磷脂、脂肪、蛋白质、微生物、矿物质、微量元素等营养成分，被誉为“全营养”食品[1]，现已成为日常饮食中的重要组成部分。
空间位阻净化-超高效液相色谱-串联质谱技术测定动物源性食品中抗
sorbent (EMR-Lipid), and then salted out and concentrated with MgSO4 and NaCl. The chromatographic separation was accomplished on a Poroshell 120 EC-C18 column by gradient elution using 0.1% formic acid as mobile phase A and 0.1% formic acid-acetonitrile as mobile phase B at a flow rate of 0.3 mL/min. The column temperature was set at 35 ℃, and the
※安全检测
食品科学
2019, Vol.40, No.12 345
空间位阻净化-超高效液相色谱-串联质谱技术 测定动物源性食品中抗组胺类药物残留
王 京1,2，叶佳明1，王 潇1，钟世欢2，陈青俊3
（1.赞宇科技集团股份有限公司，浙江 杭州 310030；2.浙江省轻工业研究所，浙江 杭州 3.浙江公正检验中心有限公司，浙江 杭州 311305）
310009；
摘 要：建立超高效液相色谱-串联质谱法快速测定动物源性食品中19 种抗组胺类药物及其代谢物残留的 方法。样品用乙腈-乙无水硫酸镁和氯化钠 盐析并浓缩后测定，以0.1%甲酸和0.1%甲酸-乙腈作为流动相进行梯度洗脱，在Poroshell 120 EC-C18色谱柱 （100 mm×2.1 mm，2.7 µm）上分离，柱温35 ℃，流速0.3 mL/min，进样量10 μL，在电喷雾正离子模式下以动 态多反应监测采集数据，外标法定量。结果表明，19 种抗组胺类药物及其代谢物在相应质量浓度范围内线性良 好，相关系数均大于0.999，不同阴性样品基质中（牛肉、鸡肉、猪肝）在3 个质量浓度水平加标实验回收率在 75.1%～89.1%之间，相对标准偏差为2.3%～7.1%，方法检出限为0.2～2.0 μg/kg，定量限为0.6～6.0 μg/kg。经方 法学验证，本方法简便快速、重复性好、灵敏度高、结果可靠。适用于动物源性食品中19 种抗组胺类药物及其 代谢物的快速筛查和定量测定。 关键词：抗组胺药物；超高效液相色谱-串联质谱；动物源食品；EMR-Lipid吸附剂
测定雨生红球藻中虾青素及其它色素含量的高效液相色谱法
第22卷第4期分析测试学报V ol.22N o.42003年7月FENXI CESHI XUE BAO(Journal of Instrum ental Anal y sis)Jul.2003测定雨生红球藻中虾青素及其它色素含量的高效液相色谱法陈勇1,李德发1,陆文清1,朴香淑1,杨文军1,惠柏棣2,韩雅珊2(1.中国农业大学动物科技学院国家饲料工程技术研究中心,北京100094;2.中国农业大学食品学院,北京100094)摘要:建立了一种分离和测定雨生红球藻中虾青素和其它色素的反相高效液相色谱法;含有雨生红球藻细胞的培养液经离心分离,匀浆破碎,用甲醇-二氯甲烷(体积比3∶1)提取色素,提取液用HP LC分离测定;分析柱为N ova-Pak C18(300mm×3.9mm I D,5μm)柱,流动相为水、甲醇和丙酮,流速1.0m L/m in,用二极管阵列检测器在250～700nm波长范围扫描,在476nm处进行检测;虾青素、多种类胡萝卜素和叶绿素在30 m in内得到较好分离,其中游离虾青素、斑蝥黄质和β-胡萝卜素的检出限分别为3.56、1.36和29.4μg/L,这3种类胡萝卜素分别在质量浓度为1.99～31.7m g/L、2.44～39.0m g/L、2.25～36.0m g/L范围内与峰面积线性关系良好,相关系数分别为0.9993、0.9987和0.9778;该法的精密度(RS D为0.09%～2.97%)和回收率(96%～102%)均符合方法学要求,可以用于研究和测定雨生红球藻中虾青素和其它色素的含量。
关键词:雨生红球藻;虾青素;类胡萝卜素;叶绿素;高效液相色谱法中图分类号:O657.72;Q949.212文献标识码:A文章编号:1004-4957(2003)04-0028-04雨生红球藻(Haematococcus p luvialis)是一种广泛分布于自然界的淡水绿藻。
在一定条件下(如应激、营养缺乏等),雨生红球藻能大量积累类胡萝卜素(可占细胞干重的2%～5%),其中80%以上为虾青素(astaxanthin)及其酯类[1]。
超高效液相色谱法测定虾青素
超高效液相色谱法测定虾青素陈伟珠;张怡评;晋文慧;方华;洪专【摘要】A ultra performance liquid chromatography(UPLC) method for determination of astaxanthin was developed. The determination of astaxanthin was performed on a UPLC BEH C8 column (50 mm×2.1mm,1.7μm). The influence of mobile phase,flow rate and column temperature on the separation of astaxanthin was comprehensively studied. The optimal separation condition was as follows:the mobile phase was methanol–water (volume ratio was 75∶25) with a isocratic elution profile and flow rate of 0.5 mL/min,the detection wavelength was 475 nm,the column temperature was 40℃. The mass concertration of astaxanthin has good linear ralationship with the chromatographic peak area in the range of 0.2–10.0 µg/mL,the correlation coefficient r was 0.998 8. The detection limit was 0.1 µg/mL (S/N=3). The quantitation detection limit was 0.2 µg/mL(S/N=10). The relative standard deviation of determination results was 0.41%(n=6), and the recovery was 105.8%–110.3%. The method is rapid,simple,reliable,and sensitive with a good reproducibility, it can be used for the determination of astaxanthin.%建立超高效液相色谱法快速检测虾青素的方法。
高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中的磺胺类药物残留
工作研究畜牧业环境 2021.0432摘 要：高效液相色谱-串联质谱法是检测领域中一种非常重要的检测方法，本文针对水产品中的磺胺类药物残留建立了相关的LC-MS法，旨在帮助实验室提高检测效率和检测质量。
本实验建立的方法在1～20ng/mL范围内具有良好线性关系，且7种磺胺药物的相关系数均大于0.998；同时该方法检出限较低，为1ug/kg。
另外测定了5ug/kg添加水平时的回收率，结果显示各类药物的回收率在83%～95%之间。
可见该方法高效准确，可以满足实验需求。
关键词：高效液相色谱-串联质谱法；水产品；磺胺类药物；检测方法1 前言磺胺类药物自发现至今，已有80余年历史。
由于其具有广谱抗菌性、性质稳定、吸收快、使用方便等诸多优点，使其在医疗卫生、食品生产、动物养殖等领域应用广泛。
但在使用过程中也存在着一些缺陷，例如抑菌效果弱、易产生耐药性、用量大、疗程长和发生不良反应等，这些缺陷的存在会造成磺胺类药物的过量使用，由此导致水产、畜禽肉等农产品中药物残留超标，对人体健康产生威胁。
随着检验检测技术的发展，关于磺胺类药物的检测方法已从最初的一种变为现在的多种，主要包括LC-MS（高效液相-串联质谱法）、LC（高效液相色谱法）、快速检测法（ELISA酶联免疫吸附法）、安培检测法等。
其中LC-MS和LC最为常用，在定性定量方面占有很大优势。
本研究以水产品为检测对象，经过一系列条件的优化，建立了关于磺胺类药物的高效液相-串联质谱法的检测方法。
2 材料与方法2.1 实验材料与仪器甲酸（色谱纯，赛默飞世尔），甲醇、乙腈（色谱纯，默克），Captive EMR柱（5982-1003，安捷伦），7种磺胺类药物的混合标准品（100μg/ml，Dr.Ehrenstorfer GmbH）。
0.1%甲酸-水溶液：甲酸：水=1：1000。
超高效液相色谱（1290）-串联四极杆质谱联用仪（6495）（美国，安捷伦）；CF16RN高速冷冻离心机（日本，日立）；涡旋混合器（德国，IKA）；MS2204TS电子天平（瑞士，梅特勒）。
高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定猪饲料、养殖用水中五氯酚的残留
中国畜牧兽医 2024,51(4):1438-1447C h i n aA n i m a lH u s b a n d r y &V e t e r i n a r y Me d i c i n e 高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定猪饲料㊁养殖用水中五氯酚的残留朱季升1,2,邢维海2,李 政3,王 力3,张亚伟1,张元庆1,杨 丹4,杨悠悠2(1.山西农业大学动物科学学院,晋中030801;2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京100193;3.中粮家佳康食品有限公司,北京100020;4.国贸食品科学研究院有限公司,北京102209)摘 要:ʌ目的ɔ本试验旨在建立一种测定猪饲料㊁饲料添加剂㊁水等养殖环节投入品中五氯酚残留的高效液相色谱-三重四极杆质谱方法㊂ʌ方法ɔ待测样品经碱性甲醇水溶液提取,使用阴离子固相萃取柱富集净化,经氮吹浓缩后用2%甲酸甲醇复溶,以5m m o l /L 乙酸铵溶液-甲醇为流动相,经P o r o s h e l l 120E C -C 18(3m mˑ100m m ,2.7μm )色谱柱分离;负离子模式下,采用多反应监测模式(m u l t i p l e r e a c t i o nm o n i t o r i n g ,M R M )进行检测;使用基质匹配外标法测定五氯酚的含量,并对所建方法的线性关系㊁检测限(l i m i to fd e t e c t i o n ,L O D )㊁定量限(l i m i to fqu a n t i t a t i o n ,L O Q )㊁回收率㊁准确度㊁精密度㊁基质效应等指标进行考察㊂ʌ结果ɔ猪饲料和饲料添加剂中五氯酚的检测限和定量限分别为0.1和0.5μg /k g ,养殖用水中五氯酚的检测限和定量限分别为5和12.5n g /L ;饲料和饲料添加剂中五氯酚定量范围为0.5~20μg /k g ,养殖用水中五氯酚定量范围为12.5~500n g /L ,方法线性关系良好,相关系数(R 2)均>0.999㊂该方法在饲料和饲料添加剂以及养殖用水中的平均加标回收率为69.8%~119.5%,相对标准偏差(r e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n ,R S D )为1.62%~9.86%,基质效应(m a t r i xe f f e c t ,M E )为0.62~1.29㊂ʌ结论ɔ本试验所建方法简便㊁快捷㊁灵敏度高㊁重复性好,适用于猪配合饲料等养殖投入品中五氯酚的测定,可为养殖环节投入品中五氯酚污染筛查提供准确高效的技术手段,从源头保障动物源性产品安全㊂关键词:五氯酚;饲料;固相萃取;高效液相色谱-三重四极杆质谱中图分类号:S 816文献标识码:AD o i :10.16431/j .c n k i .1671-7236.2024.04.012 开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):收稿日期:2023-08-30基金项目:中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(Y 2023P T 14);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2022-YW F -Z Y S Q -09);北京市科技计划课题(Z 221100007122006)联系方式:朱季升,E -m a i l :z h u j i s h e n g 2022@163.c o m ㊂通信作者张元庆,E -m a i l :y u a n q i n g _z h a n g @163.c o m ;杨丹,E -m a i l :y a n g_d a n @c o f c o .c o m ;杨悠悠,E -m a i l :y a n g y o u 229@126.c o m D e t e r m i n a t i o no f P e n t a c h l o r o ph e n o lR e s i d u e s i nS w i n eF o r m u l aF e e d a n dF a r m W a t e r U s i n g H i g hP e r f o r m a n c eL i q u i dC h r o m a t o g r a p h y -t r i p l e Q u a d r u p o l eM a s s S p e c t r o m e t r yZ HUJ i s h e n g 1,2,X I N G W e i h a i 2,L I Z h e n g 3,WA N GL i 3,Z H A N G Y a w e i 1,Z HA N G Y u a n q i n g 1,Y A N G D a n 4,Y A N G Y o u yo u 2(1.C o l l e g e o f A n i m a l S c i e n c e ,S h a n x i A g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,J i n z h o n g 030801,C h i n a ;2.S t a t eK e y L a b o r a t o r y o f A n i m a lN u t r i t i o n ,I n s t i t u t e o f A n i m a l S c i e n c e o f C A A S ,B e i j i n g100193,C h i n a ;3.C O F C OJ i a k a n g F o o dC o .,L t d .,B e i j i n g 100020,C h i n a ;4.C h i n a I n t e r n a t i o n a l T r a d eF o o dS c i e n c eR e s e a r c h I n s t i t u t eC o .,L t d .,B e i j i n g 102209,C h i n a )A b s t r a c t :ʌO b j e c t i v e ɔA h i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y -t r i p l e q u a d r u po l e m a s s s p e c t r o m e t r y (H P L C -M S /M S )m e t h o dw a s d e v e l o p e d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f p e n t a c h l o r o p h e n o l (P C P )i ns w i n ef e e d ,f e e da d d i t i v e sa n d w a t e r .ʌM e t h o d ɔT h es a m pl e s w e r ee x t r a c t e d w i t h a q u e o u sa l k a l i n e m e t h a n o l i cs o l u t i o n ,e n r i c h e d a n d c l e a n e d u p u s i n g an a n i o n i cs o l i d p h a s e4期朱季升等:高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定猪饲料㊁养殖用水中五氯酚的残留e x t r a c t i o n c o l u m n,r e c o n s t i t u t e dw i t h2%f o r m a t em e t h a n o l a f t e r n i t r og e n d r y i n g.W i t h5m m o l/La m m o n i u ma c e t a t e s o l u t i o n-m e t h a n o l a sm ob i l e p h a s e,P o r o s h e l l120E C-C18(3m mˑ100m m,2.7μm)c o l u m n w a su s e dt os e p a r a t e P C P.U n d e rt h en e g a t i v ei o n i z a t i o n,m u l t i p l er e a c t i o n m o n i t o r i n g m o d e(M R M)w a su s e dt od e t e r m i n et h ec o n t e n to fP C P.M a t r i x-m a t c h e de x t e r n a l q u a n t i f i c a t i o n m e t h o d w a su t i l i z e dt o q u a n t i t a t e P C P.L i n e a rr e l a t i o n s h i p,l i m i t so fd e t e c t i o n (L O D),l i m i t so f q u a n t i f i c a t i o n(L O Q),r e c o v e r y,a c c u r a c y,p r e c i s i o n,m a t r i xe f f e c ta n do t h e ri n d i c a t o r s o f t h e e s t a b l i s h e dm e t h o dw e r e i n v e s t i g a t e d.ʌR e s u l tɔT h eL O Da n dL O Q w e r e0.1a n d0.5μg/k g i n l i v e s t o c kf e e d,f e e d i n g r e d i e n t sa n df e e da d d i t i v e s,w h i l e5a n d12.5n g/Li nf a r m w a t e r,r e s p e c t i v e l y.T h e l i n e a r r a n g eo fP C P i n l i v e s t o c k f e e d,f e e d i n g r e d i e n t s a n d f e e da d d i t i v e s w a s f r o m0.5t o20μg/k g,a n d t h e l i n e a r r a n g eo f f a r m w a t e rw a s f r o m12.5t o500n g/L.T h e l i n e a r c o e f f i c i e n t(R2)w a sm o r e t h a n0.999,s h o w i n g t h e g o o d l i n e a r i t y.I n a d d i t i o n,t h e r e c o v e r i e s r a n g e d f r o m69.8%t o119.5%a n d t h e r e l a t i v e s t a n d a r d d e v i a t i o n(R S D)w e r e f r o m1.62%t o9.86%. T h em a t r i xe f f e c t(M E)w a s0.62-1.29.ʌC o n c l u s i o nɔT h em e t h o de s t a b l i s h e d i n t h i s s t u d y w i t h h i g hs e n s i t i v i t y,h i g ha c c u r a c y a n d g o o d r o b u s t n e s sw a s s u i t a b l e f o r t h e s c r e e n i n g o f P C P i n s w i n e f o r m u l a f e e d a n do t h e r f a r m i n g i n p u t s t o e n s u r e t h e q u a l i t y a n d s a f e t y o fm e a t p r o d u c t s.K e y w o r d s:p e n t a c h l o r o p h e n o l;f e e d;s o l i d p h a s e e x t r a c t i o n;H P L C-M S/M S五氯酚(p e n t a c h l o r o p h e n o l,P C P)是一种有机氯农药,在杀虫㊁除草㊁杀菌㊁木材防腐等方面效果良好[1],其化学性质稳定,难以降解,可溶于甲醇㊁乙腈等有机溶剂,微溶于水;五氯酚分子结构中含有酚羟基,极性较强,在碱性条件下可转化为五氯酚酸盐,自然环境中多以五氯酚酸钠的形式存在,具有良好的水溶性(图1)㊂在20世纪,五氯酚及其钠盐曾被广泛用于养殖水体消毒和血吸虫病防治[2],在发挥其功效的同时对环境造成了严重污染[3]㊂五氯酚在生物体内蓄积可引起氧化磷酸化途径解偶联,造成能量代谢障碍[4],长期暴露有致畸㊁致癌㊁致突变等毒副作用,严重时会导致生物体的死亡㊂当前在水生动物[5-6]㊁畜禽动物[7]㊁人体血液[8]㊁尿液[9-10]等组织中皆有检出案例,说明五氯酚已经进入食物链[11],并且通过生物富集作用严重威胁到了人类的生命安全㊂因五氯酚具有生物毒性㊁难以降解㊁易生物富集等特点,国际上将其认定为持久性有机污染物(P O P s)[12],世界卫生组织也将其列为一类致癌物;2019年底,中国农业农村部发布第250号公告明确规定,五氯酚在动物性食品中不得检出㊂但近年来在畜禽产品中检出五氯酚的情况仍屡有报道,据市场监督管理总局统计结果,2020年1月 2021年11月期间,在猪肉中共检出43次㊁牛肉中18次㊁羊肉中12次[13],禽肉中2次[14]㊂究其原因主要来源于畜禽养殖生产过程中的饲料及水污染[15-16],目前有关饲料和水等养殖投入品中五氯酚的检测方法存在灵敏度低㊁操作繁复等问题[17-18],因此,亟需建立一种更加简便快捷㊁灵敏度高㊁准确性高的饲料等养殖投入品中五氯酚的检测方法,从源头保障动物源性产品安全㊂图1五氯酚及五氯酚酸钠化学结构图F i g.1C h e m i c a l s t r u c t u r eo f p e n t a c h l o r o p h e n o la n ds o d i u m p e n t a c h l o r o p h e n o l a t e由于饲料等养殖投入品中含有较多的蛋白质㊁脂肪㊁色素等物质,会严重影响分析结果的准确性,并极易污染检测设备,因此需寻求合适的样品前处理方法㊂目前,五氯酚测定的前处理方法主要有液液萃取法(L L E)[19]㊁加速溶剂萃取法(A S E)[20]㊁Q u E C h E R S[21]㊁固相萃取法(S P E)[22-23]㊁固相微萃取法(S P M E)[24-25]㊁分子印迹法(M I T)[26-27]等,其中S P E法是通过选择性吸附或选择性洗脱,实现目标化合物与基质中干扰物质的分离方法,可显著降低基质效应㊂固相萃取柱的选择需要综合考虑目标化合物的性质与基质的种类㊂分析检测的方法主要是色谱法和质谱法,常用的分析仪器有液相色谱仪(L C)[22]㊁气相色谱仪(G C)[28]㊁液相色谱-质谱联用仪(L C-M S)[29]㊁气相9341中国畜牧兽医51卷色谱-质谱联用仪(G C-M S)[30-31]㊂其中L C和G C 法仅通过保留时间定性,存在灵敏度低,易存在假阳性的情况,且由于五氯酚强极性㊁高沸点等特点,在使用G C和G C-M S时,需进行衍生化反应,操作复杂耗时,因此,液相色谱-串联质谱联用仪在五氯酚精准检测方面具有较明显优势㊂本研究为重点考察养殖环节是否存在五氯酚酸钠污染的风险,拟建立一种基于固相萃取法等样品前处理方法,结合高效液相色谱-三重四极杆质谱(H P L C-M S/M S)的猪配合饲料㊁添加剂等养殖投入品中五氯酚的分析方法,以期为生猪养殖过程中的五氯酚污染筛查提供参考和依据㊂1材料与方法1.1样品采集2023年3月-2023年5月,依照‘饲料采样“(G B/T14699.1-2005)和‘水质采样技术指导“(H J494-2009)从北京周边养殖场采集了具有代表性的33种各阶段猪配合饲料㊁22种饲料原料㊁49种饲料添加剂和22份水样,样品种类信息见表1㊂空白猪配合饲料㊁饲料添加剂㊁养殖用水样品均由国贸食品科学研究院有限公司提供,经方法验证后均为五氯酚阴性㊂表1样品信息T a b l e1S a m p l e i n f o r m a t i o n样品S a m p l e s种类T y p e s数量N u m b e r 猪配合饲料仔猪配合饲料9S w i n e f o r m u l a f e e d中猪配合饲料4大猪配合饲料5生长育肥猪配合饲料8妊娠母猪配合饲料2哺乳母猪配合饲料3后备母猪配合饲料2饲料原料鱼粉2F e e d i n g r e d i e n t玉米2碎米3小麦麸2亚麻籽1膨化大豆1菜籽粕2豆粕4续表样品S a m p l e s种类T y p e s数量N u m b e r小麦次粉3小麦1大麦壳1饲料添加剂氨基酸㊁氨基酸盐及其类似物17 F e e da d d i t i v e矿物元素及其络(螯)合物9维生素及类维生素8防腐剂㊁防霉剂和酸度调节剂5抗氧化剂2酶制剂5微生物3养殖用水饲用水15 F a r m w a t e r清洁用水4污水3 1.2主要试剂五氯酚标准品(纯度>98.9%),购自D r.E h r e n s t o r f e r公司;乙腈㊁甲醇(色谱纯)㊁乙酸铵(质谱纯)均购自T h e r m oF i s h e r公司;25%氨水㊁甲酸㊁三乙胺(色谱纯)均购自阿拉丁试剂(上海)有限公司;试验用水为经M i l l i-Q处理后的一级水(>18.2MΩ)㊂1.3主要仪器高效液相色谱-质谱联用仪(6470T r i p l eQ u a d L C/M S,安捷伦科技有限公司);数控超声波清洗器(K Q-500D E,昆山市超声仪器有限公司);小型高速冷冻离心机(5810R,艾本德股份公司);涡旋混合器(V O R T E X-5,其林贝尔仪器制造有限公司);分析天平(J A3003,上海力辰仪器科技有限公司);隔膜真空泵(GM-0.33A,天津津腾实验设备有限公司);小型粉碎机(S M-3L,台湾祥泰精机股份有限公司);超纯水制备仪(M i l l i-Q A d v a n t a g eA10,默克密理博公司);MA X固相萃取小柱(60m g/3m L,北京康普兴科技有限公司)㊂1.4色谱与质谱条件1.4.1色谱条件使用A g i l e n tP o r o s h e l l120E C-C18(3m mˑ100m m,2.7μm)色谱柱;柱温40ħ;进样量为5μL;流速:0.3m L/m i n;流动相A 相为5m m o l/L乙酸铵水溶液,B相为甲醇,梯度洗脱方法见表2㊂04414期朱季升等:高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定猪饲料㊁养殖用水中五氯酚的残留表2梯度洗脱条件T a b l e2M o b i l e p h a s e g r a d i e n t e l u t i o nm e t h o d s时间T i m e/m i n流动相M o b i l e p h a s e/%A B 06040 16040 5595 85951.4.2 质谱条件采用喷射流电喷雾离子源(A J SE S I),负离子模式;毛细管电压-3500V;喷嘴电压-500V;雾化气温度300ħ,雾化气流速12L/m i n,雾化器压力40p s i;鞘气温度350ħ,鞘气流速10L/m i n;采用多反应监测模式(M R M)进行离子监测,其余质谱参数见表3㊂表3五氯酚M R M监测参数T a b l e3P e n t a c h l o r o p h e n o lM R M m o n i t o r i n gp a r a m e t e r s前体离子P r e c u r s o r i o n/(m/z)产物离子P r o d u c t i o n/(m/z)驻留时间D w e l l/m s碎裂电压F r a g m e n t o r/V碰撞池加速电压C e l l a c c e l e r a t o r v o l t a g e/V 262.7262.71001354 264.7*264.7*1001354 266.7266.71001354 268.7268.71001354*,定量离子对*,Q u a n t i t a t i v e i o n p a i r s1.5样品前处理1.5.1饲料及饲料原料样品前处理样品粉碎后称取2.00g置于离心管中,加入6m L含5%三乙胺的甲醇水(V/V为7ʒ3)溶液,涡旋混匀1m i n,超声提取5m i n,3000r/m i n离心5m i n,收集上清液,重复上述步骤1次,合并两次所得上清液㊂将上清液移入经5m L甲醇㊁5m L水活化后的MA X固相萃取小柱,自然流出,然后依次加入5m L5%氨水㊁5m L甲醇㊁5m L2%甲酸甲醇水(V/V为1ʒ1)淋洗,抽干萃取柱5m i n后使用4m L8%甲酸甲醇洗脱,收集洗脱液,氮吹浓缩至近干,加入2m L2%甲酸甲醇溶液涡旋混匀,过0.22μm有机相滤膜后,供检测分析㊂1.5.2水样前处理量取40m L水样于离心管中,加入10m L25%氨水,涡旋混匀1m i n,移入经5m L甲醇㊁5m L水活化后的MA X固相萃取小柱,自然流出,然后依次加入5m L甲醇㊁5m L2%甲酸甲醇水淋洗,后续步骤同饲料及饲料原料样品前处理㊂1.5.3饲料添加剂样品前处理称取2.00g样品,置于离心管中,加入6m L含5%三乙胺的甲醇水溶液,涡旋混匀1m i n,超声提取5m i n,3000r/m i n 离心5m i n,收集上清液,重复上述步骤1次,合并两次所得上清液,氮吹至近干,后续步骤同饲料及饲料原料样品前处理㊂1.6溶液制备1.6.1标准溶液制备准确称取1m g五氯酚标准品,使用100m L甲醇溶解配为10m g/L的五氯酚标准储备溶液,于-20ħ保存备用㊂1.6.2空白基质溶液制备取空白猪配合饲料㊁饲料添加剂㊁养殖用水样品,经1.5所述样品前处理方法处理后,制为空白基质溶液,于-20ħ保存备用㊂1.7方法学验证1.7.1线性关系标准溶液经甲醇梯度稀释后,配制成浓度为5㊁12.5㊁25㊁50㊁100㊁200㊁500㊁1000μg/L的标准工作液,准确移取1.6.2所制空白基质溶液(980μL)和20μL不同浓度的标准工作液,涡旋混匀,配制不同浓度的基质匹配标准溶液(表4),上机检测后,以浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制基质匹配标准曲线㊂1441中国畜牧兽医51卷表4各基质匹配标准溶液中五氯酚折算后浓度T a b l e4T h e c o n v e r t e d c o n c e n t r a t i o no f p e n t a c h l o r o p h e n o l i n t h e s t a n d a r d s o l u t i o nm a t c h e db y e a c hm a t r i x基质M a t r i c e s浓度C o n c e n t r a t i o n饲料与饲料原料F e e da n d f e e d i n g r e d i e n t s/(μg/k g)0.10.5151020饲料添加剂F e e da d d i t i v e s/(μg/k g)0.10.5151020养殖用水F a r m w a t e r/(n g/L)512.5501002005001.7.2检测限和定量限取所制各基质匹配标准溶液,经仪器检测后,以五氯酚定量离子色谱信号信噪比(S/N)ȡ3作为检测限(l i m i to fd e t e c t i o n, L O D),以S/Nȡ10作为定量限(l i m i t o f q u a n t i t a t i o n,L O Q)㊂1.7.3准确度与精密度以加标回收试验验证方法的准确度与精密度,空白猪配合饲料㊁饲料添加剂㊁养殖用水样品各称取6份,通过添加五氯酚标准储备溶液制为低㊁中㊁高3水平的加标样品,按照1.5样品前处理方法处理后检测分析,每个添加水平重复测定6次,计算回收率及相对标准偏差(r e l a t i v e s t a n d a r dd e v i a t i o n,R S D,%),考察方法的准确度及精密度㊂1.7.4基质效应绘制甲醇溶剂标准曲线(斜率为K2)和各基质匹配标准曲线(斜率为K1),定义基质因子(m a t r i x f a c t o r,M F)=K1/K2[32]㊂2结果2.1方法线性关系按1.7.1所述方法绘制基质匹配标准曲线,测定结果表明,不同基质中五氯酚的质量浓度与对应的峰面积在定量范围内线性关系良好,饲料与饲料原料㊁饲料添加剂㊁水的基质匹配标准曲线相关系数(R2)分别为0.9997㊁0.9994㊁0.9992;饲料与饲料原料㊁饲料添加剂基质中五氯酚线性范围为0.5~ 20μg/k g,养殖用水基质中五氯酚线性范围为12.5~500n g/L(表5)㊂表5不同基质中五氯酚的线性方程㊁相关系数㊁线性范围T a b l e5L i n e a r e q u a t i o n s,c o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t s,l i n e a r r a n g e s o f p e n t a c h l o r o p h e n o l i nd i f f e r e n tm a t r i c e s基质M a t r i c e s线性方程L i n e a r e q u a t i o n相关系数R2线性范围L i n e a r i t y r a n g e 饲料与饲料原料F e e da n d f e e d i n g r e d i e n t s Y=1639.87X+351.750.99970.5~20μg/k g 饲料添加剂F e e da d d i t i v e s Y=3415.14X+1668.320.99940.5~20μg/k g 养殖用水F a r m w a t e r Y=62.96X+173.980.999212.5~500n g/L Y为峰面积,X为折算后样品中五氯酚浓度Yi s t h e p e a ka r e a,a n dXi s t h e c o n c e n t r a t i o no f p e n t a c h l o r o p h e n o l i n t h e c o n v e r t e d s a m p l e2.2方法检测限㊁定量限㊁基质效应饲料与饲料原料㊁饲料添加剂㊁水中五氯酚的L O D分别为0.1μg/k g㊁0.1μg/k g㊁5n g/L,L O Q 分别为0.5μg/k g㊁0.5μg/k g㊁12.5n g/L㊂绘制饲料与饲料原料㊁饲料添加剂㊁养殖用水的基质匹配标准曲线,与甲醇溶剂标准曲线进行比较,测得M F分别为0.62㊁1.29㊁1.19(表6)㊂表6不同基质中五氯酚的检测限㊁定量限㊁基质效应因子T a b l e6L O D,L O Q a n dM Fo f p e n t a c h l o r o p h e n o l i nd i f f e r e n tm a t r i c e s基质M a t r i c e s检测限L O D定量限L O Q基质因子M F 饲料与饲料原料F e e da n d f e e d i n g r e d i e n t s0.1μg/k g0.5μg/k g0.62饲料添加剂F e e da d d i t i v e s0.1μg/k g0.5μg/k g1.29养殖用水F a r m w a t e r5n g/L12.5n g/L1.19 24414期朱季升等:高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定猪饲料㊁养殖用水中五氯酚的残留2.3 方法准确度与精密度由表7可知,饲料与饲料原料中五氯酚的回收率为69.80%~93.76%,R S D 为4.31%~9.86%,饲料添加剂中五氯酚回收率为73.16%~96.32%,R S D 为0.89%~5.16%,水中五氯酚的回收率为76.89%~119.50%,R S D 为1.62%~7.23%㊂样品测定准确度与精密度均良好㊂表7 不同基质中五氯酚加标回收率及精密度T a b l e 7 S p i k e d r e c o v e r i e s a n d p r e c i s i o no f p e n t a c h l o r o p h e n o l i nd i f f e r e n tm a t r i c e s 基质M a t r i c e s 加标量S p i k i n g l e v e l 回收率R e c o v e r y /%相对标准偏差R S D/%饲料与饲料原料F e e da n d f e e d i n gr e d i e n t s 0.5μg /k g 69.804.312μg /k g 93.769.8610μg /k g 76.505.89饲料添加剂F e e da d d i t i v e s0.5μg /k g73.165.162μg /k g 77.230.8910μg /k g 96.321.21养殖用水F a r m w a t e r12.5n g/L 76.897.2325n g /L 119.502.7150n g /L 111.281.622.4 实际样品检测使用本研究所建方法对33种猪配合饲料㊁22种饲料原料㊁49种饲料添加剂以及22种养殖用水样品进行分析,其中2种饲料样品中检出了五氯酚,但低于方法定量限,2种饲料添加剂中检出了五氯酚,含量分别为1.8和15.5μg/k ,阳性样品中五氯酚的多反应监测图见图2㊂图2 阳性样品中五氯酚的M R M 监测图F i g .2 M R M m o n i t o r i n g c h r o m a t o g r a mo f p e n t a c h l o r o p h e n o l i n p o s i t i v e s a m pl e s 3 讨 论3.1 前处理条件的优化五氯酚为弱酸性化合物,pK a 为4.73,目前复杂基质中五氯酚的提取主要为酸提取[33]和碱提取[34]两种方式,酸提取是通过调节p H 使五氯酚以酚羟基形式存在,较易溶于有机试剂,碱提取是在碱性条件下,五氯酚的酚羟基发生解离形成阴离子,而易溶于水中㊂MA X 固相萃取柱为混合型阴离子交换柱,在碱性环境中,五氯酚可与MA X 柱填料上的季铵基发生离子交换作用而被保留,可适用于饲料提取液及养殖用水中五氯酚的富集净化㊂本研究所使用的色谱柱p H 耐受范围为2.0~9.0,饲料添加剂的提取液㊁饲料及水样的洗脱液,p H 均超过色谱柱的耐受范围,无法直接检测,需氮吹浓缩复溶处3441中国畜牧兽医51卷理㊂为使五氯酚在色谱柱中良好保留,并考虑色谱柱的p H耐受范围,经试验对比,选用2%甲酸甲醇作为复溶试剂,可获得理想的色谱峰形㊂目前水中五氯酚的检测常使用C18[35]㊁H L B等反相固相萃取柱,而MA X固相萃取柱的应用较少,李丽等[36]使用H L B固相萃取柱对地下水中五氯酚富集净化,检测限为30n g/L;万译文等[17]分别采用H L B固相萃取柱和MA X固相萃取柱对渔业水体和渔业饲料中的五氯酚进行富集净化,检测限分别为50n g/L和0.8μg/k g㊂本研究采用MA X固相萃取柱对水样及饲料中的五氯酚进行富集净化,较现有方法达到了更高的灵敏度,水样及饲料中的五氯酚检测限分别降低至5和0.1μg/k g㊂3.2基质效应的校正在L C-M S检测分析中,由于共流出以及电离竞争抑制现象的存在,往往会使目标化合物的响应信号偏离,存在基质效应[37]㊂基质效应会影响方法的灵敏度㊁精密度及准确度㊂本试验中以M F衡量基质效应,当M F值=1时,表示无基质效应;M F 值<1时,则基质抑制;M F值>1时,则基质增强㊂由本试验测定结果可知,各基质养殖投入品中,存在较强的基质效应干扰㊂目前降低基质效应的方法主要包括稀释样品溶液㊁增加净化步骤㊁优化色谱分离条件㊁采用同位素内标物㊁配制基质匹配标准溶液等,其中采用同位素内标法可准确地消除基质效应带来的影响,但市场上暂无五氯酚同位素内标的售卖,且由于稀释样品溶液㊁增加净化步骤等处理皆会使方法灵敏度和准确性下降,因此为了得到准确结果,减少基质效应对结果的影响,本研究采用绘制基质匹配标准曲线进行定量㊂由本试验结果可知,各基质匹配标准曲线线性关系良好(R2>0.999),精密度及准确度均可满足检测要求,因此采用基质匹配外标法可较好地抵消基质效应对五氯酚定量结果的干扰㊂3.3五氯酚风险监测使用本研究所建方法对配合饲料㊁饲料原料㊁饲料添加剂以及养殖用水等养殖投入品进行筛查,由结果可知,饲料原料和养殖用水中均未检出五氯酚;配合饲料中仅有两份检出五氯酚,且含量较低,低于方法定量限;而饲料添加剂样品存在较高污染风险,其中一些含氯元素的氨基酸盐酸盐及类维生素添加剂中检测到了较高含量的五氯酚,疑似生产过程中引入杂质所产生的副产物,需要进行重点关注㊂4结论本研究采用固相萃取法及H P L C-M S/M S技术建立了猪配合饲料㊁饲料原料㊁饲料添加剂㊁养殖用水中五氯酚检测方法,通过优化前处理条件及仪器条件,该方法在各基质定量范围内线性关系良好,灵敏度高,准确性好,重现性高,加标回收率试验和精密度试验结果均符合相关要求,适用于猪配合饲料等养殖投入品中五氯酚的测定,可应用于五氯酚风险筛查㊂经研究发现含氯添加剂样品较易受五氯酚污染,应当予以关注㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1]潘胜东,陈晓红,何仟,等.超高效液相色谱-高分辨质谱确证分析泥鳅体内五氯酚代谢物[J].色谱,2017,35(12):1245-1250.P A NSD,C H E N X H,H E Q,e t a l.C o n f i r m a t i o na n da n a l y s i s o f t h e m e t ab o l i t e s o f p e n t ac h l o r o p h e n o l i nl o a c h e su s i n g u l t r a-p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y-h i g hr e s o l u t i o n m a s ss p e c t r o m e t r y[J].C h i n e s eJ o u r n a lo f C h r o m a t o g r a p h y,2017,35(12):1245-1250.(i nC h i n e s e)[2]黄轶昕.我国灭螺药物研究和现场应用[J].中国血吸虫病防治杂志,2019,31(6):679-684.HU A N G Y X.R e s e a r c ha n d f i e l da p p l i c a t i o no f s n a i lk i l l i n g d r u g s i n C h i n a[J].C h i n e s e J o u r n a l o fS c h i s t o s o m i a s i sC o n t r o l,2019,31(6):679-684.(i nC h i n e s e)[3] X U Q,A I S,G E G,e t a l.H u m a n h e a l 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t o g r a p h y-t r i p l eq u a d r u p o l e t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y c o m b i n e dw i t hQ u E C h E R S[J].C h i n aF o o dS a f e t y M a g a z i n e,2023,12:45-47.(i nC h i n e s e)[22]陆阳,朱鹏飞,姚誉阳,等.固相萃取-高效液相色谱法测定纸质食品包装材料中五氯酚含量[J].食品安全质量检测学报,2022,13(1):65-71.L U Y,Z HU PF,Y A O Y Y,e t a l.D e t e r m i n a t i o no fp e n t a c h l o r o p h e n o lc o n t e n ti n p a p e rf o o d p a c k a g i n gm a t e r i a l sb y s o l i d p h a s ee x t r a c t i o n-h i g h p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y[J].J o u r n a l o f F o o d S a f e t ya n dQ u a l i t y,2022,13(1):65-71.(i nC h i n e s e)[23]杨霄,李小玲,刘伶俐,等.大体积固相萃取/高效液相色谱-串联质谱法测定地表水中的五氯酚[J].湖南师范大学自然科学学报,2021,44(4):119-125.Y A N G X,L IX L,L I U L L,e t a l.D e t e r m i n a t i o no fp e n t a c h l o r o p h e n o l i ns u r f a c e w a t e rb y l a r g e-v o l u m es o l i d p h a s e e x t r a c t i o n,h i g h p e r f o r m a n c e l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y-t a nde m 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超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中的氯霉素和地塞米松的药物残留
doi:10.16736/41-1434/ts.2022.13.055超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中的氯霉素和地塞米松的药物残留Determination of Chloramphenicol and Dexamethasone Residues in Foods of AnimalOrigin by UPLC-MS/MS◎ 周莹莹1，刘定舟1，张丹鹤1，李 帅1，崔倩倩1，朱欣欣1，贾松涛1，赵林萍2（1.河南中标检测服务有限公司，河南 郑州 450001；2.郑州中道生物技术有限公司，河南 郑州 450001）ZHOU Yingying1, LIU Dingzhou1, ZHANG Danhe1, LI Shuai1, CUI Qianqian1, ZHU Xinxin1, JIA Songtao1, ZHAO Linping2(1.Henan Zhongbiao Testing Service Co., Ltd., Zhengzhou 450001, China;2.Zhengzhou Zhongdao Biotechnology Co., Ltd., Zhengzhou 450001, China)摘 要：目的：本文建立了超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中氯霉素和地塞米松药物残留的方法。
方法：样品通过乙酸乙酯萃取，负离子扫描，内标法或外标法定量。
结果：氯霉素和地塞米松在0.1～20.0 ng·mL-1线性好，回收率均在78.2%以上，RSD均在10.4%以下。
结论：本方法能够同时、快速测定动物源性食品中的氯霉素和地塞米松的药物残留。
关键词：超高效液相色谱串联质谱法；氯霉素；地塞米松；药物残留Abstract：Objective: To establish a method for the determination of chloramphenicol and dexamethasone residues in food of animal origin by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Method: The samples were extracted by ethyl acetate, scanned by negative ion, and quantified by internal or external standard method. Result: The linearity of chloramphenicol and dexamethasone was good in the range of 0.1～20 ng·mL-1, with recoveries above 78.2% and RSD below 10.4%. Conclusion: This method can simultaneously and rapidly determine the drug residues of chloramphenicol and dexamethasone in animal food.Keywords：high performance liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry; chloramphenicol; dexamethasone; drug residues中图分类号：O657随着人们生活水平的提高，肉、蛋、奶畜禽产品在人们的饮食结构中所占比例越来越大，畜禽产品质量受到了更多的关注[1]。
液相色谱-串联质谱法同时检测水产品中41种兽药残留
40 |陇科学股份有限公司)；甲酸、乙酸铵(HPLC 级，美国Fluka 公司)；无水硫酸钠(分析纯，西陇科学股份有限公司)；十八烷基硅烷(C18)(上海安谱实验科技股份有限公司)；Na2EDTA ·2H2O(分析纯，广东光华科技股份有限公司)；磷酸氢二钠、一水合柠檬酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；实验室用水为一级水(18.2 MΩ·cm)。
2 实验方法2.1 溶液配制标准储备液：对于固体标，分别称取相当于标准品10 mg (精确至0.01mg)置于10.0mL 容量瓶中，用乙腈溶解后定容至刻度，配制为浓度为1000mg/L 的标准储备液，-18℃避光保存。
标准工作溶液：准确吸取适量标准储备液，用乙腈逐级稀释配制成系列标准工作溶液，现用现配。
基质空白标准工作溶液：准确吸取适量标准储备液加入6份空白样品，同2.2.2处理配制成系列基质空白标准溶液，现用现配。
Na2EDTA-Mcilvaine 缓冲溶液(0.1 mol/L):准确称取37.2 g Na ２EDTA ·2H2O 、10.9g 磷酸氢二钠和12.9g 柠檬酸于烧杯内，加入一级水约900mL ，搅拌使其溶解，使用1mol/L 的氢氧化钠溶液调节pH 至4.0，定容至1000mL 容量瓶，摇匀即可。
酸化乙腈(含1%甲酸的乙腈溶液，V/V)：准确吸取1mL 甲酸于100mL 容量瓶中，用乙腈定容，混合均匀。
2.2 样品前处理称取5.0g(精确至0.1 g)样品于50mL 具塞塑料离心管中，加入100μL 50μg/L 内标溶液(MG-D5和LMG-D6)，加入2mL0 引言近年来，水产品的消费呈逐年递增趋势[1]，三苯甲烷类染料、氯霉素类、磺胺类、氟喹诺酮类和四环素类等是目前水产品养殖环节常用的病虫害防治药物。
按照我国相关食品安全标准，三苯甲烷类染料、氯霉素类由于毒性较强目前已经禁止在水产品养殖等环节使用。
高效液相色谱法测定油脂类保健食品中虾青素
高效液相色谱法测定油脂类保健食品中虾青素刘泰然;赵海燕;罗仁才【摘要】提出了高效液相色谱法测定油脂类保健食品中虾青素含量的方法.样品经乙腈提取,提取液浓缩后,用Dikma C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm)分离,用不同配比的乙腈和水的混合溶液为流动相梯度洗脱,用紫外检测器于波长479 nm处检测.虾青素的质量浓度在30.0～300mg·L-1范围内与其峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为0.07 mg·L-1.在空白样品中进行加标回收试验,方法的回收率在90.0％～96.7％之间；方法的相对标准偏差(n=6)为2.8％.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2013(049)005【总页数】3页(P553-555)【关键词】高效液相色谱法;虾青素;油脂类保健食品【作者】刘泰然;赵海燕;罗仁才【作者单位】北京市疾病预防控制中心,北京100013;北京市疾病预防控制中心,北京100013;北京市疾病预防控制中心,北京100013【正文语种】中文【中图分类】O657.63虾青素（3，3′－二羟基－4，4′－二酮基－β，β′－胡萝卜素）又名虾黄素，广泛存在于虾、蟹、某些藻类及真菌中的一种类胡萝卜素。
纯的虾青素为褐红棕色粉末，熔点224 ℃，不溶于水，具脂溶性，易溶于氯仿、丙酮等有机溶剂［1］。
近年来大量的研究表明虾青素具有许多重要的生物学功能，如增强免疫、抗癌等作用，并且在消除时差方面的效果要优于褪黑激素［2］。
虾青素还是一种强大的抗氧化剂，抗氧化效果是普通维生素E 的550倍［3］，动物试验表明，虾青素可以清除二氧化氮、硫化物、二硫化物，有效地抑制自由基引发的脂质过氧化，故而在食品添加剂、水产养殖、化妆品、保健品和医药工业方面有广阔的应用前景，因此建立快速、简便、准确的测定虾青素的方法十分必要。
目前报道的虾青素测定方法有紫外分光光度法［4－5］、高效液相色谱法［1，6］，但这些方法都适用于藻类样品，未见有关于测定油脂类保健食品的文献报道。