银杏叶不同时期黄酮含量测定与比较
银杏叶中总黄酮的提取和测定_唐婧
第30卷第5期Vol 130 No 15长春师范学院学报(自然科学版)Journal of Changchun Normal Universi ty(Natural Science)2011年10月Oct.2011银杏叶中总黄酮的提取和测定唐 婧,郑胜彪,朱金坤(安徽科技学院理学院,安徽凤阳 233100)[摘 要]本试验比较了有机溶剂浸提法和超声波法提取总黄酮的效果,选择提取率较高的超声波法来提取。
对料液比、超声时间和乙醇体积浓度对银杏中总黄酮提取效果的影响进行了单因子试验,并采用正交试验法找出最佳提取条件为料液比1g B 30mL 、超声时间30min 、乙醇浓度70%。
采用紫外可见分光法检测黄酮类化合物的含量,不加显色剂,直接以258nm 作为最大吸收波长。
结果表明,银杏中总黄酮的平均含量稳定在2177%,精密度的RSD 为01302%,该方法的平均回收率为10013%。
本试验方法样品处理简单,准确度高,精密度好,适合于银杏叶中总黄酮的提取和测定。
[关键词]银杏叶;黄酮;正交试验[中图分类号]R284[文献标识码]A[文章编号]1008-178X(2011)05-0063-05[收稿日期]2011-07-19[作者简介]唐 婧(1982-),女,安徽马鞍山人,安徽科技学院理学院助教,从事天然产物分析研究。
银杏(Ginkgo biloba L 1)又名公孙树,是我国的特产植物,其叶中含有丰富的的黄酮类化合物。
黄酮类化合物具有改善心脑血管循环、抵制血小板活化因子、降低胆固醇、抗病毒、防癌抗癌以及清除自由基等功效[1-2]。
我国拥有世界银杏树资源的70%以上,其提取方法常见报道。
通过对银杏叶中黄酮类化合物最佳提取条件的研究,可提高叶片黄酮提取率,最大化地实现银杏叶的药用和经济价值,使我国丰富的银杏树资源得到更加有效的利用。
本实验以芦丁为对照品。
芦丁(Rutin),又称芸香甙(Rutioside),属于黄酮苷类化合物,具有多种药用、生理活性作用,临床上用于治疗各种因毛细血管脆性增加而引起的出血性疾病[3],如高血压等。
银杏中美药典比较
姓名：赖秀英班级：11455 学号：1145528 专业：中药学银杏叶的中国药典2010版与美国药典USP34比较【来源】（中）本品为银杏科植物银杏G inkgo biloba L．的干燥叶。
秋季叶尚绿时采收，及时干燥。
（美）银杏科植物银杏G inkgo biloba L.(Fam. Ginkgoaceae).的干燥叶。
含黄酮不少于0.5 ％，由平均分子质量为756.7的黄酮苷计算而得。
含萜内酯的不少于0.1 ％，在干燥的基础上由白果内酯（C15H18O8），银杏内酯A（C20H24O9），银杏内酯B（C20H24O10）和银杏内酯C（C20H24O11）总和计算而得。
【性状】（中）本品多皱折或破碎，完整者呈扇形，长3～12cm．宽5~15cm。
黄绿色或浅棕黄色，上缘呈不规则的波状弯曲，有的中间凹人，深者可达叶长的4/5。
具二叉状平行叶脉，细而密，光滑无毛，易纵向撕裂。
叶基楔形，叶柄长2～8cm。
体轻。
气微，味微苦。
（美）全干，折叠或零散的叶子，带或不带叶柄，从卡其绿色变化到棕绿色为主色，顶边往往显褐绿色，并在近轴面偏暗。
叶片大致扇形，叶柄到根尖边缘大约2-12厘米宽，2-9.5厘米长;宽大于长多为1.5-2倍。
叶片基部是完整的，凹的;顶缘波状，通常截断或者是集中裂，很少多裂。
表面无毛，具二叉状平行叶脉，并从叶片基部延伸到根尖缘皱。
叶柄与叶片颜色类似，在近轴面延伸，长2-8厘米。
【鉴别】（中）薄层色谱法(1)取本品粉末1g．加40%乙醇10ml，加热回流10分钟，放冷，滤过，取滤液作为供试品溶液。
另取银杏叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
照薄层色谱法(附录ⅥB)试验-吸取上述两种溶液各6μI，分别点于同一含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5：3：1 :1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氧化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。
银杏叶中黄酮的提取及其抑菌性检测
目录第一章绪论 41.1银杏叶功效成分简述 41.2 银杏叶主要成分研究情况 41.3黄酮类化合物4（1）组成及结构4（5）银杏黄酮类化合物的理化性质5第二章理论分析 62.1银杏叶采集分析 62.2 提取分析 6第三章实验仪器及其材料7第四章实验方法及其过程74.1银杏叶采集、干燥74.2银杏叶中黄酮等物质的提取74.3细菌培养84.4制作菌悬液94.5提取物的抑菌性检测实验9第五章实验结果分析10第六章结论14银杏叶中黄酮的提取及其抑菌性检测摘要银杏是我国的特有植物，又称公孙树。
银杏叶为最古老的中生代孑遗植物银杏的干燥叶。
银杏有裸子植物活化石之称。
据《本草纲目》记载，银杏果具有敛肺平喘、止遗尿、白带的作用。
在医药上有很高的利用价值。
银杏所含黄酮类成分主要为银杏双黄酮、异银杏双黄酮，去甲基银杏双黄酮，其他还有二萜内酯、银杏内酯A、B、C等，其中黄酮类和二萜内酯类物质具有捕获游离基和抑制血小板活化因子、扩张脑血管、促进血液循环、抗氧化等功能，从而广泛用于治疗冠心病、心绞痛、治疗老年痴呆症和增强记忆功能、防治皮肤病、脱发等多种疾病，随着深入的研究银杏的开发和利用，银杏所特有的医药、经济价值逐步受到重视。
银杏叶的提取方法有有机溶剂萃取法、水提取法、碱性稀醇或碱性水提取法、超临界萃取法、超声波提取法、酶法等。
本文采用有机溶剂提取黄酮类化合物，结果表明实验证明提取银杏叶黄酮等物质用乙醚3小时提取70℃下2次回流最佳。
菌体浓度试验表明当实验用菌体浓度在OD值为0.557，稀释到10-5和10-6比较适合，涂布能够成为单菌落，便于以后进行试验。
提取抑菌性试验证明加入0.5ml时对大肠杆菌就有明显抑制作用，其抑菌效果随着提取物浓度的增加而增强，当提取物加入2.0ml时具有完全抑菌效果。
关键词：银杏叶，总黄酮，乙醇，抑菌性检测第一章绪论1.1银杏叶功效成分简述银杏树是目前发现的当今世界上最奇特、对人类贡献最大的植物，特别是银杏叶具有五大成分五大功效，银杏叶将是世界上最有发展前景的中药材，能够治疗世界上很多的疑难杂症：（1）黄酮苷类：对心脑血管疾病，高血脂，高血压，清除氧自由基具有显著的疗效，是目前世界上治疗该类疾病最显著的药物。
银杏叶有效成分含量的影响因素
银杏叶有效成分含量的影响因素
银杏叶的有效成分受其不同来源的影响，有效成分含量差别很大。
其中影响黄酮类成分的主要因素为产地、采叶时间、树龄、雌雄、采叶部位及加工方式，影响内酯类成分的主要因素为产地、采叶时间、加工方式。
青岛三九九洲生物技术有限公司原料产地，位于全国闻名的"银杏之乡"——
山东郯城的万亩银杏林种植基地，郯城属暖、温带半湿润季风区，土壤湿润肥沃，年平均气温13.2℃，年均降水量843毫米，年均日照2425小时，无霜期206天，四季分明，气候宜人，盛产银杏。
有实验表明，银杏幼叶的总黄酮含量明显高于老树叶；雌树的6种黄铜总量高于雄树；同一棵树的同一枝条上，上部树叶的黄铜含量最高；银杏鲜叶收获后及时通风干燥、其中人工干燥的方式银杏叶质量最好。
年年康银杏叶精的原料均采用每年的6-9月采摘的3-
5年的雌树小苗叶，有效成分含量高。
且年年康银杏叶精的提取物直径在110-120纳米之间，实验表明，提取物的直径若低于该区间则很难提取出真正的黄铜成分，而高于该区间不能被人体吸收，年年康银杏叶精，采用先进的三级萃取技术，将银杏叶提取物的直径有效控制在110-
120纳米之间，保证了产品的高吸收性。
银杏是所有含有黄酮的植物中含有黄酮最多的植物，且银杏总黄酮为138种黄酮的组合，其效果明显区别于山楂、葛根中的单一黄酮。
千年典藏版：产品选用的银杏叶均采摘自500年以上的银杏树，由于树身存活的时间长，因此其树叶本身含有独特的长寿因子，年年康银杏叶精将这种特有长寿因子提取出来，与138种银杏总黄酮融合在一起，形成了有效成分浓度更高的浓缩版银杏叶精。
6个银杏新品种叶片黄酮内酯含量的测定
２ ． ２ 试 验 方 法
内酯 含 量 进 行 测 定 。
１ 试 验 地 概 况
６个 银 杏 新 品 种 叶 片 黄 酮 内酯 含 量 的 测 定
仲 凤 维 ～， 王 迎 ， 万 晓 ， 宋承 东 ， 张 志玲 。 ， 杜 辉 ， 孔 凡 伟
（ １ ． 泰 安 市 泰 山林 业 科 学 研 究 院 ， 山 东 泰安 ２ ７ １ ０ ０ ０ ； ２ ． 山东 农 业 大 学 ； ３ ． 泰安市林业局）
究 首 次 对 ６个 银 杏 新 品 种 的 黄 酮 类 化 合 物 和 银 杏 总
局 植 物 新 品种 权 ， 分 别 是 夏 金 、 松 针 、金 带 、 聚 宝
、
玉帘 、 魁 梧 。前 ５个 新 品 种 于 ２ ０ ０ ６年 春 季 采 用 插
皮 接嫁 接 ， 砧木基径约 ３ ｃ ｍ， 截干于 １ ． ２ ｍ处嫁接 。 魁梧于 ２ ０ ０ ９年春 季 嫁接 ， 嫁接方式、 砧木 选 择 等 处 理和其 它 ５个 新 品种 一 致 。每个 品 种 嫁 接 ３ Ｏ株 。 本实 验于 ２ ０ １ ２年 ９月 １日对 该 ６个 新 品种 进 行 调 查、 取 样 。每个 品种选取 ５ 株， 从每株 上 随机采集 轮 生叶 ５ ０片 ， 簇生 叶 １ ０片 。将 采来 的银杏 叶洗净 ， 于 ６ Ｏ ℃烘干至 恒重 ， 研磨粉 碎 ， 过８ Ｏ目筛 ， 用 于 内含物
山东 林 业 科技
２ ０ １ ３年第 ５期
总 ２ ０ ８ 期
Ｓ ＨＡ Ｎ Ｄ ＯＮ Ｇ Ｆ Ｏ Ｒ Ｅ Ｓ Ｔ Ｒ Ｙ Ｓ Ｃ Ｉ Ｅ ＮＣ Ｅ ＡＮ Ｄ Ｔ Ｅ Ｃ ＨＮ ＯＬ Ｏ Ｇ Ｙ
２ ０ １ ３ ． Ｎ ｏ ． ５
甘肃不同产地及不同季节银杏叶中总黄酮苷的含量测定
甘肃不同产地及不同季节银杏叶中总黄酮苷的含量测定杨伟丽;马媛媛【摘要】目的:研究甘肃不同地区、不同季节对银杏叶中总黄酮苷含量的影响.方法:采用高效液相色谱仪,721分光光度计测定银杏叶中总黄酮苷含量.结果:不同因素下银杏叶中总黄酮苷具有明显的差异.结论:银杏叶中总黄酮苷的含量与不同地区、不同季节等因素有关.【期刊名称】《甘肃医药》【年(卷),期】2013(032)003【总页数】3页(P169-171)【关键词】银杏叶;总黄酮苷;产地;季节;含量测定【作者】杨伟丽;马媛媛【作者单位】730000甘肃兰州,兰州大学第一医院药剂科【正文语种】中文银杏（Ginkgo biloba L.）又名白果树，具有活化石之称，是古代二叠纪孑遗树种[1]。
我国资源拥有量约占全球总量的70%。
它具有近600年的药用历史。
研究表明，银杏叶有效成分为黄酮类、萜内酯类等，其中银杏黄酮具有增加脑血管流量，改善脑血管循环功能，保护脑细胞，扩张冠状动脉，防止心绞痛、心肌梗塞及血栓的形成，能提高机体免疫能力。
对高血压、冠心病、心绞痛、脑动脉硬化以及老年性痴呆等病人均有效[2]。
甘肃是我国银杏资源分布的西北边缘地带，主要分布于甘肃南部，资源比较丰富[3]。
黄酮苷的分析方法主要有高效液相色谱法（HPLC）[1,5]和紫外可见分光光度法[4,6]。
该文对甘肃三个地区和兰州地区不同季节的银杏叶中总黄酮苷的含量积累动态进行了分析研究，其结果为确定银杏叶的质量、最佳采收期及地区选择提供参考依据，现将实验结果报告如下。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 仪器。
高效液相色谱仪由DiodeArrayDetector235C型检测器、series 2001C pump及PENELSON数据处理器构成。
索氏提取器，721分光光度计。
1.1.2 试剂。
槲皮素、芦丁为中国药品生物制品检定所提供；甲醇：流动相是色谱纯，提取是分析纯。
70%乙醇，1%AlCl3，2.5% AlCl3，10%NaAc，4%硼酸水溶液。
银杏叶提取物2010新标准
银杏叶提取物质量标准修订意义重大——康恩贝参与中国药典2010版标准修订作者：研究院/方玲叶剑锋009年8月6日，国家药典委网站上公布了关于2010年版药典（一部）部分增修订及新增品种（第四批）的公示，其中就包括了浙江省药检所起草的新的标准主要修订了黄酮苷元峰面积比，将峰比修订为：槲皮素与山萘素的峰面积比（Q/K）应为0.8～1.2，异鼠李素与槲皮素的峰面积比（I/Q）不小于0.15其实，在此之前，我公司已经认识到，银杏叶提取物标准的修订迫在眉睫，按公司领导的安排部署，以及各相关部门做的大量具体研究工作基础上，书面准进行修订。
小小的改动，触动了很多银杏叶生产厂的“神经”，很多厂家积极反对，认为太严了。
其实，很多厂家为了谋求利益，产品不按照规定的工艺进行生产，在银杏叶提取物（EGB）是我国乃至世界上重要的天然药物原料之一。
中国是世界上银杏的发祥地，也是银杏的主要生产国与出口国，银杏资源占世界总量的厂家生产设备及工艺水平参差不齐，部分银杏叶提取物厂家为了使产品主要化学指标符合客户标准，采用水提、半萃取，掺入银杏树皮、根皮与银杏叶共素或山奈素结构的物质共同提取，或使用甲醇、工业乙醇提取等这些不当的商业行为，不仅混乱了产品的质量构成，还严重干扰了市场秩序，阻碍产品的国银杏产业的声誉。
那么，如此修订背后的意义何在呢？我们进行了如下深入理论研究。
一、银杏叶提取物及其制剂中黄酮含量研究按中国药典所载方法，测定银杏叶中黄酮含量，经多批次检验，槲皮素：山萘素峰面积比均在0.74～1.137范围内，平均为0.882。
说明在自然界的银杏叶比就有一个固定的范围。
测定数据见表1。
我公司按中国药典收载的方法，制备银杏叶提取物，多年的测定数据显示，槲皮素：山萘素（Q/K）峰比超过1.1的几乎没有。
近日，本公司有三批银杏叶提经医保商会指定的厂家进行复核检测，峰比也均为1.00～1.04之间。
美国药典USP31版中规定槲皮素：山萘素峰面积比应为0.8～1.2，异鼠李素：槲皮素峰面积比应不小于0.1，新修订的中国药典2010版中结合美国药典的素：山萘素峰面积比应为0.8～1.2，异鼠李素：槲皮素峰面积比应不小于0.15。
银杏中黄酮类化合物提取课件
紫外可见分光光度法
原理
利用黄酮类化合物在特定波长下的紫外吸收 特性进行检测。
优点
操作简便、快速、成本低。
步骤
样品处理、标准溶液配制、绘制标准曲线、 测定样品吸光度、计算含量。
缺点
精度相对较低，容易受到其他物质的干扰。
高效液相色谱法
原理
利用不同物质在固定相和流动 相之间的分配差异进行分离，
通过紫外检测器检测。
改善心脑血管疾病
银杏黄酮能够降低血脂、血压 ，改善血液循环，预防和辅助
治疗心脑血管疾病。
银杏黄酮的提取历史与现状
01
02
03
04
银杏黄酮的提取历史可以追溯 到古代中国和欧洲，当时主要
用于药用和保健。
随着现代科技的进步，银杏黄 酮的提取技术不断改进，提取
效率和纯度得到提高。
目前，银杏黄酮的提取主要采 用溶剂萃取法、超声波辅助提 取法、超临界流体萃取法等。
银杏黄酮的应用领域不断扩大 ，不仅用于药品和保健品，还 广泛应用于化妆品、食品等领
域。
02 银杏黄酮的提取方法
有机溶剂提取法
原理
特点
利用有机溶剂对银杏叶中黄酮类化合 物的溶解作用，将其从银杏叶中提取 出来。
操作简单，成本低，但提取过程中易 造成黄酮类化合物的损失和溶剂残留 问题。
步骤
将银杏叶粉碎后，加入有机溶剂进行 浸泡、搅拌或回流，使黄酮类化合物 溶出，然后过滤、浓缩、干燥得到提 取物。
抗肿瘤作用
银杏黄酮能够抑制肿瘤细胞的生长和扩散，诱导 肿瘤细胞凋亡，对多种肿瘤具有潜在的治疗作用 。
银杏黄酮在保健食品领域的应用
抗氧化作用
银杏黄酮具有较强的抗氧化作用，可以清除自由基，延缓 细胞衰老，保持细胞健康，可用于保健食品中提高人体免 疫力。
银杏叶提取物质量标准及检验操作规程
XXXXXXXXX有限企业成质量量标准及查验操作规程标题银杏叶提取物质量标准及查验操作规程共7 页第 1页文件号草拟人草拟日期部门批阅日期QA 批阅日期批准日期奏效日期颁发部门散发部门更改记录：订正文件号更改原由及目的：履行 2020 年版《中国药典》订正号：同意日期：奏效日期：1品名：1.1 中文名：银杏叶提取物1.2 汉语拼音： YinxingyeTiquwu2代码：3取样文件编号4查验方法文件编号：5依照：中国药典（ 2020 年版一部）。
6质量标准：项目法定标准内控标准本品为银杏科植物银杏价Ginkgo biloba L.的干燥叶经加工制成的提取物 .取银杏叶，粉碎，用稀乙醇加热回流提取，归并提取液，回收制法乙醇并浓缩至适当，加在已办理好的大孔吸附树脂柱上，挨次用同法定标准水及不一样浓度的乙醇洗脱，采集相应的洗脱液，回收乙醇，喷雾干燥；或回收乙醇，浓缩成稠膏，真空干燥，粉碎，即得。
性状本品为浅棕黄色至棕褐色的粉末；味微苦。
同法定标准（ 1）取本品 0.2g，加正丁醇 15ml，置水浴中温浸15 分钟并时时振摇，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
另取银杏叶比较提取物0.2g，同法制成比较提取物溶液。
照薄层色谱法（公则0502）试验，汲取上述两种溶液各 1μl，分别点于同一以含 4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅鉴别胶 G 薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮 -甲酸 -水（ 5： 3： 1： 1）为睁开同法定标准剂，睁开，拿出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与比较提取物色谱相应的地点上，显同样颜色的荧光斑点。
(2 )取本品，照〔含量测定〕萜类内酯项下的方法试验，供试品色谱中应体现与银杏叶总内醸比较提取物色谱峰保存时间相对应的色谱峰。
水分不得过 5.0%（公则 0832 第二法）。
炽灼残渣不得过 0.8% （公则 0841）。
不同产地银杏叶质量对比研究
不同产地银杏叶质量对比研究目的：比较相同树龄、相同采收期、不同产地银杏叶药材质量的差异。
方法：参照2010版药典和舒血宁注射液质量标准检测银杏叶主要质量指标，包括总黄酮醇苷，萜类内酯、总灰分、指纹图谱和黄酮苷元峰面积比。
结论：山东和江苏的银杏叶最适合作为生产舒血宁注射液的原料。
标签：银杏叶;总黄酮醇苷;黄酮苷元峰面积比;萜类内酯;指纹图谱[Abstract]Objective：To research difference of the same age ginkgo biloba leaf quality in the same picking period and different area.Method：According to the 2010 edition of Pharmacopoeia and Shu xue ning injection quality standard，to measure main quality indexes of ginkgo biloba leaf，which includes total flavone glycosides，terpene lacton，total ash，fingerprint similarity，peak area ratio of flavone.Conclusion：The Ginkgo biloba leaf in Shandong and Jiangsu is the most suitable for production of raw materials of Shuxuening injection.[Key words]ginkgo biloba leaf;terpene lacton;peak area ratio of flavone;total ginkgo biloba;fingerprint similarity银杏Ginkgo biloba L.为银杏叶科银杏属植物，主要产于我国[1]，其主要有效成分为黄酮醇苷和萜类内酯。
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样品经 Ｈ Ｌ ＰＣ分析， 可得样品
中 ３ 主成分 ， 个 即槲皮素 、 鼠李 素 、 异 山奈酚 的峰 面积 Ａ、 ２ ｌ 、 Ａ Ａ； ３由槲皮素 标准 曲线 及平均转化 系数 （．１， 黄酮甙百 ２５）可得 分含 量 ， 算 公式 为 ： （ ＝［Ａ ＋Ａ ＋Ａ ） ３２５１ 计 ｃ ％） （ ｌ ２ ３ ×（ ．１ × １ ） ． ９ ３ ］ ．１ ５／ ０ ＋００ ００ ×２５ × ０ｗ×１０ Ａ 为 槲 皮 素 峰 面 ０ ０ ％， ｌ 积 ；２ Ａ 为异 鼠李 素峰 面积 ； ３ 山奈 酚的 峰面 积 ；．１ Ａ为 ２５ 为平 均转 化系数 ；．１ １ ０ 为槲 皮素标 准曲线斜 率 ；． ９ ３ ３２５ ×１ ００ ０ ０ ０ 为槲皮 素标准 曲线 截距 ； ５ ０为样 品溶 液 体积 （ １； ｍ） Ｗ为样 品 重量 （ ） 杏 中黄 酮含量 主要 指黄酮 甙含量 。 峭 。银
摘要 黄 酮是银 杏叶的主要 药用成分 ， 其黄酮含量 在很 大程度 上决 定着银杏 叶的利 用价 值。通过 时大龄银 杏叶不 同生 长时期 黄 酮含 量 的测定 与比较 ， 分析银 杏叶 中黄酮含量 随生长期 的变化规律 ， 揭示 出大龄 银杏树 采摘 叶片的最佳 时期。试验 结果表 明 ： 同生长 时期 的 不 银 杏叶黄 酮含 量 变化 幅度较 大 ， １ 中黄 酮含 量 出现 ２次峰值 ， 在 年 ８月份 出现 第 １ 个峰 值 ， 酮含 量 为 ０ ８４ ， 黄 ． ％ 以后 下 降较快 ，０月叶 色 ８ １
发黄后 又上升到 最高值 ０９７ ．７ ％。 关键词 银 杏 叶； 生长时期 ； 酮含量 黄 中图分类 号 Ｑ ４ 文献标识 码 Ａ ９６
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文章编号
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１３ 银杏总黄酮含量的计算 ．
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银杏 叶不 同时期 黄酮含 量测定 与 比较
李 莉， 士 郑 芳 （淮 院 林 学 ，南 马 ４ ０ 田 林， 黄 学 农 科 系河 驻 店６ ０ ３） ０
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