脑胶质瘤靶向脂质体的制备和表征
脂质体阿霉素简介
脂质体阿霉素的毒性问题 提高脂质体阿霉素的稳定性 脂质体阿霉素的靶向性研究 脂质体阿霉素与其他药物的联合应用
汇报人：
关系：安全性和有效性并存，脂质体阿霉素在保证安全性的同时，也具有高效的治疗效果。 注意事项：在使用脂质体阿霉素时，仍需密切关注不良反应的发生，及时采取措施确保安全 性。
严格掌握适应症：只有 当脂质体阿霉素的潜在 益处大于潜在风险时才 使用
正确选择剂量和用药途 径：按照医生推荐的剂 量和用药途径使用，避 免超量或用药途径不当
脂质体阿霉素的给药方式包括静脉注射和瘤内注射 剂量范围通常为10-50mg/m2，具体取决于患者的体重和病情 给药频率通常为每3-4周一次 疗效评价主要通过肿瘤大小的变化和患者症状的改善来评估
肿瘤缓解率：脂质体阿霉素治疗后的肿瘤缩小或消失的比例 生存期：患者接受治疗后生存时间的延长 安全性：治疗过程中不良反应的发生率及严重程度 耐受性：患者对药物的接受程度和依从性
密切监测不良反应：在使 用过程中，应密切监测患 者的生命体征和不良反应， 及时采取措施减轻或控制 不良反应
遵循用药指导原则：遵 循医生或药师的建议， 不要自行调整剂量或改 变用药途径
脂质体阿霉素的研究已经取得了重要进展，目前已经进入临床试验阶段。
脂质体阿霉素的疗效和安全性得到了广泛认可，为肿瘤治疗提供了新的选择。
在制备过程中，要保证使用的设备和器具的清洁和干燥，以免对药物造成污染和影响。
抑制肿瘤细 胞生长
增强化疗药 物疗效
诱导肿瘤细 胞凋亡
降低化疗药 物毒性
脂质体阿霉素通过 与肿瘤细胞结合， 将药物有效成分导 入肿瘤细胞内部
抑制肿瘤细胞DNA 的合成和复制，诱 导肿瘤细胞凋亡
增强机体免疫功 能，提高抗肿瘤 能力
脂质体药物传输系统的研究新进展
脂质体药物传输系统的研究新进展盛竹君;徐维平;徐婷娟;金勤玉;吴亚东;杨东梅【摘要】概述脂质体制备方法及靶向脂质体的最新研究进展.脂质体的制备方法包括传统制备方法(薄膜分散法、反相蒸发法和乙醇注入法)和新型制备方法(微流控流体聚焦法、超临界反相蒸发法和冷冻干燥法).新型制备方法制备的脂质体具有包封率较高、粒径分布均一、无残留有机溶剂等优点.与普通脂质体相比,靶向脂质体(如长循环脂质体、物理化学靶向脂质体、配体靶向脂质体)可特异性靶向肿瘤组织,提高药物疗效,降低药物毒性.在药物传输系统中,脂质体传输系统将会有更广泛的应用.%To introduce the liposomes preparation and targeting in recent advances. The method of preparing liposomes comprises conven-tional methods(e. g., thin lipid film hydration method, reverse phase evaporation method, ethanol injection method) and novel methods (e. g.,micro hydrodynamic focusing, supercritical reverse phase evaporation method, freeze drying method), the novel methods for preparing liposomes having high encapsulation efficiency, uniform particle size, with no residual organic solvent. Compared with ordinary liposomes, targeted liposomes(e.g.,long-circulating liposomes, physical chemistry target liposomes, ligand targeting liposomes) can specifically target tumor tissue, improve drug efficacy, and decrease drug toxicity.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2015(024)023【总页数】4页(P6-9)【关键词】脂质体;传输系统;制备;靶向【作者】盛竹君;徐维平;徐婷娟;金勤玉;吴亚东;杨东梅【作者单位】安徽中医药大学,安徽合肥 230012;安徽省立医院,安徽合肥 230001;安徽省立医院,安徽合肥 230001;安徽中医药大学,安徽合肥 230012;安徽中医药大学,安徽合肥 230012;安徽中医药大学,安徽合肥 230012【正文语种】中文【中图分类】R9431965年，英国Bangham和Standish[1]将磷脂分散在水中进行电镜观察时，发现了脂质体。
药物制剂中纳米胶束的制备与表征
药物制剂中纳米胶束的制备与表征近年来，纳米技术在药物制剂领域得到了广泛应用。
其中，纳米胶束作为一种常见的纳米载体，具有较高的稳定性、可调控的尺寸和药物释放性能，已成为药物传递和靶向治疗的重要工具。
本文将介绍纳米胶束的制备方法以及其在药物制剂中的表征技术。
一、纳米胶束的制备方法纳米胶束的制备方法多种多样，常见的方法包括溶剂沉淀法、膜溶液法、逆向微乳化法等。
不同的方法适用于不同的药物和要求，下面我们将介绍一种常见的制备方法——逆向微乳化法。
逆向微乳化法是使用两种不相容的溶液（通常为水和油）制备纳米胶束的方法。
首先，将油相和水相用表面活性剂乳化剂进行乳化，形成稳定的微乳液。
然后，通过加入药物原料并控制温度、时间等参数进行反应，使纳米胶束形成。
最后，通过离心、超滤等手段分离纳米胶束，并对其进行干燥，得到纳米胶束制剂。
二、纳米胶束的表征技术纳米胶束的表征技术是评价药物纳米制剂性能的重要手段。
常见的表征技术包括粒径测定、稳定性评价、形貌观察和药物包封效率的测定。
粒径测定是评价纳米胶束尺寸的关键技术，可以通过动态光散射法（DLS）、透射电子显微镜（TEM）等方法进行。
DLS技术可以快速、无需样品准备，但对于大尺寸的纳米胶束有限。
而TEM技术需要样品制备复杂，但可以观察到纳米胶束的形貌和尺寸分布。
稳定性评价是判断纳米胶束稳定性的关键指标，常用方法包括离心沉淀试验、稳定性时间研究等。
离心沉淀试验通过离心沉淀纳米胶束并观察沉淀情况，评价其稳定性。
稳定性时间研究则是放置纳米胶束样品一定时间，观察其稳定性变化。
形貌观察主要通过扫描电子显微镜（SEM）和原子力显微镜（AFM）等技术进行。
这些技术可以观察到纳米胶束的形貌、表面形态等微观结构信息。
药物包封效率的测定可以通过分析药物在纳米胶束中的含量来进行。
常见的方法包括高效液相色谱法（HPLC）、质谱法等。
三、纳米胶束在药物制剂中的应用纳米胶束作为一种优异的药物载体，具备较高的稳定性和药物缓释性能，在药物制剂中发挥着重要的作用。
负载青蒿素类药物纳米递送系统在肿瘤治疗中的应用进展
负载青蒿素类药物纳米递送系统在肿瘤治疗中的应用进展李珊珊，闫晓林，闫海英，林晓晴，黄欣，刘凤喜山东第一医科大学第一附属医院（山东省千佛山医院）临床药学科山东省儿童药物临床评价与研发工程技术研究中心山东省医药卫生临床药学重点实验室，济南250014摘要：青蒿素类药物可通过多种机制发挥抗肿瘤作用，但该类药物存在半衰期短、稳定性差和生物利用度低等缺点，限制了其治疗效果。
与游离药物相比，负载青蒿素类药物的纳米递送系统不仅可提高药物的溶解度和稳定性，延长体内循环时间，还可增强药物运输的肿瘤靶向性，具有更显著的抗肿瘤效果。
目前，青蒿素类药物的纳米递送体系包括脂质体、纳米粒、纳米结构脂质载体、聚合物胶束、囊泡、自微乳以及纳米前药等，每种纳米递送体系均具有各自的优点及待改进之处，对其进行总结可为其在抗肿瘤治疗中的应用提供参考。
关键词：青蒿素类药物；药物递送系统；纳米技术；抗肿瘤药物doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.35.022中图分类号：R945 文献标志码：A 文章编号：1002-266X（2023）35-0088-04青蒿素（ART）是从植物青蒿中分离提取的具有过氧基团的倍半萜内酯类化合物，是我国惟一获得国际承认的、具有自主知识产权的抗疟新药［1］。
研究发现，ART类药物除具有抗疟作用外，还有免疫调节以及抗肿瘤等药理作用。
研究表明，ART类药物可以选择性杀伤多种肿瘤细胞但对正常细胞影响轻微，能逆转肿瘤细胞的多药耐药，且与传统化疗药物联合使用可起到协同、增效的作用［2-5］。
鉴于ART及其衍生物的特异抗肿瘤作用，美国国家癌症研究所已将其纳入抗癌药物筛选与抗癌活性研究计划之中［6］。
为了改善ART的理化性质，科学家经过不断探索，在原有ART 分子结构的基础上研究出ART的醚类、酯类等衍生物，包括双氢青蒿素（DHA）、青蒿琥酯（ATS）、蒿乙醚和蒿甲醚（ARM）等［7-8］。
ART具有抗肿瘤谱广、不良反应小、安全性高的特点，但其半衰期短、生物利用度低，影响其抗肿瘤效果。
恶性脑胶质瘤的基因治疗
绩 Ａ ｎ ｕ ｒａ ｄ等 ＿ 采 用 Ｔ ／ Ｃ 治 疗 鼠 脑 肿 瘤 中 发 现 无 症 状 ３ Ｋ Ｇ Ｖ
期生 存时 间 显 著 延 长 。 而在 一 组 ｌ ２例 复 发 性 恶 性 胶 质 瘤
中 ， 肿 瘤 缩 减 术 后 向 瘤 内 直 接 注 入 Ｈ ＶＴ 在 Ｓ — Ｋ后 发 现 平 均 生 存 期 ２ ６天 ，５ 生 存 期 ＞１ ， 例 ２ ８年 后 复 发 ｌ 。 ０ ２％ 年 ｌ ． ４ １ １ 基 因 转 移 途 径 有 非 病 毒 法 （ 注 射 法 、 穿 透 法 、 ． 微 电 基
因 。 转 基 因 治 疗 在 基 础 和 临 床 实 验 中 取 得 了 一 定 的 成
酶 （ Ｖ Ｔ 能 够 磷 酸 化 更 昔 洛 韦 ， 之 转 变 为 毒 性 核 苷 酸 ＨＳ —Ｋ） 使
异 质 体 从 而 阻 断 Ｄ Ａ多 聚 酶 的 功 能 ， 起 病 毒 死 亡 。 基 础 Ｎ 引 及 临 床 实 验 采 用 逆 转 录 病 毒 或 者 重 组 腺 病 毒 载 体 转 导 Ｈ Ｖ Ｓ— Ｔ 基 因进 入脑肿 瘤 细胞 ， 其 表达 Ｈ ＶＴ Ｋ 使 Ｓ ． Ｋ然 后 给 予 更 昔 洛
维普资讯
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２５ ２ ・
Ｃ ｉ ｕ ｏ ， ｇ ｓ ２ ０ Ｖ １ １ Ｎ ４ ｌｎ Ｎｅ ｒ ｌ Ａｕ ｕ ｔ ０ ２， ｏ ． ５， ｏ．
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综 述
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恶 性 脑 胶 质 瘤 的 基 因 治 疗
段 宝奇
【 图 分 类 号 】Ｒ ３ ．１ 中 ７ ９ ４ 【 献 标 识 码 】Ａ 文
肿 瘤 细 胞 亦 被 杀 伤 ， 种 现 象 称 为 “ 观 者 效 应 ” 其 可 能 途 这 旁 。
第三届药苑论坛学生报告题目汇总
上午学生报告（老五校各一场）1. 1,2-环己二胺催化的2(5H)-呋喃酮与查尔酮的直接Vinylogous Michael加成反应北京大学药学院07级药学祁超2. 柴胡总多糖对大鼠急性肺损伤的影响复旦大学药学院07级药学宋璐琎3. HPLC-Q-TOFMS法鉴定萝芙木根及根茎的化学组成沈阳药科大学05级药学张丽丽4. 具有“锁定”功能的GLUT1高亲合力脑靶向脂质体配体的设计、合成四川大学07级药学屈博毅5. 开管型毛细管电色谱柱的制备及应用中国药科大学07级药学吴夏冰下午学生报告（共37场，每个分会场约12场）C101主会场（药物化学方向）1. 照山白花的化学成分研究华中科技大学07级药学陈洪文2. 溴代呋喃酮衍生物的合成及其抑制铜绿假单胞菌生物膜形成活性研究暨南大学08级药学陈婉娜3. 药物中间体2,3-二甲基-4-（甲氧基丙氧基）-N-氧化吡啶合成研究武汉工程大学08级制药工程高瑾4. 3D-QSAR study on a series of Bcl-2 protein inhibitors using Comparative Molecular Field Analysis山东大学07级药学候旭奔5. Synthetic Improvement of Hordenine武汉工程大学07级制药工程王玄6. 具有Caspase-3抑制活性和化学多样性地衣内生真菌的优选与化学成分研究暨南大学07级中药学吴祖艳7. 基于CYP450抑制剂分类器组合模型的药物-药物相互作用预测研究华东理工大学07级制药工程于跃8. 川产迭鞘石斛化学成分初步研究成都中医药大学中药学院07级中药学周勤梅9. 基于同源模建和分子对接方法发现新型RSK2激酶抑制剂华东理工大学07级制药工程专业周艺10. 桂北金槐槐米中黄酮微波提取及抗肿瘤研究桂林医学院08级药物制剂专业周云11. 植物染发剂的研究郑州大学07级药学专业朱翠革B104分会场（药物分析药物制剂方向）1. 马钱子生物碱血浆蛋白结合率的测定与比较南京中医药大学07级药物制剂何超芹2. 南寒水石质量标准研究内蒙古医学院07级药学何帅3. 佛手和属间药用植物的主成分聚类分析及HPLC指纹图谱研究广东药学院08级中药学洪晓冰4. CTX介导的脑胶质瘤靶向纳米给药系统的构建复旦大学药学院07级药学匡宇阳5. 无定形药物微观结晶机制及抑制结晶的纳米包衣方法研究西南大学08级药学欧阳辉6. 熊果酸脂质体的制备及体外释放特性桂林医学院07级药学潘红艳7. 奥沙西罗亲水凝胶骨架片制备及体外释药特性研究山东大学04级临床药学单悌超8. 指纹图谱结合多组分定量分析银杏叶提取物徐州医学院08级药学汤安邦9. 基于MRI成像的USPIO载药阿霉素脂质体的制剂学研究第二军医大学08级药学王庆宾10. 数字化层析用紫外分析仪的设计与制作安徽中医学院08级制药工程徐露11. 胶束电动毛细管色谱在线堆扫法分离并富集伊曲康唑及其代谢物羟基伊曲康唑复旦大学药学院07级药学杨帆12. 川芎、当归炮制前后挥发油组分的研究长春中医药大学07药学杨建龙13. 中药复方缓释滴丸“内异消”的制备及药代动力学研究西南大学08级药学院张宇14. LC-MS/MS测定人血浆中头孢呋辛的浓度及药动学研究南京医科大学06级临床药学赵欣D110分会场（药理及其他方向）1. 丁香苦苷抗鸭乙肝病毒的实验研究黑龙江中医药大学07级药物制剂陈晓莉2. 血管内皮生长因子靶向的多西他赛PLGA-PEG胶束给药系统的研究沈阳药科大学10级药剂博士郭盼3. 军校生的科技创新实践第二军医大学08级药学蒋德华4. miR-124 调节骨髓间充质干细胞向心肌分化的实验研究哈尔滨医科大学07级临床药学姜帅5. MONCPT体外抗肿瘤转移活性评价及其机制研究浙江大学08级药学廖佳宇6. 2-ME纳米混悬剂对裸鼠食管癌移植瘤作用研究郑州大学07级药学李晓晨7. Enhanced gene tranfer with multilayered polyplexes assemblied with layer-by-layertechnique山东大学07级临床药学瞿潇8. 自噬溶酶体途径参与脑微血管内皮细胞损伤作用机制研究浙江大学08级药学邵雪晶9. 六种獐牙菜属植物对HepG2细胞葡萄糖消耗的影响华中科技大学07级药学王林丽10. 繁薪生物能源科技有限公司创业计划广东药学院08级药学严瑾11. 脱-γ-羧基凝血酶原通过上调节ERK1/2-MAPK信号通路诱导肝癌细胞高表达基质金属蛋白酶-2,-9山东大学07级药学袁奕12. 精制冠心方抑制大鼠中性粒细胞呼吸爆发活性部位筛选江西中医学院07级中药学张坤展板交流论文5篇1. 鸦胆子油脂质体的制备及药动学研究中国药科大学07级药学马露露2. 齐拉西酮的合成武汉工程大学07级药学王琛3. 鹿角脱盘多肽的分离纯化及其降糖活性的研究中国药科大学07级药学杨开源4. SQ粉体物理特性及体外溶出行为的比较江西中医学院杨刚5. 二取代咪唑-L-樟脑磺酸盐催化合成3,4-二氢嘧啶-2(1H)-酮衍生物第二军医大学07级药学袁文琳。
金港榄香烯注射液肿瘤科6-26素材
金港榄香烯“化疗药”解析—有效抑制脑瘤
金港榄香烯可显著抑制裸鼠C6 胶质瘤的生长，肿瘤体积与对 照组相比，差异有显著的统计 意义（P<0.001） 对肿瘤生长的抑制作用与顺铂 相当，但无不良反应 在与甲氧胺联用时抑制肿瘤生 长作用更为明显
杨宗艳.榄香烯注射液联合DP方案治疗老年晚期非小细胞肺癌疗效观察.湖南中医药大学学报.2009,29(10):5-7(中国中 医科学院广安门医院肿瘤科)
金港榄香烯联合DP方案治疗NSCLC
榄香烯联合DP方案有效治疗NSCLC
榄香烯联合化疗 具有协同作用
客观缓解率、疾 病控制率均有明 显提高
*：与DP组相比，p<0.05
抗肿瘤 植物药
有效抑制 肿瘤
防治 多途径 转移 逆转 多药耐药
低毒
金港榄香烯“绿色”解析—抗肿瘤植物药
来
源：（温）莪术
配 方：主要为β-榄香烯 少量δ-榄香烯 γ-榄香烯 化学式：C15H24 分子量：204.35 化学分类：倍半萜类化合物 结构特点：分子量小，脂溶性高 药理作用： 分子式 紫杉醇 C47H 榄香烯
意义
单用榄香烯治疗肺癌有效 ELE与化疗有协同作用，可提高疗效 ELE与放疗有协同作用，可提高疗效 单用榄香烯治疗肝癌有效 ELE与化疗有协同作用，可提高疗效
鼻咽癌
白血病 骨转移 癌 脑 癌 宫颈癌
榄香烯+放疗/放疗
榄香烯+化疗/化疗 单用榄香烯或榄香烯+化 （放）疗/化（放）疗 榄香烯+化疗/化疗 榄香烯+放疗/放疗
金港榄香烯“绿色”解析—低毒
6.2 线粒体靶向纳米材料与肿瘤治疗特点
线粒体靶向纳米材料与肿瘤治疗优势1 线粒体靶向纳米材料线粒体靶向策略的最初应用是对生物活性分子修饰线粒体靶向基团，使这些活性分子能够直接靶向至线粒体，发挥更好的疗效。
例如，将辅酶Q10或维生素E的衍生物与TPP结合，已被证明能够选择性的靶向至线粒体并提高抗氧化效率。
当亲脂性的TPP与DOX共轭结合时，原本只能在耐药的人乳腺癌高转移细胞(MDA-MB-435/DOX)的胞浆中积累的DOX，优先选择在线粒体中积累；与DOX原药相比，TPP-DOX能够增加caspase-3和PARP的剪切，诱导更明显的细胞凋亡，具有逆转MDR的应用潜力。
在前文中已经提及，将纳米材料与抗肿瘤药物结合形成纳米医药或用纳米载体负载药物，能够在保持药物原本完整的疗效的同时，改善多种药物的药代动力学和生物分布。
但在十年之前，关于线粒体靶向的纳米载药体系的报道并不多见，大部分纳米靶向系统只靶向至细胞层面，纳米载体进入细胞后靠随机分布与包括线粒体在内的亚细胞器作用。
后期研究发现，纳米递送载体通过修饰特定靶向到亚细胞器，可以增加药物与亚细胞器上特定位点作用的几率，从而提高治疗效率。
因此，定点给药的药物递送系统为目前暂时失败的治疗方法提供了新的可能性。
为了将药物运输到线粒体基质并有效的控制释放药物到不同的线粒体组分，对纳米递送系统的设计和制备有着精确的要求：精确的尺寸、亲脂性的表面、合适的电性和表面特定的靶向基团。
此外，为保证线粒体靶向的纳米递送系统在生物体内的安全性，对这些纳米材料的生物相容性与生物降解性也有一定的要求。
我们对近年来报道的几类线粒体靶向的纳米平台做一个简单总结：1.1 脂质体基线粒体靶向纳米材料靶向线粒体的脂质体基材料，可以通过膜融合将其所载的药物或活性分子带入线粒体内。
DQAsome是一类研究要多的脂质体基线粒体靶向纳米材料，此外还发展了一系列利用亲脂性阳离子TPP实现靶向功能的脂质体基纳米材料。
2008年，Weissig课题组在Nano Letter 上发表了他们制备的以脂质体为核心TPP修饰的线粒体靶向载体：他们将TPP结合到十八烷醇上制备出STPP，再和罗丹明B标记的磷脂酰乙醇胺制备脂质体用于靶向线粒体增加神经酰胺的抗癌疗效。
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Hans Journal of Biomedicine 生物医学, 2017, 7(3), 46-53 Published Online July 2017 in Hans. http://www.hanspub.org/journal/hjbm https://doi.org/10.12677/hjbm.2017.73008
文章引用: 韩伟, 胡傲, 姚大靖, 尹光福. 脑胶质瘤靶向脂质体的制备和表征[J]. 生物医学, 2017, 7(3): 46-53. https://doi.org/10.12677/hjbm.2017.73008
Preparation and Characterization of Glioma Targeted Liposomes
Wei Han, Ao Hu, Dajing Yao, Guangfu Yin* College of Materials Science and Engineering, Sichuan University, Chengdu Sichuan
Received: Jun. 22nd, 2017; accepted: Jul. 9th, 2017; published: Jul. 12th, 2017
Abstract Glioma was one of the most common encephaloma. The development of targeted drug release sys-tem was critical for the safe and efficient treatment of glioma. Angiopep-2 and TAT dual-modified and glioma-targeted liposomes were prepared (Ang-TAT-LIP). Orthogonal tests were used to study the optimum preparation conditions of liposomes. 1H-NMR spectra was utilized to verify the
modification effect of peptides. Particle sizer and TEM were used to analyze the size distribution and morphology, and characterized the serum stability of liposomes. Finally, the in-vitrocell up-take experiment was used to study the effect of liposome targeting into cells. The main results were summarized as follows: DSPE-PEG2000-Ang/TAT was confirmed successfully synthesized by
1H-NMR spectra. The optimum conditions combination was below: 50˚C water bath, rotate speed 120 rpm, ultrasonic time 16 min, filters 0.22 μm and 0.10 μm. The liposomes were about 110 nm in diameter, with uniform particle size, spherical shape, good dispersity and fine serum stability. In conclusion, the Ang-TAT-LIP was a potential drugs carrier material of glioma targeting.
Keywords Glioma, Liposomes, Angiopep-2
脑胶质瘤靶向脂质体的制备和表征 韩 伟，胡 傲，姚大靖，尹光福* 四川大学材料科学与工程学院，四川 成都
收稿日期：2017年6月22日；录用日期：2017年7月9日；发布日期：2017年7月12日 *通讯作者。 韩伟 等 47 摘 要 脑胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，能特异性靶向脑胶质瘤细胞的药物载体是脑胶质瘤安全高效治疗的关键。本研究制备了Angiopep-2和TAT双配体修饰的脑胶质瘤靶向脂质体(Ang-TAT-LIP)，通过正交试验探究脂质体的优化制备条件，并用核磁共振氢谱表征多肽修饰的效果，通过纳米粒度仪和TEM电镜表征脂质体的粒径分布和形貌，并表征脂质体的血清稳定性，最后用体外细胞摄取实验，研究脂质体靶向进入细胞的效果。具体结论如下：1H-NMR证实DSPE-PEG2000-Ang/TAT的成功合成；脂质体的优化制备
条件如下，50˚C水浴、旋蒸转速为120 rpm、探头超声16 min、并依次过0.22 μm及0.10 μm的滤膜；脂质体的平均粒径约为110 nm，径分布均匀、且粒形为圆球状，分散性和血清稳定性良好；Ang-TAT-LIP脂质体具有亲合–穿膜协同效应，可靶向脑胶质瘤细胞，进而被细胞摄取。综上所述，Ang-TAT-LIP是一种具有应用前景的脑胶质瘤靶向药物载体材料。
关键词 脑胶质瘤，脂质体，Angiopep-2
Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
1. 引言 脑胶质瘤约占颅内肿瘤的45%，具有生长速度快、高侵袭性等特点[1]，并且由于血脑屏障(BBB)的存在，用手术、放化疗等传统治疗手段很难治愈[2]。脂质体具有无毒性、低免疫原性等特性，用亲水性的聚乙二醇长链修饰脂质体，可显著提高其体内循环时间[3]。在脑靶向药物递送系统中，低密度脂蛋白受体相关蛋白1 (LRP1)常被用于促进受体介导的转胞吞作用[4]，LRP1在脑毛细血管内皮细胞和脑胶质瘤细胞上高表达[5] [6]。Angiopep-2 (Ang)肽对LRP1具有高度亲和性、TAT肽是一种公认的高效细胞穿膜肽[7]，Angiopep-2和TAT双配体修饰的脂质体(Ang-TAT-LIP)，可高效地穿透BBB并进一步靶向脑胶质瘤细胞[8]。 本课题通过正交试验研究脂质体的优化制备条件，并用透射电镜(TEM)和纳米粒度仪测试其颗粒形貌、平均粒径和Zeta电位等参数。用核磁共振氢谱(1H-NMR)研究Ang/TAT与脂质体的偶联情况。最后
用高表达LRP1的人脑星形胶质母细胞U87和大鼠脑毛细血管内皮细胞bEnd.3 [9]，进行香豆素6荧光脂质体的细胞摄取实验，以表征脂质体对BBB和脑胶质瘤细胞的体外靶向入胞效果。
2. 材料与方法 2.1. 试剂与仪器 Ang和TAT由吉尔生化有限公司合成；大豆磷脂(SPC)购自Lipoid GmbH；胆固醇(CHO)购自Avanti Polar Lipids；PEG修饰的和马来酰亚胺接枝的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000和DSPE-PEG2000-Ma)
买于Nanocs；香豆素6购自于Sigma-Aldrich；Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)和胎牛血清(FBS)买于Gibco；其它相关的化学药品都为分析纯。 旋转蒸发仪：SY-2000，中国上海亚荣；PVDF针头式过滤器：0.22 μm/0.10μm，Millipore；马尔文韩伟 等 48 纳米粒度仪：Nano ZS90，马尔文仪器有限公司；超声波细胞破碎仪：scientz-IID，新芝生物科技有限公司；TEM：JEM-100CX，日本电子株式会社；核磁共振波谱仪：600 MHz，Unity Inova光谱仪；荧光倒置显微镜(IFM)：IX-71，Olympus公司。
2.2. DSPE-PEG2000-Ang/TAT的合成 如图1所示，通过Ang中半胱氨酸的巯基和DSPE-PEG2000-Mal的马来酰亚胺(Mal)之间的共价反应合成DSPE-PEG2000-Ang。简而言之，把DSPE-PEG2000-Mal、Cys-Ang和催化剂三乙胺(摩尔比= 1:1:3)共
混于三氯甲烷中，室温避光反应20 h，用氮气防止氧化，用旋转蒸发仪真空干燥混合物。以CDCl3作为
溶剂，通过1H-NMR鉴定最终产物。用TAT-Cys替代Cys-Ang，并使用同样的方法合成DSPE-PEG2000-TAT。
2.3. 脂质体的制备 用薄膜分散法制备脂质体[10]，如表1所示，将脂质体原材料溶解到三氯甲烷中，旋转蒸发并真空干燥2 h，彻底除去有机溶剂后得到多室脂质体薄膜。将薄膜在50˚C的条件下水化30 min，随后用100 W的功率探头超声(5 s超声，5 s间隔)，最后将脂质体溶液挤压通过PVDF滤器。 制备聚乙二醇脂质体(PEG-LIP)是制备其它功能化脂质体的基础，因此用L9(34)正交试验来探究脂质
体的优化制备条件，其中旋转蒸发的温度、转速，超声时间和PVDF滤器的孔径被选为影响因素。 基于上述的操作和优化制备条件，制备了四种香豆素6(C6)包载的荧光脂质体(C6:磷脂= 1:80, w/w)，包括C6包载的脂质体(C6-LIP)、单配体修饰的C6脂质体(C6-TAT-LIP、C6-Ang-LIP)和双配体修饰的C6脂质体(C6-Ang-TAT-LIP)。
2.4. 脂质体粒径和形貌的表征 分别将脂质体稀释到质量分数为1%和0.1%，用马尔文纳米粒度仪测量脂质体的平均粒径和Zeta电位。将脂质体用超纯水稀释到约1.6 mg/mL，磷钨酸负染脂质体后，用TEM表征脂质体的形貌。
Figure 1. Synthesis of DSPE-PEG2000-Ang 图1. DSPE-PEG2000-Ang的合成
Table 1. Composition of Liposomes (mol%) 表1. 各种脂质体的组成
Samples SPC CHO Functional material compositions PEG-LIP 62% 33% 5% DSPE-PEG2000 TAT-LIP 62% 33% 4% DSPE-PEG2000, 1% DSPE-PEG2000-TAT Ang-LIP 62% 33% 2.5% DSPE-PEG2000, 2.5% DSPE-PEG2000-Ang