猪流行性腹泻病毒(PEDV)XJ-DB2株对25日龄仔猪毒力试验
猪流行性腹泻
2、发病后措施 （1）隔离封锁 一旦发生本病，应立即封锁，限制人员参观， 严格消毒猪舍用具、车及通道。将未感染的预产期20日以内的 妊娠母猪和哺乳母猪连同仔猪隔离到安全地区饲养。紧急接种 猪腹泻氢氧化铝灭活苗。
（2）对症疗法 对症治疗可以减少仔猪病死率，促进 康复。 本病用抗生素治疗无效，可参考猪传染性胃肠炎的防治 办法。 在本病流行地区可对怀孕母猪在分娩前2周，以病猪粪 便或小肠内容物进行人工感染（返饲），以刺激其产生 乳源抗体，以缩短本病的流行。
应用抗生素（四环素、庆大霉素）防止继发细菌性感 染。 病猪群饮用口服盐溶液（常用处方为：氯化钠3.5克， 氯化钾1.5克，碳酸氢钠2.5克，葡萄糖20克，常水 1000毫升）。
白细胞干扰素2000～3000国际单位，每天1～2次，皮下注射。 盐酸山莨菪碱，仔猪5毫升，大猪20毫升，每天一次，后海穴 注射。 中药处方：党参、白术、茯苓各50克，煨木香、藿香、炮姜、 炙甘草各30克。取汁加入白糖200克拌少量饲料喂服。
后海穴
(3)加强营养，控制霉菌毒素中毒，可以在饲料中添加一定 比例的脱霉剂，同时加入维生素 (4)提高温度，特别是妊娠舍、产房、保育舍。大环境温度 妊娠舍不低于15℃、产房产前大环境为23℃、分娩第一周 为25℃，以后每周降2பைடு நூலகம்，保育舍第一周28℃，以后每周降 2℃，至22℃止；产房小环境温度用红外灯和电热板，第一 周为32℃，以后每周降2℃。猪的饮水温度不低于20℃。将 产前2周以上的母猪赶入产房，产房提前加温。
(5)定期做猪场保健，全场猪群每月一周同步保健，控制细 菌性疾病的滋生。 母猪分娩后的3天保健和对仔猪的3针保健，可选用高热金针 先注射液，母猪产仔当天注射10毫升～20毫升/头，若有感 染者，产后3天再注射10毫升～20毫升/头，仔猪3针保健即 出生后的3天、7天、21天，分别肌注0.5毫升、0.5毫升、1 毫升。
猪流行性腹泻的思考总结
44猪业科学 SWINE INDUSTRY SCIENCE 2023年40卷第7期主题策划F E A T U R E猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus ，PEDV ）引起的一种临床上以呕吐、腹泻和脱水为特征的高度接触性肠道传染病，不同日龄的猪均可感染。
猪流行腹泻病毒是一种有囊膜的单股正链RNA 病毒。
该病在猪群中反复暴发、引起仔猪高死亡率接近100%，但母猪的发病率变化大，妊娠母猪可引起轻度腹泻、无乳以及生殖周期紊乱。
PEDV 的潜伏期约为两天，但是根据饲养环境及试验条件的不同，潜伏期在 1～8 d 不等。
该病与TGEV 在临床症状、流行特点及病理变化等方面极为相似，临床上极易误诊。
近年来PED 在美洲以及亚洲地区出现大规模的暴发，我国疫情频发，严重影响养猪健康发展。
1 猪流行性腹泻的暴发流行与历史沿革1971年，猪流行性腹泻首次在英国报道，被称为“流行性病毒腹泻病”（Epidemic viral diarrhea ，EVD ），随后几年，在几个欧洲国家相继发现类似的病毒性腹泻流行病，经过与已知的猪传染性胃肠炎病毒和肠道病原微生物的比对，将其命名为EVD II 以便与其他病原微生物相区分。
1978年，比利时猪流行性腹泻的思考总结郭昌明，王新平（吉林大学动物医学学院，吉林 长春 130062）基金项目：吉林省畜牧管理局2023年吉林生猪提质增效技术推广与示范项目作者简介：郭昌明（1980—），男，博士，副教授，研究方向为猪病学、动物疫病检验学、兽医诊断学，Email ：****************科学家Debouck 首次从EVD 样本中分离出病毒，并命名为冠状病毒CV777；病毒接种试验证明，CV777病毒可引起猪群发生EVD II 型腹泻。
1988年，Hofmann 和Wyler 通过向培养基中添加胰蛋白酶，使PEDV 在非洲绿猴肾（Vero ）细胞中连续传代并分离出病毒。
猪流行性腹泻微量血清中和试验的建立和应用
结论与展望
本次演示通过建立猪流行性腹泻微量血清中和试验，验证了其在检测PEDV感 染方面的灵敏度和特异性。该方法具有操作简便、快速等优点，适合临床和基层 应用。然而，MSNT也存在一定的不足之处，如需使用活的病毒进行攻击实验等。 在未来的研究中，我们将进一步探索其他快速、灵敏的诊断方法，如分子生物学 技术等，以期为PED的诊断和防控提供更多有效的手段。我们还将加强PED的基础 研究，为其防控策略的制定提供科学依断方法，本次演示采用了微量血清中和试验 （MSNT）。该方法通过检测血清中的中和抗体来间接检测PEDV感染情况，具有操 作简便、灵敏度高的优点。
实验材料包括PEDV标准株、实验猪、特异性抗体阳性血清和阴性血清。首先， 将PEDV标准株进行稀释，使其达到一定浓度，然后与不同稀释度的阳性血清和阴 性血清进行混合，观察病毒的中和情况。通过测定能使病毒完全中和的血清最高 稀释度，即可计算出该血清的中和抗体滴度。
通过图表展示实验结果（如下表）：
实验分析
通过分析实验结果，我们发现MSNT在检测PEDV感染方面具有较高的灵敏度和 特异性。阳性血清的中和抗体滴度随着时间的推移逐渐升高，而阴性血清则保持 较低的抗体滴度，这与PEDV感染仔猪后免疫应答的过程相符。此外，MSNT操作简 便、快速，适合临床和基层应用。然而，MSNT也存在一定的不足之处，如需使用 活的病毒进行攻击实验，存在一定的安全隐患；同时，由于中和抗体的产生需要 一定时间，对于急性感染病例可能存在一定局限性。
猪流行性腹泻微量血清中和试验的 建立和应用
01 引言
03 实验方法 05 实验分析
目录
02 研究现状 04 实验结果 06 结论与展望
引言
猪流行性腹泻（PED）是一种高度接触性的传染性肠道疾病，主要引起猪肠 道绒毛萎缩和上皮细胞损伤，从而影响猪的消化和吸收功能。PED的传播速度快， 病程长，往往给养猪业带来严重的经济损失。为了有效防控PED的传播，本次演 示将围绕猪流行性腹泻微量血清中和试验的建立和应用展开讨论。
一例猪流行性腹泻的诊断和防控
"UANGE' 2021年(第42卷)第3期5.2血清治疗使用牛结节性皮肤病血清进行治疗。
5.3对症治疗用鱼腥草注射液、双黄连注射液、利巴韦林、板蓝根、氨基比林、安乃近等进行对症治疗。
5.4溃疡处理每天使用碘伏(因碘酒刺激皮肤疼痛,溃疡面较大不宜使用)涂敷患部1~2次,能有效控制患部化脓感染,以加快伤口愈合。
5.5做好消毒牛结节性皮肤病牛羊共患，如果牛群或羊群发现病例，应立即停止牛羊混养，并做好隔离消毒工作，以及全圈舍及牛只皮肤的消毒工作。
病毒对强酸和强碱环境均很敏感，如3.0%次氯酸钠、3.0%碘溶液、0.5%新洁而灭溶液等。
5.6媒介控制牛结节性皮肤病在牛运输应激后或蚊蝇滋生的夏季特别容易发生。
因此，应提前做好预防工作。
特别要做好引进牛只运输工具的生物媒介控制工作，彻底杀灭蚊蝇等节肤动物。
如果引进牛只查出阳性，应立即全部退回或扑杀销毁。
(收稿日期：2020-11-26)一例猪流行性腹泻的诊斷和陆扌空王茹(唐河县动物卫生监督所，河南唐河473400)中图分类号:S858.28文献标识码：B1临床发病情况1.1猪场发病情况河南省唐河县源潭镇某规模猪场,生产母猪存栏200头。
2020年11月中旬，销售育肥猪150头，4d后育肥猪群有1%陆续出现食欲不振、精神沉郁、腹泻现象；继而发展到妊娠舍出现10%左右妊娠母猪不食、呕吐、腹泻现象；间隔3d后，产房3日龄以上哺乳仔猪开始发生呕吐、腹泻(以水泻为主)、脱水现象，陆续出现死亡同时产房哺乳母猪也有不同程度的呕吐腹泻症状;半月内初生仔猪7日龄内几乎无一幸免，死亡率达到100%。
至笔者诊断时，该猪群已发病2w时间，母猪群基本无腹泻病例，产房刚出生仔猪仍持续死亡，保育猪发生腹泻后掉膘现象严重。
1.2病理变化尸体消瘦脱水，皮肤暗灰色，皮下干燥,脂肪蜂窝组织表现不佳。
剖解可见小肠膨胀，肠壁变薄.肠系膜充血，小肠、结肠内充满大量黄绿色液体，肾脏水肿,脾脏轻度肿大。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 中国兽医杂志２０１６年（第５２卷）第１０期 ２７ 猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）Ｘｄ—ＤＢ２株 对２ ５日龄仔猪毒力试验
杜久斌，贺 笋，刘小兰，程兰玲，张迪，李延涛，李盛东，袁科 （新疆天康畜牧生物技术股份有限公司，新疆乌鲁木齐８３０００１）
摘要：用生理盐水将猪流行性腹泻病毒细胞分离毒株ＸＪ－ＤＢ２株稀释成含１０ 、１０５和１０。ＴＣＩＤｓｏ（病毒半数细胞感染量） ３个剂量组。将１６头２５日龄健康易感仔猪随机分成４组，每组４头。前３组分别口服１ ｍＬ含有１ｏ４、１０ ＴＣＩＤ５０和１Ｏ。 ＴＣＩＤ 。ＰＥＤＶ ＸＪ。ＤＢ２株病毒液作为攻毒组，最后１组作为阴性对照口服同等量的生理盐水。相同条件下隔离饲喂，连续观 察７ ｄ，攻毒组全部出现猪流行性腹泻临床症状，对照组贝Ｕ无任何临床症状。第７天全部剖杀，观察肠组织病理变化。剖检 结果显示：１０ ＴＣＩＤ如剂量组中有３头猪肠组织均有明显病变（肠壁变薄、臌气，肠内充满黄色液体）而另外１头猪肠组织无 明显病变；１０ ＴＣＩＤ∞和１０ ＴＣＩＤ卯两个剂量组８头仔猪肠组织均出现明显病变；阴性对照组４头仔，猪肠组织均无病变。由 此判断ＸＪ—ＤＢ２株为ＰＥＤＶ强毒株，以１０ ＴＣＩＤｓｏ剂量口服可以致２５日龄仔猪发病。 关键词：仔猪；ＰＥＤＶＸＪ－ＤＢ２株；ＴＣＩＤｓｏ；临床症状；病理变化
中图分类号：￥８５２．６５ １ 文献标志码：Ａ 文章编号：０５２９—６００５（２０１６）１０—００２７—０２ 猪流行性腹泻仅发生于猪，各个年龄段猪均可 感染发病。哺乳仔猪、保育小猪和肥育猪的发病率 很高，但以哺乳仔猪受害最为严重，母猪发病率变 动很大，约为１５％一９０％。病猪是主要传染源，病 毒存在于肠绒毛上皮和肠系膜淋巴结，随粪便排出 后，污染环境、饲料、饮水，以及交通工具及用具而 传染。 经人工发病试验，猪口服ＰＥＤＶ后，潜伏期一般 为２０ ｈ至３ ｄ。在实验室，新生仔猪最早有接种８ ｈ 后就开始发病的，病毒在小肠绒毛上皮细胞内繁 殖，在１６～３０ ｈ达到最大量。由于病毒的侵袭，小 肠上皮细胞变性、绒毛脱落，导致小肠内酶活性明 收稿日期：２０１５—０６－１８ 作者简介：杜久斌（１９７９一），男，兽医师，本科，从事动物疫苗研 发工作，Ｅ－ｍａｉｌ：２２９８９５２３２＠ｑｑ．ｃｏｍ 通讯作者：贺笋，Ｅ—ｍａｉｌ：１８６４６２０６＠１６３．ｃｏｒｎ 显下降，扰乱了消化及细胞运输营养物质和电解 质，引起急性吸收不良。对哺乳仔猪而言，就不能 消化乳中的乳糖和蛋白质，使肠内产生高渗，液体 在肠内滞留，甚至从组织内吸收液体，进而导致腹 泻和脱水，酸中毒而死亡¨ 。 本试验通过对２５日龄仔猪口服ＰＥＤＶＸＪ．ＤＢ２ 株，研究分离毒株ＸＪ－ＤＢ２株对猪致病性的强弱。
１材料与方法 １．１ 材料 细胞：非洲绿猴传代肾细胞（Ｖｅｒｏ）由 本实验室保存。病毒：ＰＥＤＶ分离毒ＸＪ．ＤＢ２株由本 实验室分离保存。细胞培养基及血清：细胞培养基 ＭＥＭ和胎牛血清，均购自Ｈｙｃｌｏｎｅ公司。实验动 物：２５日龄健康易感仔猪（猪流行性腹泻、猪传染性 胃肠炎、猪轮状病毒抗原阴性，猪流行性腹泻中和 抗体效价不高于１：４），与１５日龄时断奶，隔离单独 饲养，饲喂颗粒猪饲料。
能清晰分辨虫体内部各器官，即可取出封片，一般 压制较薄的节片透明时间短，反之则较长。摸索最 佳的染色和透明时间。用此改进的方法制作的曲 子宫绦虫标本，成节中雌雄生殖系统和排泄系统结 构清晰，孕节中子宫和虫卵的结构也很好辨认。
参考文献： ［１］ 汪明．兽医寄生虫学［Ｍ］，３版．北京：中国农业出版社，２００３， １ｎ４—１１
［２］裘学丽，陈艳，牟荣．带绦虫成虫节片染色方法的探讨［Ｊ］．贵 阳医学院学报，２００５，３０（４）：３７６． ［３］ 奚琳琳，杨毅梅．带绦虫妊娠节片孔雀绿染色标本制作［Ｊ］．中 国热带医学，２００８，３（８）：４７４． ［４］ 纪伟华，郭冀玲．带绦虫妊娠节片标本制作方法的研究［Ｊ］．中 国人兽共患病杂志，２００１，１７（４）：７３—７４． ［５］ 王宏运．贝氏莫尼茨绦虫幼节和成节间差异基因的ＥＳＴ研究 ［Ｄ］．新疆：石河子大学，２００７：１１—１６． ［６］ 任成林．绦虫成虫染制方法的改进［Ｊ］．动物学杂志，１９９３，２８ （６）：２８－２９． ２８ 中国Ｗ ￣ － ｔｚ ２０１６年（第５２卷）第１０期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １．２方法 １．２．１ ＰＥＤＶ ＴＣＩＤ５０的测定将ＰＥＤＶ ＤＢ２株细胞传 代毒解冻。用ＤＭＥＭ培养基将病毒作连续１０倍稀 释，即１０～、ｌ０……每个稀释度取１００ ｆｘＬ加入９６ 孔细胞培养板中，随后加入经０．２５％胰酶消化的感 染的宿主细胞１００ Ｌ（细胞含量以１０５／ｍＬ左右为 宜）每个稀释度作８个重复，并设空白细胞培养对 置３７ ｏＣ ５％ＣＯ：培养箱中。逐日观察细胞病变，并 记录细胞病变孔数，连续观察５ ｄ。用Ｒｅｅｄ—Ｍｕｅｎｃｈ 法计算病毒的ＴＣＩＤ… １．２．２试验仔猪中和抗体的测定按１．２．１中方 法进行病毒液ＴＣＩＤ 。的测定。将测定好ＴＣＩＤ铀的毒 液稀释成２００个ＴＣＩＤ 。的病毒悬液。在９６孔微量 培养板中将血清（预先５６℃灭活３０ ｒａｉｎ）作连续倍 比稀释（具体方法是在９６孔板中先加入５０ Ｌ生长 液，再加５０ 待检血清，混匀后，吸５０ Ｌ至下一 孔，如此下去。一直到ｌ：２５６）每个稀释度作４孑Ｌ。 在上述各孔内加入５０ 稀的病毒液，混匀。同时 设待检血清毒性对照，阴、阳性血清对照，病毒对照 和正常细胞对照，其中病毒对照要作２００个ＴＣＩＤ 。、 ２０个ＴＣＩＤ５ｏ、２个ＴＣＩＤ５０、０．２个ＴＣＩＤ５ｏ４个不同浓 度。将９６孔细胞培养板放人３７℃５％ＣＯ：培养箱 中作用４５ ｒａｉｎ～６０ ｍｉｎ。感作完成后每孔加人 １００ Ｌ细胞悬液，继续置３７℃５％ＣＯ：培养箱中 培养，逐日观察并记录结果，一般观察５～６ ｄ。结果 计算，按Ｒｅｅｄ—Ｍｕｅｎｃｈ两氏法或Ｋｓｒｂｅｒ法进行 计算。 １．２．３攻毒 将试验仔猪随机分成４组，每组４ 头。分别用ｌ０ 、１０ 、１０ ３个剂量ＰＥＤＶ分离毒ｘＪ— ＤＢ一２株和生理盐水１ ｍＬ对４个试验组仔猪进行口 服，相同条件下饲喂，连续观察７ ｄ并记录临床 症状。 １．２．４剖检７日后所有猪只剖检观察肠组织病 理变化
２ 结果 ２．１ ＰＥＤＶ ＴＣＩＤ ＰＥＤＶ分离毒株ＤＢ一２株１９代 细胞毒ＴＣＩＤ铀＝１．０×１０。／ｍＬ。 ２．２试验仔猪攻毒前ＰＥＤＶ抗体１６只２５日龄 仔猪血清检测中和抗体均不高于１：４。 ２．３ 临床症状所有仔猪在攻毒后观察临床症状 变化，攻毒组仔猪出现明显的临床症状呕吐、腹泻、 脱水等症状，而阴性对照组均无临床症状。每头仔 猪的临床观察结果见表１。 ２．４剖检结果 通过剖检发现，１０ ＴＣＩＤ 攻毒剂 量组有３头仔猪出现明显的肠组织病变（肠壁变
表１ 攻毒后仔猪临床症状观察结果 薄、臌气、内充满黄色液体或泡沫）１头则无明显的 肠病变。１０ 、１０ ＴＣＩＤ 。两个剂量组，８头仔猪都出 现明显的肠病变。阴性对照组肠组织正常。
３讨论 本试验选取２５日龄猪流行性腹泻、猪传染性胃 肠炎、猪轮状病毒抗原阴性，猪流行性腹泻中和抗 体效价不高于１：４仔猪进行毒力试验，分别用３个 剂量（１０ 、１０ ＴＣＩＤ轴和１０。ＴＣ１Ｄ铀）的ＰＥＤ￣ｘＪ． ＤＢ２株分离病毒进行口服攻毒，通过临床症状观 察，３个攻毒组部分仔猪在２０ ｈ左右部分猪出现呕 吐症状，且呕吐物中含有泡沫，特别是进食或饮水 后。３０ ｈ左右出现腹泻、震颤、行动迟缓等症状。 ７０ ｈ攻毒组仔猪全部表现精神沉郁、嗜睡、扎堆、驱 赶不动，行动迟缓，站立震颤、腹泻、脱水等症状，部 分呕吐仔猪症状变轻或消失。在整个发病过程中， 每头攻毒仔猪虽然发病程度轻重不同，但都会出现 腹泻症状。２５日龄仔猪攻毒后，呕吐物为黄色液 体，腹泻物为黑色黏稠水样液体，这与两周龄内仔 猪症状不同（两周龄内仔猪呕吐物为黄色液体，有 凝乳块。腹泻物为黄色或黄绿色液体 ）这可能与 仔猪的饮食、日龄有关，其他症状均与两，周龄内仔 猪感染ＰＥＤＶ症状相同。 剖检１０ ＴＣＩＤ 。攻毒剂量组肠组织病变有１头 轻微，其余３头肠组织病变很明显，１０ 、１０。ＴＣＩＤ 攻毒剂量组８头仔猪肠组织病变明显，阴性对组４ 头肠组织正常。所有仔猪肠病变主要体现在小肠 部分，与报道的猪流行性腹泻病毒在人工感染仔猪 体内的分布中剖检结果相一致 ，ＰＥＤＶ ＸＪ—ＤＢ２株 只引起猪的局部感染。 综上所述，ＰＥＤＶ ＸＪ—ＤＢ２株细胞适应毒株为强 致病性毒株，结合临床症状和剖检肠病变程度我们 认为１０ ＴＣＩＤ 剂量可致２５日龄仔猪发病，至于更 低的剂量能否使２５日龄仔猪发病还需进一步验证。
参考文献： ［１］钱永清，邹勇，何锡忠，等．猪流行性腹泻、传染性胃肠炎和猪 轮状病毒病及其防治［Ｊ］．猪病防治与保健，２００４，６：２８—３ｔ ［２］ 王增汁．冬季养猪谨防猪流行性腹泻［Ｊ］．北方牧、【 ，２０１２ （２）：２０． ［３］ 杨臣，猪流行忡腹泻病毒在人工感染仔猪体内的分布［Ｊ］．中 国人民解放军兽医大学学报，１９８６，６（１）：２１ ２５