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rnai干扰技术原理
rnai干扰技术原理
RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术是一种通过特异性降解靶向基因mRNA的方法，从而抑制目标基因表达的技术。
RNAi 技术的原理源于细胞内天然的基因沉默机制，通过这种机制，细胞可以利用小分子RNA来调控基因表达。
RNAi技术的应用已经在基础研究和临床治疗中取得了重要进展。
RNAi技术的原理基于三个主要分子，小干扰RNA（siRNA）、微小RNA（miRNA）和RNA诱导沉默复合物（RISC）。
siRNA是由外源DNA或RNA转录而来，它可以与靶向基因的mRNA互补配对，从而导致该mRNA的降解。
miRNA则是由内源基因产生的，它们可以与mRNA 的3'非翻译区域互补配对，从而抑制翻译或导致mRNA的降解。
RISC是一个多蛋白复合物，它能够识别并结合siRNA或miRNA，并将其引导到靶向mRNA上，从而促进mRNA的降解或抑制翻译。
RNAi技术的应用非常广泛，包括基因功能研究、药物研发和治疗等领域。
在基因功能研究中，科研人员可以利用RNAi技术靶向性地沉默特定基因，从而研究该基因在细胞生物学和生理学过程中的作用。
在药物研发领域，RNAi技术被用于开发针对特定基因的治疗药物，例如针对癌症和遗传性疾病的治疗。
此外，RNAi技术还被应
用于农业领域，用于改良作物品质和抗病性。
总之，RNAi技术作为一种强大的基因沉默技术，已经在生命科学研究和医学领域发挥了重要作用，并且有着广阔的应用前景。
随着对RNAi技术原理的深入理解和技术的不断改进，相信RNAi技术将会在未来发挥更加重要的作用。
RNA干涉
RNA干涉(RNA interference，RNAi)是1998年由Fire等在线虫中发现的一种转录后的基因沉默(Posttranscriptional gene silencing，PTGS)机制。
双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)能特异地抑制或沉默目的基因表达，产生如同目的基因突变的缺陷表型，这种由dsRNA介导的基因阻抑作用被称为RNAi。
1990年，美国和荷兰的两个转基因植物实验组，在矮牵牛中发现的一种转基因能同时抑制相应的内源基因以及自身表达的基因沉默现象，当时将这种现象称为共抑制。
到1994 年，由Cogni等在真菌中发现转录后的基因沉默现象，在野生型粗糙链胞霉中转入胡萝卜素基因albino 1或albino 3时，发现在部分实验中，内源性al 1或al 3基因的表达水平反而减弱，称此现象为基因压制(quelling)。
1998年，Fire等在线虫中发现了RNAi现象，并揭示了SuGuo发现正义RNA对基因表达也有抑制作用的原因，认为SuGuo发现的这种现象是由于体外转录制备的RNA中污染了微量的双链RNA，而且dsRNA 能比反义RNA或正义RNA更有效地抑制基因的表达，把由RNA引起的基因表达的抑制称为RNA干涉。
最初普遍认为共抑制、基因压制以及RNAi是机制完全不同的基因抑制现象。
但经过科研人员的不断研究，发现在共抑制、真菌中的基因压制以及RNAi现象之间存在着密切的联系。
都是由RNA引起的转录后的基因沉默，可能有共同的生物学意义和相似的作用机制。
但是共抑制与RNAi并不是完全相同，在植物的共抑制中，dsRNA不仅能引起转录后的基因沉默，而且还能引起转录水平的沉默，其可能机制是dsRNA能引起染色质的重组或甲基化而改变其内源基因的序列。
因此，在植物共抑制中还存在RNAi以外的由RNA指导的DNA 甲基化，而引起转录水平抑制的机制。
dsRNA能特异地抑制目的基因的表达，其广泛存在各种有机体中，包括线虫、果蝇、涡虫、水螅、锥虫、真菌、植物以及哺乳动物。
RNA干扰——基因表达调控的新策略
RNA干扰——基因表达调控的新策略随着生命科学的快速发展和深入探索，科学家们发现了越来越多的神奇生物学现象和生理功能。
其中，一个颇受关注的领域就是RNA干扰技术。
RNA干扰技术是一种基于RNA的分子机制，可以调控基因表达水平，从而实现对生物体的基因调控。
该技术具有精准、高效、可重复等优点，被广泛应用于基因治疗、疾病治疗、生物学研究等多个领域。
RNA干扰技术的基本原理RNA干扰技术是基于RNA分子的干扰机制，将特殊的RNA分子导入到靶细胞内，通过特定的反应作用可抑制或沉默目标基因的表达。
RNA干扰技术的基本原理为：首先，利用外源模板DNA合成小分子RNA，这种RNA又叫做小干扰RNA（siRNA）。
然后，将siRNA导入到靶细胞内部的信使RNA（mRNA）上，与mRNA区域上的蛋白质组成复合物，从而抑制mRNA的翻译和转录。
最终，目标基因的表达水平降低，以达到基因调控的效果。
在RNA干扰技术的实践中，siRNA的合成和导入技术是关键。
siRNA的合成通常采用化学合成或内源合成两种方法。
化学合成法是将单个核苷酸单元逐个连接而成，具有高度可控性和数量批量生产的优点；内源合成是通过RNA聚合酶进行合成，通常用于在细胞和试管内合成较长的RNA链。
而将siRNA导入到靶细胞内的技术又分为两种：一种是利用RNA的内在性质进入细胞内部，称作内源性进入途径；另一种是通过特殊的载体物质将siRNA导入到细胞内部，称作外源性进入途径。
RNA干扰技术的应用领域RNA干扰技术具有成本低、操作简单、精准可控等优点，近年来在生物学、医学、生命科学等领域得到了广泛应用，丰富了人们的各种科学研究和生产实践。
主要应用领域包括：1. 基因治疗。
RNA干扰技术可用于基因疾病的治疗。
通过siRNA干扰机制来抑制病原基因的表达，从而防止疾病的进一步恶化。
RNA干扰技术可以为基因治疗提供新的思路和方法，帮助人们更好地治疗基因疾病。
2. 肿瘤治疗。
rna干扰的基本原理
rna干扰的基本原理RNA干扰技术是一种特殊的基因沉默技术，它通过人工合成的小干扰RNA（siRNA）或长干扰RNA（shRNA）引导RNA诱导靶向性降解特定基因的mRNA，从而达到抑制或沉默该基因表达的目的。
RNA干扰技术的发现和应用，为基因研究和基因治疗等领域提供了一个强有力的工具。
以下为RNA干扰的基本原理。
RNA干扰分为两种类型，分别是siRNA干扰和shRNA干扰。
首先是siRNA干扰，其中“si”指短干扰RNA。
干扰RNA在合成后，将被分解成21-23个碱基对的双链RNA，其中一个链称为“导引链”，该链的末端含有两个双脱氧核苷酸，为其引导RNA诱导靶向性降解目标mRNA提供了稳定性和特异性。
另一个链称为“反义链”，是导引链的完全互补，在小干扰RNA中起到了次要的配对作用。
在siRNA寻找目标时，导引链与目标mRNA的特定序列互相配对，而反义链与目标mRNA的另一段互补，最终引导该目标RNA被RNA酶切割。
其次是shRNA干扰，其中“sh”指短发夹RNA。
shRNA序列比siRNA序列长，例如，shRNA可以含有数百个核苷酸。
RNA干扰具有持续的靶向基因沉默作用，可以通过载体转导到目标细胞，并成为RNA酶III的底物，从而形成长时间的干扰效应。
shRNA启动子构成了RNA多聚酶III识别的序列，包括人类U6和霉红菌H1等次要RNA启动子。
shRNA被RNA聚合酶III识别和切割，将shRNA转化为短干扰RNA，它们寻找目标RNA，最终被RNA酶切割。
下面是RNA干扰的应用：RNA干扰应用广泛，比如应用于生物学基础研究、基因治疗、农业等领域。
在生物学研究中，使用RNA干扰可以比较准确地测量基因的功能，识别重要基因的突变，并清楚地了解它们的作用。
在基因治疗中，RNA干扰可用于治疗包括癌症、心血管疾病、自身免疫疾病和病原体感染等疾病。
在农业领域中，可使用基于RNA干扰技术的生物农药来控制有害生物的数量，并增加作物的产量和耐性。
RNA干扰技术可实现基因静默
RNA干扰技术可实现基因静默摘要：RNA干扰技术是一种通过特异性降解特定基因的mRNA分子来抑制基因表达的方法。
这种技术通过使用siRNA或miRNA分子来静默特定基因，从而改变细胞的功能和表型。
RNA干扰在基因研究、疾病治疗和农业改良等方面具有巨大的潜力。
引言：基因静默是一种在细胞中降低或抑制基因表达的过程。
这在研究基因功能和治疗疾病时具有重要意义。
RNA干扰技术作为一种重要的基因静默方法，已经被广泛应用于基因研究、疾病治疗和农业改良等领域。
一、RNA干扰的基本原理RNA干扰是一种通过使用小分子RNA分子，如siRNA（small interfering RNA）或miRNA（micro RNA），来抑制特定基因表达的技术。
这些小分子RNA能够与目标基因的mRNA序列互补配对，导致mRNA降解或翻译抑制，从而实现基因的静默。
二、RNA干扰的应用1. 基因功能研究：RNA干扰技术可用于研究基因功能，通过静默特定基因，观察细胞功能和表型的变化，从而揭示基因在细胞活动和生物过程中的作用。
2. 疾病治疗：RNA干扰技术可以用于治疗多种疾病，特别是那些由特定基因突变或过表达导致的疾病，如癌症、遗传性疾病等。
通过静默相关基因，可以降低疾病相关的蛋白表达，减轻病情。
3. 农业改良：RNA干扰技术在农业中也有广泛的应用，可以静默植物中不需要或有害的基因，提高植物的抗性、产量和品质。
三、RNA干扰技术的优势和挑战1. 优势：a. 高度特异性：RNA干扰技术可精确地静默特定基因，而不影响其他基因的表达。
b. 灵活性：通过设计合适的siRNA或miRNA分子，可以针对不同的基因进行干扰。
c. 直接性：RNA干扰技术可以直接作用于目标基因的mRNA分子，快速实现基因的静默。
d. 通用性：RNA干扰技术适用于多种生物体和细胞类型，具有广泛的应用前景。
2. 挑战：a. 递送问题：RNA干扰技术需要有效地将siRNA或miRNA分子送入细胞内，这对于一些细胞类型和组织来说可能是挑战性的。
rna干扰技术的原理及应用
RNA干扰技术的原理及应用1. 引言RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术是一种通过介导靶向特定基因的mRNA降解或抑制转录来实现基因沉默的技术。
其原理首次由Craig Mello和Andrew Fire于1998年提出，并因此获得了2006年诺贝尔生理学或医学奖。
RNA干扰技术已广泛应用于基因功能研究、疾病治疗和农业领域等。
2. RNA干扰技术的原理RNA干扰技术的原理基于转录后基因沉默的现象。
该技术通过使用双链小分子RNA（small interfering RNA，siRNA）或合成的微小干扰RNA（short hairpin RNA，shRNA）介导基因的沉默。
2.1 siRNA的介导siRNA是由20到25个核苷酸的dsRNA分子，其中一个链作为导向链，在靶向特异性基因上结合，并介导RNA酶复合物（RNA-induced silencing complex，RISC）的形成。
RISC使导向链与靶基因的mRNA亚区特异结合，导致mRNA降解或翻译抑制，最终达到沉默目标基因的效果。
2.2 shRNA的介导shRNA是由一个长的RNA分子，其中含有自身能够形成悬臂结构的序列和与目标基因对应的序列。
细胞内的RNA聚合酶可以识别和转录shRNA的模板，生成shRNA前体。
该前体在细胞中经过剪接和成熟，形成siRNA，进而介导目标基因的沉默。
3. RNA干扰技术的应用RNA干扰技术在许多领域中都有重要的应用，包括基因功能研究、疾病治疗和农业。
3.1 基因功能研究RNA干扰技术已被广泛应用于基因功能研究领域。
通过沉默特定基因，研究人员可以探索其在细胞过程和生物学中的作用。
该技术可以帮助研究人员确定基因的功能和相互作用，解析细胞信号传导途径，并识别可能与疾病相关的新靶点。
3.2 疾病治疗RNA干扰技术在疾病治疗领域表现出巨大的潜力。
通过选择性地沉默与病理过程相关的基因，可以为开发治疗癌症、遗传性疾病和病毒感染等疾病的新型治疗方法提供理论基础。
RNA干扰和RNA介导的基因沉默机制
RNA干扰和RNA介导的基因沉默机制随着分子生物学的发展，人们对RNA的研究也变得越来越深入。
RNA分子在细胞中发挥着重要的生物学功能，包括转录、翻译和调控等方面。
其中，RNA干扰和RNA介导的基因沉默机制是近年来备受关注的研究热点之一。
RNA干扰是指短链RNA分子通过与靶基因的mRNA结合，引发RNA分解或抑制翻译的作用，从而达到基因沉默的效果。
RNA 干扰技术的出现极大地促进了基因功能研究的发展，尤其是基因调控领域。
RNA干扰技术可用于探究基因的生物学功能，如基因调控、细胞增殖和分化等过程，也可用于治疗疾病，如癌症、呼吸系统疾病等。
RNA介导的基因沉默机制是一种生物学现象，由一类小分子RNA分子调控。
这些RNA分子被称为microRNA（miRNA）和small interfering RNA（siRNA）。
miRNA和siRNA可以在细胞中通过与靶基因mRNA结合形成RNA-蛋白复合体，从而导致基因沉默。
miRNA通常通过降解靶mRNA或抑制其翻译，而siRNA 只是通过破坏靶mRNA标的完整性，达到抑制其翻译的效果。
在RNA干扰和RNA介导的基因沉默机制中，核心的分子是RNA分子。
RNA分子的结构和功能极其复杂，其正常的生物学功能至关重要。
RNA干扰和RNA介导的基因沉默机制在生物学领域的发现，不仅深化了我们对RNA分子的认识，同时为疾病治疗和新药研发提供了新的思路和途径。
除RNA干扰和RNA介导的基因沉默机制外，还有一些其他类型的RNA介导的基因调控，如piwi-interacting RNA（piRNA）、long no-coding RNA（lncRNA）等。
piRNA是一类在生殖细胞中表达的长链RNA，可保护基因组免受转座子和逆转录病毒的攻击。
lncRNA是一类长度超过200nt的RNA分子，其调控机制复杂多样，参与转录调控、翻译调控、信号转导等各方面。
总的来说，RNA干扰和RNA介导的基因沉默机制以其独特的作用方式和调控范围而备受关注。
RNA干扰技术的发现与应用
RNA干扰技术的发现与应用RNA干扰（RNA interference，RNAi）是一种影响基因表达的基因沉默技术。
它归功于安德鲁·菲尔（Andrew Fire）和克雷格·梅洛（Craig Mello）在1998年的一项研究。
他们使用小分子RNA （siRNA）来强制性降低瓢虫的pigmentary determinacy基因的表达。
这一发现成为了探索多种生命学问题的一种强有力的工具。
本文将介绍RNA干扰技术的发现和应用。
RNAi技术的发现RNA干扰技术的发现是基于对食蚜蝇（Drosophila melanogaster）早期胚胎发育的研究。
Fire和Mello在1998年的一项研究中，通过注射双链RNA分子为食蚜蝇编码的目标基因，发现这些RNA分子可以强制性降低目标基因的表达。
他们发现这种现象是由于RNA分子的特异性结合导致的，这引起了RNAi技术的发展。
RNA干扰技术的机制RNAi技术的核心是siRNA和miRNA，它们可以靶向相应mRNA分子，引导靶向RNA酶介导的无义、剪切或降解进而降低目标基因表达。
siRNA是难以由生物体自己产生的小分子RNA，通常在初始病毒感染后进入机体。
一旦存在目标基因的RNA，siRNA就会寻找其靶标并将其切断，导致目标基因表达降低，从而实现基因沉默。
miRNA除了使用相同的mechanism，还可以调控多个目标基因，并在调节上相对较慢。
RNAi技术的应用RNAi技术可以用于基因功能研究、疾病治疗和转基因植物制作等方面。
在基因功能研究方面，RNAi技术可以用于澄清目标基因对生物的影响，以及发现新的生物过程或疾病机理。
在疾病治疗方面，RNAi技术可以用于沉默癌细胞中的癌症相关基因，从而导致肿瘤细胞减少或消除。
同时，还有一些正在开发中的RNAi药物，这些药物可以在靶直接进行RNAi技术，改善人类疾病。
除此之外，RNAi技术还可以用于转基因植物制作中。
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RNA干扰 科技名词定义 中文名称： RNA干扰 英文名称： RNA interference;RNAi 定义1： 与靶基因同源的双链RNA诱导的特异转录后基因沉默现象。其作用机制是双链RNA被特异的核酸酶降解，产生干扰小RNA(siRNA)，这些siRNA与同源的靶RNA互补结合，特异性酶降解靶RNA，从而抑制、下调基因表达。已经发展成为基因治疗、基因结构功能研究的快速而有效的方法。 所属学科： 生物化学与分子生物学（一级学科）；核酸与基因（二级学科） 定义2： 引起基因沉默的一种技术，将根据基因序列制备的双链RNA注入体内，可引起该基因编码的mRNA降解，从而抑制了该基因的功能。 所属学科： 细胞生物学（一级学科）；细胞生物学技术（二级学科） 定义3： 双链RNA有效地阻断靶基因表达的现象。 所属学科： 遗传学（一级学科）；分子遗传学（二级学科） 本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布
百科名片
RNA干扰模式图
RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。
目录 简介 发现 作用机制 特点 制备方法 应用 相关知识 简介 发现 作用机制 特点 制备方法 应用 相关知识 展开
编辑本段简介 近几年来RNAi研究取得了突破性进展，被《Science》杂志评为2001年的十大科学进展之一，并名列2002年十大科学进展之首。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。
编辑本段发现 RNAi是在研究秀丽新小杆线虫（C. elegans）反义RNA（antisense RNA）的过程
RNAi实验图片 中发现的，由dsRNA介导的同源RNA降解过程。1995年，Guo等发现注射正义RNA（sense RNA）和反义RNA均能 有效并特异性地抑制秀丽新小杆线虫par-1基因的表达，该结果不能使用反义RNA技术的理论做出合理解释。直到1998年，Fire等证实Guo等发现的正义RNA抑制同源基因表达的现象是由于体外转录制备的RNA中污染了微量dsRNA而引发，并将这一现象命名为RNAi。 此后dsRNA介导的RNAi现象陆续发现于真菌、果蝇、拟南芥、锥虫、水螅、涡虫、斑马鱼等多种真核生物中，并逐渐证实植物中的转录后基因沉默（posttranscriptional gene silencing，PTGS）、共抑制（cosuppression）及RNA介导的病毒抗性、真菌的抑制（quelling）现象均属于RNAi在不同物种的表现形式。 1999年，Hamilton等首次在PTGS植株中发现了长度为25nt的RNA中间产物。2000年，Zamore和Hammond等使用体外培养的果蝇细胞进行研究发现，外源性dsRNA通过耗能过程降解成21-23nt的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）引发RNAi。 2000年，Wianny和Svoboda等分别证实在小鼠胚胎细胞和卵母细胞中dsRNA能引发RNAi效应。2001年，Elbashir等证实21nt的siRNA可在避免激活dsRNA依赖的蛋白激酶(dsRNA-dependent protein kinase，PKR)和2',5'-寡聚腺苷酸合成酶(2',5'-oligoadenylate synthetase，2',5'-OAS)信号转导途径的同时，有效抑制人胚肾293细胞、Hela细胞等哺乳动物细胞中目的基因的表达。 2002年，Brummelkamp等首次使用小鼠H1启动子构建了小发卡RNA（small hairpin RNA，shRNA）表达载体pSUPER，并证实转染该载体可有效、特异性地剔除哺乳动物细胞内目的基因的表达，为利用RNAi技术进行基因治疗研究奠定了基础。
编辑本段作用机制 病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内，并利用宿主细胞进行转录时，常产生一些dsRNA。宿主细胞对这些dsRNA迅即产生反应，
作用机制 其胞质中的核酸内切酶Dicer将dsRNA切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA（大约21～23 bp），即siRNA。siRNA在细胞内RNA解旋酶的作用下解链成正义链和反义链，继之由反义siRNA再与体内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)。RISC与外源性基因表达的mRNA的同源区进行特异性结合，RISC具有核酸酶的功能，在结合部位切割mRNA，切割位点即是与siRNA中反义链互补结合的两端。被切割后的断裂mRNA随即降解，从而诱发宿主细胞针对这些mRNA的降解反应。siRNA不仅能引导RISC切割同源单链mRNA，而且可作为引物与靶RNA结合并在RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase，RdRP)作用下合成更多新的dsRNA，新合成的dsRNA再由Dicer切割产生大量的次级siRNA，从而使RNAi的作用进一步放大，最终将靶mRNA完全降解。 RNAi发生于除原核生物以外的所有真核生物细胞内。需要说明的是，由于dsRNA抑制基因表达具有潜在高效性，任何导致正常机体dsRNA形成的情况都会引起不需要的相应基因沉寂。所以正常机体内各种基因有效表达有一套严密防止dsRNA形成的机制。 怀特黑德生物医学研究所的本杰明·刘易斯等研究人员发现小RNA能通过阻断蛋白质合成的方式调控基因表达。他们借助一个计算模型来确定小RNA和对应的基因，发现了miRNA控制很大一部分生命功能的证据。 研究人员比较了人类和狗、鸡、鼠的基因组，对这几个物种共有的蛋白质合成基因与miRNA寻求对应关系。结果发现，尽管这几个物种在3.1亿年前就开始“分家”各自进化，但它们基因组中受miRNA调控的基因都占三分之一左右，而且这些基因在进化过程中都得以保存而未发生变化。刘易斯说，随着更多的基因组数据发布以及实验技术的进步，还可能发现更多的基因是由小RNA调控的。 RNAi具有的特征 ①RNAi是转录后水平的基因沉默机制； ②RNAi具有很高的特异性，只降解与之序列相应的单个内源基因的mRNA； ③RNAi抑制基因表达具有很高的效率，表型可以达到缺失突变体表型的程度，而且相对很少量的dsRNA分子(数量远远少于内源mRNA的数量)就能完全抑制相应基因的表达，是以催化放大的方式进行的； ④RNAi抑制基因表达的效应可以穿过细胞界限，在不同细胞间长距离传递和维持信号甚至传播至整个有机体以及可遗传等特点; ⑤dsRNA不得短于21个碱基，并且长链dsRNA也在细胞内被Dicer酶切割为21 bp左右的siRNA，并由siRNA来介导mRNA切割。而且大于30 bp的dsRNA不能在哺乳动物中诱导特异的RNA干扰，而是细胞非特异性和全面的基因表达受抑和凋亡； ⑥ATP依赖性：在去除ATP的样品中RNA干扰现象降低或消失显示RNA干扰是一个ATP依赖的过程。可能是Diecer和RISC的酶切反应必须由ATP提供能量。
编辑本段特点 高效性：Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的，只是高浓度起始的更有效些。将双链RNA浓度降低到1.5 nmol/L时产生的基因沉默效果变化 不大，只有当浓度降低到0.05 nmol/L时，沉默的效果才消失。Holen等也证实1～100 nmol/L的双链RNA浓度对基因沉默的效果是一致的。这说明双链RNA介导的基因沉默效率是相当高的。
RNAi作用机制 需要ATP：Zamore等认为RNAi过程中至少有2个步骤需要能量的供给：一是长的双链RNA被 Dicer所酶切产生双链RNA；二是在双链RNA与RISC结合解链后形成有活性的RISC。 特异性：Elbashir等和Brummel kamp等发现在21～23个碱基对中有1～2个碱基错配会大大降低对靶mRNA的降解效果。 位置效应：Holen等根据人TF(tissue factor)不同的位置各合成了4组双链RNA来检测不同位置的双链RNA对基因沉默效率的影响。在不同浓度和不同类型的细胞中，hTF167i和hTF372i能够抑制85％～90％的基因活性，hTF562i只能抑制部分基因活性，而hTF478i则几乎没有抑制基因的活性。他们还以hTF167为中心依次相差3个碱基对在其左右各合成了几组双链RNA，有趣的是它们所能抑制该基因活性的能力以hTF167为中心依次递减。特别是hTF158i和 hTF161i只与hTF167i相距9个和6个碱基，但它们几乎没有抑制该基因活性的能力。结果还表明双链RNA对mRNA的结合部位有碱基偏好性，相对而言，GC含量较低的mRNA被沉默效果较好。 竞争效应：Hoten等将10 nmol/L和30 nmol/L的hTF167i相比，两者的沉默基因效果无差异，但将20 nmol/L基因抑制效果很差的PSK314i和10 nmol/L的hTF167i相混和后，hTF167i产生的抑制效果明显降低。 可传播性：在线虫中，双链RNA可以从起始位置传播到远的地方，甚至于全身。Feinberg 和Hunter在线虫细胞膜上发现一种跨膜蛋白SID1，它可以将双链RNA转运出细胞，因此系统性的RNAi包括了SID1介导的双链 RNA在细胞间的运输。但在果蝇上并未发现有此基因的同源物，因此在果蝇上通过注射产生的RNAi不能扩散。
编辑本段制备方法
化学合成 许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为