还原糖的测定国标法
还原糖测定法ZBX66040—87
还原糖测定法ZB X 66040中华人民共和国专业标准，还原糖测定法ZB X 66040—87Determination of reduced sugar━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1 亚铁氰化钾快速法1.1 试剂与溶液1、费林氏甲液称取分析纯硫酸铜(CuSO4·5H2O)15g及四甲基蓝(次甲基蓝) 0.05g,用蒸馏水溶解,淀容至1000mL。
2、费林氏乙液称取分析纯酒石酸钾钠50g,分析纯氢氧化钠54g及分析纯亚铁氰化钾4g,用蒸馏水溶解,定容至1000mL。
3、乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌,加3ml冰乙酸，加水稀释至100ml.4、亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100ml5、0.1%葡萄糖标准溶液精确称取在105℃烘2～3h至恒重的分析纯无水葡萄糖1.000g,放入100mL烧杯中,用蒸馏水溶解,定容至1000mL,为防染菌,可加5mL浓盐酸后再定容。
1.2 测定方法1.2.1 样品处理及吸取精确吸取样品10mL,用蒸馏水稀释定容至100mL,摇匀吸取稀释液1mL进行测定。
稀释度及吸取量根据含糖量可予增减。
1.2.2 空白滴定精确吸取费林甲、乙液各5mL放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL。
再用滴定管加入0.1%葡萄糖标准液9mL。
摇匀在电炉(或煤气灯)上加热,使其在2min内沸腾,沸腾30s后,匀速滴入0.1%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点。
记录沸腾前后共耗用葡萄糖液毫升数(A)。
1.2.3 预备滴定精确吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL,再加1mL10%样品稀释液。
根据样品含糖量的高低(估计数),可用糖液滴定管先加入一定量的0.1%葡萄糖液(空白滴定耗用葡萄糖液一般在10mL以上),摇匀加热,沸腾30S后,匀速滴入0.1%葡萄糖液,至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用0.1%葡萄糖标准液毫升数,作正式滴定时参考用。
还原糖的测定方法还原糖和总糖的测定
还原糖的测定方法还原糖和总糖的测定还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关1系，利用分光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1( 实验材料小麦面粉;精密pH 试纸。
2( 主要仪器(1)具塞玻璃刻度试管:20mL×11(2)大离心管:50mL×2(3)烧杯:100mL×1(4)三角瓶:100mL×1(5)容量瓶:100mL×3(6)刻度吸管:1mL×1;2mL×2;10mL×1(7)恒温水浴锅(8)沸水浴(9)离心机(10)扭力天平(11)分光光度计3( 试剂(1)1mg/mL 葡萄糖标准液2准确称取80?烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4?冰箱中保存备用。
(2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
食品中还原糖的测定方法
食品中还原糖的测定方法1. 概述还原糖（Reducing sugar）是指具有还原性的碳水化合物，能够还原其他物质。
在食品中，还原糖广泛存在于各种食材中，包括水果、蔬菜、谷物等。
准确测定食品中还原糖的含量对于食品质量的评估和营养分析具有重要意义。
本文将介绍食品中还原糖的测定方法。
2. 基本原理还原糖测定的基本原理是利用还原糖与碱性溶液中的某些金属离子（如铜离子）发生氧化还原反应产生沉淀物的特性。
在碱性条件下，还原糖与铜离子发生氧化反应，将铜离子还原为氧化铜（Cu2O），同时还原糖自身被氧化。
生成的氧化铜沉淀可以通过比色法或电化学法进行测定，从而确定还原糖的含量。
3. 还原糖测定方法3.1 Benedict’s试剂法Benedict’s试剂是一种常用于测定还原糖含量的试剂。
其成分包括硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸三钠。
该方法需要将待测溶液与Benedict’s试剂混合，加热反应一段时间后，观察溶液颜色的变化，通过比色法确定还原糖的含量。
实验步骤：1.准备试样：将待测食品样品加入适量的蒸馏水，搅拌均匀。
2.配制Benedict’s试剂：按照一定比例将硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸三钠溶解在蒸馏水中，得到Benedict’s试剂。
3.反应：将试样加入Benedict’s试剂中，加热反应5分钟。
4.观察：根据溶液颜色的变化，可以初步估计还原糖的含量。
优缺点：•优点：操作简便、成本低廉。
•缺点：适用范围有限，无法测定低浓度还原糖。
3.2 蔗糖氧化法蔗糖氧化法是利用蔗糖与硫酸铜和氯化铜反应生成氧化铜沉淀的特性，间接测定还原糖的含量。
该方法适用于含有蔗糖的食品样品。
实验步骤：1.准备试样：将待测食品样品加入适量的蒸馏水，搅拌均匀。
2.氧化反应：将试样加入含有硫酸铜和氯化铜的试剂中，反应一定时间。
3.沉淀溶解：将反应后的沉淀溶解，并根据氧化铜溶液的颜色进行测定。
4.计算含量：根据溶液颜色的浓度，计算出还原糖的含量。
优缺点：•优点：适用范围广泛，可以测定含有蔗糖的食品样品。
还原糖测定方法
还原糖测定方法一、原理3，5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，可在最大吸收波长540nm处进行比色测定还原糖含量。
二、试剂和溶液除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。
1、DNS试剂配置：将7.5g 3，5-二硝基水杨酸和14.0gNaOH充分溶解在l000ml 水中，加入216.0g酒石酸钾钠、5.6ml预先在50℃水浴中溶化的苯酚和6.0g偏重亚硫酸钠，充分溶解后盛于棕色瓶中，放置5天后即可使用。
2、NaOH3、酒石酸钾钠4、偏重亚硫酸钠5、葡萄糖6、苯酚三、仪器、设备1、分光光度计：有10mm比色池，可在540nm处测定吸光度2、分析天平3、恒温水浴锅4、振荡器5、容量瓶：100ml6、移液枪：1000ul7、计时器8、棕色试剂瓶9、量筒、试管等四、标准曲线的制作1、精确配制浓度为0.1g/l、0.2g/1、0.3g/l、0.4g/l、0.5g/l、0.6g/1、0.7g/l、0.8g/l、0.9g/l、1.0g/1的标准葡萄糖溶液一组。
2、在试管中加入l ml标准葡萄糖溶液，3mlDNS试剂，沸水浴10min，冷却至室温后，加水至25ml，摇匀。
以水为空白测540nm处的吸光度A。
3、以浓度对吸光度A作标准曲线。
五、测定步骤取适当稀释后的样品l ml，加3mlDNS试剂，沸水浴10min，冷却至室温后，加水至25ml，摇匀。
以水为空白测540nm处的吸光度A。
根据标准曲线计算出其浓度，再乘以稀释倍数，就得到样品中的糖浓度。
食品中总糖、还原糖的测定
食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定1安全性评估谨防试剂灼伤：加入碱性酒石酸铜甲乙液、20%氢氧化钠和2%盐酸试剂时，需佩戴一次性乳胶手套。
谨防玻璃割伤：使用前检查玻璃仪器外观完好无损，使用时注意轻拿轻放，清洗时，需佩戴防割手套。
谨防高温烫伤：滴定时，调节滴定管滴定速度的手需佩戴涂脂手套/一次性乳胶手套，且不裸露手腕皮肤，双手不碰及电陶炉表面。
2 目的规范食品中转化糖（总糖）、还原糖的检测流程，确保检测结果的准确性。
3 范围适用于各类食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定。
4 依据参照GB 5009.7 - 2016食品安全国家标准食品中还原糖的测定、GB 5009.8 - 2016食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定。
5 检测原理还原糖（直接滴定法）：试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以亚甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用葡萄糖标准溶液标定），根据样品液消耗体积计算还原糖含量。
转化糖（总糖）（酸水解-莱茵-埃农氏法）：试样经除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为还原糖，再按还原糖测定，根据样品液消耗体积计算转化糖（总糖）含量。
注：①为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与Cu2O生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀，其反应如下：Cu2O↓+K4Fe(CN)6+H2O=K2Cu2Fe(CN)6+2KOH②碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。
6 试剂和仪器：实验室三级用水6.1 试剂2 %盐酸溶液，20 %氢氧化钠溶液，碱性酒石酸铜溶液：碱性酒石酸铜甲液（以下简称A 液）（硫酸铜+亚甲基蓝）+碱性酒石酸铜乙液（以下简称B液）（酒石酸钾钠+氢氧化钠+亚铁氰化钾），乙酸锌溶液（219 g/L），亚铁氰化钾溶液（106 g/L），葡萄糖标准溶液。
用高锰酸钾滴定法测定食品中的还原糖
用高锰酸钾滴定法测定食品中的还原糖将一定量的样品溶液与过量的碱性酒石酸铜溶液反应，还原糖将Cu2+还原为Cu20，抽滤后得到Cu2O沉淀，向Cu2O沉淀中加入过量的酸性硫酸铁溶液，Cu2O被氧化溶解，而Fe3+被定量地还原为Fe2+；再用高锰酸钾标准溶液滴定所生成的Fe2+，根据高锰酸钾溶液的消耗量可计算出cu2O的量，从附表7中查出与氧化亚铜量相当的还原糖量，即可计算出样品中还原糖的含量。
本法摘自GB／T 5009．7 2003，又称贝尔德蓝(Bertrand)法，适用于各类食品中还原糖的测定，有色样品溶液也不受限制，此法准确度和重现性都优于直接滴定法；但操作复杂、费时，计算测定结果时，需使用特制的高锰酸钾法糖类检索表，反应式如下。
Cu2O+Fe2(SO4)3+H2SO4——2CuSO4+2FeSO4十H2O10FeSO4+2KMnO4+8H2SO4——5Fe2(SO4)3+2MnSO4+K2SO4+8H2OCu2O生成过程同直接滴定法。
1．样品处理(1)乳类、乳制品及含蛋白质的冷食类 2.00～5.00g固体样品(液体样品25.00～50.00mL)，置于250mL容量瓶中，加50mL。
水，摇匀后加10mL碱性酒石酸铜甲液和4mL的1mol／L氢氧化钠溶液，加水定容后混匀，静置30min，用干燥滤纸过滤，弃初滤液后其余滤液待测。
(2)含酒精饮料 100mL样液，置于蒸发皿中，用1mol／L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积的1／4后，移入250mL容量瓶中，加5OmL水，混匀，以下步骤同上类样品中“加10mL碱性酒石酸铜甲液”相同操作。
(3)含淀粉量高的食品 10.00～20.00g样品，置于250mL容量瓶中，加水200mL，45℃水浴巾加热1h，并不断振摇，取出冷却后定容，混匀，静置，吸取200mL上清液于另一个250mL容量瓶中，以下步骤同上类样品中“加10mL碱性酒石酸铜甲液”相同操作。
还原糖含量测定
二、还原糖含量的测定葡萄糖标准溶液：(葡萄糖在98~100℃先烘干至恒重，干燥冷却，再称量)1 mg ·mL-1葡萄糖标准液：准确称取1 g 的无水葡萄糖，待溶解后定容至1000 mL 。
DNS 显色液：准确称取无水的3,5-二硝基水杨酸6.5 g 溶解待用。
无水氢氧化钠40 g 溶解后移入500 mL 容量瓶，冷却后定容。
将水杨酸溶解液移入1000 mL 容量瓶并加入325 mL 的氢氧化钠，再加入15 mL 丙三醇溶解定容至1000 mL 贮存于棕色试剂瓶中。
以上试剂均为分析纯。
水为蒸馏水。
采用3,5—二硝基水杨酸比色法：还原糖测定液的制备：准确称取块茎干样品粉末1.3××g ，放入50ml 容量瓶中加入25ml 蒸馏水，置沸水浴中加热20min ，其间摇动数次，取出立即加入2ml 乙酸锌(219g/L)溶液和2ml 亚铁氰化钾(106g/L)溶液，摇匀，冷却，定容至50ml 容量瓶中，过滤，滤液备用。
标准曲线的制作：用移液器准确吸取0、2、4、6、8、10、12、14、16ml ……的葡萄糖标准溶液，分别置于50ml 容量瓶中，用蒸馏水补充至约20ml ，加3,5—二硝基水杨酸溶液5ml ，至沸水浴中煮5min 进行显色，取出后以流水冷却，定容，摇匀。
20min 后比色。
用试剂空白调零，用分光光度计在510nm 波长处测定吸光值（A ），以吸光值为纵坐标，葡萄糖含量（mg ）为横坐标，绘制标准曲线。
样品的测定：用移液器吸取样品溶液5ml ，置于50ml 容量瓶中，加3,5—二硝基水杨酸溶液5ml ，至沸水浴中煮5min 进行显色，取出后以流水冷却，定容，摇匀。
20min 后比色。
用试剂空白调零，用分光光度计在510nm 波长处测定吸光值（A ）。
结果计算：在标准曲线中查出相应的还原糖含量，按以下公式计算样品中还原糖的百分含量。
还原糖（%）=)()(mg mg 样品质量样品稀释倍数数还原糖 ×100式中，分取倍数：50/5=10换算成：还原糖(%FW)=还原糖(%DW)×干物质(%)。
糖果—还原糖的测定—直接滴定法
FSPTSTG002 糖果还原糖的测定直接滴定法F_SP_TS_TG_002糖果—还原糖的测定—直接滴定法1 范围本方法采用直接滴定法测定糖果中的还原糖含量。
本方法适用于糖果的还原糖含量的测定，以%（m/m）报告其结果。
2 原理样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定标定过的碱性酒石酸铜液，以次甲基蓝作指示剂，根据样品液消耗体积，计算还原糖量。
3 试剂3.1 碱性酒石酸铜甲液称取15g硫酸铜（CuSO4・5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000mL。
3.2 碱性酒石酸铜乙液称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
3.3 乙酸锌溶液称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。
3.4 亚铁氰化钾溶液（10.6+89.4）称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。
3.5 葡萄糖标准溶液（1mg/mL）精密称取1.000g经过98～100℃干燥至恒量的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水稀释至1000mL。
此溶液每毫升相当于1mg葡萄糖。
3.6 盐酸4 仪器4.1 实验室常规仪器和设备4.2 古氏坩埚或G4垂融坩埚5 操作步骤5.1 样品处理将样品捣碎混匀待用，样品应避免暴露在空气和阳光下，并尽可能迅速地进行分析。
称取约2.5～5g样品，置于250mL容量瓶中，加50 mL水，摇匀后慢慢加入乙酸锌溶液5mL及亚铁氰化钾溶液（10.6+89.4）5mL，加水至刻度，混匀。
静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
5.2 标定碱性酒石酸铜溶液吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL（甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。
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直接滴定法测还原糖
1.实验原理
实验经除去蛋白质后，在加热条件下，以亚甲基蓝为指示剂，滴定标定过
的碱性酒石酸铜溶液（用还原糖标准溶液标定），根据样品液消耗体积计算还
原糖含量。
2.实验药品与试剂
硫酸铜、亚甲基蓝指示剂、酒石酸钾钠、氢氧化钠、乙酸锌、冰乙酸、亚铁氰
化钾、葡萄糖、氢氧化钠溶液(40g/L)
碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜及0.05g亚甲蓝加适量水溶解至1000ml
碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠与75g氢氧化钠，加适量水溶解，再
加4g亚铁氰化钾，完全溶解后稀释至1000ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
盐酸溶液：量取50ml盐酸加水稀释至100ml。
葡萄糖标液：称取1.0g干燥2h后的葡萄糖,加水溶解并加入5ml盐酸，并以水
稀释到1000ml，此溶液每毫克相当于1.0mg葡萄糖。
3.仪器
25ml滴定管、250 ml容量瓶、150ml锥形瓶、玻璃珠、真空泵、电子天平、可
调电炉（带石棉板）
4.实验步骤
4.1 样品处理：
一般食品是称取粉碎后的样品2.5~5g或吸取5～25g液体样品，置于250
ml容量瓶中，加50ml水，摇匀。
加入5ml 乙酸锌溶液及5ml亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀。
静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
4.2标定碱性酒石酸铜溶液：
吸取5.0g碱性酒石酸铜甲液及乙液，于150ml锥形瓶中加水10ml,加入玻璃珠两粒，从滴定管滴加约9ml葡萄糖或其他还原糖标液，控制在2min内加热至沸，趁热以1滴/2s的速度继续滴加葡萄糖或其他还原糖标液至蓝色刚好褪去，
即为终点，记录消耗体积，平行测定3次并取平均值，计算每10ml酒石酸铜溶
液（甲、乙各5ml）相当于多少葡萄糖或其他还原糖的质量（mg）。
4.3试样溶液预测：
吸取5.0g碱性酒石酸铜甲液及乙液，于150ml锥形瓶中加水10ml,加入玻
璃珠两粒，控制在2min内加热至沸，保持沸腾以先快后慢的速度，从滴定管中滴加试样溶液，病保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以1滴/2秒的速度
滴定，直至蓝色刚好褪去即为终点，记录样液消耗体积。
4.4样品测定：
吸取5.0g碱性酒石酸铜甲液及乙液，于150ml锥形瓶中加水10ml,加入玻璃珠两粒，从滴定管滴加比预测体积少1ml的试样溶液至锥形瓶中，使在2min 内加热至沸，保持沸腾继续以1滴/2秒的速度滴定，直至蓝色刚好褪去即为终点，记录样液消耗体积，平行测定3次，得出平均消耗体积。
5.计算
式中：
X—样品中还原糖的含量（g/100g）
V—测定用样品时平均消耗溶液的体积（ml）
m—试样质量（g）
m1—碱性酒石酸铜溶液相当于某种还原糖的质量（mg）。