实验五柴胡中皂苷类成分的提取分离和鉴定
皂苷提取技术 ppt课件
PPT课件
36
PPT课件
37
PPT课件
38
8.超临界CO2萃取法
• 超临界CO2萃取法具有萃取效率高，时间 短，萃取出的产品纯度高、产量大、无化学残留 物、附加值高等优点。阎巧娟等用体积分数为 95%的乙醇及甲醇、正丁醇和正己烷作为夹带剂 提取黄芪皂苷粗品，结果表明，以甲醇和U(乙醇) 为95%的乙醇作为夹带剂效果较好，得率和含量 都较高：U(乙醇)为95%的乙醇作为夹带剂时， 粗品得率为0. 96%,皂苷质量分数为96. 32%； 甲醇作为夹带剂时，得率为1. 27%，质量分数 为94. 15%。
PPT课件 21
PPT课件
22
PPT课件
23
PPT课件
24
PPT课件
25
PPT课件
26
HSCCC色谱包括储液罐、泵、螺旋管分离 柱、检测器、色谱工作站或数据采集软件或记 录仪以及馏分收集器等部分。
选择溶剂体系 充满螺旋管柱
平衡
选择固定相 泵入 流动相 收集馏分
27
高速旋转螺旋管
流动相流出，注入待分离的样品
PPT课件
18
PPT课件
19
4.2 高速逆流色谱法
• 高速逆流色谱法的分离原理是基于样 品在两种互不混容的溶剂之间的分配作用， 溶质中各组分在通过两溶剂相的过程中因 分配系数不同而得以分离。优点是避免了 样品的不可逆吸附，样品不易变性,适用于 生物活性物质的分离。已有许多成功分离 三萜皂苷和甾体皂苷的实例，如：从马拉 维的柿树科植物柿的根皮中分离出的两种 齐墩果烷苷。
PPT课件 10
PPT课件
11
【应用举例】
PPT课件
12
3.树脂吸附法
中草药中皂苷类成分的提取方法
2.2 超临界流体萃取法
超临界流体萃取技术（SFE）是 20 世纪 60 年代兴起的一 种新型分离技术。国外已广泛用于香料、食品、石油、化工 等领域。20 世纪 80 年代中期以来，由于其选择分离效果好、 提取率高、产物没有有机溶剂残留、有利于热敏性物质和易 氧化物质的萃取等特点， 超临界萃取技术逐渐被应用到中草 药有效成分的提取分离上, 并且与气相色谱（GC）、红外光 谱（IR）、气-质连用（GC-MS）、高效液相色谱（HPLC） 等联用形成有效的分析技术。
3.5 提取操作的 p H 值
为提高浸提效能，增加浸提成分的溶解度，增加制剂的稳 定性，可在浸提溶剂中加入浸提辅助剂。常用的浸提辅助剂 有酸、碱、酶及表面活性剂等。浸提过程中，除根据各种被 浸出物质的理化性质选择适宜的溶剂外，提取溶剂的 pH 值 与浸提效果有密切关系。在中药材浸提过程中，往往根据需 要调整浸取溶剂的 pH 值，以利于某些有效成分的提取，如 用酸性溶媒提取生物碱，用碱性溶媒提取皂苷等。
1.2 渗漉法
渗漉法主要分为单渗漉法、重渗漉法、逆流渗漉法和加压渗 漉法。 具体操作是将中草药粉末先装在渗漉器中，使药材浸渍 24～48 小时膨胀，然后不断添加新溶剂，使其自上而下渗透过药 材，从渗漉器下部流出、收集浸出液的一种浸出方法。当溶剂渗 透进药粉细胞内溶出成分后，由于其比重加大而向下移动时，上 层新加入的溶剂便置换其位置，造成良好的浓度差，使扩散能较 好地进行，提取的过程是一种动态过程，故浸出的效果优于浸渍 法。但流速应加以控制（宜成滴不宜成线），在渗漉过程中应该 随时从药面上补充加入新的溶剂，使药材中有效成分充分浸出为 止。当渗漉流出液的颜色极浅或渗漉液的体积相当于原药材重的 10 倍时，便认为已基本上提取完全。
3.6 提取时间
NEW柴胡有效成分研究及注射液研制
NEW柴胡有效成分研究及注射液研制柴胡有效成分研究及注射液研制班级：药剂二班姓名：刘佳学号：1046030202一、柴胡药理研究1.对中枢神经系统的作用：1.1 抗惊厥作用：小鼠（10只）灌胃柴胡煎剂20g（相当生药）/kg，l小时后皮下注射不同剂量的咖啡因，与对照组相比，15分钟内各组发生惊厥的动物数，求出用药组与对照组的半数有效量分别为350（385.O-318.2）mg/kg和250（302.5-206.6）mg/kg，表明柴胡煎剂对小鼠咖啡因惊厥有对抗作用。
1.2 解热镇痛作用：给大鼠（每组6只）腹腔注射北柴胡油300mg/kg（1/4半数致死量），北柴胡总皂甙380和635mg/kg（1/5和1/3半数致死量）。
结果表明，在注射酵母后5-8小时内均有明显的解热作用。
采用电击鼠尾法，北柴胡总皂甙478mg/kg（1/4半数致死量）有明显的镇痛作用。
小鼠灌胃柴胡煎剂10g（相当生药）/kg亦具有镇痛作用，其镇痛作用可破阿托品灌胃25mg/kg或纳络酮皮下注射0.26mg/kg部分拮抗。
1.3 镇静作用：柴胡制剂和柴胡总皂甙均有明显镇静作用，小鼠口服粗柴胡皂甙200-800mg/kg即可出现镇静作用。
在小鼠攀登试验中，粗柴胡皂甙有与眠尔通相似的镇静作用，口服的运动半数抑制剂量（CD50）为347mg/kg。
粗皂甙对大鼠的条件性回避、逃避反应均有明显的抑制。
小鼠口服柴胡总皂甙500mg/kg 能延长环己巴比妥钠的睡眠时间。
1.4 抗炎作用：大鼠肌肉注射50mg/kg、25mg/kg2%柴胡总皂甙水溶液，能明显抑制由右旋糖酐（6%溶液0.1ml/只）引起的足浮肿，抑制作用与剂量相关，大鼠去两侧肾上腺后抑制作用明显减弱。
小鼠腹腔注射l00mg/kg总皂甙的2%水溶液和0.6%醋酸0.2ml/只，对醋酸引起的小鼠腹腔液的渗出有明显的抑制作用。
柴胡总皂甙和挥发油腹腔注射对角叉菜胶所致大鼠足肿均有明显的抑制作用。
柴胡属5种植物总皂苷和总黄酮含量的测定
柴胡属5种植物总皂苷和总黄酮含量的测定
周亚福;毛少利;李思锋;黎斌;蔡霞
【期刊名称】《时珍国医国药》
【年(卷),期】2013(24)5
【摘要】目的测定和揭示柴胡属5种植物根、茎、叶及果实中总皂苷及总黄酮的含量及差异。
方法采用可见光分光光度法。
结果小叶黑柴胡根和叶总皂苷的含量均比北柴胡、狭叶柴胡高;秦岭柴胡根和果实中总皂苷含量亦较高;狭叶柴胡果实总皂苷含量与其根中含量相近。
另外,秦岭柴胡叶和果实中总黄酮的含量远远高于其它种,且其茎中的含量也较高。
结论小叶黑柴胡和秦岭柴胡具有很好的开发前景,狭叶柴胡果实也可被利用提取柴胡皂苷,建议将几种柴胡属植物地上(包括果实)和地下部分根据不同需要分别药用。
【总页数】3页(P1241-1243)
【关键词】柴胡;柴胡属;化学成分;总皂苷;总黄酮
【作者】周亚福;毛少利;李思锋;黎斌;蔡霞
【作者单位】陕西省西安植物园;西北大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.紫外分光光度法测定黄瓜籽中总多糖、总黄酮、总皂苷的含量 [J], 张蕾;陈丽艳;孙银玲;綦菲;王伟明
2.柴胡中柴胡总皂苷及柴胡皂苷a的含量测定 [J], 朱兰兰;孙玲;翟丽屏;黄伟;李素君;陆永辉;孙蓉
3.厚朴总黄酮、总多糖、总木脂素、总鞣质和总皂苷含量测定 [J], 龙飞;周元雳;李杰;何慧;程峰;雷杰;卫莹芳
4.不同产地牛大力水提物中总黄酮、总皂苷及总多糖的含量测定 [J], 李荣宇;林少玲;骆月姬;苏靖雯
5.分光光度法测定金丝桃属药用植物总金丝桃素和总黄酮的含量 [J], 裴瑾;万德光;李昌志;宋波
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
柴胡中柴胡皂苷a提取条件探讨[1]
![柴胡中柴胡皂苷a提取条件探讨[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/d59e8c69b84ae45c3b358c8a.png)
朱兰1，黄东萍1，宋英21成都中医药大学药学院，四川成都 （610075）2成都中医药大学附属医院，四川成都（610072）E-mail：zhuzhu3227◎摘要：目的：考察柴胡中柴胡皂苷a提取率的影响因素。
方法：考察提取溶媒，提取时间，粉碎程度等对柴胡皂苷a提取率的影响。
结果：提取溶媒的影响最大。
结论：柴胡皂苷a结构中的氧环易断裂，但采用碱醇提取能抑止其断裂，提取率高。
关键词：柴胡 柴胡皂苷a 提取中图分类号：R281.引言柴胡为伞形科植物柴胡(Bupleurum chinense DC.)和狭叶柴胡(B.scorzonerifoliunz Willd.)干燥根，具有疏散退热，疏肝解郁，升阳举陷之功效。
柴胡皂苷a、d被认为是柴胡的主要药效成分，对整个药物的疗效起着举足轻重的作用。
所以，在含有柴胡制剂的工艺研究过程中，应该以柴胡皂苷的含量为指标，找出影响其提取率的主要因素，确保制剂疗效，提高药材的利用度。
柴胡皂苷a、d具有13，28－氧环的结构，氧环不稳定，在酸的作用下醚键可能会断裂生成人工产物异环或同环双烯结构。
所以，在柴胡皂苷a、d在提取过程中，受植物体内酸性成分的影响，转变为柴胡皂苷b1、b2[1]。
又有人认为加热提取时间对柴胡皂苷a的含量影响较大，水提加热提取8h柴胡皂甙A已损失殆尽[2]。
故笔者针对这些因素，对柴胡的提取工艺进行了考察。
2.材料和仪器2.1试药与试剂乙腈（色谱纯），甲醇（色谱纯），重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
柴胡皂苷a对照品，纯度>98％，由江西本草天工科技有限责任公司提供。
2.2 仪器HP1100型高效液相色谱仪(美国惠普公司)，二极管阵列检测器。
3.柴胡皂苷a的含量测定3.1色谱条件色谱柱，Diamond C18柱(5μm,4.6×250mm)流动相：乙腈：水：甲醇（40：45：15），流速- 1 -图1 柴胡皂苷a对照品（A）、柴胡药材样品（B）3.2标准曲线及线性范围准确称取柴胡皂a标准品约5mg.分别置于10m1容量瓶中.用甲醇溶解后稀释至刻度。
三种中草药中皂苷类化合物的液质联用分析
三种中草药中皂苷类化合物的液质联用分析本课题从六个方面阐述了皂苷类药物有效成分的药理作用,评述了目前皂苷类有效成分的提取分离技术,指出了不同提取方法的优缺点,综述了皂苷类有效成分的分析研究现状,比较了不同检测方法的特点,指出了目前检测方法的不足。
针对目前皂苷类药物有效成分的检测现状,依据皂苷类药物有效成分的结构特征,本课题集高效能、高分辨的高效液相色谱分离技术与高灵敏度、高选择性的质谱检测技术于一体,建立了三种中草药中皂苷类化合物的高效液相色谱-电喷雾电离-质谱联用(HPLC-ESI-MS/MS)分析方法,该法灵敏度高,选择性好,可用于皂苷类中草药的有效质量监控。
本课题详细考察了三种中草药中皂苷类化合物的色谱分离及质谱分析检测的最佳条件。
通过对固定相、流动相、柱温和流速的研究,优化了色谱分离条件。
通过对离子化模式、喷雾针电压、干燥气温度、干燥气压力、毛细管电压和碰撞能量的研究,得到了最佳的质谱条件最终建立的相应皂苷类化合物分离分析方法如下：(1)柴胡皂苷的研究。
目的：建立高效液相色谱-电喷雾离子-质谱联用技术同时测定柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的新方法。
方法：实验采用Ultimate(?)XB-C8色谱柱(150mm×2.1mm,3μm),流动相：0.1%甲酸水溶液-CH3CN,梯度洗脱；流速：0.2mL·min-1;柱温：35℃；质谱条件为：电喷雾电离源(ESI)；负离子扫描；选择性反应监测(SRM)模式；喷雾针电压：-4500V；干燥气温度：350℃；干燥气压力：22psi；碰撞气(Ar)压力：1.8mT。
结果：在最佳实验条件下,柴胡皂苷a和d达到了基线分离。
在负离子模式下,根据化合物准分子离子峰和碎片离子峰,鉴定了化合物的结构。
其中,准分子离子峰均为[M-H]=m/z=779,定量离子峰均为[M-H-Glc]-m/z=617,在最佳实验条件下柴胡皂苷a和d分别在0.05～5.0mg·L-1和0.05～10.0mg·L-1范围内,峰面积与浓度呈现良好的线性关系,柴胡皂苷a和d的回归方程和相关系数分别为：A=1.31×105c-3.9×104,r=0.9994； A=1.34×105c1.9×104,r=0.9992,检出限分别为15ngⅡm-1(a)和12ngⅡmL-1(d),加标回收率分别为99.3%和99.8%。
57.柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a与柴胡皂苷d含量测定----祝婧
柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a与柴胡皂苷d含量测定祝婧1龚千锋钟凌云张金莲（江西中医药大学江西南昌330004）摘要：目的以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量为指标，考察不同炮制方法对柴胡中皂苷类成分含量的影响。
方法采用RP-HPLC法测定柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量，色谱柱为DikmaDiamonsil C(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-水(35：1865)，流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长210nm。
结果柴胡经不同的方法炮制后，柴胡皂苷a、d的含量有不同程度的变化，柴胡皂苷a的含量变化依次为:生品＞酒麸制品＞清炒品＞酒炙品≈鳖血制品＞醋炙品，柴胡皂苷d的含量变化依次为:生品＞酒麸制品＞鳖血制品＞酒炙品＞清炒品＞醋炙品。
结论本方法简便、可靠、重现性好，可用于柴胡及其炮制品中柴胡皂苷a、d的含量测定，并为全面控制其质量提供参考，为深入探讨柴胡炮制的意义，提供一定的实验依据。
关键词：柴胡；炮制品；柴胡皂苷a；柴胡皂苷d；HPLC 柴胡为伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd的干燥根。
具有疏散退热、疏肝解郁、升举阳气的功能，主要含有挥发油、柴胡皂苷、多糖等成分。
柴胡生品升散作用较强，临床多用于解表退热。
常用炮制品清炒柴胡1基金项目：江西中医药大学重点学科资助项目（550024）作者：祝婧，女，1985年生，讲师，从事中药制药工艺研究，TEL:(0791)87118995,E-mail:277836041@.具有缓和升散作用，增强升举阳气的功效；醋炙柴胡具有缓和升散之性，增强疏肝止痛的作用；酒炙柴胡能改变药性、引药上行，增强活血通络作用并能矫臭去腥；酒麸柴胡缓和升散之性并增强活血通经之功；蜜炙柴胡药性缓和，能增强润肺止咳、补脾益气的作用且能矫味和消除副作用。
我们对柴胡不同炮制品的柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量进行了比较研究，通过探讨不同炮制工艺对柴胡皂苷类物质含量的影响，为临床安全、有效、合理应用柴胡及其炮制品提供实验依据。
柴胡总皂苷提取工艺研究
寺 ・ ｝・ ・ ＞ 牵 ・ ・ ・ ＞ 寺 ・ ・ ・ ・ ・ ＞ ｔ － ・ ・ ・ ＞・ ＞ ・ ＞ 专 ・ ・ ・ ・ ・ ＞・ ・ ・ ＞ －＞ － ・ －－ ・ ・ ・ ・ ・ ＞ 寺 ・ ・ ＞ 专 ・ ｔ 辛 － ・ ４ 寺 寺 － ・ 寺 毒 々 夺 － ・ 夺 夺 ・ － － ・ ４ ４ 争 夺 ４ ４ － ・ ４ 夺 专 串 串 － 毒 孛 － ・ ・＞－ ・＞寺 夺 幸 专 － ・ ４ ４ ４ ４ ４ ４ ４ 辱 － ・ ４
取工艺条件 ，为更有效的开发和利用柴胡资源提供理论参
考和实验指导 。
１ 仪 器 与 材 料
热、 镇痛 、 镇静 、 抗菌 、 抗病毒及抗肿瘤等作 用【一 】药用价 ｌ２， 值极高。 柴胡 主要 的有效成分是挥发 油和皂苷 ， 五环三萜类 齐墩果烷型衍生物是最 主要 的活性成分之－ ［］ － ３。本文利用 不 同浓度乙醇提取 ，正交试验确定柴胡中总皂苷 的最佳提
治疗 方便 、 法简单 ， 方 无需 特殊 的设施及场所 ， 大部分
患者无须住院 ， 随治 随走 。经济 、 实用 ， 无副作用 ， 具有科 学
性。 即保证 了产妇母乳 喂养 ， 又可解 除其 日后患乳腺疾病的
后顾之忧 。 母乳是母 亲送 给 自己婴儿的第一份厚礼 ， 母乳作
原因 ， 我们认为保持乳汁通 畅是最重要的 ， 而手法排乳就是 起到一个疏通的作用 。 我们选择 的病例为乳腺炎早中期 ： 乳 房出现肿块 ， 有疼痛 ， 有些患者伴有高热 ， 但是很 多患者在
儿。
不伤害乳房 ， 不破坏女体美感 ， 不存在治疗 风险及其他并 发 症 问题 ； 效果 明显 、 迅速 ， 时间内可治愈急性乳腺炎等 急 短 症 ， 乳腺其他疾病 ， 假性缺乳尤其是真性缺乳患 者产后 对 如
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验五柴胡中皂苷类成分的提取分离和鉴定柴胡（Radix Bupleuri）一般是作为中药植物出药使用，含有大量的皂苷类成分，具有清热解毒、消肿止痛、祛风湿的功效，对病毒性乙型肝炎具有明显的疗效。
皂苷是柴胡的重要活性成分，也是药物开发的重要目标，尤其是皂甙类成分，因其抗氧化、降血脂、抗肿瘤等活性非常强大，对疾病的预防和缓解都具有重要的疗效。
柴胡中皂苷类成分的提取、分离和鉴定是柴胡药物的重要课题，其中包括的步骤有：
一、柴胡中皂苷类成分的提取。
提取柴胡中的皂苷类成分，可以采用溶剂萃取法进行提取，其中最常用的是乙醇提取法和乙醚提取法，两种方法的原理都是利用不同溶剂提取植物中的物质，乙醇提取法可以从中萃取出一定比例的匝碱型皂苷，而乙醚提取法能够对柴胡中的酯型皂苷效果更好。
二、柴胡中皂苷类成分的分离。
在提取的基础上，利用色谱技术对其中的匝碱型皂苷和酯型皂苷进行分离，这种色谱技术可以利用不同分子的溶剂和层析特性，对柴胡中的皂苷进行相互分离。
此外，为了提高皂苷分离的精度和效率，还可以使用其他的分离技术，如凝胶电泳、离子交换色谱，等等。