鸡的切片制作

鸡的切片制作

实

验

报

告

实验三病变组织的取材、固定和修块

一.实验目的

掌握用于病理组织学诊断的组织材料的取材原则，固定法及修块标准。

二．实验耗材

手术刀、组织剪、刀片、生理盐水、多聚甲醛固定液（福尔马林）、铅笔等。

三．实验过程

1.取材：用颈部放血法处死公鸡，打开腹腔，取需要的组织。切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm*5mm*2mm或10mm*10mm*2mm为宜。取下所需的组织，切成一小块2-3mm厚。

注意：取材动作要迅速。不宜做太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化，不要损伤所需要的部分。

2.固定：将切好的脏组织用生理盐水把组织洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定。（固定的作用）

组织经一系列的处理后，就必须进行固定。

固定的作用，从组织学的角度其简单的定义是，保持细胞、组织的固有形态和结构，使之尽量保持细胞、组织的固有形态和结构，而从免疫组化技术的角度，固定的作用不仅是使细胞蛋白质凝固，尽量减少或终止外源性酶和源性酶的反应；防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质；以保持组织的固有形态和结构；更重要的是保持组织或细胞的抗原性，不但要使抗原不导致失活，而且不使抗原发生弥散的现象，才能在免疫组化染色时，不产生过深的背景，影响对阳性物的判断。

3. 修块

样品要求：长，宽各1cm左右，厚不宜超过1cm（依据组织不同要求不同）。

肝、肾、脾、肺、肌肉、消化道、脑

其他注意

（1）组织固定越新鲜越好。组织一经离体，就能及时地固定，这是最好的。

（2）固定材料时，固定液必须充足，一般材料块的20-30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次新液。

（3）组织固定，组织块不宜过大。对于产酶类的器官如肝、肾、脾等，更要处理好，否则更容易出现自溶现象。

（4）对不同类型的组织应适当合理地选择固定液。

（5）组织固定，时间不宜太短，也不宜太长。

（6）特殊病例或特殊物质应选择特殊的固定液。一般的病例标本，如没特殊的要求，都可以应用甲醛配成的各种固定液来固定。但是，如果要显示狂犬病毒的包含体时，应用上述的的固定液就不行了，必须采用丙酮来固定，显示糖元，可选择无水酒精或丙酮来固定组织。（7）有些混合固定液的成分之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才能混合，如果混合太早，固定就没作用了。如Zenker液（一种核固定剂），最适合于造血和网状皮组织的固定。

实验四组织的脱水处理

一．实验目的

掌握组织脱水的目的和原理，及在实验过程中的注意事项。

二．实验耗材

75%酒精、85%酒精、95%酒精、100%酒精Ⅰ、100%酒精Ⅱ。

三、实验步骤

原理：

用脱水剂完全除去组织的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任比例下均能混合的液体。

脱水概念：把含于组织或细胞的水份用脱水剂把其置换出来的过程称组织脱水。

（脱水过程）

1、水洗：将固定组织块放入广口瓶，瓶口用纱布包好，置流水下水洗，水洗时间依固定时间而定，一般12h以上，固定时间越长水洗时间越长。

2、脱水

1）75%酒精12h

2) 85%酒精6-8h

3）95%酒精12h

4) 100%酒精Ⅰ2h

5) 100%酒精Ⅱ2h

组织块在进入下一阶段梯度酒精前要用吸水纸吸干水，尤其在95%酒精中进入100%酒精（Ⅰ）中，切记防止带入水分，所有过程要在瓶口加盖，防止水分子进入。

（脱水的基本原则）

从低浓度酒精开始逐渐升到高浓度酒精，以保持组织中的水分完全脱净。一般1cmX1cmX0.2cm大小的组织,脱水全过程仅需要数小时即可达到完全脱水。在各级浓度酒精处理的最短时间分别减少到2—4小时也能获得满意的结果。

但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。

注意事项：

（1）脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。

（2）在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水

剂，再用吸水吸尽器皿剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。

（3）在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

（4）在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。（5）如需过夜，应停留在80%酒精中。

（6）脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂出现白色混浊现象。

实验五组织的透明、浸蜡和包埋

一．实验目的

了解透明、浸蜡原理，掌握透明、浸蜡和包埋的法。

二．实验材料

二甲苯、西林瓶、二甲苯：蜡=1:1、蜡、烘箱、包埋框、标签纸、铅笔等。

三．实验过程

1.透明

透明主要是萃取可溶性有机物质。由于乙醇和蜡不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于蜡，所以脱水后还要经过二甲苯以过度。先用二甲苯Ⅰ浸泡1.5-2小时，然后在放入二甲苯Ⅱ中浸泡，同时观察透明程度。当组织中全部被二甲苯占有时，光线可以透过，组织呈现出不同的透明状态后可立即取出，浸泡过久的组织则会变脆。

2.浸蜡

将处理好的材料置于1:1蜡二甲苯混合物2.5h，再放入蜡30min。浸蜡的目的是除去组织中的透明剂，使蜡渗透到组织部达到饱和程度，以便包埋。浸蜡时间根据组织大小而定。浸蜡应在恒温箱中进行，温度保持在55-60℃左右，温度过高会使组织发脆。

3.包埋和修块

将60℃的纯蜡迅速倒入包埋盒，再迅速将浸蜡后的组织放入，一定要注意将平整的组织切面朝下，并将标签一同放入包埋盒，待蜡全部凝固后取出。整个过程要迅速，防止蜡凝固过快，或组织倾斜，不利于切片。

将包埋好的组织蜡块进行修整，削去组织围的蜡块，整体与木块大小相适应，将标签贴在蜡块侧面，用灼烧过的刀片将标签微嵌入蜡块中，以便于切片。