ELISA血清学检测所需设备
电化学发光法和ELISA法检测HBsAb的结果分析_赵秀丽
·医学检验·2012年10月第19卷第28期乙型肝炎（hepatitis B，简称乙肝）是一种严重危害人类健康、传播广泛的病毒传染性疾病，据世界卫生组织报道，全球约有20亿人感染乙型肝炎病毒，每年有超过60万人死于乙型肝炎病毒所致肝硬化或肝癌[1]。
乙型肝炎病毒侵入人体后，刺激人体免疫系统中的B淋巴细胞分泌出一种特异的免疫球蛋白G，也就是常说的乙型肝炎病毒表面抗体（HB-sAb），它可以与表面抗原特异地结合，与人体的其他免疫功能共同作用消除掉病毒，保护人体不再受HBV的感染[2]。
所以，乙型肝炎表面抗体（HBsAb）是一种中和抗体，具有保护作用，它的检测是判断疫苗接种效果的重要指标[3]。
目前，乙型肝炎表面抗体的检测主要还依赖于酶联免疫吸附试验（ELISA）来判断是否阳性，并不能说明HBsAb是否能达到对机体的保护作用。
电化学发光法（ECLIA）作为一种新型标记免疫分析技术，在临床工作中也得到了越来越广泛的应用。
笔者2011年8～11月对本院536例HBsAb阳性的标本分别使用电化学发光法和ELISA方法进行检测，并对检测结果进行分析比较。
1材料与方法1.1标本来源选取沈阳医学院奉天医院2011年8～11月门诊和住院患者HBsAb为阳性的血液标本536份。
1.2仪器及试剂ECLIA采用Roche E170型全自动电化学发光免疫分析仪，HBsAb试剂盒、校准品、质控品均由Roche公司提供。
严格按照仪器和试剂说明书进行校准、质控、检测等操作。
ELISA法采用上海科华HBsAb试剂盒检测，实验仪器为安图酶标仪和洗板机。
所有试剂均在有效期内使用。
1.3阳性标准ECLIA法≥10IU/L为阳性；ELISA法按照说明书确定临界值：为2.1×阴性对照（阴性对照<0.05按0.05计算），每次标本测定值（S/CO）≥临界值为阳性。
1.4统计学处理数据采用SPSS11.0软件进行四格表分析。
TORCH感染检验技术
TORCH感染检验技术TORCH感染的检验诊断结果对临床诊断具有极重要的价值。
临床应用的TORCH感染病原体检测方法有多种，如直接病原体检测、血清学抗原抗体检测、病原体核酸的PCR检测等。
但从临床实践来看，血清学特异性IgM、IgG检测以及病原体核酸的PCR检测最具代表性。
下面将分别介绍。
一、抗体捕获法ELISA检测TORCH特异性IgM抗体病原体特异性IgM抗体的检测可以协助临床诊断早期或现症的TORCH感染。
TORCH病原体特异性IgM抗体检测方法主要有酶联吸附免疫方法（ELISA）的间接法和抗体捕获法，由于间接法ELISA检测时易受到血清中IgG和类风湿因子（RF）的干扰，因此，目前应用于临床的TORCH特异IgM抗体诊断的试剂多采用抗体捕获法ELISA。
（一）检验方法学1.原理①用被检物的抗原包被微孔板；②标本稀释液中含有抗人IgG或IgM抗体等，以灭活待测血清中的IgG或IgM和有干扰作用的类风湿因子（如要测定IgG时则灭活IgM，而要测定IgM时则灭活IgG）；③标本稀释后加入微孔板与抗原反应，洗去游离抗体；④加入酶标记的抗人IgM或IgG抗体，孵育后洗去游离抗体；加入底物显色反应；⑤测定光密度，确定阳性与阴性。
抗原包被法的缺点是易受血清中类风湿因子（RF）对IgM测定的干扰，因此目前所用的应用该原理试剂中，已有了对被测血清的预处理方法，以减少血清中类风湿因子对IgM测定的干扰，而对于特异IgG的测定一般仍用此法。
酶联吸附免疫检测-抗体捕获法：自1983年Meurman O等发现RF干扰后，经过近10年时间完善了抗体捕获法技术。
目前使用的TORCH特异抗体IgM诊断试剂中，多数厂商的产品用的是抗体捕获法：①用抗人IgM的抗体包被微孔板；②人的被检血清标本中含有IgM类抗体，加入微孔板后，被包被在微孔板上的抗体所结合；③加入待测病原体的特异性抗原，若该血清中存在待测病原体的特异抗体，则被特异抗体所结合，由于特异抗体的桥接作用，而被连接于固相载体（微孔板）；④加入酶标记的抗病原体抗体，与病原体结合再次通过桥接连接于固相载体（微孔板）；⑤洗去游离的抗原、抗体及酶标记物，加入底物作显色反应；⑥测定光密度，确定阳性与阴性。
梅毒检测技术规范介绍
阳性
阴性
梅毒螺旋体 抗原血清学
试验
（以TPPA为例）
报告RPR阴性
报告 RPR 滴度
阳性
报告RPR阳性 TPPA阳性
阴性
报告RPR阳性 TPPA阴性
以临床诊断为目的的检测策略二
梅毒螺旋体抗原血清学试验 （以ELISA为例）
阳性
报告ELISA 阳性
非梅毒螺旋体 抗原血清定性/
定量试验
（以RPR为例）
① TPPA（+）， RPR/TRUST（—） ② TPPA（—）， RPR/TRUST（+） ③ TPPA（+）， RPR/TRUST（+）
④ TPPA（—）， RPR/TRUST（—）
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背景简介
梅毒的诊断
梅毒的诊断必须依靠病史、症状及实验 检查进行综合分析。
梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性
所有梅毒检测实验室应参加外部质量评价 省级中心实验室应参加国家级职能工作考
核和PT 其他实验室应参加省级职能工作考核和PT
。
质量评价
考评组织单位根据PT考核结果、职能工作评价结果及 对部分实验室现场评价情况，汇总各实验室的最终考 评结果，上报相关机构。
考评单位应将考评得分及扣分原因反馈各参评实验室 ，以适当的方式在适当范围内公开发布考评结果。为 合格者颁发合格证书。
梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA等梅毒螺旋体 抗体试验试验仍可阳性，故TPPA等试验阳性不 能作为疗效观察的指标。
TPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，应 结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。
作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛 阳性标本的确证试验。
梅毒血清学试验结果的临床意义总汇
临床免疫学检验技术
三、酶联免疫吸附试验（enzyme-
linked immunosorbent assay,ELISA）
• 4.捕获法 用于测定特异性IgM类抗体。被检 血清中针对某抗原旳特异性IgM和IgG常同步 存在，为防止IgG旳干扰，一般采用捕获法 来测定IgM。先将已知特异性抗体（如抗人μ 链）包被于固相载体上，加待测人血清样本， 其中旳IgM（IgM分子相对于固相抗μ链又是 一种抗原）被固相抗μ链抗体特异性捕获， 形成IgM-抗IgM复合物。洗涤除去血清中旳 其他Ig和杂质；加特异性抗原试剂，该抗原 只与固相上旳特异性IgM结合。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
• 5. 生物素—亲合素ELISA（avidin—biotin— peroxi—dase complex，ABC-ELISA）是将生 物素（biotin）和亲合素(avidin)或链霉亲合素 (streptavidin,SA)引入ELISA旳措施。生物素是 一种小分子物质，经活化后可高比度旳偶联 抗体或抗原等大分子。亲合素（或链霉亲合 素）与生物素旳结合力极强，一分子亲合素 可与4个生物素分子结合。在反应系统中引入 生物素和酶标识亲合素，可将ELISA旳反应多 级放大，明显提升检测措施旳敏感性。
临床免疫学检验技术
一、概述
• 免疫学检验是研究免疫学技术及其在医学 检验领域应用旳一门学科。免疫检验技术 则要点论述各类免疫学技术旳基本原理、 措施类型和临床应用。19世纪末相继建立 了凝集试验、沉淀试验和补体结合试验等 三大经典血清学试验，用于检测病原微生 物旳抗原或抗体对传染病旳诊疗起到主要 作用。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
实验室检测技术
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目录
一、细菌对生产的危害及药敏试验 二、血清学检测技术在生产中的应用 三、活苗病毒含量的测定（EID50）及无菌检验 四、灭活苗稳定性和粘度实验 五、饲料理化检测技术
黄山德青源种禽有限公司
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一、细菌对生产的危害及药敏试验
➢ 认识微生物：
微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物。
❖ 将贴好药敏试纸的平板置于4℃冰箱中15min，使药物充分扩散后,再将平板底部
在下，置36±1℃培养箱中培养18～24h。
❖ 结果观察
用直尺测量抑菌圈直径的大小，以 mm为黄单山德位青源。种禽≤有限1公3司低敏；14--17中敏；≥18高敏
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二、 血清学检测技术在生产中的应用
用疫苗按一定免疫程序进行免疫接种是控制鸡病流行的主要途径之一，但 鸡群免疫抗体的产生及维持时间受到鸡群免疫应答能力、所用疫苗种类、免疫 方法、免疫次数、疫病流行状况等方面的影响，良好的免疫接种不等于鸡群能 够产生良好的保护力。因而通过对鸡群进行抗体监测，及时检查鸡群的免疫状 态、疫苗使用效果，为制定合理的免疫程序提供依据就显得非常重要。因此， 建立开展免疫抗体监测工作，成为我们养鸡生产中的一项重要工作。下面将抗 体监测所需设备及检测项目、监测过程向大家做一说明。
温的油苗，立即扩散，再滴入第二滴成为点状30s-1m内不扩散，说明油苗的油包水较好 。 粘度检验：
用1ml吸管（出口内径为1.2mm），取25℃左右的疫苗1ml,令其垂直自然流出， 记录流出0.4ml所需时间，不超过8s。
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五、饲料检测理化技术
1.水分
----检测项目及原理
肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群落。
Elisa技术原理及应用PPT课件
ELISA的检测类型
ABS-ELISA法
➢ 亲和素与生物素的结合，
虽不属于免疫反应，但特
异性强，亲和力大，能够
形成一种极为稳定的复合
体。把亲和素和生物素与
ELISA偶联起来，可以大
①：固相支持物；
大提高ELISA的敏感度。
②：样品； ③：特异性IgG； ④：生物素化抗小鼠IgG （Biotin）；
• 检查抗原和半抗原方面：在内分泌方面用于检测雌性激素、绒毛膜促性腺 激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促甲状腺素和孕酮等
• 在血液学方面：可用于检查凝固因子（如第Ⅷ凝固因子）、红细胞抗原及 结合球蛋白（Hapto Globin）等
• 在肿瘤方面：试用检查甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA），对前者的敏
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ELISA应用前景
ELISA在生物医学领域的应用范围四个方面： •免疫酶染色各种细胞内成份的定位 •研究抗酶抗体的合成 •显现微量的免疫沉淀反应 •定量检测体液中抗原或抗体成份
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ELISA应用前景
ELISA在检测抗原方面：
• 在实际应用方面：可作疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查、法医检查、 兽医及农业上的植物病害的诊断检定等。
ABS:亲和素（avidin）生物素 （biotin）系统（system）
⑤：辣根过氧化物酶HRP-酶标链亲和素（Avidin）；
⑥：DAB显色液；
⑦：显色；
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ELISA检测
ELISA特点：
•灵敏度高：ELISA测定法的灵敏度来自作为报告基团的酶。由于酶的催 化效率很高，很少量的酶即可诱导大量的催化反应，产生可供观察的显 色反应，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。
艾滋病血清学检测方法比较
艾滋病的血清学检测方法比较【摘要】目的观察对比艾滋病（aids）的血清学检测方法，总结其临床应用价值。
方法选取我中心20011年5月至2012年5月经艾滋病确认实验室送检的经免疫蛋白印迹法（wb）证实为aids 患者34例，对其酶联免疫吸附试验（elisa）、明胶颗粒凝集试验（pa法）检测结果进行回顾性分析，以wb法作为金标准，观察对比两种检测方法的灵敏度、特异性及准确率。
结果elisa检测aids 的灵敏度占100.0%（34/34），特异性占64.7%（22/34），准确率为64.7%（22/34），pa法检测aids的灵敏度占100.0%（34/34），特异性占88.2%（30/34），准确率为88.2/%（30/34），两种检测方法的特异性及准确率比较有一定差异（p0.05），无统计学意义。
结论elisa检测和pa法检测aids的灵敏度较高，而pa法检测aids的特异性较高，临床上可根据实际情况合理选用，pa法检测可作为elisa检测的补充，在初筛为阳性的标本可进一步采取wb法进行确诊，提高临床诊断准确率，具有重要的临床应用价值。
【关键词】艾滋病；血清学检测；灵敏度；特异性艾滋病近年来在我国内的发病率呈现日渐上述的趋势，其传播速度也加快，因此，有效的早期hiv病毒抗体血清学检测可对其防控有积极的意义。
本文通过观察对比艾滋病（aids）的血清学检测方法，总结其临床应用价值如下：1资料与方法1.1一般资料选取我中心2011年5月至2012年5月经艾滋病筛查实验室送检的经免疫蛋白印迹法（wb）证实为aids患者34例，对其酶联免疫吸附试验（elisa）、明胶颗粒凝集试验（pa法）检测结果进行回顾性分析，以wb法作为金标准，观察对比两种检测方法的灵敏度、特异性及准确率。
年龄为20-49岁，平均年龄为33±3.2岁，男有20例，女有14例，皆为自愿咨询并检测（vct）。
1.2方法1.2.1免疫蛋白印迹法（wb）法使用的是蛋白印迹仪（auto blot system公司生产，型号：20型）及wb试剂盒（新加坡mp diagnostics 公司生产提供），检测血清中的hiv抗体。
百日咳的实验室检测
六、百日咳的实验室检测
(三)抗体检测
1、血清学检测：血清学检测是最早用于百日咳临床诊断的 实验室检测方法学，早期主要有补体结合试验和细菌凝集试 验，后逐渐被酶联免疫吸附试验(ELISA)所替代。有研究评 估美国43种商业ELISA试剂盒，发现不同试剂的阳性预测值 和阴性预测值的差异较大，以细菌培养和/或PCR阳性为标准 时，抗PT IgA、IgG和IgM抗体ELISA检测的阳性预测值范围 分别为29%~90%、26%~96%、0~73%，而阴性预测值范围分 别为13%~100%、27%~100%和42%~100%。其中抗PT IgG抗 体ELISA定量是百日咳杆菌感染最特异和敏感的血清学检测 方法。但是对感染早期患者、近期接种过疫苗、婴幼儿的诊 断价值有限。
七、百日咳实验室检测质量管理
(一)分析前
为了提高检出率，也可以采集下呼吸道标本。用于培养的咽 拭子应为涤纶或尼龙材质，避免使用对百日咳杆菌具有抑制 作用的棉签拭子，标本宜35~37℃恒温保温运送；用-20℃冷 冻保存。静脉血标本主要采用真空采血法，分别采集乙二胺 四乙酸二钾抗凝血和普通非抗凝血各1管。抗凝血标本应常 温条件下运送和保存，主要用于外周血细胞分析及形态学检 测。普通非抗凝血充分凝固后，应及时分离血清，主要用于 血清学检测。双份血清标本采集时间隔14 d。
七、百日咳实验室检测质量管理
(一)分析前
百日咳实验室检测的分析前质量管理，主要有标本采集和转 运。采集应根据பைடு நூலகம்测目的，在病程早期、症状典型、用药前 或有需要时进行。操作应规范化，同时向患者或其家属解释 采集的方法和用途，征得患者或家属的理解和配合。鼻腔咽 拭子最适合用于病原微生物学和分子生物学的检测。其采集 方法是将一次性无菌拭子轻轻插入鼻腔咽后壁，摩擦旋转拭 子1圈以上，取出拭子，将拭子放回塑料管中，密封送检。
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ELISA 血清学检测所需设备
主要用途：能够完成日常的血清学检测
建立实验室要求：
1．基本要求
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1）实验室使用面积：
≥ 30m
2）具有进、出排水系统
3）排风换气系统
4）控温设备（空调）
2．设备要求
名称 规格 单价（元） 数量 备注
酶标仪
Bio-tek 45000 1
芬兰雷勃 /美国宝特
培 养 箱 DHP-9052 2680 1 国产
台式离心机
TD-60B 3500 1
国产、 6000 转 /分
立式干燥箱 DHG-9075A 3190 1 国产
高压灭菌锅
YX-280 950 1
国产、不锈钢、 18 升、手提式
多道微量移液器 5-50ul 1750 1 国产大龙
多道微量移液器 50-300ul 1750 1 国产大龙
微量移液器 0.5-10ul 280 1 国产大龙
微量移液器 20-200ul 280 1 国产大龙
微量移液器 200-1000ul 280 1 国产大龙
冰 箱 / / 1 冷藏、冷冻 （自备）
电脑 / / 1 如仅用于实验数据分析软件及酶标仪打印机链
接，配置不需要太高。 （自备）
耗材及试剂 / / 离心管、枪头、板架、样品盒、湿盒、试管、
试管架、烧杯、量筒、三角瓶、平皿、酒精灯、
移液管、常用试剂、培养基试剂、药敏片等根
据所需量采购
空 调 / / 1 冷暖条件。主要控制实验室温度用，从而保证
检测结果可靠
合 计
59660