《婴幼儿配方食品和乳粉核苷酸的测定》编制说明-食品安全标准
GBT 5413.25-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 肌醇的测定
盐酸 体积比为
将体积分数为 的浓盐酸
用水稀释至
氢氧化钠
为
将 氢氧化钠溶解于水中 稀释至
肌醇标样 无水晶体
菌种
培养基
链孢霉菌琼脂培养基 号蛋白胨 酵母浸膏 麦芽糖 琼脂
肌醇测定用培养基 葡萄糖
柠檬酸钾 柠檬酸 磷酸二氢钾
氯化钾
硫
酸镁
氯化钙
硫酸锰
氯化亚铁
色氨酸
胱氨酸
异亮氨酸
赖氨酸
蛋氨酸
苯基丙氨酸
酪氨酸
天门冬酰胺
允许差
同一样品两次测定值之差不得超过两次测定平均值的
表
试管号 蒸馏水 样品溶液
盐酸 稀释至
热处理
用棉塞或不锈钢帽盖住所有试管
蒸汽蒸
接种
冷却试管至 以下 无菌添加接种物于基础贮备培养基中 以每
添加 的比例添加
充分混合 将上述已接种的培养基无菌加入到 和 的每个测定管中 每管加
其中标准曲线
中
号试管只加 未接种的培养基
培养
将试管固定在机械振荡器上 以每分钟振荡
天
门冬氨酸
丝氨酸
甘氨酸
苏氨酸
缬氨酸
组氨酸
脯
氨酸
丙氨酸
谷氨酸
精氨酸
盐酸硫胺素
生物素
泛酸钙
盐酸吡哆醇
加蒸ห้องสมุดไป่ตู้水至
仪器
常用实验室仪器及 计
国家技术监督局
批准
实施
圆底烧瓶 与冷凝器连接的锥形玻璃接头 比色仪
样品制备
贮备菌种的制备
从纯菌种
中转接 个以上已制备好的麦芽浸出汁琼脂斜面
培养
贮
于冰箱中 保存期不要超过 周 然后再转接到新的琼脂斜面上
婴幼儿辅助食品检验规程
婴幼儿辅助食品检验规程一、食品安全性检验婴幼儿辅助食品必须经过严格的安全性检验，包括对原料、生产过程、产品等各个环节的监控，以确保食品的安全性。
检验项目包括理化指标、卫生指标、重金属、农药残留等。
二、营养含量检验婴幼儿辅助食品的营养含量必须符合国家相关标准，包括蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质等。
检验项目还包括食品中各种营养素的含量和比例，以确保食品能够满足婴幼儿生长发育的需要。
三、卫生指标检验婴幼儿辅助食品的卫生指标必须符合国家相关标准，包括菌落总数、大肠菌群、致病菌等。
检验项目还包括食品中农药残留、重金属等有害物质的检测，以确保食品的卫生安全。
四、微生物指标检验婴幼儿辅助食品的微生物指标必须符合国家相关标准，包括菌落总数、大肠菌群、致病菌等。
检验项目还包括对包装材料和生产设备的微生物检测，以确保食品不受微生物污染。
五、添加剂检验婴幼儿辅助食品中使用的添加剂必须符合国家相关标准，包括色素、防腐剂、抗氧化剂等。
检验项目还包括对食品中添加剂的含量和种类进行检测，以确保食品添加剂的使用符合国家规定。
六、包装材料检验婴幼儿辅助食品的包装材料必须符合国家相关标准，包括材料的质量、安全性、环保性等。
检验项目还包括对包装材料的阻隔性能、印刷质量等进行检测，以确保包装材料的质量符合要求。
七、标签标识检验婴幼儿辅助食品的标签标识必须符合国家相关标准，包括产品名称、配料表、生产日期、保质期等信息。
检验项目还包括对标签标识的规范性和清晰度进行检测，以确保消费者能够准确了解产品的相关信息。
八、生产过程检验婴幼儿辅助食品的生产过程必须符合国家相关标准，包括生产环境、设备设施、生产流程等。
检验项目还包括对生产过程中的卫生状况和工艺参数进行监控，以确保生产过程的规范性和安全性。
婴幼儿食品安全标准与检测
彭 涛
博士/副研究员
中国检验检疫科学研究院 二〇一二年十二月
一、婴幼儿食品质量安全重大事件
中国：
“阜阳奶粉”——“量”；
“三聚氰胺”、“圣元奶粉”——“质”。
美国：
有11％的10～13岁的美国儿童患有后天性高血压。这些儿 童在婴幼儿时期基本上食用过咸食物，如油炸薯片、三明 治、蛋糕、饼干等食品，含盐量均偏高。
七、我国对婴幼儿食品的其他规定
原料要求
所有婴幼儿食品中不得使用氢化油脂和经辐照处理过的原料。（GB 10765）
婴儿（0-12月龄）配方食品中所使用的原料和食品添加剂不应含有谷 蛋白。(GB 10765) 婴幼儿罐装辅助食品中不应使用香辛料。(GB 10770)的生长期是人一生中身心健康发展的重 要时期，婴幼儿食品是维系婴幼儿生命和健康的“ 粮食”，不同于普通的食品，其营养成分的选择和 配比是根据不同年龄段或月龄段婴幼儿的生长发育 对营养素的需求而设计的，对奠定婴幼儿一生的体 格和智能极为重要。
三、婴幼儿食品分类
我国 主要是婴儿配方奶粉和配方米粉, 此外还有少量新开发 的儿童强化食品、儿童保健食品和特殊儿童食品等。 发达国家 主要是婴儿配方奶和婴儿配方奶粉, 医用特殊婴儿配方 奶和奶粉（大豆基质、铁强化、低过敏源等）, 断奶婴儿 谷物食品（谷物为基料, 加入水果蔬菜、肉、鱼等的婴幼 儿辅食），冷冻婴幼儿辅食, 有机婴幼儿食品等。
婴幼儿食品中使用的营养强化剂
在我国食品营养强化剂是一类非常重要的食品添加剂,其品种、使 用量和使用范围必须符合GB14880《食品营养强化剂使用卫生标准》及 卫生部相关公告。 在GB14880中, 营养强化剂包括维生素、矿物质、氨基酸及含氮化 合物、脂肪酸等类别,涉及的使用范围既有普通人群消费的乳与乳制品 、谷物制品、饮料、面粉等, 又有专供特殊人群食用的婴幼儿食品、孕 妇乳母专用食品等。
婴幼儿奶粉食药局检测检验项目和检验依据
附件1
本次检验项目
本次抽检的婴幼儿配方乳粉主要包括乳基较大婴儿和幼儿配方食品、豆基较大婴儿和幼儿配方食品和乳基婴儿配方食品、豆基婴儿配方食品。
一、抽检依据
抽检依据《食品安全国家标准婴儿配方食品》（GB 10765—2010）、《食品安全国家标准较大婴儿和幼儿配方食品》（GB 10767—2010）、《食品安全国家标准食品中污染物限量》（GB 2762—2012）、《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2011）、《关于三聚氰胺在食品中的限量值的公告》（卫生部、工业和信息化部、农业部、工商总局、质检总局公告2011年第10号）等标准及产品明示质量的要求。
二、检验项目
抽检项目包括蛋白质、脂肪、碳水化合物、乳糖占碳水化合物总量比、亚油酸、α-亚麻酸、亚油酸与α-亚麻酸比值、终产品脂肪中月桂酸和肉豆蔻酸（十四烷酸）总量、芥酸与总脂肪酸比值、反式脂肪酸与总脂肪酸比值、维生素A、维生素D、维生素E、维生素K1、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、
烟酸（烟酰胺）、叶酸、泛酸、维生素C、生物素、钠、钾、铜、镁、铁、锌、锰、钙、磷、钙磷比值、碘、氯、硒、胆碱、肌醇、牛磺酸、二十二碳六烯酸与总脂肪酸比、二十碳四烯酸与总脂肪酸比、水分、灰分、杂质度、铅（以Pb计）、硝酸盐（以NaNO3计）、亚硝酸盐（以NaNO2计）、黄曲霉毒素M1、黄曲霉毒素B1、菌落总数、大肠菌群、左旋肉碱、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、阪崎肠杆菌、三聚氰胺、二十二碳六烯酸（22:6n-3）与二十碳四烯酸（20:4n-6）的比、长链不饱和脂肪酸中二十碳五烯酸（20:5n-3）的量与二十二碳六烯酸的量的比、二十二碳六烯酸、二十碳四烯酸、叶黄素、核苷酸、脲酶活性定性测定等63个指标。
乳粉编制说明
《食品安全国家标准食品理化检验方法总则》（征求意见稿）编制说明一、标准起草的基本情况受国家卫生与计划生育委员会食品安全标准与监测评估司（原卫生部食品安全综合协调与卫生监督局）委托，按照《2011年卫生标准制（修）订项目委托协议书》要求，编制组承担了《食品安全国家标准食品理化检验方法总则》（GB/T5009.1-2003）国家标准的修订工作。
项目编号：spaq-2011-40。
标准负责起草单位：国家食品安全风险评估中心（原中国疾病预防控制中心与营养食品安全所）。
简要起草过程：编制组主要以《食品卫生检验方法理化部分总则》（GB/T5009.1-2003）为基础，依据《标准化工作导则第一部分：标准结构与编写规则》（GB/T1.1-2009）、《标准编写与规则第四部分：化学分析方法》（GB/T 20001.4-2001）、《检测和校准实验室能力的通用要求》（GB/T 27025-2008）、《出口食品、化妆品理化测定方法标准编写的基本规定》（SN/T 0001-2016）和《测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义》（GB/T 6379.1-2004），参照SANCO/10684/2009、2002/657/EC等，认真贯彻落实《2011年卫生标准制（修）订项目委托协议书》的要求，完成文献资料收集整理工作，并公开征求多方对标准修订的意见，形成标准方法草案，按要求完成GB 5009.1《食品安全国家标准食品理化检验方法总则》国家标准征求意见稿。
二、标准的重要内容及主要修改情况本标准的重要内容包括：范围、试样制备与贮存、试料的检验、分析结果的表述、检验方法的验证、试料处理以及相应的附录。
本标准与GB/T5009.1-2003相比，主要修改情况如下：1.标准名称修改为《食品安全标准检验方法理化部分总则》；2.调整了文本的主体结构，修改后的文本主体结构包括范围、试样制备与贮存、试料的检验、分析结果的表述、检验方法的验证、试料处理以及相应的附录；3.增加了试样制备与贮存要求；4.增加了感官检测要求；5.细化了检测的要求；6.附录增加并细化了检验方法技术参数，具体增加了标准曲线、准确度、精密度、重复性、再现性、检出限、定量限等的定义及要求。
超高效液相色谱法测定婴幼儿配方奶粉中5种核苷酸
， ， ， ， MAShiboWANGXiqingXIAKeguangQIUNingningSHIJiangchuan
收稿日期：2018-11-28 作者简介：马世波（1975-），男，本，研究方向乳品检测技术研究。
462019年第 47卷第 5期（总第 342期）
1965年，日本就在婴儿奶粉中添加核苷酸，西班牙自 年 1983 ，美国自 1989年也开始推荐使用。2005年中 国卫生部 15号公告建议，核苷酸在婴幼儿配方粉中的 添加量为 0.2~0.58g/kg （以核苷酸总量计）。
(SynutraNutritionalFoodCo.,Ltd.,Qingdao266400,China)
Abstract:Amethodforthedeterminationoffivenucleotides(UMP,AMP,IMP,GMPandCMP)ininfantformulamilkpowderbyultra performanceliquidchromatography(UPLC)wasestablishedandoptimized.Thesampleswereextractedbywater,deproteinizdebyaceticac
withgradientelution.ThedetectionwavelengthUVdetectorwassetat254nm.Therelativecoefficientwas0.9995~0.9999,therecovery 97.0%~102%;theRSD in6samplesbytestingwas2.5%~4.7%.Thelimitsofquantificationwerefrom 1.5mg/kgto2.0mg/kg.Themethod iseffective,accurateandrepeatable..Itissuitableforthedeterminationofthefivenucleotidesininfantformulamilkpowder. Keywords:Ultraperformanceliquidchromatography(UPLC);Nucleotide;Infantformulamilkpowder;Solidphaseextraction
乳粉中亚硝酸盐含量标准
乳粉中亚硝酸盐含量标准
一、亚硝酸盐限量
根据国家食品安全标准，乳粉中的亚硝酸盐含量应符合以下限量：
1.婴幼儿配方食品（GB 10765、GB 10767）：≤0.2mg/kg（以亚硝酸根离
子计）
2.其他婴幼儿辅助食品：≤0.4mg/kg（以亚硝酸根离子计）
二、原料要求
1.原料乳：应符合国家相关食品安全标准，不得含有亚硝酸盐残留。
2.原料添加剂：不得使用含有亚硝酸盐的添加剂。
三、生产工艺控制
1.在生产过程中，应严格控制亚硝酸盐的使用量，确保最终产品的亚硝酸盐
含量符合国家标准。
2.在生产过程中，应对原料乳进行严格的检测，确保不含有亚硝酸盐残留。
四、检测方法
1.亚硝酸盐的检测方法可以采用分光光度法、离子色谱法等。
具体检测方法
应根据产品特性和实验室条件进行选择。
2.在检测过程中，应确保实验室的设备、试剂和操作符合相关标准和规范。
五、标签标识
1.在产品标签上，应明确标注产品的亚硝酸盐含量，以供消费者参考。
2.在产品标签上，还应注明产品的生产日期、保质期等信息。
总之，为了保障消费者的健康和安全，乳粉生产企业应严格遵守国家食品安全标准，控制原料、生产工艺和产品检测等方面，确保产品的亚硝酸盐含量符合国家标准。
食品安全国家标准 特殊医学用途配方食品通则
食品安全国家标准特殊医学用途配方食品通则一、标准起草的基本情况（包括简要的起草过程、主要起草单位、起草人等）(一)任务来源、起草单位、起草人为了满足中国临床病人对特殊医学用途配方食品的需求，大力在中国发展特殊医学用途配方食品，以及为了建立与国际接轨的相关配套的国家标准体系，经申请立项、审查，本标准于2011年由卫生部批准立项，项目编号SPAQ-2011-35。
参加本标准起草单位有：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、中国人民解放军301医院和上海华东医院等。
参加本标准的主要起草人包括：杨晓光、张坚、韩军花、薛长勇、孙建琴、满青青、宋鹏坤、邓陶陶、石磊、冯冰、杨丹、张文红等。
(二) 简要起草过程1. 2008年12月：由主要起草人牵头于2008年12月向原卫生部食品卫生标委会申报立项。
2. 2009年12月7日：特殊医学用途配方食品标准的工作会议。
工作组就“特殊医学用途配方食品标准的起草进展情况向卫生部领导进行了汇报，并特别邀请了食品卫生委员会秘书处、协和医院、解放军总医院、北医三院的临床营养专家。
各位专家对于该标准的草稿提出许多建设性的意见和建议。
3. 2010 年10月19日-2010年12月10日：《特殊医学用途配方食品》的起草工作组向25家相关企事业单位发函征求该标准草稿的意见。
起草工作组共收到16家企事业单位的42条意见，并将意见汇总及修改。
4. 2012年3月30日：《特殊医学用途配方食品》的起草工作组组织专家研讨会，邀请国外专家，分享和交流国外的经验，深入探讨美国和欧盟的监管模式；邀请临床专家，介绍了特殊医学用途配方食品在我国临床应用的必须性，并对临床的经济学效益进行分析；邀请质检总局的专家参会，讨论标准的实施和监管方面的潜在问题和风险交流。
5. 2012年6月12日：起草工作组再一次进行内部讨论，就一些意见达成共识，并决定将标准文本、编制说明尽快完成后上报到国家食品安全标准委员会秘书处，以申请在网上公开征求意见。
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婴幼儿配方乳粉核苷酸的测定编制说明国家乳制品质量监督检验中心2008年9月10日背景：核苷酸是构成核酸的成分，是由含氮的碱基、核糖或脱氧核糖、磷酸3种分子连接而成。
核苷酸在人体内广泛分布，具有多种生物学功能：①核苷酸是构成核酸的基本单位，这是其最主要功能。
②参与人体的能量代谢和生理调节。
③促进抗体形成、增强免疫功能。
④组成辅酶的作用。
一些临床上的研究发现，添加核苷酸的婴儿配方奶粉，可减少腹泻的发生及促进较小胎儿的生长发育。
由于核苷酸对婴幼儿的生长发育具有明显作用，近几年来，婴幼儿乳粉生产企业在配方中作为强化成分添加的一定量的核苷酸，并作为卖点在广告宣传中作为重点大力宣传。
目前婴幼儿配方奶粉中主要添加的核苷酸主要有5种：胞嘧啶核苷酸（cytidine,CMP）；尿嘧啶核苷酸（uridine,UMP）；腺嘌呤核苷酸（adenosine,AMP）；鸟嘌呤核苷酸（guanosine,GMP）；次黄嘌呤核苷酸（inosine,IMP）。
一般在配方中以3-4种核苷酸混合后加入配方粉中。
在现行的国家相应标准中未对核苷酸含量进行规定，其检测方法标准也未建立。
该成分的含量要求都是通过企业标准在质检部门备案后的企业标准作出的规定。
由于在婴幼儿配方食品中使用核苷酸的情况国内外都非常普遍，在市场销售的国外独资企业、进口及国内生产婴幼儿配方粉的大中型企业都在其婴幼儿配方乳粉中加入了核苷酸。
虽然核苷酸是婴儿的重要营养素，对婴儿的生长发育有重要的作用但有一定的含量范围，过低起不到应有的营养作用，过高则有可能对婴幼儿的正常生长发育产生不利影响。
所以对产品中核苷酸的质量监控极为重要，这就需要相应的检测技术支持。
根据目前报道，核苷酸检测方法主要有微生物法、毛细管电泳法、高效液相色谱法等，其中高效液相色谱法测定核苷酸较适于对象婴幼儿配方乳粉基质复杂的样品。
本研究就是在收集有关资料的基础上，结合乳制品样品的特点，选择离子对反相色谱法进行研究，建立高效液相色谱法测定乳制品中核苷酸的简便、准确的检验方法。
一、任务来源、起草单位和主要起草人任务来源：全国乳制品标准化技术委员会任务编号：本标准起草单位：国家乳制品质量监督检验中心、南京同凯兆业生物技术有限责任公司本标准参加单位：上海英特儿营养乳品有限公司、美赞臣营养品（中国）有限公司、内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司主要起草人：二、制定标准的必要性和意义1.维护消费者健康的需要核苷酸是构成核酸的成分,牛奶中一般不含有核苷酸，作为添加剂添加的核苷酸目前在乳制品中主要用于婴幼儿配方奶粉中。
核苷酸的主要生理功能是广泛参与人体的能量代谢、蛋白质合成,具有提高各种酶的活性、活化细胞功能、促进抗体形成、增强免疫功能的作用。
对婴幼儿来说可促进神经细胞的生长发育,是与“神经生长因子”有关或者可以作为神经生长物质利用的营养成分；促进铁质吸收及影响脂质代谢,改变肠道菌丛及提供肠道黏膜完整所需的营养,达到提升免疫功能的效果；一些临床上的研究发现,添加核苷酸的婴儿配方奶粉,可减少腹泻的发生及促进较小胎儿的生长发育。
但人体对核苷酸的需求是有一定限度的，并非越多越好，必须对其用量进行控制。
由于核苷酸价格较高，个别企业添加核苷酸时为降低成本不按配方足量添加甚至不添加，有些企业因工艺过程把握不好造成核苷酸成分损失，而使得核苷酸含量不足，给消费者利益造成损失。
所以为了维护消费者利益，必须尽快建立适用于乳制品的检测标准。
2.国家政府部门食品安全监管的需要我国自实施食品质量安全市场准入制度以来，对规范食品质量安全生产、保护广大消费者的利益等起到了极为重要的作用。
其中食品生产许可证审查细则就是审查生产企业是否符合要求的法规性文件，也是企业必须达到的最低要求。
在许可证审查中，添加核苷酸的产品必须在企业标准中进行规定，并发证检验合格后方能达到要求。
但对出厂产品质量是否达到标准要求，在政府监管部门实施各类监督中就必须依据相应的标准方法进行检测，所以其产品质量的监督必须有相应的技术标准支持，否则无法有效监管。
由此可看出，制订此检测方法标准的重要性与紧迫性。
3.完善国家标准的需要由于核苷酸在婴幼儿食品中使用是近几年来的事情，在我国现行的标准中尚缺失针对婴幼儿食品中核苷酸的检测方法标准，这也是完善食品检测方法国家标准的需要。
三、起草过程1.前期工作核苷酸在婴幼儿配方乳粉中使用始于5年前，当时根据个别企业的要求，我们于2003年开始开展了《反相高效液相色谱法测定乳制品中核苷酸方法的研究》，并于当年将研究成果发表于《中国食品添加剂》。
在以后的5年中，婴幼儿配方乳粉生产使用核苷酸的企业数量剧增，目前有90%以上的企业都作为营养成分之一添加核苷酸，作为检测机构急需建立才完善的检测方法并尽快申报国家标准已成为当务之急。
基于这种情况，我们又在2006年专门组织技术人员成立研究小组对原来的检测方法研究进行了分析，从而找出原方法的缺陷，同时通过各种途径收集相关技术资料，制定了进一步开展研究的技术路线。
因原方法中采用的是缓冲盐作为流动相，且5个组分须采用不同的流动相分两次进行测定，其方法较为繁琐，若制定为国家标准明显不符合要求。
为此，我们通过论证决定采用离子对色谱法一次同时测定5个组分的技术路线展开研究，并于2006年底初步完成了乳制品中核苷酸检测技术的研究工作。
自2007年起，为进一步完善该技术，我们又与南京工业大学国家生化工程技术研究中心下属专业生产核苷酸的产业基地—南京同凯兆业生物技术有限责任公司合作，利用他们的技术优势，共同对该检测技术进一步实验研究，通过大量实验建立了高效液相色谱法测定乳制品中核苷酸的方法。
为将该方法能及时上升为国家标准，解决乳制品中核苷酸的检测及在婴幼儿配方乳粉等发证检验有据可依等问题，我们通过全国乳品标准化中心向国家标委会提出立项的申请，并于2007年批准。
随后我们共同组织了标准起草小组，按照国家标准制定的要求对方法的适用范围、采用的标准、验证方法、准确性、精密度等方面进行了分析和确认，并于2007年底基本完成了实验室验证工作。
通过验证后认为此方法操作简单、准确、快速，基本符合制定国家标准的条件。
2.实验室间验证工作2008年6月，全国乳品标准化中心在青岛组织召开了乳品系列标准的制修订工作研讨会，我们提交了由国家乳制品质量监督检验中心与南京同凯兆业生物技术有限责任公司共同起草的标准讨论稿，并对该标准进行了详细的介绍。
会上一致通过了该标准讨论稿并同意进行方法验证。
根据会议精神，我们邀请了通过CNAS认可的实验室美赞臣（广州）有限公司、上海英特尔营养乳品有限公司、内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司等单位与我中心共同进行了实验室间的方法验证工作。
通过统计分析各实验室提交的检测数据，验证了该方法的精密度等。
参加验证的实验室一致认为：该方法用于测定以婴幼儿配方乳粉类产品为主的样品中核苷酸的含量，具有测定结果准确可靠，操作简单、快速等特点。
四、制定标准的原则和依据。
目前报道的检测方法主要有微生物法、毛细管电泳法、高效液相色谱法等，对于核苷酸的仪器分析报道较多，多用ODS反相色谱柱，通常采用离子对反相色谱法，但都不适合乳品中核苷酸的测定。
本研究就是在收集有关资料的基础上，结合乳制品样品的特点，选择离子对反相色谱法进行研究，建立了高效液相色谱法测定乳制品中核苷酸的简便、准确的检验方法。
经实验验证认为该方法的准确性、重现性、检出限等完全能满足婴幼儿配方食品和乳粉中核苷酸含量测定的要求。
五、标准主要条款的说明1.标准名称和适用范围本标准的名称为《婴幼儿配方食品和乳粉核苷酸的测定》，适用于婴幼儿配方食品、乳粉中5种核苷酸的测定（胞嘧啶核苷酸CMP、尿嘧啶核苷酸UMP、腺嘌呤核苷酸AMP、鸟嘌呤核苷酸GMP、次黄嘌呤核苷酸IMP）。
2.样品处理方法的研究样品的处理主要考虑的是既能将样品中的蛋白质分离出去，又能将核苷酸无损失的提取出来。
为此，我们将样品用水溶解，通过超声波振荡后采用3种样品处理方式来沉淀蛋白质：10%乙酸、调pH值及0.33mol/L的高氯酸。
10%乙酸沉淀蛋白和高氯酸沉淀蛋白质的方法是，将充分振荡溶解的样品转入50mL容量瓶中，加入5mL10%乙酸或0.33mol/L的高氯酸溶液，定容，充分混匀后用滤纸过滤；调pH法沉淀蛋白质的方法是，先用稀盐酸溶液将充分振荡溶解的样品溶液的pH调至1.7，静止1min后再用氢氧化钠调pH到4.5，转入50ml容量瓶中定容，混匀，用滤纸过滤。
上述滤液通过0.45µm的滤膜过滤后上机测定。
通过对测定色谱图进行分析后发现，上述3种处理方式对色谱图中杂质峰的数量和色谱峰形及分离度都有有一定的影响：调pH沉淀蛋白质的试液杂质峰要多于用乙酸沉淀蛋白质的方法；使用高氯酸沉淀蛋白和乙酸沉淀蛋白效果相近，但用乙酸沉淀时色谱峰形最好，而且方便。
根据上述处理样品方法的比较，确定采用10%乙酸沉淀蛋白质的样品处理方法。
4.色谱柱及条件的选择4.1色谱柱的选择色谱柱性能是待测物能否达到理想的分离度、方法成功的关键之一。
由于核苷酸为离子型化合物，采用离子对色谱进行各组分的分离可能会得到理想的结果。
在色谱柱的选择上，我们先后采用了AichromBond-AQC18柱、SUPELCOSILLC-18-TC18柱和氨基柱waters三种色谱柱进行实验。
结果发现：使用氨基柱时，GMP和IMP完全重叠在一起，没有分开，所有组分在10min左右全部流出；使用AichromBond-AQC18柱时，由于流动相的细微变化，其中GMP和IMP有时重叠在一起，有时分离度较差，较难分离；而SUPELCOSILLC-18-T可以使5种核苷酸都得到较好的分离。
SUPELCOSILLC-18-T柱添料的硅表面经过特殊的处理，与普通的C18柱相比，它可以减少硅烷醇和核苷酸之间的相互作用，提高分析的灵敏度，因此我们选用SUPELCOSILLC-18-T柱进行测定。
4.2流动相的选择我们主要对流动相进行了优化，即离子对试剂的浓度、流动相pH值和甲醇浓度进行优化。
4.2.1离子对试剂的浓度我们选用离子对试剂四丁基硫酸氢铵的浓度分别为1.30mmol/L、1.40mmol/L、1.50mmol/L、1.70mmol/L、1.75mmol/L和2.0mmol/L，由试验结果可以看出离子对试剂浓度变化对核苷酸的出峰顺序、分离效果及峰形影响很大：当四丁基硫酸氢铵浓度为1.40mmol/L时，分离效果最好，基线分离，峰形对称，且样品中的核苷酸与杂质峰完全分开，色谱峰的顺序为CMP、AMP、UMP、GMP和IMP，因此我们选用离子对试剂的浓度为1.40mmol/L。
4.2.2流动相pH值的选择考虑到核苷酸的水溶液在酸性环境中比较稳定，选择调节流动相的pH值为酸性。