还原糖蛋白质脂肪的鉴定
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蛋白质的检测结果
蛋白质的鉴定----双缩脲试剂
鸡蛋清溶液 NaOH 溶液
滴加CuSO2 溶液, 每次滴加均需摇匀
结果显示: 紫色
实验成功的关键与注意事项
1.实验成功的关键在于实验材料的选择:
⑴.在做可溶性还原糖的鉴定实验中,最理想的实验 材料是含糖量较高的生物组织(或器官),而且组织的颜色 较浅,最好是白色或近于白色的植物组织,这样可以避免 材料自身颜色对实验变化颜色的掩盖。经实验比较,颜色 反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。
深化
问题探讨: 1、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时,为什么要留出
一部分样液? 作对照
2、使用双缩脲试剂时为什么B液只能加3~4滴而不能 过量?
过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应,使溶液呈蓝色,
而掩盖生成的紫色。
3、为什么斐林试剂要现配现用,不能放置太久?
时间太长,Cu(OH)2悬浊液就沉淀在试管底部而 无法参与反应。
显微观察:先在低倍镜下找到已着色的薄片,后用高倍镜观察
现象: 有被染成橘黄色(或红色)的脂肪微粒
脂肪的检测结果
3.蛋白质的鉴定
选材与制备 黄豆组织样液(或鸡蛋蛋清稀释液) 组织样液:[黄豆浸泡 →去皮→切片→研磨→过滤→滤液]
显 色 反 应 现象:
(创设碱性条件)
(提供Cu2+)
无色
紫色或紫红色
4、斐林试剂与双缩脲试剂两者有何不同?
比较项 试剂及成
目
分
原理
溶液浓度
方法
加热 结 与否 果
新配制 NaOH
可溶还 斐林试剂 的
浓度为
原糖的 鉴定
NaOH和 CuSO4
Cu(OH)2
溶液
0.1g/mL
CuS04 浓度为
先把NaOH
溶液和CuSO4 水浴 溶液混合, 加热
而后立即使用。
砖 红 色 沉
实验流程(步骤)
1.可溶性还原糖
选材:含糖量较高的白色或近于白色的植物组织(排除色素对 显色的干扰),苹果、梨最好 。
制浆:去皮、切块、研磨,
制备组织样液: 过滤:(用单层纱布)
显色反应
取液:(2mL)
(用前混匀)
50~65.C水浴 加热2min
现象:
还原糖的检测和观察:
还原糖的检测结果
含糖高,颜色为
还原性糖的鉴定 白色的植物组织,
/
如苹果和梨
脂肪的鉴定 富含脂肪的种子 浸泡3~4小时 ,如花生
蛋白质的鉴定
富含蛋白质的 黄豆需浸泡1-2天, 黄豆或鸡蛋清 鸡蛋清要先稀释
C.蛋白质的鉴定
(1)在蛋白质的鉴定实验中,若用蛋白质作实验 材料,必须稀释,如果稀释不够,与双缩脲试剂发 生反应后会粘固在试管内壁上,使反应不彻底,且 试管不易洗刷干净。
(2)双缩脲试剂的使用,应先双缩脲加试剂 A(0.1g/mL的NaOH溶液),造成碱性的反应环 境,再加试剂B(0.01g/mL的CuSO4溶液)。
0.05g/mL
淀
在碱性
NaOH 浓度为
蛋白质 的鉴定
双缩脲试 剂NaOH和
CuSO4
环境下 的Cu2+
0.1g/mL
CuS04 浓度为
先加入Na0H 1mL,然后 再加CuS04 4滴,摇匀。 (不能过量)
不 需 要
溶 液 呈 紫
0.01g/mL
色
5、实验的材料的选择和处理有什么要求?
材料的选择 材料的处理
2.脂肪的鉴定
取材:花生种子(浸泡3-4h),去皮,将子叶削成薄片
脂肪微粒
①选取最薄的薄片移至载玻片中央
②在薄片上滴加苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ) 染液2 - 3滴,染色
制片:
2-3min
③滴加体积分数为50%的酒精溶液1—2滴,洗去浮色
(多余的苏丹Ⅲ )
④吸去余液,滴1-2滴蒸馏水,盖上盖玻片,制成临时装片
检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质
1.实验原理
生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定
实验原理
鉴定物质 还原性糖
脂肪 蛋白质
试剂 斐林试剂
苏丹Ⅲ 苏丹 双缩脲试剂
实验现象ห้องสมุดไป่ตู้
砖红色沉淀 橘黄色 红色 紫色
方法步骤: 1.实验材料、仪器和试剂的选择 2.设计记录表格,记录预测结果 3.检测的方法步骤 (1)还原糖的检测和观察; (2)脂肪的检测和观察; (3)蛋白质的检测和观察;
⑵.在做脂肪的鉴定实验中,实验材料最好选用富含 脂肪的种子,且徒手切片要成功,要求实验技能较高,不 妨改成刮取花生子叶泥制作临时装片,易做,效果又好。
⑶.在做糖和蛋白质的实验时,最好选用富含蛋白质 的生物组织,植物材料常用的是大豆,动物材料常用的是 鸡蛋,鉴定之前需要留出一部分样液,以便与鉴定后的样 液的颜色做比较,这样可增强说服力。
2.注意事项:
A.可溶性还原糖
(1)斐林试剂很不稳定,故应将组成斐林试剂的甲液 (0.1g/mL的NaOH溶液)和乙液(0.05g/mL的 CuSO4溶液)分别配制、储存,使用时,再临时配制, 将4~5滴乙液滴入2mL甲液中,配完后立即使用。切勿 将甲液和乙液分别加入组织样液中。
(2) 鉴定可溶性还原糖,加热试管时,应该用试管夹 夹住试管上部,放入盛开水的大烧杯加热;注意试管底部 不接触烧杯底部,同时试管口不要朝向实验者,以免试管 内溶液沸腾时冲出试管,造成烫伤。如果试管内溶液过于 沸腾,可以提起试管夹,使试管与沸水接触面减少,以免 溶液溢出。
B.脂肪的鉴定
(1) 在鉴定脂肪的实验中,若用花生种子作实验材 料,必须提前浸泡3~4小时,浸泡时间短了,不容易 切片,浸泡时间过长,则组织太软,切下的薄片不易 成形,切片要尽可能的薄。
(2) 染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色, 染色和洗浮色时间不宜过长(否则酒精将脂肪溶解影 响实验效果),观察时找最薄处最好只有1—2层细胞。