第二章 分光光度法
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第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用 ppt课件
光源透镜吸收池光栅光电二极管阵列检测器tu1800spc紫外可见分光光度计285新型分光光度计展示光度计photolabspektral适亍多种形状吸收池dr2700型便携式分光光度计便携性295分光光度法测量条件的选择1检测波长的选择丌易有其它物质干扰的较高的和宽的吸收峰处的波长302溶剂的选择及处理方法选择原则
分子能级的能量(各种能级能量总和)
或能量间隔各异，因此不同物质将
选择性地吸收不同波长或能量的外来
辐射，这是UV-Vis定性分析的基础。
（P164-166:电子跃迁的种类）
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
7
（2）定性分析方法：
♥与标准品、标准谱图对比
♥对比吸收光谱特征数据
♥对比吸收度的比值
第二章 紫外可见分光光度法在食品检
测中的应用
1
第二章 紫外-可见分光光度法
在食品检测中的应用
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
2
精品资料
你怎么称呼老师？
如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是
否会认为老师的教学方法需要改进？
你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？
教师的教鞭
“不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，
该法只有在测定浓度范围内遵守L-B定律，
且cx与cs大致相当时，才可得到准确结果。
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
18
b. 多组分定量方法
由于吸光度具有加和性，因此可以在同一试样中
测定多个组份。
设试样中有两组份X 和Y，将其显色后，分别绘
制吸收曲线，会出现如图所示的三种情况：
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
分子能级的能量(各种能级能量总和)
或能量间隔各异，因此不同物质将
选择性地吸收不同波长或能量的外来
辐射，这是UV-Vis定性分析的基础。
（P164-166:电子跃迁的种类）
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
7
（2）定性分析方法：
♥与标准品、标准谱图对比
♥对比吸收光谱特征数据
♥对比吸收度的比值
第二章 紫外可见分光光度法在食品检
测中的应用
1
第二章 紫外-可见分光光度法
在食品检测中的应用
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
2
精品资料
你怎么称呼老师？
如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是
否会认为老师的教学方法需要改进？
你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？
教师的教鞭
“不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，
该法只有在测定浓度范围内遵守L-B定律，
且cx与cs大致相当时，才可得到准确结果。
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
18
b. 多组分定量方法
由于吸光度具有加和性，因此可以在同一试样中
测定多个组份。
设试样中有两组份X 和Y，将其显色后，分别绘
制吸收曲线，会出现如图所示的三种情况：
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
现代光学分析：第2章 双(三)波长分光光度法
①.在双峰双波长位置有最大吸光度差值 公式
∆A= A2 –(-A1)= A2 + A1
②.双波长法可以提高分析校准曲线斜率
提高灵敏度原因:
以二甲苯胺蓝Ⅱ测定镁为例, ①.1线和3线斜率相同,仅参比溶液不 同,当1线减去固定试剂空白的吸光度 值得3线. ②.2线是以相应过剩显色剂作参比测 定结果,既1线减4可得2线. ③.2线与3线相比,2线的斜率大大高 于3线.
双组分的测定-（1）等吸收法
对于双组分体系中某一组分的测定,实质上在测定任一组分 时,要选择两个合适的波长,使另一组分在这两个波长处具有 相等的吸光度,以达到消除干扰的效果.
对于含有吸收光谱相互重叠的 A,B组分来说,选择波长必须考 虑两个条件:
①.B组分在 两个波长处 具有相同的 吸光度,即
ΔAB=0
如果选择合适的波长使As`A s``，通过吸收池的两道光束的 光信号差：
-log I2 = A2 -A1=A I1
A=( a2 -a1)bc
双波长测定方法-（1）等吸收点法
等吸收点:指在某一波长上的吸光度 不随浓度的变化而发生改变.
如果吸光物质在不同浓度的吸收曲线 有若干个等吸收点,可以选择其中一 个等吸收点处的波长作为参比波长 （1），与吸收物质的吸收峰波长 （2 ）组合。
三波长法中三个波长的选择——等吸收点法和计算法
等吸收点法
如果在干扰组分的吸收光谱上能找到三个 等吸收点,而且在此三波长处测得的待测组 分ΔA值较大.
如选择的三个波长相应于干扰物吸收曲线上三点处于 一条直线上,则测得干扰物的ΔA为0.
当干扰组分的吸收曲线 为一直线(如浑浊产生的 干扰, 右图),则在任选的 三个波长处测定,测得的 ΔA与干扰物浓度无关.
∆A= A2 –(-A1)= A2 + A1
②.双波长法可以提高分析校准曲线斜率
提高灵敏度原因:
以二甲苯胺蓝Ⅱ测定镁为例, ①.1线和3线斜率相同,仅参比溶液不 同,当1线减去固定试剂空白的吸光度 值得3线. ②.2线是以相应过剩显色剂作参比测 定结果,既1线减4可得2线. ③.2线与3线相比,2线的斜率大大高 于3线.
双组分的测定-（1）等吸收法
对于双组分体系中某一组分的测定,实质上在测定任一组分 时,要选择两个合适的波长,使另一组分在这两个波长处具有 相等的吸光度,以达到消除干扰的效果.
对于含有吸收光谱相互重叠的 A,B组分来说,选择波长必须考 虑两个条件:
①.B组分在 两个波长处 具有相同的 吸光度,即
ΔAB=0
如果选择合适的波长使As`A s``，通过吸收池的两道光束的 光信号差：
-log I2 = A2 -A1=A I1
A=( a2 -a1)bc
双波长测定方法-（1）等吸收点法
等吸收点:指在某一波长上的吸光度 不随浓度的变化而发生改变.
如果吸光物质在不同浓度的吸收曲线 有若干个等吸收点,可以选择其中一 个等吸收点处的波长作为参比波长 （1），与吸收物质的吸收峰波长 （2 ）组合。
三波长法中三个波长的选择——等吸收点法和计算法
等吸收点法
如果在干扰组分的吸收光谱上能找到三个 等吸收点,而且在此三波长处测得的待测组 分ΔA值较大.
如选择的三个波长相应于干扰物吸收曲线上三点处于 一条直线上,则测得干扰物的ΔA为0.
当干扰组分的吸收曲线 为一直线(如浑浊产生的 干扰, 右图),则在任选的 三个波长处测定,测得的 ΔA与干扰物浓度无关.
第二章-紫外-可见分光光度法在食品检测中的应用
谱只有2～3个较宽的吸收峰，具有相同生色团的
不同分子结构，有时在较大分子中不影响生色团
的紫外吸收峰，导致不同分子结构产生相同的紫
外吸收光谱——紫外吸收光谱相同，两种化合物
有时不一定相同。
例如：甲苯与乙苯：谱图基本相同
2021/6/4
6
（4）紫外光谱用于有机化合物结构辅助解析
a.可获得的结构信息
1）200～800nm 无吸收峰。脂肪族碳氢化合物、胺、醇、
4） 210～350 nm有强吸收峰（ε≥104），表明含有两个双
键的共轭体系（K）带。共轭二烯：K带（∼230 nm）；
α,β-不饱和醛酮：K带∼230 nm，260nm～3பைடு நூலகம்0 nm有强
吸收峰——3～5个双键的共轭体系。
2021/6/4
7
b.光谱解析注意事项
1）确认λmax，并算出logε，初步估计属于何种吸收
第二章 紫外-可见分光光度法
在食品检测中的应用
2021/6/4
1
一、紫外-可见分光光度法简介
1、什么是紫外-可见分光光度法？
根据物质分子对波长为200-760nm这一范
围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种
定性、定量和结构分析方法。
2021/6/4
2
2、什么是吸收曲线（吸收光谱）？
描述物质分子对辐射吸收的程度随波长而
定其在入射波长处对应吸光值；
得到标准曲线后，通过标准曲线法测
定待测试样的浓度。
2021/6/4
14
2）标准对比法：
该法是标准曲线法的简化，即只配制一个
浓度为cs的标准溶液，并测量其吸光度，
求出吸收系数k，然后由Ax=kcx求出cx
不同分子结构，有时在较大分子中不影响生色团
的紫外吸收峰，导致不同分子结构产生相同的紫
外吸收光谱——紫外吸收光谱相同，两种化合物
有时不一定相同。
例如：甲苯与乙苯：谱图基本相同
2021/6/4
6
（4）紫外光谱用于有机化合物结构辅助解析
a.可获得的结构信息
1）200～800nm 无吸收峰。脂肪族碳氢化合物、胺、醇、
4） 210～350 nm有强吸收峰（ε≥104），表明含有两个双
键的共轭体系（K）带。共轭二烯：K带（∼230 nm）；
α,β-不饱和醛酮：K带∼230 nm，260nm～3பைடு நூலகம்0 nm有强
吸收峰——3～5个双键的共轭体系。
2021/6/4
7
b.光谱解析注意事项
1）确认λmax，并算出logε，初步估计属于何种吸收
第二章 紫外-可见分光光度法
在食品检测中的应用
2021/6/4
1
一、紫外-可见分光光度法简介
1、什么是紫外-可见分光光度法？
根据物质分子对波长为200-760nm这一范
围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种
定性、定量和结构分析方法。
2021/6/4
2
2、什么是吸收曲线（吸收光谱）？
描述物质分子对辐射吸收的程度随波长而
定其在入射波长处对应吸光值；
得到标准曲线后，通过标准曲线法测
定待测试样的浓度。
2021/6/4
14
2）标准对比法：
该法是标准曲线法的简化，即只配制一个
浓度为cs的标准溶液，并测量其吸光度，
求出吸收系数k，然后由Ax=kcx求出cx
紫外可见分光光度法UltravioletVisible
A1 = 1bc1 A2 = 2bc2 A = 1bc1+ 2bc2
当物质中只有一种吸光组分，则上式简化 为：
A=bc
（3）定义2：若将I/I0称为透光度（亦称：透 射率），用T表示， T=I/I0 则 A= lgI0/I= - lgT= bc
2. 朗伯-比尔定律成立的条件及其偏离该定律 的因素 （1）成立的条件 (a) 适用于极稀的溶液(一般c<0.01molL-1)。 (b) 电磁波辐射和所讨论的吸光成分之间的 相互作用机制只是光被该成分吸收。 (c) 采用“单色光”。 (d) 吸收成分（分子或离子）的行为相互无 关，且不论其数量和种类如何。
iii) 分子络合物内部电荷转移 例如：在乙醇介质中，将醌与氢醌混 合，就可以得到美丽的醌氢醌暗绿色结晶， 它的吸收峰在可见光区。
特点：电荷转移吸收光谱的最大特点 是：吸收强度大，摩尔吸收系数一般超过 104L/ (mol cm)。
（3）两种吸收谱带的区别 这类光谱一般位于可见光区。 电荷迁移吸收带的谱带较宽，吸收强度 大，最大波长处的摩尔吸收系数max可大于 104 L cm-1mol-1。 与电荷迁移跃迁比较，配位场跃迁吸收 谱带的摩尔吸收系数小，一般max< 102L cm-1mol-1。
吸收峰红移，n→*跃迁所产生的吸收峰蓝移。
（3）除上述六种跃迁可产生紫外-可见吸收 谱带外，还有两种跃迁也可产生紫外-可见吸 收谱带，即电荷转移跃迁和配位场跃迁。
综上所述：发生在电磁光谱的紫外和可 见光区内的，由于电子的跃迁或转移而引起 的吸收光谱共有以上八种价电子跃迁类型。
3. 在有机物的紫外-可见谱解析中吸收带的分类 在有机物的紫外-可见谱解析中，通常将吸 收带分为以下四种类型。
而n→*、n→*和→*三种跃迁需要能
当物质中只有一种吸光组分，则上式简化 为：
A=bc
（3）定义2：若将I/I0称为透光度（亦称：透 射率），用T表示， T=I/I0 则 A= lgI0/I= - lgT= bc
2. 朗伯-比尔定律成立的条件及其偏离该定律 的因素 （1）成立的条件 (a) 适用于极稀的溶液(一般c<0.01molL-1)。 (b) 电磁波辐射和所讨论的吸光成分之间的 相互作用机制只是光被该成分吸收。 (c) 采用“单色光”。 (d) 吸收成分（分子或离子）的行为相互无 关，且不论其数量和种类如何。
iii) 分子络合物内部电荷转移 例如：在乙醇介质中，将醌与氢醌混 合，就可以得到美丽的醌氢醌暗绿色结晶， 它的吸收峰在可见光区。
特点：电荷转移吸收光谱的最大特点 是：吸收强度大，摩尔吸收系数一般超过 104L/ (mol cm)。
（3）两种吸收谱带的区别 这类光谱一般位于可见光区。 电荷迁移吸收带的谱带较宽，吸收强度 大，最大波长处的摩尔吸收系数max可大于 104 L cm-1mol-1。 与电荷迁移跃迁比较，配位场跃迁吸收 谱带的摩尔吸收系数小，一般max< 102L cm-1mol-1。
吸收峰红移，n→*跃迁所产生的吸收峰蓝移。
（3）除上述六种跃迁可产生紫外-可见吸收 谱带外，还有两种跃迁也可产生紫外-可见吸 收谱带，即电荷转移跃迁和配位场跃迁。
综上所述：发生在电磁光谱的紫外和可 见光区内的，由于电子的跃迁或转移而引起 的吸收光谱共有以上八种价电子跃迁类型。
3. 在有机物的紫外-可见谱解析中吸收带的分类 在有机物的紫外-可见谱解析中，通常将吸 收带分为以下四种类型。
而n→*、n→*和→*三种跃迁需要能
第二章--可见-紫外分光光度法(2012春)PPT课件
主讲教师：高金波
1
第二章 光谱分析法概论
主讲教师 高金波
2
本章主要介绍: 光学分析法定义 光学分析的三个主要过程 电磁辐射和电磁波谱 电磁辐射与物质的相互作用 光学分析法的分类
3
一、定义（光学分析法）
基于物质发射的电磁辐射或物质与电磁辐 射相互作用后产生的辐射信号或发生的信 号变化来测定物质的性质、含量和结构的 一类仪器分析法。
辐射的吸收特性进行的物质成分分析与分子结 构分析的方法
12
第一节 紫外-可见分光光度法 的基本原理和概念
转动能级差 振动能级差 外层价电子能级差
0.005~0.05V
0.05~1eV
1~20eV
250~25m 25000~1250nm 1250~60nm
吸收光谱 分子光谱 电子光谱
13
一、电子跃迁类型 ➢ 预备知识：
1 ．吸收光谱（吸收曲线）： 不同波长光对样品作用不同，吸收强度不同 以波长λ—吸光度A作图，所描绘的曲线为~
2 ．吸收光谱特征：定性依据 吸收峰→λ最大 吸收谷→λ最小 肩峰→λ sh 末端吸收→靠近200nm的呈现
19
图示
20
3 ．生色团（发色团）：
能吸收紫外-可见光的基团 有机化合物：具有不饱和键和未成对电子的基团
每种电磁辐射都有确定不变的频率
c ， 1
(2) 粒子性表现在:
每个粒子都具有能量 E
Hale Waihona Puke Ehhchc7五2. 电、磁光波学谱分: 电析磁法辐射分按类波长顺序排列而成
γ射线→ x 射线→紫外光→可见光→红外光→微波→无线电波
高能辐射区 γ射线 能量最高，可以引起核能级跃迁 χ射线 可以引起内层电子能级的跃迁
1
第二章 光谱分析法概论
主讲教师 高金波
2
本章主要介绍: 光学分析法定义 光学分析的三个主要过程 电磁辐射和电磁波谱 电磁辐射与物质的相互作用 光学分析法的分类
3
一、定义（光学分析法）
基于物质发射的电磁辐射或物质与电磁辐 射相互作用后产生的辐射信号或发生的信 号变化来测定物质的性质、含量和结构的 一类仪器分析法。
辐射的吸收特性进行的物质成分分析与分子结 构分析的方法
12
第一节 紫外-可见分光光度法 的基本原理和概念
转动能级差 振动能级差 外层价电子能级差
0.005~0.05V
0.05~1eV
1~20eV
250~25m 25000~1250nm 1250~60nm
吸收光谱 分子光谱 电子光谱
13
一、电子跃迁类型 ➢ 预备知识：
1 ．吸收光谱（吸收曲线）： 不同波长光对样品作用不同，吸收强度不同 以波长λ—吸光度A作图，所描绘的曲线为~
2 ．吸收光谱特征：定性依据 吸收峰→λ最大 吸收谷→λ最小 肩峰→λ sh 末端吸收→靠近200nm的呈现
19
图示
20
3 ．生色团（发色团）：
能吸收紫外-可见光的基团 有机化合物：具有不饱和键和未成对电子的基团
每种电磁辐射都有确定不变的频率
c ， 1
(2) 粒子性表现在:
每个粒子都具有能量 E
Hale Waihona Puke Ehhchc7五2. 电、磁光波学谱分: 电析磁法辐射分按类波长顺序排列而成
γ射线→ x 射线→紫外光→可见光→红外光→微波→无线电波
高能辐射区 γ射线 能量最高，可以引起核能级跃迁 χ射线 可以引起内层电子能级的跃迁
第二章 紫外-可见分光光度法-1
=40~80 80
nm时，显色反应对比度为中等；
nm时，显色反应具有较高的对比度。
一般要求显色剂与有色化合物的对比度 在60 nm以上。
2. 对比度在实际分析测定中的意义
对比度实质上表示了显色反应颜色变化 的程度；反映了过量显色剂对测定体系的影 响。 如果显色反应的对比度大，则过量试剂 对测定的影响较小；反之，对比度小，则过 量试剂对测定的影响就比较大。
第二章 紫外-可见分光光度法 (Ultraviolet-Visible Spectrophotometry) 又称: 紫外-可见分子吸收光谱法 （Ultraviolet-Visible Molecular Absorption Spectrometry）
2.1 紫外－可见分光光度法发展简史 1729年，Bouguer首先发现溶液对光的 吸收与液层厚度之间的关系。 1760年 ，Lambert就此基本定律进行了 数学运算，确定了相应的关系式。 1833年，Brewster在提取叶绿素及胡萝 卜素的研究中，注意到有机化合物的吸收光 谱。
2.4 光吸收定律—朗伯-比耳定律 1. 朗伯-比耳定律(Lambert-Beer Law) （1）定义1： A= lg I/I为吸光度(Absorbance)。 其中：I和I分别为试样入射光强度和出 射光强度。
（2）朗伯-比尔定律的数学表达式为： n A= i ci l i=1 其中：i表示某一吸光质点。c为浓度， 单位mol/L；l为液层厚度，单位为cm；为 摩尔吸光系数，单位L/(mol▪cm)。
机理：过渡金属络合物中，由于配位体的 影响，中心离子的d轨道或f轨道能级发生分 裂。当过渡金属络合物吸收了可见或紫外光 区的某部分波长的光时，d电子或f电子就可 以从较低的能级跃迁到较高的能级，称为d -d跃迁或f -f跃迁。
nm时，显色反应对比度为中等；
nm时，显色反应具有较高的对比度。
一般要求显色剂与有色化合物的对比度 在60 nm以上。
2. 对比度在实际分析测定中的意义
对比度实质上表示了显色反应颜色变化 的程度；反映了过量显色剂对测定体系的影 响。 如果显色反应的对比度大，则过量试剂 对测定的影响较小；反之，对比度小，则过 量试剂对测定的影响就比较大。
第二章 紫外-可见分光光度法 (Ultraviolet-Visible Spectrophotometry) 又称: 紫外-可见分子吸收光谱法 （Ultraviolet-Visible Molecular Absorption Spectrometry）
2.1 紫外－可见分光光度法发展简史 1729年，Bouguer首先发现溶液对光的 吸收与液层厚度之间的关系。 1760年 ，Lambert就此基本定律进行了 数学运算，确定了相应的关系式。 1833年，Brewster在提取叶绿素及胡萝 卜素的研究中，注意到有机化合物的吸收光 谱。
2.4 光吸收定律—朗伯-比耳定律 1. 朗伯-比耳定律(Lambert-Beer Law) （1）定义1： A= lg I/I为吸光度(Absorbance)。 其中：I和I分别为试样入射光强度和出 射光强度。
（2）朗伯-比尔定律的数学表达式为： n A= i ci l i=1 其中：i表示某一吸光质点。c为浓度， 单位mol/L；l为液层厚度，单位为cm；为 摩尔吸光系数，单位L/(mol▪cm)。
机理：过渡金属络合物中，由于配位体的 影响，中心离子的d轨道或f轨道能级发生分 裂。当过渡金属络合物吸收了可见或紫外光 区的某部分波长的光时，d电子或f电子就可 以从较低的能级跃迁到较高的能级，称为d -d跃迁或f -f跃迁。
第二章-紫外-可见分光光度法在食品检测中的应用
2021/6/4
31
（4）吸光度读数范围的选择
改变被测液浓度使吸光度在0.16～0.80范围内
（5）显色反应条件的选择
➢
➢
➢
➢
➢
2021/6/4
显色剂用量
溶液的酸度
温度
显色时间
干扰组成的去除
32
二、紫外-可见分光光度法
在食品检测中的应用
（一）、食品酶分析
一般步骤：
粗酶液制备→反应→终止反应→ （显色）→检测→计算
邻-硝基苯酚（ONP）：
黄色，420nm有特异吸
收
2021/6/4
34
“不同豆类乳糖酶活力的研究”
样品处理：红豆、绿豆、花生、黄豆→发芽→取10g →加
20mL预冷的缓冲液A（0.1mol/L磷酸缓冲液，pH为7.0、内
含5%甘油和1mmol/L EDTA），冰浴研磨，5000r/min冷冻
离心10min，收集上清液待测。
确性；
2021/6/4
10
(7)朗伯-比尔定律的偏离及其原因？
根据朗伯-比尔定律，在同一条件下进行测
定，A-c曲线应为通过原点的直线，但实际
工作中直线常常发生弯曲，这称为朗伯-比
尔定律的偏离。
原因：
吸光物质浓度较高；非单色光引起；介质
不均匀引起；吸光物质不稳定引起。
2021/6/4
11
剂)在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合
物还原而呈蓝色反应（钨兰和钨兰混合
物）。由于蛋白质中含有具有酚基的氨基
酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），因此，
蛋白质及其水解产物也呈此反应。利用蛋
白酶分解酪素（底物）生成含酚基氨基酸
的呈色反应，来间接测定蛋白酶的活力。
31
（4）吸光度读数范围的选择
改变被测液浓度使吸光度在0.16～0.80范围内
（5）显色反应条件的选择
➢
➢
➢
➢
➢
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显色剂用量
溶液的酸度
温度
显色时间
干扰组成的去除
32
二、紫外-可见分光光度法
在食品检测中的应用
（一）、食品酶分析
一般步骤：
粗酶液制备→反应→终止反应→ （显色）→检测→计算
邻-硝基苯酚（ONP）：
黄色，420nm有特异吸
收
2021/6/4
34
“不同豆类乳糖酶活力的研究”
样品处理：红豆、绿豆、花生、黄豆→发芽→取10g →加
20mL预冷的缓冲液A（0.1mol/L磷酸缓冲液，pH为7.0、内
含5%甘油和1mmol/L EDTA），冰浴研磨，5000r/min冷冻
离心10min，收集上清液待测。
确性；
2021/6/4
10
(7)朗伯-比尔定律的偏离及其原因？
根据朗伯-比尔定律，在同一条件下进行测
定，A-c曲线应为通过原点的直线，但实际
工作中直线常常发生弯曲，这称为朗伯-比
尔定律的偏离。
原因：
吸光物质浓度较高；非单色光引起；介质
不均匀引起；吸光物质不稳定引起。
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剂)在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合
物还原而呈蓝色反应（钨兰和钨兰混合
物）。由于蛋白质中含有具有酚基的氨基
酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），因此，
蛋白质及其水解产物也呈此反应。利用蛋
白酶分解酪素（底物）生成含酚基氨基酸
的呈色反应，来间接测定蛋白酶的活力。
第二章紫外-可见分光光度法
其数学表达式为：
A＝－ lgT ＝ － lg（ It / I0)= ε b c
式中：A：吸光度；T:透射率； b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位； c：溶液的摩尔浓度，单位mol·L-1； ε：摩尔吸光系数，单位L·mol-1·cm-1；
二. Lambert – Beer 定律的应用条件 1. 入射辐射为单色辐射 2. 吸收过程中各物质无相互作用 3. 辐射与物质的作用仅限于吸收过程，没有荧光，散 射光化学作用（适用于稀溶液）
ε>105：
超高灵敏；C= A/ε b =0.01/105=10-7 mol/L
ε=(6～10)×104 ：高灵敏； C= A/ε b =0.01/5 ×104= 2×10-7 mol/L
ε<104 ：
不灵敏。 C= A/ε b =0.01/104= 10-6 mol/L
ε 在数值上等于浓度为1 mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波 长下的吸光度。
４. 吸光系数的几种表示方法
A bC
C ---mol / L
ε---摩尔吸光系数
L ·mol –1 ·cm -1
A abC
C--g / L a---吸光系数
L ·g –1 ·cm -1
、 a之间的换算：ε= Ma
第四节 紫外-可见分光光度计
一. 主要组成及部件的功能
碘
光源
钨
灯
单色器
氘 灯光
有色物质的不同颜色是由于吸收了不同波长的光所致。只有 当入射光的能量同吸光体的基态与激发态能量相等时才会产生 吸收，溶液能选择性地吸收某些波长的光，而让其他波长的光 透过，这时溶液呈现出透过光的颜色。透过光的颜色是溶液吸 收光的互补色。
有色溶液对各种波长的光的吸收情况，常用光吸收曲线来描 述。将不同波长的单色光依次通过一定的有色溶液，分别测出 对各种波长的光的吸收程度（用字母A表示）。
A＝－ lgT ＝ － lg（ It / I0)= ε b c
式中：A：吸光度；T:透射率； b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位； c：溶液的摩尔浓度，单位mol·L-1； ε：摩尔吸光系数，单位L·mol-1·cm-1；
二. Lambert – Beer 定律的应用条件 1. 入射辐射为单色辐射 2. 吸收过程中各物质无相互作用 3. 辐射与物质的作用仅限于吸收过程，没有荧光，散 射光化学作用（适用于稀溶液）
ε>105：
超高灵敏；C= A/ε b =0.01/105=10-7 mol/L
ε=(6～10)×104 ：高灵敏； C= A/ε b =0.01/5 ×104= 2×10-7 mol/L
ε<104 ：
不灵敏。 C= A/ε b =0.01/104= 10-6 mol/L
ε 在数值上等于浓度为1 mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波 长下的吸光度。
４. 吸光系数的几种表示方法
A bC
C ---mol / L
ε---摩尔吸光系数
L ·mol –1 ·cm -1
A abC
C--g / L a---吸光系数
L ·g –1 ·cm -1
、 a之间的换算：ε= Ma
第四节 紫外-可见分光光度计
一. 主要组成及部件的功能
碘
光源
钨
灯
单色器
氘 灯光
有色物质的不同颜色是由于吸收了不同波长的光所致。只有 当入射光的能量同吸光体的基态与激发态能量相等时才会产生 吸收，溶液能选择性地吸收某些波长的光，而让其他波长的光 透过，这时溶液呈现出透过光的颜色。透过光的颜色是溶液吸 收光的互补色。
有色溶液对各种波长的光的吸收情况，常用光吸收曲线来描 述。将不同波长的单色光依次通过一定的有色溶液，分别测出 对各种波长的光的吸收程度（用字母A表示）。
紫外可见分光光度法
波长和颜色的关系
λ（nm） 400-450 450-480 480-490 490-500 500-560 560-580 580-610 610-650 650-760
颜色 紫 蓝 绿蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 橙 红
互补光 黄绿 黄 橙 红 红紫 紫 蓝 绿蓝 蓝绿
二、物质对光的选择性吸收
1、物质对光的吸收的本质
定性分析： 1、与标准品或标准图谱对比，鉴定未知物； 2、鉴别异构体 如：顺反异构、互变异构（如酮-烯醇式） 3、纯度检查
定量分析： 1、单一组分测定 2、多组分同时测定
第二节 紫外可见分光光度计
一、紫外可见分光光度计的构造
光源
单色器 吸收池
检测 系统
信号显 示系统
（一）光源
1、作用：提供符合要求的入射光。
3、分类： （1）可见光光源：
①钨丝灯：是最常见的可见光光源，它可发射波长 为325-2500nm范围的连续光谱，其中最适宜的使 用范围是320-1000nm，除用作可见光源外，还可 用作近红外光源。
②卤钨灯
在钨丝中加入适量的卤化物或卤素，灯泡用石 英制成，具有较长的寿命和高的发光效率。
（2） 紫外光光源： 多为气体放电光源，其中应用最多的是氢灯和
➢ 以光的衍射现象和干涉现象为基础（平面反射光栅和平面 凹面光栅）Βιβλιοθήκη （三）吸收池（又称比色皿）
1、作用：盛装被测溶液和参比溶液。 2、分类： （1）玻璃比色皿：适用于可见光区。（能否用于紫 外光区？） （2）石英比色皿：适用于紫外及可见光区。
3、主要规格： 0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm等。
紫外可见分光光度计基本组成
钨灯卤素 灯或氘灯
棱镜或光 栅，玻璃 或石英
原子吸收分光光度法
2. 化学原子化法(低温原子化法)
A.冷蒸汽原子吸收法 常温下把低沸点元素的原子蒸汽引入蒸汽区。 如： Hg2+＋Sn2+——Hg+Sn2+ B.氢化物原子化法 待测元素在强还原剂NaBH4或KBH4作用下生 成低沸点的共价分子型氢化物，如： As + HCl + KBH4 + H2O——AsH3 + KCl + HBO2 + H2 适于能生成易挥发氢化物的元素的分析。
由于基态原子发生电离，使得吸光度下降的 影响。 主要产生于电离电位低于6eV的元素。
消除:(1)采用低温火焰
(2)加入消电离剂（ionization buffer)
四、化学干扰(chemical interference)
（一）加入抑制剂 1.释放剂( releasing agent )。 例： Ca2+ +2HPO42- ——2CaHPO4—— CaP2O7＋H2O CaCl2 + HPO42- + La3+——LaPO4 + CaCl2 2.加“保护络合剂”。 例：测Ca2+时，PO43-有干扰，加入EDTA： Ca2+ + H2Y——CaY2- + H+ 测Mg时，Al有干扰，加入8－羟基奎啉，生 成Al－（8－羟基奎啉），消除Al对Mg的干扰。 （二）化学分离法。
二、Concept
共振线 resonance line 共振吸收线：电子从基态跃迁到最低激发 态发出的谱线。 共振发射线：电子从最低激发态跃迁回基 态发出的谱线。 又叫第一共振线，主共振线。 共振线可作分析线，分析线不一定是共振线
三、原子吸收定量分析原理 —光的吸收定律和峰值吸收法 （一）Lambert-Beer定律在AAS中的应用