组织病理切片的制作过程
病理标本制作流程
病理标本制作流程病理标本制作是病理诊断中至关重要的一环。
它能够为医生提供有效的病理诊断帮助，为患者的诊断和治疗提供可靠的依据。
下面将会介绍一下病理标本制作流程。
1. 标本获取对于需要制作病理标本的患者，首先需要进行标本获取。
标本获取的方法包括手术切除、穿刺、刮片、切片等。
手术切除是最常用的获取组织标本的方法，在手术过程中切除部位可以得到完整的组织标本。
穿刺是通过特殊的针头取出一小部分组织进行活检，这种方法相对于手术切除具有更小的创伤、更短的康复时间以及较低的费用。
刮片是用刮刀将组织表面的细胞刮下来，作为细胞组织切片，常用于液体活检中。
切片则是将组织样本切成微薄的片状，通常用于组织学以及病理诊断。
2. 标本固定接下来，对于新鲜获得的标本，需要对它们进行有效的固定。
标本固定的目的是保持标本的完整性，并防止其在处理过程中产生变形或腐败。
常用的标本固定方案包括福尔马林、乙醛、甲醛、B5等，其中最常用的是福尔马林固定液。
福尔马林固定液主要能够固定蛋白质，防止其在移植切片时溶解，并能够保存细胞和组织的形态结构。
3. 石蜡包埋在标本固定完毕后，需要进行石蜡包埋。
这个步骤的目的是将标本置入石蜡切片盒中，并在其中加入一定量的石蜡。
然后将石蜡切片盒置于高温平台上，石蜡逐渐熔化，在标本周围形成一定厚度的石蜡边界。
这个过程十分漫长，通常需要持续数小时之久。
4. 石蜡切片在石蜡包埋之后，标本会被固定在石蜡中。
为了从中得到切片，需要将石蜡切片机设置合适的参数，比如切片厚度、切片速度、加速度等。
在设置完毕之后，将石蜡切片盒置于切片区域，切片机快速运转，数千次往返，最终产生一系列的石蜡切片。
石蜡切片需要进行染色和病理分析，通常会用到常规的组织学染色方法，比如hematoxylin 和eosin（H&E）染色以及Masson染色等。
综上所述，病理标本制作流程涉及到多个环节，包括标本获取、标本固定、石蜡包埋和石蜡切片等。
这些环节都十分关键，需要仔细操作以保证病理标本的质量和准确性。
动物病理组织免疫组化制片操作规程
动物病理组织免疫组化制片操作规程1、取材选材部位以病灶与正常组织交界处的组织标本为好，取材要完整，要尽可能注意到整个器官的结构特点。
大小一般是1cm×1 cm×0.5 cm为宜。
在夹取组织时不要用力压、挤、揉等以免损坏组织。
2、固定以10%中性福尔马林固定液（固定液的量应为组织块的10-20倍）固定时间24-36小时。
组织长时间固定，固定液中的福尔马林含有的杂质会产生一种酸，影响核的染色，整个组织显得非常陈旧。
3、全自动脱水机：包括脱水、透明、浸蜡等步骤3.1、脱水组织经固定后，内含大量水分，须除尽水分才利于透明、浸蜡。
常用酒精为脱水剂，逐级提高酒精浓度，以防组织过度收缩、变脆或脱水不完全而影响制片效果。
脱水一般在室温下进行，由60%酒精、70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、100%酒精I、100%酒精II组成。
组织块在酒精中时间不宜过长，否则组织块容易变硬。
如切片后的蜡块中央呈灰白粗糙而不透亮，放置一段时间后蜡块中央出现一陷窝，此即表明组织脱水不够彻底，组织面暴露后水分蒸发，蜡块中央收缩形成陷窝，严重时难以切出完整切片。
注意定时更换新的脱水剂，一般在使用到1500个脱水盒(含组织块)后即可考虑更换脱水液。
3.2、透明在室温下，组织块采用二甲苯或TO透明剂中进行透明。
一般透明剂分为I、II两个试剂缸。
组织在二甲苯或TO透明剂中贮留时间必须严格掌握，时间稍长，则组织脆硬易碎；时间过短，石蜡不易渗透进去，使浸蜡不完全。
3.3、浸蜡恒温杯内温度应调至58-60℃为宜，使石蜡熔化完全。
石蜡分为I、II两个缸。
尽量控制组织块在石蜡中的浸泡时间，时间过长组织易碎；时间过短，石蜡未渗透进去，组织不能切片。
附：自动脱水机使用操作规程4、包埋将温箱中熔化好的石蜡倒进包埋框内，迅速用热镊子将组织放入包埋模具内，将要切的面朝下并摆正位置，多块的小的组织应集中放在一起，处于一个水平面上，管状组织如血管、气管、肠道等须立起来包埋，然后压上塑料盒，再注入少量的石蜡液，将其移放室温下一定时间后，再转移至冰冻台上冰冻固定，待其蜡块完全凝结后，取出蜡块，修切去抱抱盒周边浓度余蜡。
石蜡切片实验报告
石蜡切片实验报告一、实验目的石蜡切片技术是组织学、病理学等研究领域中常用的技术手段，通过本实验，旨在掌握石蜡切片的制作流程和方法，为后续的组织学观察和研究提供高质量的切片样本。
二、实验原理石蜡切片是将组织经过一系列处理，包括固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和染色等步骤，使其成为薄而均匀的切片，以便在显微镜下观察细胞和组织的形态结构。
三、实验材料与设备1、实验材料新鲜组织样本（如肝脏、肾脏、心脏等）固定液（如福尔马林）乙醇（不同浓度）二甲苯石蜡苏木精染液伊红染液中性树胶2、实验设备切片机烤箱显微镜染色缸移液器四、实验步骤1、取材与固定选取新鲜的组织样本，大小约为 1cm×1cm×03cm。
将组织样本迅速放入固定液中，固定时间根据组织的大小和性质而定，一般为 24 48 小时。
2、脱水将固定好的组织依次放入 70%、80%、90%、95%和 100%的乙醇中进行梯度脱水，每次脱水时间约为 1 2 小时。
3、透明脱水后的组织放入二甲苯中进行透明处理，透明时间约为30 分钟，直至组织变得透明。
4、浸蜡将透明后的组织放入已融化的石蜡中进行浸蜡，浸蜡温度约为 60 62℃，浸蜡时间为 2 3 小时。
5、包埋预先准备好包埋模具，将浸蜡后的组织放入模具中，注入融化的石蜡，待石蜡冷却凝固后，形成蜡块。
6、切片将蜡块固定在切片机上，调整切片厚度为4 6μm，进行连续切片。
7、展片与贴片将切好的切片放入 40 45℃的温水中展平，然后用载玻片将切片捞起，使其贴附在载玻片上。
8、烤片将贴片后的载玻片放入烤箱中，在 60 65℃下烘烤 2 3 小时，使切片牢固地贴附在载玻片上。
9、染色苏木精染色：将烤片后的切片放入苏木精染液中染色 5 10 分钟，然后用流水冲洗。
分化：用 1%盐酸乙醇分化，使细胞核染色清晰。
返蓝：用弱碱性溶液（如氨水）返蓝，使细胞核呈蓝色。
伊红染色：将切片放入伊红染液中染色 1 3 分钟，然后用流水冲洗。
石蜡切片的具体步骤与做法
石蜡切片的具体步骤与做法？石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。
石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。
缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。
制片时间太长。
石蜡切片的制作过程（一）材料与用具1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
（二）实验内容与步骤1．取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。
组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。
切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。
组织块取下后，先用先用0.85％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。
不同的组织应选用适当的固定液。
固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。
组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。
AFA固定液则不需要水洗。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
皮肤病理石蜡切片
省二院：
厂地：上海懿洋仪器有限公司
伊红（曙红Y） EosinY
配制伊红，有许多种方法，根据各单位的情况，使用不同 种类的伊红。 市售的伊红有两种：一是水溶性伊红，二是醇溶性伊红， 在我们的实践中，水溶性伊红用低浓度的酒精来配制，只要配 制得当，其效果非常好。 伊红 1g 70-75%酒精 100ml 先将伊红用蒸馏水(少许)调成浆糊状，再加入酒精，边加 边搅拌，直到彻底溶解，此时试剂有些混浊，取少许冰醋酸， 加入到试剂中去，试剂逐渐转变为清亮，呈鲜红色，染出切片， 效果很好。
目的，否则不易染色！（石蜡不与染液结合）
脱苯（水）→蒸馏水
无水乙醇 95%乙醇 80%乙醇 2min 2min 数秒
70%乙醇
流水冲过
反 酒 精 梯 度
比较：
我们没有反酒精梯度脱水， 只用了95%乙醇进行脱苯1min。
功能：脱去组织上多余的苯，使组织梯度进水水，进而染色。 注意：如果组织进入95%乙醇中有云雾状现象，说明二甲苯没有脱彻底或乙醇
3-4h
①我们95%乙醇采用两步脱水， 以减小收缩力。
无水乙醇Ⅰ ≧1.5h 无水乙醇Ⅱ ≧1.5h
功能：
②无水乙醇的脱水时间不超过 2h，与此相比较，相差将近2倍。
脱去组织中的水分，以便石蜡浸入。
注意：①水和石蜡不相容，需脱水彻底，以便制备出好的切片。
②无水乙醇同样具有使组织收缩变硬的影响，故不能时间过 长。 议：无水乙醇脱水3-4h皮肤组织会不会变硬？
透明
二甲苯Ⅰ 20min
比较：
20min
透明时间都相同，但我们用 的是松节油进行组织透明。
二甲苯Ⅱ
功能:
二甲苯是酒精和石蜡的共同溶剂（媒剂）目 的是为石蜡的浸入作媒介。
医院病理科病理切片操作规范
医院病理科病理切片操作规范病理切片是病理科诊断疾病的重要步骤之一，因此，对于病理切片操作应该遵循以下规范：2.标本固定：对于切片需要的组织标本，需要及时进行固定以防止组织脱落和变形。
通常使用10%的中性缓冲福尔马林进行固定，固定时间应根据样本大小和类型进行调整，以确保组织固定充分。
3.标本处理：接受标本后，需要进行适当的标本处理。
对于组织标本，应进行组织去水、蜡浸渍等处理，确保标本组织的切片质量。
对于细胞标本，应进行细胞离解和离心等处理。
4.病理切片制作：对于组织标本，制作病理切片通常采用甩片法或旋片法。
在制作切片之前，需要使用切片机对刀片进行清洗和消毒，并根据需要调整切片机的切片厚度。
确保制作的病理切片的厚度均匀一致。
5.切片染色：病理切片制作完成后，需要进行染色。
常用的染色方法包括苏木精-伊红染色、血液学染色、免疫组化染色等。
染色时，需要严格按照染色试剂的使用说明进行操作，确保染色的质量和结果的准确性。
6.切片质量控制：在病理切片操作过程中，需要进行质量控制以确保切片的质量。
包括检查切片的厚度、颜色、染色效果等。
对于染色不好或有问题的切片，需要重新制作。
7.切片保存和归档：制作完的病理切片需要进行保存和归档。
切片应放置在干燥、阴凉而通风良好的地方，避免切片暴露在阳光下，防止切片变形和褪色。
8.切片质量评估：对于制作的病理切片进行质量评估，包括切片的清晰度、染色的均匀性、细胞结构的完整性等。
评估结果可以作为诊断和治疗的参考。
总结：病理切片操作规范是病理科工作中非常重要的一环，合理规范的操作可以保证病理切片的质量，提高疾病的诊断准确性。
因此，医院病理科应该建立标本接受和登记制度，对标本进行适当处理，制作和染色病理切片，对切片进行评估和保存。
同时，医院病理科还应定期进行切片质量控制，提高切片的质量。
常规病理切片制作中常见的问题及处理方法
不能随意放置 ， 如皮肤 、 有乳头 的组织 ； ⑤包埋 时注意有无缝 线、 纸絮并剔 除 ； 如果组织边缘 四角翘起或扭 曲不平 ， ⑥ 应用
包埋镊压平 ； ⑦包埋用蜡要干净 、 致密 。包埋时蜡 缸温度不能 超过 ７ ０℃， 以防石蜡挥发 ， 污染环境 ； 刚包埋好 的蜡块不能 ⑧
立 即 冷冻 。
组织 以窄 面朝下 ； ③管腔 、 囊壁组织 要立埋 ； 有特殊要求 的 ④
以减 少和消除 甲醛颗 粒。②防止组织 同定不 良 ： 组织 固定不
均 匀 ， 央 区组 织 固定 不 良 ， 地 软 ， 仅 取 材 时 切 面 不 整 ， 中 质 不 还会影响脱水 、 明 、 蜡 、 剖开后继续固定。 透 浸 可
．
平行 。 如组织发脆可边 向蜡块吹气 边切 。防毛笔丝进入刀 口。 每切一个蜡块都应该将 切片刀和 刀架 上碎屑清理干净 ， 避免
相互污染 。
时产生白色云雾状 ， 示脱水 不彻底 ， 须更换酒精 、 甲苯 。 二 ⑤伊
红不易着染时可加入数滴冰醋酸酸化 。 但也不能过 多， 否则核 质红染。 ⑥封片时注意避免 口、 鼻呼 出气体接触树胶或室内湿
的第… 关 。周定 的 目的是组织保 持在活体 内原 有形态 ， 使细
胞 内 各 种 化 学 成 分 得 以定 为 不 可 溶 性 ， 淀 、 同 细 胞 内 物 沉 凝 质 。 固定 剂 可 与 蛋 白质 交 联 ， 之 变性 、 织 硬 化 、 构 固定 ， 使 组 结 同定 后 可 与 染 料 结 合 ， 强 着 色 能 力 ， 得 显 微 镜 下 易 于 清 增 使
６ｈ 大标本一定 要按要求 切开固定 ， 当 日手术标本 不要 急 ； 对 于取材 ， 固定 ２ 待 ４ｈ后再取 。 尤其是要做免疫组 织化 学（Ｈ Ｉ Ｃ）
肺梗死病理切片实训报告
一、实训背景肺梗死是肺循环障碍导致肺组织坏死的一种疾病，常见于老年人、患有慢性阻塞性肺疾病、心血管疾病等患者。
为了深入了解肺梗死的病理变化，提高病理诊断水平，本次实训采用肺梗死病理切片进行观察和分析。
二、实训目的1. 熟悉肺梗死的病理形态学特点；2. 掌握病理切片的制作和观察方法；3. 提高病理诊断能力。
三、实训内容1. 实验材料肺梗死病理切片、显微镜、染色试剂、载玻片、盖玻片、酒精、蒸馏水等。
2. 实验步骤（1）切片准备：将肺梗死病理切片置于显微镜载物台上，调整切片厚度至合适位置。
（2）染色：将切片浸入苏木精染液中，染色5-10分钟，然后用蒸馏水冲洗。
接着将切片浸入伊红染液中，染色2-3分钟，再用蒸馏水冲洗。
（3）封片：用载玻片和盖玻片将切片夹紧，滴加中性树胶封片。
（4）观察：将染色后的切片置于显微镜下，依次观察肺梗死病理切片的各个结构。
四、实训结果与分析1. 肺梗死病理切片观察结果（1）肺泡结构：肺梗死病理切片显示，肺泡壁增厚，肺泡腔内充满红细胞和纤维素。
（2）肺血管：肺梗死区域肺血管壁增厚，管腔狭窄或闭塞，血管内可见血栓形成。
（3）肺实质：肺实质细胞出现水肿、坏死，部分细胞出现核固缩、核溶解。
2. 分析（1）肺泡结构变化：肺梗死导致肺泡壁增厚，肺泡腔内充满红细胞和纤维素，提示肺组织出现出血和炎症反应。
（2）肺血管变化：肺梗死区域肺血管壁增厚，管腔狭窄或闭塞，血管内可见血栓形成，提示肺血管阻塞是肺梗死的主要原因。
（3）肺实质变化：肺实质细胞出现水肿、坏死，部分细胞出现核固缩、核溶解，提示肺梗死导致肺组织损伤。
五、实训总结通过本次肺梗死病理切片实训，我对肺梗死的病理形态学特点有了更深入的了解，掌握了病理切片的制作和观察方法。
以下是我对本次实训的总结：1. 肺梗死病理切片观察结果与理论知识相符，验证了肺梗死的病理变化特点。
2. 通过实训，提高了我的病理诊断能力，为今后临床病理诊断工作打下了基础。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
组织病理切片的制作过程1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。
故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。
(2)注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部，或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。
这时宜采用注射固定或灌注固定法。
将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。
(3)蒸汽固定法：比较小而厚的标本，可采用锇酸或甲醛蒸汽固定法。
如血液涂片，则应在血片未干燥前采用锇酸或甲醛蒸汽接触固定。
最常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。
3．脱水透明标本经过固定和冲洗后，组织中含有较多的水分，必须将组织块内的水分置换出来，这一过程叫做脱水。
无论是用石蜡切片，还是用火棉胶切片，都必须除去组织中所含水分，因含水组织与石蜡、火棉胶等包埋材料不相容，常用的脱水剂为一系列不同浓度的乙醇。
脱水的步骤是：80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时，此过程可用脱水机自控完成。
丙酮也是一种脱水能力很强的脱水剂，但因其脱水能力很强，对组织有剧烈收缩作用，在制作科研、教学切片时一般不用该试剂。
因乙醇、丙酮等不溶于石蜡，还要经过一个能溶于石蜡的溶剂替代过程称为透明。
常用的透明剂有二甲苯、三氯甲烷、水杨酸甲酯等。
4．浸蜡、包埋(1)使石蜡浸入组织中，取代组织中含有的透明剂。
(2)包埋：将浸蜡后的组织置于融化的固体石蜡中，石蜡凝固后，组织即被包在其中，称蜡块，此过程称为包埋。
5．切片和贴片(1)修整蜡块：可视其组织的大小，在组织边缘约0.1～0.2cm处，切去余蜡部分，否则易造成组织皱缩不平。
(2)准备好切片用具：切片刀、毛笔、眼科镊子（弯）、漂烘温控仪(3)安装蜡块：将修好的蜡块安装在金属或木制持蜡器上。
(4)安装切片刀：将切片刀安装在切片机的刀台上，把刀台上的紧固螺丝旋紧，使切片时不产生振动，能保持一定的切片厚度。
(5)切片的厚度：切片机的厚度调节器上刻有0～50μm或0～25μm，可任意选择其厚度，石蜡切片的厚度一般在4～6μm。
(6)切片(7)铺片：用眼科镊子镊起蜡带轻轻平铺在40～45℃的水面上，借水的张力和水的温度，将略皱的蜡带自然展平。
(8)贴片、烘片：待切片在恒温水面上充分展平后，将蜡片捞到载玻片的中段处倾去载玻片上的余水，置入60～65℃恒温箱内或切片漂烘温控仪的烘箱内烤片15～30分钟，脱去溶化组织间隙的石蜡。
6．染色和封片常用的染色方法是苏木素-伊红（Hematoxylin-Eosin）染色法，简称H.E染色法。
这种方法对任何固定液固定的组织和应用各种包埋法的切片均可使用。
苏木素是一种碱性染料,可使组织中的嗜碱性物质染成蓝色，如细胞核中的染色质等；伊红是一种酸性染料，可使组织中的嗜酸性物质染成红色，如多数细胞的胞质、核仁等在H.E染色的切片中均呈红色。
H.E染色程序如下:脱蜡、脱苯、复水、染色、脱水、透明、封固常规苏木素染色中的对比染色是用伊红,近年来在英、美国家的一些实验室则采用焰红（phloxine）,此外也有用桔黄G（OrangeG）、比布里希猩红(Biebrich scarlet)、波尔多红(Bordeaux red)等作为对比染色。
伊红为染胞质、胶原纤维、肌纤维、嗜酸性颗粒等常用的染料。
1 . 取材取材的好坏，直接影响切片的质量。
医生在取材时，首先要有一把锋利的取材刀，在切割组织时要避免取材刀来回拖拉，切取的组织块厚薄要均匀，一般厚度以0.2 ～0.3cm为适，较容易发脆的组织如甲状腺、肝脏、血块、淋巴结、大块癌组织等可适当厚一点，而脂肪组织、肺组织、纤维性肿瘤、平滑肌瘤等致密的或试剂不易渗入的组织应取薄一些；淋巴结应修掉两侧球冠，并尽量剔除周围的脂肪组织。
在取材中还应十分注意组织内是否有缝线或骨组织，如碰到不可避免的钙化组织，应与技术室讲明，在切取纤维组织、肌肉组织、胃肠道时，应注意纤维及肌肉的走向，取材时尽可能按与纤维平行走向切取为佳。
2 . 固定固定是技术室工作的第一步，也是在整个制片过程中无法补救的一步。
所谓“固定”，就是组织离体后，用各种办法使其细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置的过程。
固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败，防止了细胞内的酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各和成分如蛋白质、脂肪、碳水化合物或酶类转变为不溶性物质，以保持原有的结构与生活时相仿。
另外，组织固定后，均呈一定的硬化状态，增加组织韧性，而且不易变形，有利于以后的组织处理。
所以组织一旦离体必需及时固定，固定液的量应为组织的5倍。
固定的关键主要与固定的及时性、固定液的选择、固定液的浓度、固定的温度和时间有关。
最常用的固定液为10％福尔马林。
笔者认为，10％福尔马林由于受到福尔马林的质量、使用时的挥发和取材时带入的水分影响，浓度被降低致组织固定不足，而高浓度的福尔马林，降低了对组织的穿透性，形成周围固定好而中央固定不到的现象。
通过实践，本人认为以酸性12～15％的福尔马林最佳。
大标本（2cm厚）一般需要6～12个小时，小标本一般需要3～6个小时；当室温低18℃时，可在37℃以下的温箱内加温4～6个小时。
由于HE染色最佳着色PH为3.5～4.5, 中性福尔马林对苏木素染色有一定影响,细胞核容易发灰,核染色质不佳。
所以, 尽管中性福尔马林对抗原有很好的保存作用，但酸性福尔马林对绝大多数抗原来说也有很好的保存作用，所以在没有特别处理的情况下常规HE用12～15％酸性福尔马林也可以（每100毫升12～15％福尔马林液内加5毫升冰醋酸）。
骨髓、结缔组织固定以Bouin液为佳，经Bouin液固定后的组织必须流水冲洗4小时以上。
有条件的单位可根据不同要求选用二种或二种以上的固定液；少数单位还可建立组织冷冻库，以便适应各种特殊的处理要求。
3. 水洗固定后水洗（10～20分钟），通常被很多人所忽视，而水洗不彻底，容易造成脱片和染色不鲜艳。
对需做免疫组织化学的组织，更不应当忽视。
福尔马林不利于组织块内抗原的保存4 . 脱水和透明所谓脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于有机溶剂的渗入，这一过程称为脱水。
脱水是否彻底，直接关系到组织是否能充分透明，而脱水过度（原因是组织在纯酒精内时间过久，发生组织质地发生变化）容易造成组织发脆。
造成组织发脆的原因还有加温（温度超过35℃）、脱水剂内加有丙酮、浸蜡用的石蜡中二甲苯过多等等。
一般我们总认为组织发脆跟高浓度酒精有关，而忽视了与低浓度的酒精关系，其实低浓度的酒精具有强大的穿透力，比纯酒精更容易渗透到组织块内部使之脱水，组织如果在低浓度酒精里充分脱水，在高浓度酒精里只需脱去从低浓度到高浓度之间的水份，因此，仅需短时间就可完成，如果这时不缩短纯酒精的时间，便会引起组织发脆；如果脱水时加温，使用丙酮，还可引起组织收缩，并影响免疫组织化学的标记。
为了使石蜡浸入到组织块内，必须经过一种既能与脱水剂混合，又能与石蜡相溶的媒介物质，这个过程称透明。
目前最好的透明剂是二甲苯。
很多人认为二甲苯极容易使组织发脆，这个观点很片面，在常温下，如果不是时间过长（超过２4小时以上）二甲苯并不会引起组织过份发脆，相反会使某些组织结构比较质韧的组织：比如子宫肌瘤等相当好切），但是当二甲苯温度超过35℃以后，极易引起组织发脆。
所以本人认为，大小标本最好分开脱水，一般情况下，大标本脱水时间（室温18℃）以80％酒精2小时、95％酒精（2道）各1个半小时至2小时、纯酒精（3道）各1个半小时至2小时，二甲苯（2道）各30-60分钟为宜；小标本脱水时间应相应缩短。
脱水时间长短，与室温高低有密切的相关。
我们在实践中发现，室温在12～15℃时，可作为一个临界温度范围。
当室温高于此温度范围时，组织容易脱水，可适当缩短脱水时间；而室温低于该温度范围时，应适当延长脱水时间（如能保证在一个恒定的温度下最佳）。
更换试剂，应以量为基础，定量更换，不能等到切片不好时再去更换。
否则，至少会有2～3批组织切片不好。
根据我科经验，如试剂用量为500ml，每500个蜡块更换一次为宜。
5. 浸蜡组织透明后，在熔化的石蜡内浸渍的过程称为浸蜡。
用其他浸透剂（如火棉胶、明胶等）渗入组织内部的过程可称为浸透或透入。
浸蜡温度过高（超过60℃），在蜡内加入二甲苯蜡或由于透明时带进的二甲苯过多，都会导致组织发硬，还会使组织内的抗原受到破坏；所以作者主张浸蜡用的石蜡熔点在56℃（三道），第一道：石蜡30分钟；第二道：石蜡90分钟；第三道：石蜡，90分钟。
浸蜡温度控制在56～58℃左右。
（第一道也可用硬脂酸石蜡1：3混合浸蜡，不仅可软化组织，特别适用于比较韧、硬的组织，而且由于硬脂酸是弱酸性的，对细胞核有媒染作用，核浆比鲜明，但容易脱片；同时对疏松组织容易散片）。
有条件的可以每天打开第一道石蜡的盖子，让二甲苯挥发。