黑曲霉固体发酵三七药材的皂苷变化研究
广西三七中皂苷成分的含量测定及其变化
广西三七中皂苷成分的含量测定及其变化
刘华钢;梁秋云;赖茂祥;黄慧学
【期刊名称】《中国实验方剂学杂志》
【年(卷),期】2006(12)5
【摘要】目的:高效液相色谱法测定不同药龄、不同月份生育期的广西三七中皂苷的含量,并考察其变化规律,为广西三七的质量评价提供依据。
方法:采用HPLC 法,Shim-pack CLC-ODS柱分离,流动相:乙腈与水梯度洗脱,检测波长203nm,柱温:室温,流速1mL/min。
结果:不同药龄、不同月份生育期的广西三七中人参皂苷
Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1的含量有明显差异,4年药龄的广西三七10月份采收三七皂苷含量最高。
结论:所建立的高效液相色谱法灵敏度高,专属性强,重复性好,能准确、快速地进行含量测定;药龄及月份生育期是影响广西三七皂苷含量的重要因素。
【总页数】3页(P5-7)
【关键词】HPLC;三七;人参皂苷;三七皂苷;采收期
【作者】刘华钢;梁秋云;赖茂祥;黄慧学
【作者单位】广西医科大学;广西中医药研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.三七中三种皂苷含量测定方法的比较研究 [J], 张涛;冯一凡;张明
2.HPLC法测定三七中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量 [J], 李华丽;王小龙;李梅荣;叶晓亚
3.HPLC-ELSD 法测定含三七中成药的皂苷成分的含量 [J], 王芮;郭华
4.超高效液相色谱法测定三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量 [J], 谢耀轩;林亚珠
5.HPLC法测定三七中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量 [J], 何书平
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黑曲霉固态发酵产纤维素酶条件优化及秸秆糖化研究
黑曲霉固态发酵产纤维素酶条件优化及秸秆糖化研究黑曲霉固态发酵产纤维素酶条件优化及秸秆糖化研究摘要：纤维素酶在生物能源领域中扮演着重要角色，能够有效降解秸秆等废弃物，并转化为发酵产物，如生物乙醇。
本研究通过固态发酵的方式培养黑曲霉，优化产纤维素酶的条件，并利用优化的酶解液对秸秆进行糖化实验，探究最佳的糖化条件。
关键词：黑曲霉；固态发酵；纤维素酶；秸秆糖化1. 引言随着能源危机的严峻形势和环境问题的日益突出，生物质能源作为一种可再生、环境友好的能源逐渐受到人们的关注。
秸秆作为生物质资源的一种，具有庞大的潜在能量价值，但其利用率低下。
纤维素作为秸秆主要成分之一，具有较高的结晶度和难以降解的特点，传统的物理、化学方法不能有效降解纤维素。
2. 方法及实验步骤2.1 培养黑曲霉产生纤维素酶选择黑曲霉作为研究对象，进行固态发酵培养。
黑曲霉菌种接种于固态培养基中，控制温度、湿度等条件。
根据黑曲霉固态发酵产酶曲线，确定最佳培养时间和培养温度。
2.2 优化产纤维素酶的条件通过单因素实验以及响应面试验，探究培养基配方、碳源浓度、氮源浓度、pH值等因素对纤维素酶产量的影响。
通过分析实验数据，确定最佳的产酶条件。
2.3 秸秆糖化实验利用优化的纤维素酶酶解液对秸秆进行糖化实验。
调整酶解液的酶解时间、温度和pH值等参数，探究最佳的糖化条件。
通过测定糖化液中的还原糖含量，评估糖化效果。
3. 结果与讨论3.1 产纤维素酶的固态发酵条件优化在黑曲霉固态发酵条件下，最佳培养时间为7天，最佳培养温度为32℃。
该条件下，纤维素酶的产量达到最高。
3.2 产纤维素酶的条件优化通过单因素实验和响应面试验优化产纤维素酶的条件，得到最佳培养基配方为：碳源浓度5g/L，氮源浓度4g/L，pH值5.5。
3.3 秸秆糖化效果评估在最佳糖化条件下，糖化液中的还原糖含量达到最高值，说明纤维素酶能够有效降解秸秆中的纤维素，释放出糖分。
4. 结论通过本次研究，确定了黑曲霉固态发酵产纤维素酶的最佳条件，并利用优化的纤维素酶对秸秆进行糖化实验，证实了纤维素酶能够有效降解秸秆中的纤维素。
《三七总皂苷对K562细胞抗肿瘤作用及机制的研究》
《三七总皂苷对K562细胞抗肿瘤作用及机制的研究》摘要本研究主要探讨了三七总皂苷（PNS）对K562细胞的抗肿瘤作用及其潜在机制。
通过一系列实验，我们观察了PNS对K562细胞的增殖抑制作用，以及其对细胞凋亡、细胞周期、信号通路等方面的影响。
实验结果表明，三七总皂苷具有显著的抗肿瘤作用，其机制涉及多个层面。
一、引言三七是一种常用的中药材，具有广泛的药理作用，其中三七总皂苷（PNS）是其主要的有效成分之一。
近年来，研究表明PNS具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种生物活性。
K562细胞是一种人慢性髓性白血病细胞，常被用作肿瘤研究的模型。
因此，本研究旨在探讨PNS对K562细胞的抗肿瘤作用及机制。
二、材料与方法1. 材料实验所用的三七总皂苷（PNS）购自某某制药公司，K562细胞购自中科院细胞库。
实验所用药品与试剂均符合实验要求。
2. 方法（1）细胞培养与处理：K562细胞在含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养，并加入不同浓度的PNS进行处理。
（2）细胞增殖检测：采用MTT法检测PNS对K562细胞增殖的影响。
（3）细胞凋亡检测：通过流式细胞术检测PNS处理后K562细胞的凋亡情况。
（4）细胞周期检测：利用PI染色法检测PNS对K562细胞周期的影响。
（5）信号通路分析：通过Western blot法分析PNS处理后K562细胞中相关信号通路的变化。
三、结果1. PNS对K562细胞增殖的抑制作用实验结果显示，PNS能够显著抑制K562细胞的增殖，且呈剂量依赖性。
在较高浓度下，PNS几乎完全抑制了K562细胞的增殖。
2. PNS诱导K562细胞凋亡流式细胞术检测结果显示，PNS处理后，K562细胞的凋亡率显著增加。
这表明PNS能够诱导K562细胞发生凋亡。
3. PNS对K562细胞周期的影响PI染色法检测结果显示，PNS处理后，K562细胞周期发生阻滞，主要停留在G0/G1期和S期，表明PNS可能通过干扰细胞周期进程来抑制K562细胞的增殖。
三七总皂苷的提取分离和纯化实验方案
三七总皂苷的提取分离和纯化实验方案三七总皂苷是一种具有药用价值的天然产物，其提取、分离和纯化是研究和开发其药用价值的重要环节。
下面是一个关于三七总皂苷的提取、分离和纯化实验方案的简要描述。
1. 原料准备：-采用鲜三七根茎为原料，首先进行清洗和切碎，以便提高提取效率。
-预先准备好一定量的有机溶剂（如乙醇、甲醇等），用于提取和分离。
2. 提取过程：-将切碎的三七根茎置于有机溶剂中，进行浸泡提取。
-选择适当的提取时间和温度，常规条件下可选择30-60分钟的提取时间，在温度范围为50-70摄氏度进行提取。
-可采用超声波辅助提取，以提高提取效率。
3. 过滤和浓缩：-提取液经过滤，去除悬浮物和固体颗粒。
-使用旋转蒸发器或其他适当的浓缩方法，将提取液浓缩至一定体积，以便后续的分离和纯化步骤。
4. 分离步骤：-可采用柱层析技术进行初步分离，选择合适的吸附剂和洗脱溶剂，以使目标化合物与其他杂质分离。
-通过调节洗脱溶剂的极性和流速，可以优化分离效果。
5. 纯化过程：-将初步分离得到的目标化合物溶解在适当的溶剂中，进行再结晶或凝胶柱层析等纯化操作。
-通过重复纯化步骤，可以获得更高纯度的三七总皂苷。
6. 分析与评价：-使用合适的分析方法（如高效液相色谱、质谱等），对提取和纯化得到的样品进行分析和评价，确定三七总皂苷的含量和纯度。
7. 结果记录和数据处理：-记录实验过程中的操作步骤、观察结果和实验数据。
-对实验结果进行统计和数据处理，计算提取率、分离纯度等指标。
8. 结果分析和优化：-对得到的三七总皂苷样品进行分析，如测定其含量、质量和纯度。
-根据结果进行优化，可对提取时间、溶剂比例、温度等参数进行调整，以提高提取和纯化效果。
9. 产品保存：-对纯化得到的三七总皂苷进行适当的保存和储存，避免光照和潮湿等有害因素对其质量的影响。
-建议将样品存放在干燥、密封的容器中，冷藏保存以延长其稳定性和有效期。
10. 安全注意事项：-在实验过程中，注意个人防护，佩戴适当的实验手套、护目镜和实验服。
黑曲霉AF-98固体发酵产纤维素酶的产酶条件研究
黑曲霉AF-98固体发酵产纤维素酶的产酶条件研究
黑曲霉AF-98固体发酵产纤维素酶的产酶条件研究
通过单因子及正交试验,对黑曲霉AF-98固体发酵产纤维素酶的产酶条件进行了探讨.其优化的产酶条件为:甘蔗渣3g,麸皮2g,加含尿素为0.15%的Mandels营养液25mL(加水比1:5),调初始pH5.0,28℃发酵72h.在此优化条件下,纤维素酶活力可达7.56u/g干曲.
作者：伍红陆兆新吕玫徐源 WU Hong LU Zhao-Xin LU Mei XU Yuan 作者单位：伍红,WU Hong(西南民族大学生命科学与技术学院,成都,610041)
陆兆新,吕玫,徐源,LU Zhao-Xin,LU Mei,XU Yuan(南京农业大学食品科技学院,南京,210095)
刊名：菌物学报 ISTIC PKU 英文刊名： MYCOSYSTEMA 年，卷(期)： 2006 25(3) 分类号： Q94 关键词：真菌单因子试验培养条件优化麸皮。
三七总皂苷对肝癌高转移细胞HCCLM3的抑制作用研究
法 。结果 ： 乙肝清热 解毒 片等 中成 药对 ５株 阳性代 表 菌株有
不 同程 度 的 抗 菌 活性 。结 论 ： 择 适 当的 检 查 方 法 ， 提 高微 选 可
生 物 检 出率 。
科学 、 准确 ， 检测前应进行方法 学验证 。本文通过对 乙肝清热
解毒片等 中成药进行方法学验证试 验 ， 果表 明： 结 对具有抑菌 作用 的中成药 ， 其抑菌作用的强弱不 同， 进行微 生物限度检查
疗 药物毒副作用 大 ， 效不 理想 。因此 寻找一 种低 毒副作 用 疗
药 物 能 抑 制 肝 癌 术 后 复 发 转 移 显 得 很 有 意 义 。三 七 总 皂 苷 是
１ ３ 统计分析 ．
学差异 。
２ 结 果
实验数据用 （ ±ｓ 表示 。采用 Ｓ Ｓ ３ ０ ） Ｐ Ｓ １．
ｉ２ 培养基 ．
营 养琼脂 、 玫瑰 红钠 琼 脂 、 养 肉汤 、 良马 营 改
蛋 白并 细胞 角质 蛋 白 ８阳性 ， 具备肝癌细胞 特点 ； 用该 细胞瘤 组织原位接种 于裸 鼠肝脏 ， ５周 后腹壁 转移 １ ０ 、 腔 内转 ０ 腹 移 ８ 、 内转移 １０ 、 Ｏ 肝 ０ 膈肌 转移 ７ 、 Ａ ｏ Ｏ 肺转 移 １０ ， ０ 具有
尽每孔 中的液体 ， 加入二 甲基亚砜 １Ｏ ｌ ， ５ ／ 在震 荡器上震荡 孔
５ｍｉ， 结晶物充分溶解 。在全 自动酶标读 数仪上分 别测定 ｎ使
５ ０ｎ 波 长 处 不 同 时 间 （４ｈ ４ 、２ｈ 、 同药 物浓 度 下 的 ７ ｍ ２ 、８ｈ ７ ）不
降低 ， 且 这 种 作 用 随 时 间和 药 物 浓 度 增 加 更 加 明 显 。倒 置 并 显微 镜 观 察 发 现 三 七 总 皂 苷 作 用 后 细 胞 密 度 降 低 。 结 论 ： 三
《三七总皂苷对K562细胞抗肿瘤作用及机制的研究》
《三七总皂苷对K562细胞抗肿瘤作用及机制的研究》一、引言随着肿瘤疾病发病率的不断上升，抗肿瘤药物的研究成为了医学领域的重要课题。
三七作为一种传统中药材，其总皂苷成分被广泛关注，其潜在的抗肿瘤作用受到了研究者的青睐。
本论文以三七总皂苷为研究对象，以K562细胞为实验模型，对其抗肿瘤作用及机制进行深入研究。
二、材料与方法1. 材料三七总皂苷购自正规中药材供应商；K562细胞来自中国典型培养物保藏中心。
2. 方法采用细胞培养、MTT法、流式细胞术、PCR等技术手段，探究三七总皂苷对K562细胞的增殖抑制作用，并从细胞周期、凋亡等角度揭示其抗肿瘤机制。
三、实验结果1. 三七总皂苷对K562细胞的增殖抑制作用实验结果显示，三七总皂苷对K562细胞的增殖具有显著的抑制作用。
随着皂苷浓度的增加，K562细胞的生长速度明显减慢，且在较高浓度下出现大量死亡细胞。
2. 细胞周期和凋亡的改变三七总皂苷作用后，K562细胞的细胞周期发生明显改变，G0/G1期细胞比例增加，S期和G2/M期细胞比例减少。
同时，流式细胞术检测结果显示，三七总皂苷可诱导K562细胞发生凋亡，凋亡率随皂苷浓度的增加而升高。
3. 抗肿瘤机制研究通过PCR技术检测相关基因表达水平发现，三七总皂苷可上调p53、Bax等促凋亡基因的表达，同时下调Bcl-2等抗凋亡基因的表达。
此外，三七总皂苷还可抑制肿瘤细胞内相关信号通路的活性，如NF-κB等。
这些结果表明，三七总皂苷通过调控细胞周期、诱导凋亡及抑制相关信号通路等途径发挥抗肿瘤作用。
四、讨论三七总皂苷对K562细胞的抗肿瘤作用主要体现在抑制细胞增殖、诱导细胞周期改变和凋亡等方面。
通过调控相关基因的表达及抑制肿瘤细胞内信号通路的活性，三七总皂苷实现了对K562细胞的全面抑制作用。
与传统化疗药物相比，三七总皂苷具有低毒、副作用小的优势，为抗肿瘤药物的研究提供了新的思路。
然而，三七总皂苷的抗肿瘤机制尚不完全清楚，仍需进一步研究以明确其具体作用靶点及途径。
可发酵三七等中药材的食用菌种筛选和皂苷生物转化产物的分析
可发酵三七等中药材的食用菌种筛选和皂苷生物转化产物的分析李粟琳;张翔宇;王洋;郭宇瑛;姜国正;周瑞;王昱升;李涛【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2017(043)012【摘要】研究了保加利亚乳杆菌、凝结芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌和冠突散囊菌等食品工业中常用的微生物菌种对三七之类的中药原料的生物转化,利用HPLC分析了不同菌种直接发酵对人参皂苷组成的影响.通过不同微生物菌种的发酵,三七、人参和西洋参所含的Rb1、Re等常见人参皂苷会分别转化为Rh1、C-K和Rd等稀有人参皂苷,产物中没有检测到Rh2等人参皂苷,说明菌种产生的糖苷酶具有相当的专一性,为进一步对特殊目标皂苷的开发利用提供了基础.【总页数】5页(P164-168)【作者】李粟琳;张翔宇;王洋;郭宇瑛;姜国正;周瑞;王昱升;李涛【作者单位】北京中医药大学中药学院,北京,100029;北京中医药大学中药学院,北京,100029;北京中医药大学中药学院,北京,100029;北京中医药大学中药学院,北京,100029;北京中医药大学中药学院,北京,100029;北京中医药大学中药学院,北京,100029;江南大学生物工程学院,江苏无锡,214063;中国食品发酵工业研究院,北京,100027【正文语种】中文【相关文献】1.菌株CG2对三七总皂苷的微生物转化及其转化机理 [J], 付玉;王超;尹成日2.三七总皂苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1对光化学反应诱导的大鼠肠系膜细静脉血栓的抑制作用——三七主要成分抑制细静脉血栓 [J], 王芳;刘育英;刘涟祎;曾庆江;樊景禹;王传社;韩晶岩3.菌株MB6对三七总皂苷的微生物转化及其转化机理的研究 [J], 武伦鹏;尹成日;韩春峰;白龙律;金恩华;康辰凯;郭德山;付玉4.中药材三七中皂苷类成分的近红外光谱快速无损分析新方法 [J], 杨南林;程翼宇;吴永江5.党参发酵优势菌种筛选及发酵产物的化学成分研究 [J], 黎氏大芳;张涵雪;高英鑫;杨雪晴;邱智东;徐伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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黑曲霉固体发酵三七药材的皂苷变化研究闫炳雄;许文迪;贺帅;邱智东;王伟楠【摘要】为研究黑曲霉发酵三七药材过程中皂苷类成分的化学变化,利用黑曲霉对三七药材进行固体发酵,根据高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)联用的检测结果,对三七发酵产物的总皂苷类成分进行分析和鉴定,并探讨了皂苷含量变化.结果表明,黑曲霉可以高效的转化三七药材中皂苷类成分.三七药材经黑曲霉发酵之后,人参皂苷Rb1几乎全部转化生成其他物质,在发酵产物中己未检出,三七皂苷R1和人参皂苷Rg1大幅度减少,三七皂苷R2、人参皂苷Rh1、Rd等含量明显增加,并且在三七发酵产物中检出了稀有人参皂苷F1、Rh4、Rg3、CK、三七皂苷Rh16和T5.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2015(034)009【总页数】4页(P41-44)【关键词】黑曲霉;三七;皂苷;生物转化;液质联用【作者】闫炳雄;许文迪;贺帅;邱智东;王伟楠【作者单位】长春中医药大学药学院,吉林长春130117;长春中医药大学药学院,吉林长春130117;长春中医药大学药学院,吉林长春130117;长春中医药大学药学院,吉林长春130117;长春中医药大学药学院,吉林长春130117【正文语种】中文【中图分类】TQ929三七（Panax notoginseng）又名田七，为五加科人参属多年生草本植物的根茎，是传统名贵中药材之一，具有化瘀止痛，活血定痛的功效，对出血症，跌打损伤，瘀血肿痛，虚损劳伤等病症疗效显著。
现代研究表明三七的主要活性物质为皂苷类成分。
其药理作用主要包括对心脑血管的影响、对中枢神经系统的影响、对血液的影响、对免疫系统的影响和抗肿瘤等方面[1-8]。
三七中皂苷含量为6%，远高于其他五加科植物的总皂苷含量[9]，但活性和生物利用度较好的稀有皂苷类成分如人参皂苷Rd，Rh1，Rh2，Rg3，CK等含量极少，甚至不可检出，因此如何提高稀有皂苷含量成为了三七深度开发利用的关键问题。
应用微生物发酵技术提高中药活性成分含量，改变物质基础组成是中药研究领域的热点内容，因其效率高、无污染，具有较好的应用前景。
中药材经过微生物发酵之后，化学成分发生了明显的变化，某些大分子降解成小分子，易于被人体吸收，提高药材生物利用度；某些药物增加了有效成分或有效部位的含量，改善了药效[10-16]。
黑曲霉（Aspergillusniger）是环境中的常见菌种，生长速度快，环境适应能力强，且生物安全性较高，非常适用于在中药基质上生长。
前期试验发现黑曲霉在潮湿的三七药材中很容易生长。
所以本研究利用黑曲霉对三七药材进行固体发酵，采用高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱（high performance liquidchromatography-quadrupole-timeofflight-tandemmass spectrometry，HPLC-Q-TOF-MS/MS）方法，对发酵产物中主要活性成分皂苷含量的变化进行检测，为三七药材的开发和利用及相关药物研究提供理论依据和参考。
1 材料与方法1.1 材料与试剂1.1.1 材料三七药材购于吉林国安药业有限公司。
1.1.2 试剂葡萄糖、蛋白胨、酵母浸粉、琼脂、麦芽浸膏、马铃薯浸出粉（生物试剂）：北京奥博星生物技术有限责任公司；七水合硫酸镁、硫酸亚铁、磷酸二氢钾、氯化钾、硝酸钠甲醇均为分析纯：北京化工厂；乙腈、甲酸均为色谱纯：美国Thermo Fisher公司。
人参皂苷Rb1（批号：MUST-12102301）、人参皂苷Rg1（批号：MUST-13041301）、人参皂苷Rd（批号：MUST-15020910）、人参皂苷Rh1（批号：MUST-15020914）、人参皂苷Rh2（批号：MUST-14062410）、人参皂苷CK（批号：MUST-15012711）、人参皂苷Rg3（批号：MUST-14041211）、人参皂苷F1（批号：MUST-14101610）标品：成都曼斯特生物科技有限公司；人参皂苷F2（批号：GR-133-131224）、三七皂苷R1（批号：GR-133-131109）、三七皂苷R2（批号：GR-133-131209）标品：南京广润生物制品有限公司。
1.1.3 培养基斜面培养基采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基（potato dextrose agar，PDA）：葡萄糖20 g/L，蛋白胨10 g/L，酵母粉10 g/L，KH2PO41 g/L，MgSO40.5 g/L。
自然pH，121℃灭菌20 min。
液体种子培养基：葡萄糖20 g/L，蛋白胨10 g/L，酵母粉10 g/L，KH2PO41g/L，MgSO40.5 g/L。
自然pH，121℃灭菌20 min。
固体发酵培养基：粉碎三七药材粉末（过10目筛），1.5%CaCO3，加入50%的蒸馏水，搅拌均匀121℃灭菌60 min。
1.1.4 菌种黑曲霉（Aspergillus niger）CICC 2124：中国工业菌种保藏管理中心，PDA培养基斜面4℃保存。
1.2 仪器与设备Agilent1260高效液相色谱仪、Agilent 6520 Q-TOF质谱仪：美国Agilent公司；DZX180微生物培养箱：上海艾测电子科技有限公司；ZD-88恒温冷冻振荡器、HSP150B恒温恒湿培养箱：金坛市天竟实验仪器厂；TG328A（S）分析天平：北京斯达恒通科技有限公司；YXQ-LS-50A立式压力蒸汽灭菌器：上海博迅实业有限公司医疗设备厂；BPZ-6930LC真空干燥箱：上海一恒实验仪器总厂；FW177中草药粉碎机：天津市泰特仪器有限公司。
1.3 方法1.3.1 菌种的复壮、复苏及种子液的制备将黑曲霉斜面从低温冷藏冰箱中取出，迅速移至30℃水浴中加热30 min后，擦干试管表面，将斜面放置在28℃的微生物培养箱中12 h后，即可取出备用。
将复苏的黑曲霉菌于液体培养基中，于28℃恒温培养培养5 d，即得液体种子培养基。
1.3.2 菌体培养取三七药材粉碎（过10目筛），加入0.5%无机盐CaCO3，加入50%的蒸馏水，搅拌均匀，分装于250 mL广口三角瓶中，密塞瓶口，放入高压蒸汽灭菌器中保持温度121℃，灭菌60 min，取出，自然冷却至室温，在生物安全柜中接种黑曲霉菌液适量，待接种完成后放入温度为28℃，相对湿度65%的恒温恒湿培养箱中，培养20 d。
1.3.3 发酵产物供试品及对照样品的制备将发酵至终点的发酵物从培养瓶中取出，置于减压真空干燥箱60℃干燥，用中草药粉碎机粉碎。
取本品粉末（过65目筛）0.2 g，精密称定，精密加入甲醇4 mL，称质量，超声（150 W，40 kHz）处理1 h，冷却后再称质量，用甲醇补足减少的质量，摇匀，过滤，取续滤液，用0.22 μm微孔滤器过滤，作为供试品溶液。
同法制得三七药材对照品溶液。
皂苷含量变化计算公式如下：1.3.4 液相色谱-质谱分析（1）高效液相色谱条件采用ZORBAXSB-Aq色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表1中的程序进行梯度洗脱，进样量10 μL，流速1 mL/min。
表1 三七发酵产物高效液相色谱洗脱梯度Table 1 HPLC chromatographic elution condition ofPanax notoginsengfermentation product时间/min 流动相A/% 流动相B/%0～35 35～55 55～70 70～100 100～120 19 19→29 2929→40 40→90 81 81→71 71 7l→60 60→10（2）质谱条件电喷雾离子源（electronic sprayion，ESI）；电离模式：负离子模式；喷雾器压力：207kPa；干燥气（N2）流速：10L/min；干燥气温度：350℃；毛细管电压：3500V；碎裂电压：175V；锥孔电压：65 V；质量检测范围：300～1 400 m/z。
2 结果与分析2.1 色谱峰归属三七混标溶液及固体发酵产物进行鉴定分析，其液相色谱-质谱（liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）分析得到的总离子流色谱图见图1，各组分鉴定结果见表2。
由图1和表2可知，三七药材经黑曲菌固体发酵后主要活性成分发生较大变化。
根据分子量和结构裂解规律，推断1～13号色谱峰均为皂苷类成分。
经过标准品对照，色谱峰1、2、3、4、5、6、11、12、13分别鉴定为三七皂苷R1（notoginsenoside R1）、人参皂苷Rg1、三七皂苷R2（notoginsenosideR2）、人参皂苷Rh1、F1、Rd、F2、Rg3、CK；7号峰的[M-H]m/z=751.469 4计算分子式为C41H68O12，初步推测为三七皂苷T5（notoginsenoside T5）；8、9、10号峰的[M-H]m/z值分别为619.432 9、619.432 4、619.432 3，计算分子式均为C36H60O8，为三个同分异构体，结合目前已有的文献报道，初步推测为人参皂苷Rk3、Rh4和Rh16。
图1 混标(A)和发酵产物(B)的皂苷化合物分析LC-MS总离子流色谱图Fig.1 Total ion chromatogram(TIC)of the mixed standards(A)and fermentation product(B)for saponin compounds analysis by LC-MS表2 色谱峰鉴定Table 2 Identification of the chromatographic peaks色谱峰编号保留时间/min [M-H]m/z 峰鉴定1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 11 12 13 25.659 33.740 63.130 66.820 71.239 89.377 94.711 96.254 97.009 99.467 105.540 106.311 111.806 931.529 0 799.502 0 769.480 3 637.448 5 637.448 6 945.553 6 751.469 4 619.432 9 619.432 4 619.432 3 783.493 7 783.490 5 621.451 5三七皂苷R1人参皂苷Rg1三七皂苷R2人参皂苷Rh1人参皂苷F1人参皂苷Rd初步推测为三七皂苷T5初步推测为人参皂苷Rk3初步推测为人参皂苷Rh4初步推测为人参皂苷Rh16人参皂苷F2人参皂苷Rg3人参皂苷CK2.2 三七药材发酵前后主要皂苷类成分的含量变化对三七药材及固体发酵产物进行鉴定分析，其LC-MS分析得到的总离子流色谱图见图2，通过液质联用的定量模式，记录不同色谱峰发酵前后的峰面积变化，三七药材及三七发酵产物皂苷峰面积对比结果见表3。