微生物实验5 放线菌

微生物实验报告

放线菌的形态观察实验

刘欣怡201100140057

生物科学基地班

组别：周一下午三组

同组者：曹平平，周楠，

刘艺，刘希伟

实验完成时间：2012年11月5号

一、实验目的

1．学习并掌握观察放线菌形态的基本方法——插片法。

2．了解放线菌的形态特征。

3. 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。

4. 掌握配制高氏一号培养基的一般方法。

二、实验器材

1．.菌种：

青色链霉菌，弗氏链霉菌。

2．试剂及培养基：

酒精溶液，用来配制高氏I号培养基的淀粉、氯化钠、琼脂、水、硝酸钾、硫酸亚铁、硫酸镁、磷酸氢钾等。

3．仪器或其他用具：

培养皿，盖玻片，锥形瓶，酒精灯，火柴，载玻片，接种环，镊子，显微镜等。

三、实验原理

1．放线菌

放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。

常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝 ( 简称“基丝” ) ，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝( 简称“气丝” ) ，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。

能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。

放线菌的孢子丝形状和孢子排列情况是放线菌分类的重要依据。

2. 插片法观察放线菌

将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培

养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。

这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。

3. 高氏I号营养培养基

高氏I号营养培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将两中或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如Fe元素。

4、补充其它方法：

a.玻璃纸法

玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。

这种方法既能保持放线菌的自然生长，也便于观察不同生长期的形态特征。

b.印片法

将要观察带放线菌带菌落或菌苔，先印在载玻片上，经染色后观察。这种方法主要用于观察孢子丝带形态、孢子带排列及其形状等。

该方法简便、但形态特征可能有所改变。

四、实验内容

从本实验所提供的两种菌，即青色链霉菌和弗氏链霉菌，选择一种菌或者两种菌都选，用接种环无菌操作将培养好的菌接种到倒好的平板上，而且划平板接种，然后在垂直划线的方向上插入盖玻片，每个培养基中插入三个盖玻片，然后

放置在28摄氏度的恒温环境中培养7天，然后镜检，观察放线菌的形态特征（一个培养基上接种一种细菌）。

五、实验步骤

1、配制高氏一号培养基：

根据高氏一号培养基的配方（配制1000ml），首先计算配制200ml高氏一号培养基所需各成分的用量，除了量非常少的物质用分析天平称量外，其余的物质均用电子天平称量。用小烧杯取200ml去离子水，将称量好的的物质放入去离子水中，搅拌溶解。调节pH，然后加入称量好的琼脂再倒入300ml锥形瓶中，加塞并用纸绳子绑上牛皮纸。

2、器材及培养基进行灭菌：

将盖玻片十个一组用牛皮纸包成一包，包时一个盖玻片折一下牛皮纸，一共包6包。将包扎好的器具以及配置好的培养基放入高压灭菌锅中进行灭菌。3、取出灭好菌的器材和培养基，冷却：

将灭好菌的器具和培养基取出，放入柜子中，不打开牛皮纸等下周实验时用。

4、倒平板：

将上周准备好的培养基取出，除去牛皮纸并拔松棉塞，放在电炉子上加热融化。全部融化好后，从电炉子上取下锥形瓶，稍稍冷却（放在桌子上并轻轻摇动）后用凉水冲洗，冲洗过程中不断摇晃培养基使其均匀受冷。等到培养基锥形瓶瓶底的温度降到手可以承受的范围内后，点燃酒精灯，无菌操作向灭好菌的培养皿中倒入培养基，尽量使其厚一些。将培养皿平放在桌面上静置等其凝固完全。翻转倒置。

5、取菌、接种、划线：

运用接种环，现在酒精灯上灼烧2遍，然后无菌操作从斜面培养基中取菌，接着无菌操作在倒好的平板上划线，划线要密集。完成后，用记号笔在培养皿盖上做一下标记，记录划线方向。然后写好标签，区分实验小组并标明接种的是什么菌。

6、镊子消毒：

将镊子浸泡在酒精溶液中一段时间，使用时取出现在火焰上灼烧，再去夹取

灭好菌的盖玻片。

7、插入灭菌的盖玻片

用消毒镊子夹取盖玻片，可以平行边缘夹其一端，在酒精灯旁边打开培养皿，从镊子均匀用力沿垂直划线方向插入盖玻片，盖玻片和培养基表面夹角约为45度，如下图所示。

（约

每一个培养皿中插入三个盖玻片，零散分布，如下图所示。

8、放置培养

将插好盖玻片的培养基倒置，放置在28摄氏度的恒温箱中培养7天。

9、取出插片

将镊子在酒精灯火焰上灼烧后，稍稍冷却，然后在酒精灯旁打开培养基平皿盖，用镊子夹取插入到培养基中的盖玻片，闭合培养基平皿盖。

10、放置于载玻片上

可以先擦净取出的盖玻片的一面，然后擦净的一面朝下即有菌一面朝上，将盖玻片放置在载玻片中部；也可以不进行擦盖玻片操作，直接将盖玻片放置于载玻片中部即可。

11、镜检

将放置好盖玻片的载玻片放在显微镜的载物台上进行观察。先用10倍物镜进行观察，找到目标观察物后移至视野中央，换用40倍物镜接着观察。如若换