微生物学 实验3 放线菌的形态观察
放线菌形态及结构的观察
放线菌形态及结构的观察姓名：贾晓霖学号：201000140032班级：生科10.1同组人员：李江湲程子修洪钧烨摘要：配制高氏I号培养基用来培养青色链霉菌和弗式链霉菌，本实验运用插片法观察放线菌的形态，初步地了解放线菌的基本结构和形态。
更直观的了解，基内菌丝、气生菌丝以及气生菌丝分化而成的孢子丝以及孢子。
关键词：青色链霉菌（Streptomyces glaucus）、弗氏链霉菌（Streptomyces microflavus）、高氏I号培养基、插片法前言：放线菌（actinomycetes）是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。
广泛存在于自然界中，土壤中最多，主要以孢子繁殖，至今发现的共有五六十属，它与人类的关系极为密切，根据1978年的统计，在当时已发现的5128种抗生素中，有3165种为各种放线菌所产生，链霉菌属又占放线菌中的首位（占放线菌产生的抗生素中的87.5％）；有的放线菌还可用于生产维生素、酶制剂等；少数会引起人类、动物、植物的疾病。
链霉菌属是放线菌中种类最多、分布最广、形态特征最典型的类群，其孢子丝的形态多样，而且性状较稳定，是对它们进行分类、鉴定的重要指示。
因此学习如何培养和观察它们不仅对科学研究有很大的意义，对实际生活应用也有很大的帮助。
本实验采用合成培养基进行培养，采用插片法取菌观察，不仅可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的放线菌形态，除此之外还可以采用玻璃纸法、印片法进行观察。
链霉菌属（Streptomyces）共约1，000多种，它们具有发育良好的菌丝体，也是实验中选取它们观察的重要原因。
一、实验目的1.1学会正确的配置高氏I号培养基1.2运用插片法观察放线菌的形态，初步地了解放线菌的基本结构和形态二、实验材料1、菌种：青色链霉菌(Streptomyces glaucus)，弗氏链霉菌(S. glaucus).2、试剂：高式I号培养基200ml、二甲苯、香柏油3、仪器和其他用具：三角烧瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，分析天平，牛角匙，高压蒸气灭菌锅，pH 试纸，棉塞，牛皮纸，记号笔，载玻片，盖玻片（3包 10个/包），培养皿（1包 10个/包），移液管，接种环，镊子2把三、实验方法一、高氏I号培养基的制备1、称量和溶解。
实验三霉菌放线菌形态观察及微生物菌落观察
观察青霉菌 丝和分生孢 子着生情况：
1.单轮生青霉群；2.对称二轮 生青霉群；3.多轮生青霉群；4. 不对称生青霉群
担子菌担孢子的观察
切片标本的制作：现场演示
下次实验准备
每组两个平板，分别是马铃薯培养基（培养 真菌），另一个高氏培养基（培养放线菌）
实验室环境中微生物的检查 用棉签取实验室环境条件下的微生物进 行涂板。
一、实验目的
了解放线菌、霉菌、酵母菌和大型真菌的特点 并观察其形态特征
学习掌握霉菌染色的基本方法
二、实验原理
原核微生物
放线菌：
由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细 胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入 培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝） 和生长在培养基表面的气生菌丝。有些 气生菌丝分化成孢子丝，呈螺旋形、波 浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆 形或杆状。气生菌丝及孢子的形状和颜 色常作为分类的重要依据。
真核微生物
酵母菌：酵母菌细胞一般呈卵圆形、圆形、圆柱形或
柠檬形。酵母细胞核与细胞质有明显的分化，个体直 径比细菌大几倍到十几倍。繁殖方式也较复杂，无性 繁殖主要是出芽生殖，有些酵母能形成假菌丝。有性 繁殖是通过接合形成子囊及子囊孢子。
霉菌：凡在营养基质上形成绒毛状、棉絮状或蜘蛛网
形丝状菌体的真菌，统称为霉菌。霉菌包括分类学上 许多不同纲或类的真菌，它们分别属于藻状菌纲、子 囊菌纲、担子菌纲和半知菌类。
常见大型真菌：在分类上属于子囊菌纲和担子菌纲，
均为丝状真菌。
三、实验材料
放线菌和真菌培养物
1. 放线菌培养物：青色链霉菌四天插片培养物。 2. 啤酒酵母24至28h液体培养物。 3. 黑曲霉和根霉4d搭片培养物。 4. 各种真菌示范片。 5. 市售平菇
微生物实验放线菌的形态观察
实验一：丝状微生物的鉴定实验目的：1、观察常见放线菌的基本形态特征。
2、观察镰刀菌与木霉的基本形态。
3、掌握埋片培养法培养放线菌。
4、掌握载片培养法培养丝状真菌。
5、学会用显微镜观察未染色样品。
实验原理：放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。
放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。
孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。
孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。
它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。
真菌的菌丝较放线菌粗，菌落疏松，主要用肉眼观察，必要时借助放大镜或显微镜。
利用显微镜主要观察孢子的着生状态，孢子形状及菌丝有无横隔等。
3材料3.1菌种链霉菌（Streptomyces sp.）；诺卡氏菌（Nocardia sp.）；尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)；绿色木霉（Trichoderma viride）3.2培养基高氏1号培养基，PDA培养基。
3.3器皿培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。
4流程4.1埋片培养法: 倒琼脂→切槽→接种→埋片→培养→镜检→记录绘图。
4.2载片培养法：滴琼脂→凝固→边缘接种→盖盖玻片→培养→镜检→记录绘图。
5步骤埋片培养法：1 向每个培养皿倒约20毫升高氏一号琼脂培养基，待凝固。
2 用无菌手术刀在琼脂平板上平行开两条槽，取出其中的琼脂培养基。
3 在槽的外侧边缘接种待鉴定的放线菌菌株。
4 将无菌载玻片呈与槽垂直的方向盖在平板上面，用镊子轻轻压下，使载玻片与琼脂平板接触。
5 放于28℃培养3天。
6 将载玻片从平板上取下，直接在显微镜下观察。
载片培养法：1 将无菌载玻片放于洁净工作台。
实验三 酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察
实验三酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察一目的要求1.观察酵母菌的个体形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
2.掌握酵母菌的菌落特征及其与细菌菌落的区别。
3．学会识别霉菌的菌落特征，掌握霉菌的乳酸石炭酸制片法。
4．学习观察霉菌个体形态及各种无性孢子的方法。
5．学会观察放线菌的菌落特征，个体形态及其繁殖方式。
二实验原理1．酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，多数是圆形或椭圆形，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。
用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
2.霉菌形态比细菌、放线菌复杂，个体比较大，具有分支的菌丝体和分化的繁殖器官。
霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
因此，在观察时要注意菌丝直径大小，菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性繁殖形成的孢子是那一种？孢子是怎样着生的？3.放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。
常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。
孢子的表面光滑或粗糙、圆或椭圆，孢子有各种颜色，这些形态特点都是鉴定放线菌的重要依据。
三实验材料1．菌种（1）啤酒酵母、面包酵母、裂殖酵母、热带假丝酵母;（2）毛霉、黑根霉、青霉、黑曲霉;（3）白色链霉菌、红色链霉菌2. 0.1%的美蓝染色液，乳酸石炭酸溶液、乳酸石炭酸棉蓝溶液, 芽孢染色液、无菌水、盖玻片、载玻片，接种钩，接种铲。
四内容与步骤1．酵母菌(1)菌落特征和菌苔特征的观察。
观察菌落表面干燥或湿润、隆起形状、边缘整齐度、大小、颜色等，并用接种环挑菌，注意与培养基结合是否紧密。
霉菌和放线菌的接种、培养及形态观察
一、实验目的：
1、了解霉菌，放线菌形态观察的基本方法并了 解其基本形态特征.
2、掌握培养基配置，无菌操作，接种与培养，
显微镜观察等各种综合微生物技能的运用。
二、实验原理
1、微生物接种方法：接斜面、接平皿、接三 角瓶。
2、微生物的培养方法：静止培养、振荡培养。
二、实验原理
1、放线菌（玻璃纸法）：
制备培养基 倒平板 放玻璃纸，铺平
制菌悬液
培养7d
涂布菌液
28℃倒置
制片观察。
2、真菌（载片法）： 准备湿室 融化培养基 整理湿室
点接孢子ห้องสมุดไป่ตู้
加水棉球
覆培养基
28℃保湿培养7d
加盖玻片
镜检。
3、形态观察
• 观察内容：
霉菌、放线菌的营养菌丝体、
气生菌丝体、孢子丝、分生孢子 头、分生孢子、孢子梗、足细胞 等的形态和结构。注意不同微生
物典型结构形态的区别。
五、注意事项
1、本实验步骤均应无菌操作； 2、倒平板时，摇动培养皿要轻，以免溅出；
3、铺玻璃纸时，涂布棒冷却后，才可与玻璃 纸接触；
4、加盖玻片时要轻压，使培养物均匀的分布 在盖玻片下； 5、取玻璃膜观察时，取放线菌最薄的地方； 6、培养时，培养基滴半滴，以保证一周后结 果理想。
3、放线菌的培养观察方法： 插片法、搭片法、玻璃纸法。 4、霉菌的培养观察方法：载片培养法。
三、实验器材
1、器皿：湿室、镊子、平板、无菌滴管、
显微镜、涂布棒、移液器、滤纸、水棉球载 玻片等。 2、培养基：高氏一号培养基、半固体PDA 培养基。 3、菌种：5406链霉菌、黑曲霉、青霉。
四、实验步骤
放线菌的培养与形态观察
姓名系年级组别同组者科目微生物学实验题目放线菌的培养及形态观察学号放线菌的培养及形态观察一．实验目的1．掌握配制合成高氏一号培养基的一般方法。
2．掌握放线菌形态的基本观察方法。
3．了解并掌握放线菌的形态。
二．实验原理1．高氏I号培养基高氏I号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。
此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。
因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。
此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如Fe元素。
2．放线菌放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。
常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝( 简称“基丝” ) ，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝( 简称“气丝” ) ，并进一步分化产生孢子丝及孢子。
有的放线菌只产生基丝而无气丝。
在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。
孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。
在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。
能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。
3．插片法观察放线菌将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。
观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。
这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。
三．实验器材1．菌种青色链霉菌 ( S glaucus ) ，弗氏链霉菌 ( S. fradiae ) 。
2．培养基高氏 I号培养基（配方见后附）。
3．仪器或其他用品平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片，接种环，接种铲，镊子，显微镜,双层瓶，马铃薯，酒精灯。
四．实验步骤姓名系年级组别同组者科目微生物学实验题目放线菌的培养及形态观察学号1．配制高氏I号培养基（200mL）：按配方称取高氏培养基各组分，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至200mL，调节pH，121℃灭菌20min。
放线菌的形态观察
实验四放线菌的形态观察一、目的要求1. 学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。
2. 了解放线菌的形态特征和繁殖方式。
二、基本原理放线菌是由纤细的有分枝的菌丝构成，菌丝体为单细胞原核微生物。
大多数放线菌的菌丝分化为营养菌丝和气生菌丝两部分。
营养菌丝深入培养基中生长，气生菌丝则生长在培养基的表面，并向空中伸展。
因此用普通方法制片，往往很难观察到放线菌的整体形态。
必须采用适当的培养方法，以便将自然生长的放线菌直接置于显微镜下观察。
通常采用的方法有玻璃纸培养法、插片法和印片法。
三、材料及器材1. 菌种：细黄链霉菌(5406放线菌)2. 溶液和试剂：吕氏美蓝染液3. 仪器及其他用具：盖玻片，载玻片，擦镜纸，接种环，显微镜，剪刀，镊子，吸管，玻璃涂布棒，玻璃纸等。
四、方法与步骤（一）插片法1. 取一淀粉琼脂培养基平板，用接种环将菌种在琼脂平板上划线接种，然后用无菌镊子将灭菌的盖玻片以大约45°角插人琼脂内(插在接种线上，插片数量可根据需要而定。
2. 倒置培养，28℃，3～5天。
3. 用镊子小心取出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检。
（二）玻璃纸法1. 以无菌操作用镊子将已灭菌的小块玻璃纸片铺在琼脂淀粉培养基表面，用无菌涂布棒将玻璃纸压平，使其紧贴在琼脂表面，不留气泡，每个平板可铺5～10块玻璃纸。
2. 用接种环挑取菌种斜面培养物在玻璃纸上划线接种。
3. 平板倒置，28℃，培养3～5天。
4. 镜检在载玻片上加一小滴水，用镊子小心取下玻璃纸片，菌面朝上放在玻片的水滴上，使玻璃纸平贴在玻片上，中间不要有气泡，直接镜检。
（三）印片法用一洁净盖玻片，平放在培养皿中放线菌的培养物上，轻轻按压一下，取出盖玻片，将印有放线菌的一面朝下，放置在加有一滴美蓝染液的载玻片上，观察孢子丝和孢子。
五、实验作业及实验报告（一）结果绘图说明你所观察到的放线菌的主要形态特征。
（二）思考题1. 试比较3种培养和观察放线菌方法的优缺点。
放线菌的形态观察实验报告
放线菌的形态观察实验报告放线菌的形态观察实验报告放线菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，具有丰富的多样性和重要的生物学功能。
本次实验旨在通过对放线菌的形态进行观察，了解其基本特征和生长习性。
以下是实验过程和观察结果的详细描述。
实验材料和方法：1. 实验材料：放线菌培养基、无菌培养皿、无菌匙、显微镜、石英片。
2. 实验方法：a. 取一块无菌培养皿，将放线菌培养基倒入培养皿中，待其凝固。
b. 使用无菌匙，将待观察的放线菌菌落划入培养基表面，尽量避免交叉污染。
c. 将培养皿盖好，放置在恒温箱中，温度设定为28摄氏度。
d. 每隔一段时间，取出培养皿进行观察，使用显微镜观察放线菌的形态特征，并用石英片进行取样。
实验观察结果：1. 放线菌的形态特征：a. 放线菌呈现为长而细的菌丝状，类似于细长的线状结构。
b. 放线菌的菌丝通常呈现分枝状，形成复杂的网络结构。
c. 放线菌的菌丝颜色多样，包括白色、黄色、红色等，具有一定的色彩变异性。
d. 放线菌的菌丝表面常常有颗粒状物质附着，形成颗粒状结构。
2. 放线菌的生长习性：a. 放线菌生长缓慢，通常需要较长时间才能形成可见的菌落。
b. 放线菌的菌落呈现不规则形状，边缘模糊不清，有时会形成分支状的菌落。
c. 放线菌的菌落表面通常光滑而湿润，有时会有微小的颗粒状结构。
d. 放线菌在培养基上生长的过程中，会逐渐扩散并形成新的菌落。
3. 放线菌的细胞结构：a. 放线菌的菌丝由一系列细胞组成，细胞间通过连接点相互连接。
b. 放线菌的细胞内含有细胞质和细胞核，细胞核通常位于细胞中央。
c. 放线菌的细胞质内含有丰富的有机物质和细胞器，包括线粒体、内质网等。
实验讨论和结论：通过对放线菌的形态进行观察，我们可以发现放线菌具有独特的细胞结构和生长习性。
放线菌的菌丝状结构和分枝状特征使其能够在土壤中广泛分布，并与其他微生物相互作用。
放线菌的色彩变异性可能与其生长环境和代谢产物有关，这也为进一步研究放线菌的生态功能提供了线索。
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3 、染色及干燥。滴加适量番红染液，染色 1 min ；水 洗至流出液为无色； 在酒精灯高处加热干燥。
4 、镜检。先用低倍镜寻找视野，然后用油镜进行观察。 注意区分气生菌丝、孢子丝和孢子的形态及排列方式。
五、观察与绘图
1.描述放线菌5406的菌落特征（大小、形 状、颜色、边缘情况等特征）。 2.绘制观察到的放线菌气生菌丝及孢子丝 形态。
3、孢子丝——有些气生菌丝分化成各种孢子丝，呈螺 旋状、波浪形或分枝状等，着生形式有丛生、互生和轮 生三种。
孢子的表面光滑或粗糙，圆或椭圆和线菌的重要依据。
分生孢子形态
三、材料
1、菌种：“5406”放线菌培养72 h的 平板培养物； 2、染料：蕃红； 3、器材：载玻片、盖玻片、酒精灯、镊 子、接种针、接种铲等。
四、方法及步骤
1、印片。取2片干净的载玻片，用解剖刀无菌挖取一块 放线菌的菌落（注：带培养基切下），放在一块载玻 片的中央（注：菌落面朝上）；用另一干净的载玻片 盖在这一菌落上轻轻按压，再小心取下这块载玻片 （注：不要使菌落移动）。 2、干燥固定。将取下的上面的载玻片在酒精灯火焰高 处烘烤干燥（注：有菌落的面朝上）；然后迅速通过 火焰2～3次，加热固定。
细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)
显微形态：单细胞菌丝体，菌丝内一般无隔膜。
菌丝体分为三部分： 1、基内菌丝—深入培养基中的营养型一级菌丝 （较透明、颜色浅色）。一般无隔膜，直径 0.2～0.8 µ m，可产生各种色素。 2、气生菌丝—由基内菌丝从培养基向上伸展的 二级菌丝（颜色较深），直径1～1.4 µ m。
实验三 放线菌的形态观察
一、实验的目的
1、学会用”印片法” 法制作标本片。 2、观察放线菌的群体形态及个体形态 特征。
二、实验原理
同细菌简单染色法，放线菌也可用石炭酸复 红或吕氏碱性美蓝等染料着色后，在显微镜下观 察其形态。 放线菌是呈丝状生长的单细胞菌丝体。菌丝 体分为两部分，即潜入培养基中的基内菌丝和生 长在培养基表面的气生菌丝。有些气生菌丝分化 成各种孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。 孢子常呈圆形、椭圆形或杆形。孢子丝及孢子的 形状和颜色常作为分类的重要依据。 由于孢子丝在菌落表面，可以采用印片法 把孢子丝印在载玻片上，从而可以看到完整的自 然状态下的孢子丝形态。