菌种复苏、传代、使用记录
菌种的复苏、传代管理规程
目的：建立菌种的复苏、传代管理规程，保证检验人员操作规范化、标准化。
范围：菌种的复苏、传代。
责任人：QC科化验员。
内容：
1 菌种的复苏
1.1 准备好冷冻菌种安瓿、灭菌的毛细滴管、培养皿、镊子、注射器、普通肉汤培养基、灭菌水及普通琼脂斜面，移入接种室（或超净工作台）。
1.2 在接种室（或超净台）按无菌操作要求操作。
1.3 用75%酒精棉擦净菌种安瓿外壁放在无菌培养皿内稍干。
1.4 点燃煤气灯或酒精灯，将安瓿的封口一端在火焰上烧灼红热，用毛细管吸取灭菌水少许在灼热处，使其骤冷而炸裂。
1.5 在不离开火焰圈内，迅速用注射器抽取0.3ml肉汤培养基加入安瓿内，并摇动使冷冻块溶解，摇匀，用注射器吸取安瓿内容物分别接种至1支肉汤培养基、2支普通琼脂斜面培养基。
1.6 将接种后肉汤培养基及普通琼脂斜面培养基于35～37℃恒温培养12～24h。
1.7 取出培养物，仔细观察菌苔形态，有无杂菌，并转接3支普通琼脂斜面，于35～37℃恒温培养12～24h，供菌种保存与传代用，同时作平板分离单个菌落及涂片镜检，应为典型的菌型。
2 工作用菌种保存与传代
2.1 将上述斜面培养物作为日常工作中使用的菌种，置于冰箱保存。
每月用普通琼脂斜面传代1次，将新传代的培养物代替原有的菌种，作为工作用菌种。
2.2 工作用菌种，每半年在琼脂平板上分离单个菌落1次，选典型的菌落接种于普通琼脂斜面上，可以代替原有的工作用菌种。
2.3 培养好的斜面，应仔细观察有无杂菌，可涂片镜检，或再移植斜面于35～37℃培养48h检查有无杂菌，有可疑即应废弃，重新取原始冷冻安瓿接种。
菌种传代
A、试验用菌种的培养传代方法●程序：冻干菌复苏————接种（斜面）（菌种传代）（营养肉汤）制备菌悬液对照菌液●检定用标准菌种，由中国药品生物检定所提供，为冷冻干燥菌种。
●菌种的复苏与保存在专用无菌室或超净工作台内进行。
1 菌种的复苏•把冻干菌种管、灭菌1ml 滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支，移入接种室或净化工作台。
•先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕,再将冻干菌种管外壁用碘酒擦洗消毒、稍干，用75% 乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。
点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。
• 取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取1支灭菌滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面置35~37℃培养22~24 h。
• 取出培养物，仔细观察菌苔形态、有无杂菌、涂片、革兰氏染色镜检，呈典型菌落后，转种3 代即可应用。
如发现菌型不典型，可进行平板分离单菌落。
2 菌种的传代与保存方法（1）：菌斜面菌斜面（保存）• 培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。
标签上著名菌名及接种日期。
至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。
• 点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠进火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。
左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞，拨开棉塞，将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。
• 堵上棉塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面1支，照上述操作打开棉塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的低部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。
菌种传代的操作方法
菌种传代的操作方法
菌种传代，是指将已有的菌株进行繁殖，并保持其遗传特性的操作。
以下是菌种传代的一般操作方法：
1. 选择合适的培养基：根据菌株的需求选择合适的培养基，如琼脂或液体培养基。
2. 培养菌株：将初始的菌株接种到培养基上，培养在适当的条件下，如温度、光照和湿度等。
3. 观察生长情况：观察菌株在培养基上的生长情况，如菌落形态、颜色和密度等。
4. 选取单一菌落：根据需要，从培养基上选择单一的菌落，避免杂交或干扰。
5. 转移到新的培养基上：将选取的单一菌落转移到新的培养基上。
可以使用传递环法，即在新的琼脂平板上划出线形、网状或圆形区域，将菌落转移到该区域；或使用菌液接种法，将菌悬液接种到新的培养基中。
6. 维持传代：继续重复步骤3-5，将菌株传代到新的培养基上，以保持其遗传特性。
需要注意的是，在菌种传代的过程中，应避免污染和混杂，保持无菌操作。
另外，菌种传代的频率也应根据需要和菌株的生长特性进行调整，以保证菌株的质量和稳定性。
细菌传代操作规程
细菌传代操作规程细菌传代操作规程引言：细菌传代是一种实验室技术，用于研究细菌在连续传代中的生物学特性和遗传变异。
正确的传代操作是维持细菌群体稳定且准确反映遗传特性的关键。
为了保证传代操作的成功和规范性，制定相关的操作规程是必要的。
一、实验前准备：1. 确定传代实验的目标和方案。
2. 准备所需的培养基、试剂和实验器材。
3. 检查实验器材的清洁和消毒情况，保证无污染。
二、细菌传代操作步骤：1. 第一代接种：a. 从冷冻细菌库中取出所需的细菌母种，转接到含有适当培养基的培养皿中。
b. 用接种环或接种针沾取适量的细菌悬液，均匀涂布在培养皿的表面。
c. 恒温培养箱中培养，温度和时间根据不同的菌株而定。
2. 后续代接种：a. 从前一代的培养皿中取适量的细菌悬液，转接到新的培养皿中。
注意保持接种量的一致性。
b. 重复上述步骤，逐代传代。
三、传代操作注意事项：1. 操作均需在无菌工作台或无菌条件下进行，以避免外源性污染。
2. 接种时避免直接接触培养基和装置内壁，以减少细菌的外源污染。
3. 接种环或接种针在使用前需经过高温炉高温灼烧，以杀灭潜在的细菌。
4. 尽量避免细菌的暴露在空气中的时间过长，以保证其活力。
5. 传代时应注意接种量的一致性，以减少菌群的变异。
四、细菌传代操作记录：1. 每次操作均需详细记录传代实验的日期、细菌菌株、传代代数等信息。
2. 记录每次传代的细菌生长情况，如菌落形态、数量等。
3. 定期保存样品用于后续的分析和验证。
五、实验后处理：1. 做好实验区域的清理和消毒，防止细菌污染蔓延。
2. 注射器、接种环和接种针等实验器材彻底清洗和高温灼烧。
3. 储存冷冻细菌库中的细菌母种。
六、应急措施：1. 若在实验过程中出现异常情况，如培养皿内出现异常菌落、污染等，应立即停止传代操作，并采取必要的消毒措施。
2. 若实验结果与预期不符，可重新设计实验方案或检查实验操作是否存在问题。
结语：细菌传代操作规程旨在规范实验操作过程，确保细菌传代的准确性和连续性。
冻干菌种复苏的方法
冻干菌种复苏的方法
冻干菌种复苏的方法如下：
1. 准备培养基：选择适合菌种生长的培养基，可以是含有营养成分的琼脂培养基或液体培养基。
2. 取出冻干菌种：从冷冻保存的菌种中取出所需菌株，尽量避免长时间接触室温空气，以防止污染。
3. 快速复苏：将菌种迅速加入预先准备好的培养基中，并快速均匀地摇匀，以确保菌株与培养基充分接触。
4. 孵育菌种：将培养基含菌的培养瓶或培养皿置于恰当的温度和湿度条件下培养，通常是在30°C-37°C的恒温培养箱中。
5. 观察菌种生长情况：大约24小时后，开始观察菌株的生长情况，包括菌株数量、生长速率、形态等。
6. 纯化和鉴定：如果需要纯化和鉴定菌种，可以进行传代培养并使用相应的鉴定方法进行检测。
总结起来，冻干菌种的复苏主要包括准备培养基、取出冻干菌种、快速复苏、孵育菌种、观察生长情况和纯化鉴定等步骤。
检定菌种接收、传代记录(附表1-7)
用途 用于 20220301 批次产品初始污 染菌阳性对照菌 用于洁净区环境监测沉降菌阳 性对照菌 用于菌悬液的制备
文件编号：
废弃菌种（物品）销毁记录
日期 被处理菌种（物品）名 销毁原因 处理方式
销毁人 销毁监督人
备注：废弃菌种要标明编号、数量（支）
表码： 接收日期
名称
代号
编号
标准菌株库存记录 数量 代次
来源
检查情况 保存条件 接收人Biblioteka 备注：表码： 接收日期
名称
编号
检定菌种接收记录
数量 代次
来源
检查情况 保存条件 接收人
备注：
表码： 菌种名称
传代前菌种代次 传代前菌种状态
检定菌种传代记录
大肠埃希菌
0代 正常
菌种代号
传代前菌种保存方 法
传代数量
备注
表码： 日期
检定菌种观察记录
塞子是否
冰箱温度（℃）
是否染菌
松动
处理措施
记录人
文件编号： 菌种名称及编号
鉴定原因
菌落形态
检定菌种鉴定记录 开始鉴定日期
革兰氏染色
鉴定 项目
显微镜下形态
典型生化特征 鉴定结果：
备注：
操作人：
复核人：
文件编号： 领用日期 菌种名称
检定菌种使用登记台账
菌种编号
数量
使用人
CMCC(B)44102
冷藏＞-30℃ 1支
传代日期
2022.3.1
编号
E.c-G1-220301-01
传代用菌种
□工作用菌种
培养基信息 生产批号：
胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）
生产日期：
菌种传代.
1. 目的建立菌种的传代、保藏及菌液制备的操作规程。
2. 范围适用于质检中心菌种的传代、保藏及菌液制备。
3. 责任人实验室检定菌保管员、检验中心主任。
4. 内容4.1 标准菌种的概念及其管理4.1.1标准菌种是指由国家授权机构制备的具有稳定的生物学特性并用妥善方法保藏的菌种。
我国的标准菌种统一由中国菌种保藏管理委员会（CCCCM）管理，涉及药品微生物检验的菌种由医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）提供。
4.2 菌种代号的意义4.2.1国内药品微生物检验所用的菌种代号是：CMCC（F）或 CMCC（B）CMCC ——中国医学菌种保藏中心；B ——代表细菌， F ——代表真菌。
4.2.2 菌种的名称▪铜绿假单胞菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）１０１０４］▪生孢梭菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）６４９４１］▪大肠埃希菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）４４１０２］▪金黄色葡萄球菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）２６００３］▪枯草芽孢杆菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）６３５０１］▪白色念珠菌［ＣＭＣＣ（Ｆ）９８００１］▪黑曲霉［ＣＭＣＣ（Ｆ）９８００３］4.3 标准菌种的保藏形式我国提供的标准菌种通常是以冻干粉的形式包装于熔封的厚玻璃容器中。
在这种容器中，微生物通常与赋形剂共存，由于缺乏生长必须的环境条件，一般呈休眠状态。
4.4 培养基的选择细菌一般用营养琼脂培养基，特别指出的是生孢梭菌用硫乙醇酸盐流体培养基加琼脂制成的培养基进行传代，真菌一般用改良马丁培养基。
4.5 菌种的传代4.5.1 菌种的复苏4.5.1.1把冻干菌种管、灭菌1ml 滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支，移入接种室或净化工作台。
4.5.1.2先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕,再将冻干菌种管外壁用碘酒擦洗消毒、稍干，用75% 乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。
点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。
4.5.1.3取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取1支灭菌滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面置35~37℃培养22~24 h。
菌种的复苏传代及保存标准程序
菌种得复苏传代及保存标准程序目得:建立菌种得复苏、传代及保存标准程序、范围:适用于检定用菌种得复苏、传代及保存得操作、职责:质管部生物测定人员对本规程得实施负责。
内容:菌种得复苏与传代操作均应在生物检定室阳性对照间或专用超净工作台内进行、操作中使用过得滴管、吸管及菌种管等均需放入消毒液中浸泡,试验结束后经1２1℃３0分钟高温灭菌处理。
１.菌种得复苏1.1冻干菌种得复苏检定用标准菌种,由中国药品生物制品检定所提供,为冷冻干燥菌种(0代)。
使用前需将其复苏。
1．１.１准备:①用具:灭菌1ｍl滴管、灭菌双碟、灭菌镊子、砂轮、酒精灯、接种环。
②培养基:根据菌种得性质选择合适得液体培养基(营养肉汤培养基或改良马丁培养基)、营养琼脂(或改良马丁琼脂)斜面数支。
③消毒液:7５%酒精、碘酒、0.1％新洁尔灭或84消毒液等。
1.１。
2操作:1。
1。
２.１将准备妥得冷冻菌种管、灭菌滴管、灭菌双碟及镊子、培养基移入工作台、1.1.2。
2用砂轮将冻干菌种管颈部挫出刻痕,再７5％酒精棉擦净菌种管外壁,放在灭菌双碟内待干。
1.1。
2。
3点燃酒精灯,将菌种安瓿得封口一端在火焰上灼烧红热,用灭菌滴管吸取液体培养基少许,滴在灼热得菌种安瓿封口一端,使其骤冷而炸裂。
１．1.2.4取灭菌镊子,在火焰旁,将炸裂得管口打开后,把菌种安瓿放入灭菌双碟内。
1．1。
2、5另取一支灭菌滴管,在火焰旁吸取适用液体培养基少许,加至菌种管底部,将冻干菌搅动促使溶解,随即吸出管内菌液,接种至液体培养基内、用接种环取菌液划线接种于琼脂斜面培养基上。
1.1。
2。
6将已接种得液体培养基及琼脂斜面培养基置规定温度下(一般细菌在3０~35℃,真菌在23~28℃)培养24ｈ。
１。
1.2。
7 取出培养物(第1代),仔细观察菌苔形态、有无杂菌,必要时涂片、革兰氏染色镜检,若呈典型菌落即可应用。
如发现菌型不典型,可进行平板分离单菌落。
１、２为保证工作用菌株得传代次数不超过5代,并减少购买冻干菌种得次数,可在对冻干菌种复苏得同时制备部分菌悬液(第1代)冷冻保存,并将此冻存菌液复苏后得第２代培养物冻存保藏。
菌种复苏传代操作规程
菌种复苏传代操作规程一、引言菌种复苏传代操作规程是生物实验室中非常重要的一项工作，它关系到实验的可靠性和成功率。
本文将详细介绍菌种复苏传代操作规程，包括前期准备、菌液制备、培养基制备、菌种接种、传代等步骤。
二、前期准备1.准备好所需设备：无菌培养箱、移液器、显微镜等；2.准备好所需试剂：琼脂、葡萄糖等；3.清洗设备并消毒。
三、菌液制备1.从冰箱中取出需要复苏的菌株，将其在无菌条件下解冻；2.取出一定量的琼脂加入到试管中，并加入适量的葡萄糖和其他所需成分；3.将琼脂溶液加热至沸腾，然后冷却至50℃左右；4.将解冻后的菌株用移液器吸取适量细胞悬浮液，并滴入琼脂溶液中；5.轻轻摇晃试管使得细胞均匀分布在琼脂中；6.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。
四、培养基制备1.准备好所需试剂：琼脂、葡萄糖等；2.将琼脂加入到试管中，并加入适量的葡萄糖和其他所需成分；3.将琼脂溶液加热至沸腾，然后冷却至50℃左右；4.将制备好的菌液接种到琼脂溶液中，并轻轻摇晃使得细胞均匀分布在琼脂中；5.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。
五、菌种接种1.准备好所需设备：无菌移液器、显微镜等；2.从前一代培养基中取出需要传代的菌株；3.用移液器吸取一定量的细胞悬浮液，并滴入新的培养基中；4.轻轻摇晃试管使得细胞均匀分布在琼脂中；5.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。
六、传代1.在前一代培养基中进行培养，当菌落数量达到一定程度时，即可进行传代；2.从前一代培养基中取出需要传代的菌株；3.用移液器吸取一定量的细胞悬浮液，并滴入新的培养基中；4.轻轻摇晃试管使得细胞均匀分布在琼脂中；5.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。
七、结论通过以上步骤，我们可以成功地进行菌种复苏传代操作。
在实验过程中，我们需要注意保持无菌条件，并严格按照操作规程进行操作，以确保实验结果的准确性和可靠性。
实验室细菌传代实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解细菌传代的概念和意义。
2. 掌握细菌传代的方法和技巧。
3. 学习观察细菌在不同代次下的生长和变化。
二、实验原理细菌传代是指将细菌从原始培养物转移到新鲜培养基上的过程。
通过传代，可以使细菌繁殖，扩大培养量，同时也能对细菌进行筛选、鉴定和保存。
细菌传代的方法有平板划线法、涂布分离法等。
在传代过程中，需要严格控制传代次数，以防止细菌发生变异。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）2. 培养基：LB培养基、琼脂平板3. 仪器：无菌操作台、接种环、酒精灯、培养箱、显微镜等四、实验方法1. 初始培养：将菌种接种于LB培养基中，37℃培养过夜。
2. 传代培养：a. 第1代：将过夜培养的大肠杆菌接种于新鲜的LB培养基中，37℃培养过夜。
b. 第2代：将第1代培养的大肠杆菌接种于新鲜的LB培养基中，37℃培养过夜。
c. 第3代：将第2代培养的大肠杆菌接种于新鲜的LB培养基中，37℃培养过夜。
d. 第4代：将第3代培养的大肠杆菌接种于新鲜的LB培养基中，37℃培养过夜。
3. 观察和记录：a. 在每个代次培养结束后，观察细菌的生长情况和形态变化。
b. 对每个代次的细菌进行涂片、革兰染色，观察细菌的染色特性。
c. 对每个代次的细菌进行平板划线分离，观察菌落特征。
五、实验结果1. 初始培养：菌落呈圆形、光滑、湿润，边缘整齐，无色透明。
2. 第1代培养：菌落大小与初始培养基本一致，但生长速度略快。
3. 第2代培养：菌落大小略有增大，生长速度较快，菌落表面出现少量细小菌落。
4. 第3代培养：菌落大小明显增大，生长速度较快，菌落表面出现大量细小菌落，部分菌落出现变异。
5. 第4代培养：菌落大小进一步增大，生长速度较快，菌落表面出现大量细小菌落，变异现象更加明显。
六、讨论与分析1. 在实验过程中，细菌在不同代次下的生长速度和菌落特征发生了明显的变化。
随着传代次数的增加，细菌的生长速度逐渐加快，菌落大小逐渐增大，变异现象也逐渐明显。
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菌种名
称：
编号：
购进代数：购进日
期：
复苏日
期
使用人使用人使用人使用人使用人
销毁日期销毁日期销毁日期销毁日期销毁日期
8
7
10
9
6
5
4
3
2
日期1序号第1代第2代第3代第4代第5代日期日期日期日期
菌种使用记录
菌种复苏、传代、使用记录
保藏代数保藏数量操作人销毁日期操作人
保藏方法：