复旦大学生化与分子生物学实验室实验室手册

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分子实验手册

分子实验手册

一、真菌RNA提取实验原理在所有RNA实验中,最关键的因素是分离得到全长的RNA。

而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA 酶)的污染。

由于RNA酶广泛存在而稳定,一般反应不需要辅助因子。

因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解,而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA 分析的结果,所以RNA的制备与分析操作难度极大。

在实验中,一方面要严格控制外源性RNA酶的污染;另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA酶。

RNA酶可耐受多种处理而不被灭活,如煮沸、高压灭菌等。

外源性的RNA酶存在于操作人员的手汗、唾液等,也可存在于灰尘中。

在其它分子生物学实验中使用的RNA酶也会造成污染。

这些外源性的RNA酶可污染器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂。

而各种组织和细胞中则含有大量内源性的RNA酶。

①防止RNA酶污染的措施1.所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hR或更长时间。

2.塑料器皿可用0.1% DEPC 水浸泡或用氯仿冲洗(注意:有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀,故不能使用)。

3.有机玻璃的电泳槽等,可先用去污剂洗涤,双蒸水冲洗,乙醇干燥,再浸泡在3% H2O2室温10min,然后用0.1% DEPC水冲洗,晾干。

4.配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC,在37℃处理12 h以上。

然后用高压灭菌除去残留的DEPC。

不能高压灭菌的试剂,应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制,然后经0.22μm滤膜过滤除菌。

5.操作人员戴一次性口罩、帽子、手套,实验过程中手套要勤换。

6.设置RNA操作专用实验室,所有器械等应为专用。

②常用的RNA酶抑制剂1.焦磷酸二乙酯(DEPC):是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。

它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性。

2.异硫氰酸胍:目前被认为是最有效的RNA酶抑制剂,它在裂解组织的同时也使RNA酶失活。

生物化学与分子生物学 考试大纲 复旦

生物化学与分子生物学 考试大纲 复旦

生物化学与分子生物学考试大纲复旦
复旦大学生物化学与分子生物学专业硕士考试大纲主要包括以下几个部分:
一、考试科目:
1. 思想政治理论
2. 英语(一)
3. 生物化学
4. 遗传学和细胞生物学
二、考试内容:
1. 生物化学部分:
- 蛋白质的结构与功能:包括蛋白质的基本结构单位、氨基酸的分类、氨基酸的理化性质、多肽与生物活性多肽、蛋白质的分类等。

- 蛋白质的一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。

- 蛋白质的一级结构与功能的关系、蛋白质的空间结构与功能的关系。

- 蛋白质的理化性质、蛋白质胶体性质、蛋白质的变性与复性等。

2. 分子生物学部分:考试大纲中未给出具体内容,请考生参考相关教材和资料。

三、题型及分值分配:
1. 选择题:约占30%
2. 简答题:约占25%
3. 论述题:约占20%
4. 实验题:约占25%
以上信息仅供参考,具体的考试内容和题型可能会根据每年的考试要求有所调整,请考生及时关注复旦大学的官方通知和公告。

实验室手册

实验室手册

國立中正大學化學暨生物化學系實驗室安全衛生工作守則一、作業行為管理1、實驗室、實習工場作業人員應穿著實驗衣,戴護目鏡,不宜穿著過於寬鬆之衣服,如蓄長髮者應加以束紮。

不得穿拖鞋或赤腳至作業場所。

2、在實驗室、實習工場不得戲鬧及飲食。

3、不可隨意坐於實驗室、實習工場桌上。

4、不可將食物儲藏在存有化學藥品之冰箱內。

5、使用化學藥品後,需先洗手後方能進食。

6、避免單獨於實驗室從事實驗,如須於入夜進行實驗,應有其他人員陪同。

7、在實驗室、實習工場時,應有老師或專職人員擔任監督之角色。

8、使用玻璃器皿時,不可直接觸摸剛加熱後之試瓶。

9、使用本生燈前應檢查通氣導管是否有漏氣現象,且不可用紙片點火,不用時應將通氣導管關閉。

10、任何玻璃器皿放置應有適當之固定,不可任意放置,造成滑落而產生意外。

11、破損之玻璃器皿應收集儲存後集中處理。

12、用試管直試加熱時,身體不可太靠近加熱區,以免內含物噴出而濺及身體。

13、在有禁煙之標誌區內嚴禁煙火。

二、溶劑及藥品存放之規範1、五百毫升或更大容量之易燃液體在實驗後,需放回特定防火防爆之儲存櫃中。

(註:非全滿之容器仍以全滿視之)2、化學藥品及溶劑存量以足夠進行實驗為原則。

3、化學藥品及溶劑應依其危害性及相容性隔離置放。

(見附件一)4、無機酸與可燃化學藥品需隔離置放。

5、存放在實驗桌,排煙櫃,及其他實驗場所的化學藥品的量,以足夠一次試驗為原則,取樣後的化學藥品應放回原位。

三、廢液分裝器之規範1、危害性廢液應依其性質分類,分別倒入貯存容器中,勿直接倒入水槽。

(見附件二)2、危害性固體廢棄物應依其性質分類,分別裝入塑膠袋中密封起來,以方便集中處理,絕不可將之與一般垃圾混合。

危害性固體廢棄物之分類如下:(1)化學藥品儲存罐及實驗用之玻璃器皿以及廢棄針頭。

(2)舊藥品罐及無標籤之藥品罐。

(3)附著水銀系藥劑的消毒紗布、紙類及樹脂。

(4)油泥或沾染油污之布、紙等廢棄物(5)吸附有害物質的矽膠、活性鋁膠及樹脂類等材料。

从质粒抽提谈起

从质粒抽提谈起

从质粒抽提谈起这是质粒抽提方法经典的总结,感谢复旦大学生化与分子生物学实验室教授撰写。

碱裂解法从大肠杆菌制备质粒,是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。

可以我收研究生十几年了,几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。

追其原因,我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤,而没有对原理进行详细的论述。

这是导致我的学生误入歧途的主要原因。

后来我发现其实是整个中国的相关领域的研究生水平都差不多,甚至有很多“老师”也是这个状态。

这就不得不让人感到悲哀了。

我想这恐怕和我们的文化有点关系。

中国人崇尚读书,“学而优则仕”的观念深入人心。

经常听到的是父母对他们的独苗说,你只要专心读好书就可以了。

所以这读书的定义就是将教课书上的东西记住,考试的时候能拿高分……这就是现代科学没有在中国萌发的根本原因。

如果中国文化在这一点上不发生变化,那么科学是不能在中国真正扎根的,它只能蜕化成新的“八股学”。

生命科学是实验科学,它讲究动手。

如果实验科学只要看看书就可以了,那我想问有那位神仙看看书就会骑自行车了?或者听听体育老师的讲解就会滑冰了?可是光动手不思考,不就成了一个工匠?一个合格的生命科学研究者,需要在这两方面完善自己。

一个杰出的科学工作者,是一个熟知科学原理并善于应用的“艺术家”。

每个曾经用碱法抽提过质粒的同学,希望你看本文后能有所思考,让中国的未来有希望。

为了方便理解,这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液:溶液I,50 mM葡萄糖/ 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA,pH 8.0;溶液II,0.2 N NaOH / 1% SDS;溶液III,3 M醋酸钾/ 2 M 醋酸。

让我们先来看看溶液I的作用。

任何生物化学反应,首先要控制好溶液的p H,因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液,是再自然不过的了。

那么50 mM葡萄糖是干什么的呢?说起来不可思议,加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。

《化学实验操作手册》

《化学实验操作手册》

化学实验操作手册1. 引言化学实验是化学学习中不可或缺的一部分,但正确而安全地进行实验操作是至关重要的。

本手册旨在提供一些基本的化学实验操作指导,包括实验室安全、仪器和设备使用、常见试剂及其性质,以及常见实验步骤和技术。

2. 实验室安全2.1 实验室准备•确保实验室通风良好。

•确保实验室消防设备齐全,并且易于使用。

•检查实验台面是否整洁,并清除杂物。

•确定安全出口位置并熟悉应急逃生路线。

2.2 实验室个人防护措施•穿戴适当的个人防护装备,如实验服、实验眼镜和手套。

•遵循标签和SDS(Safety Data Sheet)上的有关试剂的个人防护要求。

2.3 常见危险品处理•小心处理和储存易燃物质、腐蚀性物质和有毒物质。

•正确处置废弃物并采取环境友好的方式进行处理。

3. 实验仪器和设备3.1 常见实验仪器•烧杯、容量瓶、试管等容器的使用方法和注意事项。

•平衡器、分光光度计等常用实验仪器的操作指南。

3.2 常见实验设备•加热装置、离心机等实验设备的正确使用方法。

•pH计、天平等电子设备的校准和维护要点。

4. 常见试剂及其性质4.1 酸碱溶液•常见酸碱溶液的命名规则。

•各种酸碱溶液的pH值范围,特性和应用。

4.2 化学反应试剂•氯化银、硫酸铁等常见化学反应试剂的性质和用途。

4.3 其他常用试剂•氧化剂、还原剂等常见试剂的性质和预防措施。

5. 常见实验步骤和技术5.1 稀释操作•稀释溶液时要注意的比例关系和安全操作。

5.2 过滤操作•不同类型的过滤器和过滤方法的选择与使用。

5.3 结晶操作•结晶试剂的选取、溶解度与结晶温度的关系。

5.4 酸碱中和反应•酸碱中和反应的判断方法与实验步骤。

结论通过本手册提供的指导,使用者将能够正确有效地进行化学实验操作。

然而,在进行任何化学实验之前,请确保已经详细阅读并理解每个实验的特定要求,并且遵循所有实验室安全规定。

分子生物学实验操作方法与技巧(2).ppt

分子生物学实验操作方法与技巧(2).ppt
• 碱裂解法从大肠杆菌制备质粒,是从事分子 生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。 可是许多人却对碱法质粒抽提的原理知之甚 少。追其原因,大概是因为《分子克隆》里 面只讲实验操作步骤,而没有对原理进行详 细的论述。本次课将告诉大家常见的几种质 粒提取的方法、原理、步骤及其技巧,并对 质粒提取过程中遇到的常见问题进行分析。
溶液III的配制
• 溶液 III :3 M 醋酸钾(KAc)缓冲液, pH 5.6。 5 M 冰醋酸。 • 配制:500 ml • 醋酸钾 147 g • 冰醋酸 57.5 ml • 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。待醋酸 钾溶解后,再加去离子水将溶液定容至500 ml。高温高压(121˚C,20分钟)灭菌后, 4℃保存。
• 和表达载体pET32等)上。
• 生化试剂:一般多为分析纯,少数为化学纯。 • 水:最好的是超纯水,其次为三(双)蒸水,最差为去离子水,
一般很少用自来水。
• 高效酶类:限制酶,修饰酶,连接酶,Taq酶,pfu等。 • 经典的分子生物学工具书:分子克隆(目前出到第三版),
精编分子生物学实验指南(目前出到第四版)等。
价格昂贵,一般合成1kb基因约需花费5000-6000元,3-4星 期时间。
• (3)自己合成寡核苷酸引物并拼接:采用OE-PCR技
术,不需要原始材料,一般自己合成基因的费用约相当于专 业公司合成价格的三分之一至二分之一,所需时间视个人操 作技巧。
什么是质粒?
• 质粒是独立于染色体外的DNA分子,其大小范 围在1KB至200KB以上不等。大多数来自 细菌细胞的质粒是双链、共价闭合的环状分 子,以超螺旋形式存在。 • 至少在实验室,大多数质粒是通过写信获取 而并不需要自己动手构建。所有的质粒,无 论来自于商家还是科技工作者,在用于实验 以前一定要进行验证(验证的方法一般为酶 切、电泳)!

《分子生物学》实验(17课时)

《分子生物学》实验(17课时)

(本科)生物科学专业分子生物学实验2013年制订课程代码:学分:1总学时:17先修课程:《生物化学》,《有机化学》等。

开课对象:生物科学专业(本科)一、课程的性质、目的与任务分子生物学已成为生命科学的基础学科之一,其基本理论和实验技术已渗透到生物学的各个领域并促进了一批新学科的兴起和发展。

目前,以分子生物学为基础的基因克隆重组技术已成为现代生物技术的核心。

为了适应分子生物学技术的发展,落实培养创新人才的目标,特开展本实验课程,以培养学生的动手能力,加强学生对分子生物学实验技术的理解。

除了增进对分子生物学内容的理解,更重要的是培养学生的实验技能和创新思维设计。

通过实验原理的讲解和实验操作,使学生初步了解和熟悉现代分子生物学实验的基本原理、操作机能和实际应用,提高学生的创新思维和独立分析问题解决问题的能力。

二、实验内容与学时分配实验内容实验类型学时分配比例实验器材清洁灭菌与试剂配制操作 2PCR扩增目的DNA 验证 2 核酸的琼脂糖凝胶电泳与分析验证 2 pET28a质粒在大肠杆菌中的扩增与试剂盒抽提(碱抽提法)综合 4 感受态细胞的制备(CaCl2法)综合 3 pET28a质粒转化大肠杆菌TOP10与鉴定综合 4共17学时实验一实验器材清洁灭菌与试剂配制一、学习分子生物学实验室规则与注意事项二、熟悉相关仪器的使用及操作规程超净工作台、PCR仪、电泳仪及电泳槽、凝胶成像系统、恒温水浴锅、恒温培养箱、摇床、冷冻离心机、涡旋振荡器、高压蒸汽灭菌锅、微波炉、重蒸水装置、移液枪三、器材的清洁与包装消毒(每组一份)1.试管清洗与包装灭菌:用清洁液刷洗后自来水冲洗,再用蒸馏水冲洗两遍,晾干或烘干使用。

取棉花与纱布,制成棉塞,塞好试管口。

3只一组用报纸包裹、细绳扎紧,高温蒸汽灭菌。

2.培养皿清洗与包装灭菌:将培养皿清洗干净,晾干或烘干,盖好,4套一组用报纸包裹,灭菌。

3.离心管的包装与灭菌:将100ml烧杯清洗干净,晾干或烘干。

复旦大学硕士研究生培养手册说明

复旦大学硕士研究生培养手册说明

复旦大学硕士研究生培养手册说明第一篇:复旦大学硕士研究生培养手册说明复旦大学硕士研究生培养手册说明一、本手册供硕士研究生使用,填表要求字迹清楚、语句通顺。

请注意清洁,保持完好。

毕业时归入本人学业档案。

二、本手册由院系统一负责保管。

硕士研究生根据不同培养阶段从研究生院网页上下载以下空表,认真填写有关内容并在规定时限内提交,包括通过研究生院网页进入复旦大学研究生教育管理信息系统提交。

无故未完成者,研究生管理部门将对其学籍做出处理。

1.复旦大学硕士研究生培养计划2.复旦大学硕士研究生开题报告3.复旦大学硕士研究生中期考核4.复旦大学硕士研究生实践5.复旦大学硕士研究生学术活动6.复旦大学硕士研究生科研和发表论文 7.复旦大学硕士研究生学位论文预审三、本手册自2005级硕士研究生开始实行。

各院系在使用过程中有好的意见和建议,望反馈给我们,以便再版时及时补充和完善。

复旦大学研究生院二○○五年九月第二篇:复旦大学博士研究生手册培养手册说明复旦大学博士研究生培养手册说明一、本手册供博士研究生使用,填表要求字迹清楚、语句通顺。

请注意清洁,保持完好。

毕业时归入本人学业档案。

二、本手册由院系统一负责保管。

博士研究生根据不同培养阶段从研究生院网页上下载以下空表,认真填写有关内容并在规定时限内提交,包括通过研究生院网页进入复旦大学研究生教育管理信息系统提交。

无故未完成者,研究生管理部门将对其学籍做出处理。

1.复旦大学博士研究生培养计划2.复旦大学博士研究生开题报告3.复旦大学博士研究生中期考核4.复旦大学博士研究生实践5.复旦大学博士研究生学术活动6.复旦大学博士研究生科研和发表论文7.复旦大学博士研究生学位论文预审三、本手册自2005级博士研究生开始实行。

各院系在使用过程中有好的意见和建议,望反馈给我们,以便再版时及时补充和完善。

复旦大学研究生院二○○五年九月第三篇:复旦大学硕士研究生毕业自我鉴定复旦大学硕士研究生毕业自我鉴定范文本人作为研究生在复旦大学数学所攻读计算数学专业近三年,毕业之际,回顾三年来的学习、工作以及生活,做自我鉴定如下:本人在思想觉悟上始终对自己有较高的要求,能用科学发展观来认识世界认识社会,能清醒的意识到自己所担负的社会责任,对个人的人生理想和发展目标,有了相对成熟的认识和定位。

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复旦大学生化与分子生物学实验室实验室手册实验室就像一个大家庭,没有“规矩”就没有秩序。

每个成员都要为实验室的正常秩序而不懈努力。

本手册是每个成员的行为准则,每个老成员有责任和义务用它来教育新加入实验室的成员。

一、行为道德实验室是进行科学研究的场所。

诚实是进行科学研究的基本。

尽可能多发论文,发高质量的论文,是每个成员的应尽义务,同时也提倡成员间的互相帮助。

坚决杜绝任何篡改数据的行为,不然会害人害己。

而数据的修改,需要在得到实验室主管的许可,并在其监督下进行。

本实验室一旦发现伪造数据现象,将立刻开除期当事人之学籍。

论文著者排名:第一作者为论文的主要完成人,包括写作;如果做实验的人没有完成论文的写作就离开了实验室,那么第一作者就很可能是后面帮助重复实验和写作的人;论文的通讯作者是对论文内容负责的人,一般是实验室的头,放在著者排名的最后(除非博士后有特殊需求,也需得到头的许可才可以成为通讯作者)。

实验室成员需对自己的个人生活负完全责任,不得因此影响工作。

有特殊困难的,可以请求帮助。

二、课题、工作时间和假期研究生的课题选择分两种情况:出于实验室的发展需要而需要进行的课题;围绕人类重大疾病选择自己喜欢而实验室又能支撑的课题。

按照国际惯例,研究生原则上没有寒假和暑假。

本实验室允许大家在安排好工作的基础上适当休假,但寒暑假休假实验室不发工资。

本实验室采用柔性工作时间制,但除非有特殊理由,每天到实验室的时间不得晚于10:30am。

长时间外出,需要适当说明和请假。

三、实验室安全须知实验室的安全问题关系到每个人的切身利益。

实验室危害源按大小区分如下:放射线、病毒>>氯仿> EB / acrylamide >臭氧。

放射性元素本实验室不使用,因此不必担心。

将来做同位素实验,需要接受王维荣老师(本实验室同位素实验上岗证持有者)的安全指导;特别需要关注的是氯仿,会导致肝肿大、肝硬化,如果瓶子的内塞不盖,会不知不觉中挥发,不知不觉中实验室所有人都吸入了氯仿。

新开瓶的氯仿要在上面加上0.5 cm厚的离子水,防止氯仿挥发。

本实验室所从事的研究范围内的病毒属于安全系数较高的范畴,但对于出实验室的样品和导入下水道的废液,需要严格灭活处理。

处理方法:废液高温灭菌,器具NaOH浸泡)。

EB在Ames test中显示有致突变活性,但实际上不能穿越表皮,因此即便沾在手上也危害甚微。

如果浓度比较高,可以用次氯酸钠等氧化剂擦手。

臭氧会导致肺气肿和肺纤维化,因此要尽量缩短开石英紫外灯的时间(只有石英灯管才会发生臭氧),并尽量避免吸入臭氧;向下水道倒废液,要注意将危害大的物质做适当处理:如考马斯亮兰染色液应该加入次氯酸钠将色素破坏后确认达到中和。

四、实验记录实验记录目前在中国很不规范,但应该逐渐开始规范化。

本实验室翻译的“At the helm”一书中有详细的描述,将是我们实验室的努力方向。

目前可以做到的是,将任何细节都记录在实验记录本上,特别是和导师讨论后要记录讨论的时间和内容以及达成的共识。

铭记――好记性不如烂笔头。

实验记录本需要妥善保存,离开实验室时将记录本留在实验室。

因此你所记录的东西应该让后面查阅的人能够看懂,不要使用自己的“暗语”和“记号”。

本实验室成员独自开发过改良过的的实验protocol,当不怨其烦地进行整理,放在服务器的实验室工具箱中,以便其他人共享。

五、实验室工作应该注意细则实验室的任何东西都有它最应该放的地方。

切记,哪里拿的放回哪里。

实验室区域划分:实验室分公用区域和个人实验区域。

个人使用区主要为指定的实验桌和试剂架,指定的坐位,指定的4℃和-20℃使用区,冷库使用区;公用区域包括细胞室、大小摇床、大小离心机、PCR仪、称量区、HPLC室、动物箱、破菌机、成像系统、核酸电泳区和蛋白质电泳区、灭菌室、RNA实验区、冷库、生活区、浴室等。

所有公用区需要保持清洁和空闲,不能因为个人样品不收拾而影响别人的正常使用。

试剂是实验室的血液。

任何试剂接近用完时,或有特殊试剂需求时,必须先向实验室负责试剂定购的人员提出,必要时向实验室负责人商量定购事宜。

正确的标签,是保证实验室正常运转的最低要求。

标签必须写明4个要素:试剂名称、浓度(及pH)、人名、日期。

如果高温灭菌过,也请注明。

严格禁止使用个人编号。

只要是使用时间在一天以上,就要具体写清楚这4个要素。

要像“小狗见了电线杆一样”,多多留下你的标签。

强烈建议所使用的试剂一定要自己配。

器皿洗涤:个人使用的玻璃和塑料器皿,需要各自负责清洗、凉干。

玻璃器皿橱、灭菌室门、仪器室门要始终保持关闭状态。

如果你相信只由你一个人使用的物品,可以存放在你自己的抽屉。

细胞培养须知:细胞室负责人为闵太善老师,负责血清定购,培养基、培养皿等试剂的定购,培养箱加水等;新配培养要冻在-20℃,由闵太善分装并加入双抗后派分给大家(分装血清前也在血清中加入双抗),这样可以最大程度避免污染;进入细胞室一定要换鞋;培养室显微镜一般不要切断电源,只把照明亮度调小,这样做是为了延长灯泡的寿命;所有的培养皿上都需要写上自己的名字;做完实验要将所有物品进行清理,看到消毒棉花少了就进行补充;看到消耗品少了,及时告知小闵;由于做细胞实验人员多,地方小,大家一定要多互相关照,优先考虑有重要实验的成员的需要;发生霉菌污染,用抗真菌药物进行抑制,不要马上抛弃;多带口罩做实验,避免发生支原体污染;细胞室的打扫,由使用人员轮流进行(闵负责指挥)。

使用层析载体时,一定要好好阅读有关资料,了解载体的性质。

分离纯化蛋白质和核酸的层析载体多数是由可被微生物降解的材料做成的,因此每次层析后只要第二天不用,就应当用20%的酒精进行置换(这个条件下没有微生物可以生存)。

层析柱不能为了保存就放到4度的冷库里去,不然拿到室温就会出现气泡;如果是ProteinA亲和柱之类的带蛋白质配体的层析柱,就应该一直在低温操作;如果低温保存的柱子需要搬到室温操作,就应该在最短时间内将柱子里的液体置换成室温的液体;中压和高压的层析柱一般常温保存,不要在低温保存;一旦在层析柱中出现气泡,最有效的解决办法就是将缓冲液用微波炉加热煮沸后迅速冷却,然后过柱,利用空气溶解度的差异来吸收载体中的气泡。

实验桌使用注意:实验室人数大于实验桌数,要及时清理桌面上的东西以方便别人临时使用。

同样,使用了别人的实验桌就一定要将之打扫干净。

PCR须知:定期用50%的酒精擦PCR上的样品孔,看好时间做实验,为了仪器寿命,不能让PCR仪4℃保温过夜。

PCR的技术深不可测,每个人都要潜心研究,特别是污染的防止。

Taq酶、dNTP都有储备,找相关的管理人员(洪洁、章宏海)要,然后妥善保存,不要用别人的备份以避免污染。

感受态:制备高效率的感受态,是保障研究工作正常进行的前提。

每个人都应该定时活化工作菌株,每天接种一管大肠杆菌以备用。

经常用pUC或pSK质粒检测转化效率,一旦发现转化效率下降就马上更换。

制备感受态细菌的培养器皿一定要极力避免洗涤剂的使用。

试剂称量须知:从冰箱中取出来的固体试剂必须在37度温箱中加温,等试剂的温度高于室温后方能打开盖子称量;称毫克级试剂时,一次性往Eppendrof管中取出适当的量,称重后就按重量进行计算该加入溶剂的量。

冰箱、冷库使用须知:一般在各自划定的区域内使用-20℃冰箱(特别是卧式)时,将自己的盒子取出后再挑选,切勿长时间开着冰箱门影响别人样品质量。

定期整理各自使用的冰箱区域,腾出试管架子。

限制性内切酶的酶切反应需在37℃培养箱中进行(整体加热),这样做是为了避免水分凝结在管盖上导致反应液中离子浓度偏高。

贵重酶要尽量节省用量。

精密移液器(Pipetman)的正确用法:Pipetman不得在酒精灯上操作,不要习惯性空打(会造成磨损)。

离心机使用时:Hitachi高速离心机用后需将转子取出倒置。

最重要的是,不管什么离心机,一定要将离心管进行平衡,不然离心机轴心会在一次不经意的不平衡后,发生永久性偏轴损伤。

带可调控性电源(电压和电流)仪器使用时,需将电压或电流调至零点方可以关电源。

这样的仪器有:离心机、显微镜、电泳仪等。

空调使用时应该注意不要经常开关,因为每次启动制冷相当于3小时的持续制冷的损伤;实验室日光灯应该保持一直开的状态,主方可保证最长寿命。

Agarose凝胶倒好后不及时用时,需在1小时内转移至TAE中保存。

带盖的离心管、试剂瓶等在进行高压灭菌时,需将盖子拧松或者在瓶口插一片纸;带徒弟时必须在第一课讲解灭菌要领。

废液回收:尽可能减少酚氯仿抽提时酚氯仿的用量,废液要回收。

其他需要回收的废液:乙酸乙脂、吡啶、乙醚,及其他不溶于水的有机溶剂。

电泳仪和台式离心机需将电压调至最小后再关闭电源,这是为了让仪器长寿。

脱色摇床,培养摇床不用时要关闭(电机有使用寿命),不用的器皿、管子及时拿出。

实验服只能在实验区穿,不能穿出实验区,也不得穿入生活区。

浴室用后要打扫,将滤盖上的头发除去,将地板上的水除去。

实验室书籍尽可能不带离实验室。

六、其他对于实验室的集体活动之一的Lab meeting,每个成员必须准时出席,一般三年级以上当每周做工作汇报。

Seminar是实验室最重要的学术活动,每个成员必须最大限度加以重视,努力提高演讲水平。

Ppt文件要存档;实验室提倡大家多参加各种学术会议,并要积极提问题。

实验室旅游也是集体活动的一部分,实验室成员当尽量单独参加(特殊情况特殊处理)。

实验室内互相转告事情,碰到对方不在时,马上找来纸和笔写条子留在当事人的桌上。

这是为了避免你的健忘可能会带来的灾难。

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