动物生理学血液学实验

实验报告

课程名称：动物生理学指导老师：实验名称：血液学实验

一、实验目的和要求

1.掌握实验用兔颈动脉采血的方法

2.了解红细胞比容及其测定方法

3.血液凝固的基本过程及影响血凝的一些因素

装

二、实验内容和原理

订

将抗凝血放在特制有刻度的玻璃管(温氏分血管)中，经过离心沉淀，使血细胞线

与血浆分离。红细胞下沉，彼此压紧而又不改变每个血细胞的正常形态。根据玻璃管刻度的读数，可以计算出红细胞在全血中所占的容积百分比——即红细胞比容。

血液凝固可分为三个主要步骤:

第Ⅰ阶段是凝血因子FX激活成FXa并形成凝血酶原复合物（凝血酶原激活物）第Ⅱ阶段是凝血酶原（Prothrombin，FⅡ）激活成为凝血酶（thrombin，FⅡa）第Ⅲ阶段是纤维蛋白原（FI）转变成纤维蛋白（filbrin，FIa）

在这三个主要步骤中都需要Ca离子的参与

三、主要仪器设备

大兔一只，兔手术保定台，

烧杯（500ml，50ml），常用手术器械（手术刀、毛剪、手术剪、止血钳），线动脉套管，动脉夹

温氏分血管，长颈滴管，5毫升试管，离心机，天平，5ml 注射器

试管，试管架，吸管

2％戊巴比妥钠，3.8％柠檬酸钠，肝素，1％氯化钙，5％草酸钾，液体石蜡，带有开叉橡皮管的玻棒等。

四、操作方法和实验步骤

手术操作

2％戊巴比妥钠按1ml/kg的剂量从耳缘静脉注入实验用兔

麻醉后仰卧固定于手术台上（同时准备实验用试管等）

剪去颈部术野的被毛，切开皮肤，找出两侧颈动脉

将颈动脉剥离2厘米左右，然后在颈动脉下面穿两条线。将一侧颈动脉在远心端用线结扎，再于近心端用动脉夹夹住。结扎处与动脉夹之间最好不少于 1.5厘米

用眼科剪刀在这段动脉上靠近结扎处1／4的地方，斜向近心方向剪一小口，将动脉套管插入，用线扎好，以免滑脱，待用（需采集血样时打开动脉夹即可）

比容的测定：（1）用配有长注射针的注射器吸取含肝素的抗凝血，然后将注射针插入温氏分血管的底部，缓缓地将滴管内的血液注入分血管内(不得有气泡)，使血液正确地装到刻度10处。

（2）离心：将温氏分血管放入离心机中，以每分钟3000转的速度离心30分钟。取出分血管，观察红细胞所占的容积并记录其数值(不包括白细胞和血小板沉积所形成的灰白色薄层)。然后再以3000转速度离心5分钟，如红细胞的容积与上次记录相同，表明红细胞已被压紧，读数即为红细胞的比容(如读数为4. 0，

即表示100毫升血液中，红细胞容积占40毫升)。

影响血凝的物理因素

a 取试管3支，一支管内加少量棉花，一支管内壁涂少许液体石蜡，一支不作任何处理，为对照。

b 将以上三支试管分别加入新鲜血液2毫升，每30秒轻轻地倾斜试管一次，分别记录三支试管的凝血时间。

温度对血凝的影响

取试管两支，分别加入新鲜血液2毫升。一管置于常温或37℃水浴中，一管放在低温或冰箱内，记录两支试管的凝血时间。

钙离子对血凝的影响

1．取试管3支，一支放入3.8％柠檬酸钠3滴，一支加入5％草酸钾3滴，一支不作任何处理，为对照(与1共用)。然后，再向各管分别加入1毫升新鲜血液，混合后观察并记录血凝情况。

2．将加入柠檬酸钠管和草酸钾管分别再加1％CaCl2 1—2滴后，观察并记录血凝情况。

肝素的作用

取一支试管放肝素8单位，再加入新鲜血液1毫升，摇匀后，观察其结果。

取新鲜血液50毫升，放入烧杯中用带有开叉橡皮管的玻棒搅动，以除去其中的纤维蛋白；将除去纤维蛋白的血液静置之，观察其能否凝固。

五、实验结果与处理

六、实验分析与讨论

实验数据分析与讨论：

第一组实验：从理论教学书中查阅得，兔的血液比容为35~45ml/100ml,实验数据符合理论值

第二组实验对比：通过对比试验发现，棉花会促进凝血作用，而石蜡削弱了凝

血作用。

1.棉花给血液凝固提供了一个粗糙的表面，容易使血小板发生黏

着，聚集，然后方冉生解体，释放许多凝血因子和血小板因子；

另外棉花含有许多负电荷和植物纤维，也能够激活FXII，启

动内源性凝血途径，因此加快了凝血速率

2.石蜡是表面光滑，不易引起血小板黏着，无法发挥凝血作用，

并且石蜡为绝缘体，把试管表面所带负电荷覆盖，不利于FXII

的激活，所以相比正常对照组要慢

第三组实验对比：试验中发现单单草酸钾或者柠檬酸的情况下，血液都未发生

凝血作用，而加入氯化钙后，凝血作用较为迅速。

1.凝血中Ca2+是重要的凝血因子，在是试管中加入了草酸钾以后，

草酸钾与钙离子发生反应，生成草酸钙沉淀，血液中没有钙离

子，故血液难以发生凝固

2.柠檬酸与钙离子结合则成可溶性络合物，同样可以起到抗凝血作用

第四组实验对比：实验发现37℃下凝血作用较快，而4℃下则很慢，其原因分析如下：

1.血液凝固的过程中有许多蛋白质酶的参与，所以当温度降低的

时候，酶的活性降低，因此放置在冰水中的试管长时间不凝固 2.室温大致低于体内温度，所以将血液放于37℃的时候恰好

到达酶活性最高的状态，因此加速了血液的凝固

第五组实验：肝素具有抗凝血作用，与抗凝血酶III结合，可使抗凝血酶III 与凝血酶的亲和力增强

第六组实验：橡皮管在搅拌过程中，将形成的纤维蛋白收集到橡皮管上，没有纤维蛋白网罗作用的血液无法凝固，同时橡皮管上缠绕上了

白色丝状的物质

实验结论：

1.血液凝固过程可分为三个相互联系的主要阶段，其中任何一个阶段被破坏，

血液凝固过程都会终止，血液凝固的过程实际上是纤维蛋白的形成过程

2.血液凝固手接触面、温度、钙离子等理化因素的影响，血液接触面粗糙，能

加速血液凝固，而血液接触面光滑，降低温度则使血凝减慢，此外加肝素等抗凝剂，加草酸钾出去血液中的钙离子等课延缓血液凝固

试验中部分操作失误之处：

1.实验中加入草酸钾溶液后再加入氯化钙，发现血液未发生凝血，经过排查发

现使用的试管在之前使用时使用过肝素，由于未清洗赶紧，可能导致血液无法发生凝结。

2.实验开始时可能由于操作不当或者操作幅度过大等原因惊吓到了兔子致使兔

子两次尿液失禁。

在参阅其他实验资料以后还发现有2种其他的采血方法：

1、心脏采血法

将兔仰卧固定在手术台上，把左侧胸部相当于心脏的部位的被毛剪去，用碘伏、酒精消毒皮肤。实验者用左手触摸左侧第3-4肋间，选择心跳最明显处作穿刺。

一般由胸骨左缘外3mm处将注射针头插入第三肋间隙。穿刺时最好用左手触诊心跳，在触诊的配合下穿刺。

经6-7天后，可以重复进行心脏穿刺术。家兔一次可采取全血量的1/6-1/5。

2、耳缘静脉采血法

穿刺采血法：是家兔最常用的采血方法。具体方法同耳缘静脉注射给药。此法一次可采血5～lOml，可多次重复使用。针头不可连接注射器，直接让血液滴在有抗凝剂的试管内。

切割采血法：当兔耳部血管被充分扩张后，可用刀片割破耳缘静脉，或用注射针刺破耳缘静脉，让血液自然流出。采血穿刺和注射穿刺方向不同。采血穿刺逆血流方向行针，采血量越大，越要靠近根部行针。

个人认为上述两种方法较本实验中的颈动脉采血法的优点在于兔子无需处死，可以多次取血。心脏采血法不容易控制，不能很准确得将针头插入心脏中。