龙胆苦苷

龙胆中龙胆苦苷研究进展

1.龙胆苦苷简介

1.1龙胆苦苷的基本性质

龙胆有效药用成分中主要成分为龙胆苦苷，其广泛分布于龙胆属植物中。龙胆苦苷属于裂环烯醚萜苷类化合物的一种，容易在乙醇、甲醇以及水溶剂中发生溶解，其分子式为C16H20O9。龙胆苦苷性状为淡红/黄色或者白色针状结晶，存在内酯苷类化合物颜色反应，龙胆苦苷具有较强亲水性，而脂溶性则相对较差。英文名:Gentiopicroside

分子式：C16H20O9

化学名:5-Ethenyl-6-(β-D- glucopyranosyloxy)-5,6- dihydro- 1H,3H - pyrano[3,4-C]pyran-1-one

分子量：356

Mp: 191℃

[α]D: -196.3(H2O)

UV:λmax 270(MeOH)

1.2龙胆苦苷的结构

2.龙胆苦苷的来源与应用

2.1龙胆苦苷的来源

本品为龙胆科植物条叶龙胆Gentiana manshurica Kitag.、龙胆Gentiana scabra Bunge 、三花龙胆Gentiana triflora pall 或坚龙胆Gentiana rigescens Franch. 的干燥根及根茎.龙胆苦苷(Gent iopicroside)是龙胆科龙胆属植物龙胆的有效成分之一, 也是当药及獐芽菜等植物中的苦味成分, 属于裂环环烯醚萜苷类, 分子式为C16H20O9 , 白色粉末或淡黄(红)色结晶, 易溶解于水、甲醇及乙醇等溶剂, 阳光下易变色.龙胆具有利胆、抗炎、健胃、降压等作用。龙胆中主含环烯醚萜苷类成分，龙胆苦苷为其中主要有效成分。

2.1.1龙胆苦苷的植物来源

全球龙胆属龙胆科( Gentiana L．) 植物超过500种，其中以热带高山以及温带地区分布较为广泛，此类植物在我国也有广泛分布，其种类超过230 种，西南部为其主要产地，大部分龙胆属龙胆科植物均用于观赏，也有部分可入药。

2.1.2龙胆苦苷的药物来源

来源于龙胆的干燥根及根茎，也是当药及獐牙菜等植物的苦味成分。

2.2龙胆苦胆的应用

龙胆苦苷具有保护肝脏、抗氧化、抗炎、镇痛及抗肿瘤等作用.

2.2.1抗炎作用

陈长勋等[ 1]报道, 秦艽所含龙胆苦苷具有抗炎作用, 即龙胆苦苷可减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀, 抑制冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的增加, 阻止角叉

菜胶及酵母多糖所致大鼠足跖肿胀, 但对制霉菌素所致的炎症模型无明显作用.

2.2.2保肝作用

刘占文等[2]研究探讨了龙胆苦苷的肝保护作用, 发现龙胆苦苷可明显降低四氯化碳所致急性肝损伤小鼠血清A LT ,AS T 水平, 增加肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶活力, 提高大鼠胆流量及胆汁中胆红素含量, 故认为龙胆苦苷具有明显的肝保护作用.研究发现, 龙胆苦苷可显著抑制由四氯化碳和D-氨基半乳糖所致急性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶的升高, 从而对肝脏起保护作用.刘涛等[3]通过对四氯化碳损伤大鼠肝脏和新鲜肝细胞体外筛选模型进行观察, 证实龙胆苦苷具有明显的抗四氯化碳肝损伤作用;李艳秋等[4]通过对四氯化碳、TAA 及D-氨基半乳糖所致小鼠肝损伤及豚鼠同种免疫性肝损伤模型的研究发现, 龙胆苦苷对化学性及免疫性肝损伤具有保护作用, 即龙胆苦苷可显降低多种急性肝损伤和慢性肝损伤动物血清氨酶, 减轻肝组织片状坏死、肿胀及脂肪变性的程度,促进肝脏的蛋白质合成.Kondo 等[5]将龙胆苦苷分别作用于四氯化碳和脂多糖/卡介苗所致的肝损伤模型, 均发现龙胆苦苷具有一定的保肝作用.

2.2.3 镇痛作用

陈雷等[6] 报道, 龙胆苦苷具有镇痛作用, 即经皮下注射给予小鼠龙胆苦苷, 可减少小鼠的扭体次数, 提高小鼠痛阈阈值, 且此作用呈良好的量效关系;龙胆苦苷可明显减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀, 降低蛋清所致大鼠足趾肿胀, 抑制大鼠肉芽肿.Chen 等[7]报道, 龙胆苦苷通过下调N R2B 受体, 对持久性炎症性疼痛起显著的镇痛作用.

2.2.4健胃作用

研究发现, 经胃瘘管注入龙胆苦苷可使胃液中游离酸含量提高, 降低胃内pH 值;舌下涂抹龙胆苦苷可使胃液量稍微增加, 而静脉给药胃液量基本不增加, 提示龙胆苦苷刺激胃液和胃酸分泌的作用方式为直接作用[8] .

2.2.5抗肿瘤作用

Cho u 等[9]对龙胆苦苷对肝癌细胞Hep 3B 的细胞毒作用进行了研究, 结果表明收效甚微.另据报道, 龙胆苦苷在体外对人肺腺癌细胞株A 549 具有一定的抑制作用.黄馨慧等[10]报道, 龙胆苦苷可抑制SMMC-7721 人肝癌细胞的增殖. 2.2.6抗氧化作用

龙胆苦苷具有清除自由基的能力, 龙胆苦苷标准品质量浓度在0.25 ～10.00 g/L时清除氢氧自由基能力随质量浓度的增加呈增长趋势, 清除率达40.74 %～87.03 %.据报道, 龙胆苦苷抗氧化活性RC50为0.75 g/L[11] .

2.2.7其他作用

2.2.7.1利胆作用

龙胆苦苷可促进大鼠胆汁分泌,促进胆囊收缩[12] .

2.2.7.2 促进伤口愈合作用

Ozt¨urk 等[13]通过鸡胚成纤维细胞研究发现, 龙胆苦苷具有较好的促进伤口愈合作用.

2.2.7.3 平滑肌松弛作用

将龙胆苦苷质量浓度依赖性地作用于豚鼠离体回肠, 可阻碍由组胺、乙酰胆碱、氯化钡和氯化钾引起的回肠收缩, 表明龙胆苦苷可能干扰钙涌入平滑肌细胞, 起到平滑肌松弛作用[14].

2.2.7.4 中枢神经系统作用

从黄龙胆中得到的龙胆苦苷、当药苦苷和当药苷对小鼠的中枢神经系统有兴

奋作用.

3.龙胆苦苷的提取与分离

3.1龙胆苦苷的提取方法

3.1.1超声提取

综合龙胆苦苷的提取因素：乙醇浓度、加热回流时间、提取次数和溶媒量，以70%乙醇，加热回流1h，重复提取3 次，从中药龙胆中提取的龙胆苦苷含量较高，是龙胆苦苷的最佳提取工艺。所提取的龙胆苦苷的最高含量为 5.79% 。其中乙醇用量和提取次数是龙胆苦苷提取的主要影响因素。

3.1.2 大孔吸附树脂富集法

D-101大孔吸附树龙胆苦苷具有较好的吸附能力, 且解吸附快, 洗脱率大, 经过D-101 大孔吸附树脂处理后的药液固形物含量较上柱前原药液显著降低, 有效成分含量明显提高.验证实验表明, 用D-101大孔吸附树脂富集龙胆苦苷时, 以蒸馏水和250 mL/L 乙醇依次洗脱的工艺稳定可行.

3.1.3酒炙法

以水浸出物含量及水浸出物中龙胆苦苷的含量为指标, 采用正交设计筛选炮制工艺.以龙胆切短段(5 ～ 10 mm), 加入药材质量1/5 的白酒, 闷润2 h , 文火炒制的炮制品中水浸出物含量及水浸出物中龙胆苦苷的含量最高.

1.4 乙醇提取法

1.4.1 乙醇冷浸法

采用正交试验法,以龙胆苦苷含量为指标筛选出合理的提取工艺为乙醇体积浓度为700 mL/L , 浸提时间为36 h , 溶媒用量为药材的10 倍, 提取3 次.

1.4.2 乙醇热回流法

利用正交试验筛选出的龙胆中龙胆苦苷的提取工艺为以600 mL/L 乙醇回流提取3 次, 每次2 h ,乙醇用量为药材量的18 倍.

1.5 高速逆流色谱法

利用制备型高速逆流色谱仪, 以氯仿-甲醇-正丁醇-水(5 ∶4 ∶2 ∶4)为溶剂系统对龙胆甲醇粗提取物进行分离, 上相为固定相, 下相为流动相, 转动速度为820 r/min , 流动速度为2.0 mL/min .所得龙胆苦苷经HPLC 分析, 纯度达到96.68 %(峰面积百分比).

1.6 高速逆流色谱结合大孔树脂法

对药材醇提取液经D-101 大孔吸附树脂柱的层析物直接进行高速逆流色谱分离纯化, 以醋酸乙酯-正丁醇-水(2 ∶1 ∶3)为溶剂系统, 下相为流动相, 流动速度为1.5 mL/min , 检测波长为254 nm , 分离温度为30 ℃, 所得产物经HPLC 与质谱分析检测, 并与标准品进行对照.

3.2龙胆苦苷的分离方法

3.2.1试验方法

3.2.1.1微波辅助萃取-大孔树脂分离法

萃取剂为600 mL/L 乙醇,流动速度为3 mL/min ;大孔树脂分离富集优化条件为上样速度为2.0 mL/min , 洗脱液为500 mL/ L 乙醇, 流动速度为1.0 mL/min .

3.2.1.2回流提取

龙胆药材的提取称取坚龙胆药材500 g，用70% 的乙醇溶液5 L、4 L 依次回流提取，每次回流提取2h，滤过，合并滤液，减压浓缩至无醇味，冷冻干燥。

3.1.2纯化方法

采用经大孔吸附树脂AB-8分离得到的龙胆苦苷粗品经MCI树脂进一步分离纯化。

3.2.3实验结果

在优化的萃取及纯化条件下测得龙胆原料中龙胆苦苷平均含量为34.57mg/g .，纯化后得到浓度大于97% 的龙胆苦苷此方法采用树脂结合技术，可直接从龙胆药材中分离得到高纯度的龙胆苦苷，简单、快捷、无毒、得率高，可以用于龙胆苦苷的大批量生产和标准品的制备。

3.2.3方法对比讨论

经过以上分析龙胆苦苷的提取工艺条件为:在龙胆中加入8倍量的乙醇，超声提取2次，每次20min乙醇浓度70%、料液比1:10、提取时间3h、提取温度71.5℃. 在此条件下, 龙胆苦苷得率较高.，此工艺能保证坚龙胆中龙胆苦苷提取较完全。

4.参考文献

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