明胶酶谱法 -回复

明胶酶谱法是一种用于测定明胶酶活性的分析方法。

明胶酶谱法基于明胶酶对明胶的降解作用，通过测定明胶的降解

程度来反映明胶酶活性。

这种方法可以在实验室中进行，通常需要一些特定的试剂和设备。

明胶酶谱法的原理是利用明胶对明胶酶的敏感性，通过观察明胶

降解的速度来确定酶的活性。

在明胶酶谱法中，一般会选择特定浓度和分子量的明胶，以确保

最佳的测定结果。

明胶酶谱法可以用来研究明胶酶对明胶的降解过程，了解酶的活

性和特性。

这个方法可以应用于食品工业、制药工业等领域，用于检测明胶

酶的活性和质量。

明胶酶谱法在实验室中的操作比较简单，但需要一定的实验操作

技巧和对仪器的熟悉。

这种方法对明胶酶活性和测定结果的准确性有着重要影响，所以需要严格按照操作流程进行实验。

明胶酶谱法的操作流程包括样品制备、反应过程、数据记录等环节，需要仔细阅读方法说明书并进行实践。

在明胶酶谱法中，常用的数据处理方法有绘制酶活性曲线、计算酶活性单位等。

明胶酶谱法需要注意的问题包括试剂的质量、设备的准确性和对废液的处理等。

明胶酶谱法的优点是操作简便、结果准确可靠，可以在较短时间内完成分析。

明胶酶谱法的局限性在于它只是测定明胶酶活性的一种方法，不能全面了解酶的特性。

在明胶酶谱法中，一些因素如温度、pH值等会对酶的活性产生影响，需要进行恰当的控制。

明胶酶谱法的操作需要注意安全，避免对人体和环境造成伤害。

明胶酶谱法是一种常用的分析方法，被广泛应用于生物化学、食品科学等领域。

该方法在明胶酶的研究和应用中具有重要意义，可以帮助科学家们更好地了解酶的特性和机制。

明胶酶谱法的结果可以用于酶活性检测、比较不同酶样品的活性等。

这种方法还可以用于评估明胶酶的纯度和稳定性，指导生产过程中的酶的应用。

明胶酶谱法可以与其他分析方法结合使用，提高酶活性测定的准确度和可靠性。

该方法还可以用于研究明胶酶的底物特异性、抑制剂的效果等。

明胶酶谱法的发展使得对明胶酶的研究更加深入和全面。

在明胶酶谱法中，还可以对酶的催化机制进行研究，探索明胶酶和底物之间的相互作用等。

明胶酶谱法还可以用于研究明胶酶在不同环境条件下的稳定性和适应性等。

该方法对明胶酶的质量控制和质量分析具有重要意义，可以帮助生产者保证产品的质量。

明胶酶谱法可以与其他测定方法相互补充，提高对明胶酶的分析效果。

明胶酶谱法的应用还可以推动酶工程和生物技术的发展，促进产业的发展。

明胶酶谱法可以用于研究明胶酶在不同物种中的分布和功能差异等。

在明胶酶谱法的研究中，还可以发现一些新的酶和底物适配体，推动酶学的发展。

明胶酶谱法是一个重要的工具，可以用来研究酶对明胶的降解机制和途径。

明胶酶谱法在工业生产中也有广泛的应用，用于监测酶的活性和产品质量。

明胶酶谱法在生命科学研究中的应用前景非常广阔，可以深入了解酶的功能和机制。

关于明胶酶谱法的研究还有许多待发掘的问题和挑战，需要继续努力和探索。

明胶酶谱法的发展为科学家们提供了一个重要的工具，用于研究酶的结构和功能。

明胶酶谱法的应用领域还在不断扩大和深化，可以为科学家们提供更多的研究机会和挑战。

明胶酶谱法的应用可以促进生物工艺学和生物医学领域的创新和发展。

明胶酶谱法在生物化学和分子生物学领域的应用也得到了广泛的肯定和应用。

明胶酶谱法的原理和操作流程对于初学者来说可能比较复杂，需要进行系统的培训和学习。

明胶酶谱法在研究领域的应用还存在一些争议和问题，需要进行更深入的探讨和研究。

明胶酶谱法对于提高明胶酶的生产效率和质量控制非常重要，可以为产业发展提供支持和指导。

明胶酶谱法在追踪酶活性和酶底物相互作用方面具有重要作用，

可以直观地显示酶的催化效果。

明胶酶谱法在测定酶活性和研究酶的功能特性方面具有独特的优

势和潜力。

明胶酶谱法在医药业的应用也受到广泛关注，可以用于药物研发

和酶抑制剂的筛选。

明胶酶谱法在环境科学中的应用也有一定的潜力，可以用于监测

和评估环境中的酶活性。

明胶酶谱法对于探索酶的催化机理和生物催化工艺具有重要的意

义和应用前景。

明胶酶谱法的应用也能够为食品安全和质量控制提供支持和保障。

明胶酶谱法的研究还有待于进一步的深入和拓展，能够为生物学

和工业界提供更多的创新和发展机会。

酶学实验

实验一、木瓜蛋白酶活性测定实验(明胶法) (一)实验原理木瓜蛋白酶从明胶中分解出氨基酸和肽，其氨基型氮可用甲醛复分解，产生氢离子，浓度可用氢氧化钠溶液滴定。 (二)定义一个木瓜蛋白酶单位相当于在规定条件下分解1ug分子量的肽键时所需的酶量。 (三)试剂 1. 底物明胶 2. 柠檬酸盐缓冲液(pH5.0) 取70.000g一水柠檬酸溶于720mL 1mol/L氢氧化钠溶液中。用1mol/L氢氧化钠溶液将pH调至5.0，用蒸馏水定容至1000mL。 3. 37%甲醛溶液 4. 酚酞溶液取0.5g酚酞溶于95%的乙醇中，并定容至50mL。 5. 0.1mol/L氢氧化钠溶液取4.0克氢氧化钠置于洁净干燥的烧杯中，加纯水稀释、搅拌溶解，将溶液移入1000ml洁净容量瓶中定容至刻度。 6. 酶溶液用蒸馏水溶解酶，每毫升配制溶液应含有40U左右。酶的称量一定得按以下原则确定：用于主值和空白值试验的耗量之差应在1.8～2.2mL这一范围内。此外需用一个合适的称量重复测定几次。 (四)操作步骤称取500mg明胶放入一只100mL锥形烧瓶内，加8mL蒸馏水，加热后明胶溶解。待明胶完全溶解加2.0mL柠檬酸盐缓冲液，置于水浴中冷却至40℃。加5.00mL已预热至40℃的酶溶液，于40℃下保温60min，加10.0mL甲醛溶液终止反应。加0.5mL酚酞溶液后用0.1mol/L氢氧化钠溶液滴定，直至第一次出现明显的粉红色为终点。用同样方法测定空白值，只是这里在添加酶溶液之前先添加甲醛溶液。在空白值测定方面耗去大约5mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液。

(五)计算用以下公式计算酶活性：酶活力(U/mg)=(H-B)/E W×100 式中：H-用于主值的滴定耗量(mL)； B-用于空白值的滴定耗量(mL)； 100-相当于1mL0.1mol/L氢氧化钠溶液； E W-每5.0mL所用酶液中含有酶的重量(mg)。举例：测定一个木瓜蛋白酶样品。从样品中称取68.2mg，定容100mL。5 mL此溶液中含有3.41mg样品。8.52mL滴定耗于空白值试验，10.57mL耗于主值试验。则酶活性为：(10.57-8.52)×100/3.41=60.1 U/mg

明胶酶谱法

明胶酶谱法原理：酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含0.1％明胶）电泳分离，然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性，在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶，最后用考马斯亮蓝将凝胶染色，再脱色，在蓝色背景下可出现白色条带，条带的强弱与MMP-2和MMP-9活性成正比。复性原理：在电泳过程中，SDS与样品中的MMPs结合（当然是可逆性结合），破坏其氢键、疏水键而使MMPs不能发挥其分解明胶的作用，而只有当将胶置Trition中洗脱（最好是放在摇床上摇，30min／次，做2次或15min/次，4次。静置于Trition中是不妥的。）时，由于SDS被Trition结合而去除，从而使MMPs 恢复了活性。 Mmp-2 72kd mmp-9 92kd 实验步骤 1.取对数期的癌细胞在的C。 2.次日收集上清液，将上清液移入离心管中2000rpm 离心10min，-70℃储存备用。 3.根据细胞计数调整各组细胞培养上清液中的蛋白浓度（或者测定蛋白浓度调整使所上蛋白总量一致）。与5×上样缓冲液混合，13ul样本+4ul上样缓冲液。（不要用枪用力吹打，防止出现过多气泡） 4.配制分离胶和浓缩胶，16ul/孔上样（根据表达强度和蛋白浓度确定上样量），4℃进行SDS-PAGE 电泳100v约1.5小时（电泳时在周围敷上冰，有利于使条带跑直）。 5.电泳结束后,将凝胶置于洗脱液(2.5% Triton X-100，50mmol/L Tris -HCl ，5mmol/L CaCl2，pH7. 6) 中振荡洗脱2次,每次40分钟,然后用漂洗液(除不含Triton X - 100 外其余同洗脱液) 漂洗2次,每次20分钟,接着,将凝胶置于孵育液( 50mmol/L Tris - HCl , 5mmol/ CaCl2 , 0. 02% Brij-35 ,pH7.6) 中37℃孵育42h。 6.孵育结束后经染色液(0.05% Coomassic 亮蓝、30%甲醇、10%乙酸) 染色3h,及脱色液A、B、C(甲醇浓度分别为30%、20%、10 % ,乙酸浓度分别为10 %、10 %、5%) 分别脱色0.5、1、2h后，显示出MMP-2（72KD）和MMP -9（92 KD）为位于蓝色背景上的透亮带，用凝胶图像分析系统分析读取条带面积，宽度和灰度值，做统计分析。注意事项： 1.制备聚丙烯酰胺时应注意排除气泡。 2.明胶酶谱的活性受钙离子，锌离子，和PH值等因素的影响，因此缓冲液配制应严格准确，尽量用超纯水，孵育温度也掌握好。 3.用大梳子 4.孵育液的PH最好在7.5-7.6，复性的TRITON时间长了会有絮状物，所以实验时尽量使用新鲜配置的。

免疫组化技术在病理诊断中的应用

免疫组化技术在病理诊断中的应用随着医学技术的不断发展，免疫组化技术已成为病理诊断中不可或缺的一部分。这项技术通过特定的抗体标记病变组织，帮助医生更准确地识别病变性质、程度及预后等。本文将详细介绍免疫组化技术的原理、应用、优势及局限性。免疫组化技术是利用抗原抗体反应，即免疫反应，来检测组织或细胞中的特定抗原。将组织或细胞固定在载玻片上，然后使用特异性抗体与抗原结合。抗体通常与酶或其他可视化标签相连，以便更轻松地检测抗原。通过显微镜观察组织或细胞的染色情况，从而得出诊断结果。免疫组化技术在病理诊断中具有广泛的应用，以下是几个具体例子：确定肿瘤类型：免疫组化技术可以帮助医生确定肿瘤的类型，如乳腺癌、肺癌等。通过检测特定的抗原，如雌激素受体、EGFR等，可以为治疗提供指导。预测肿瘤预后：免疫组化技术可以检测肿瘤细胞的增殖活性、细胞周期蛋白和凋亡相关蛋白等，从而预测肿瘤的预后及对治疗的反应。鉴别良性和恶性肿瘤：通过免疫组化技术检测特定抗原的表达水平，可以帮助医生鉴别良性和恶性肿瘤。例如，Ki-67抗原是一种细胞增

殖相关抗原，其在恶性肿瘤中的表达水平通常较高。检测感染性疾病：免疫组化技术也可用于检测感染性疾病，如艾滋病、乙肝等。通过检测相应的病原体抗原，可以快速、准确地诊断疾病。高特异性：免疫组化技术利用抗原抗体反应，具有高度的特异性。这意味着该技术可以准确地检测出组织或细胞中的特定抗原，降低误诊率。定位准确：免疫组化技术可以准确地检测出抗原在组织或细胞中的位置，有助于医生对病变进行精确分析。多种抗原同时检测：免疫组化技术可以同时检测多个抗原，从而为医生提供更多关于病变的信息。交叉反应：虽然免疫组化技术具有高度的特异性，但仍有可能出现交叉反应，影响结果的准确性。技术要求高：免疫组化技术的操作过程相对复杂，对技术人员的要求较高。技术人员的操作水平可能影响结果的稳定性和可靠性。成本较高：免疫组化技术使用的试剂、仪器等成本较高，可能限制其在某些地区的应用。

酶谱法测定肝星状细胞合成的明胶酶活性

酶谱法测定肝星状细胞合成的明胶酶活性王晓丹;时晓明;曲显俊;程艳娜;史桂云;高允生【摘要】目的建立检测肝星状细胞(HSC)合成的明胶酶(MMP-2,MMP-9)活性的方法.方法用含SDS-明胶的聚丙烯酰胺凝胶电泳为基础的酶谱法,检测体外培养的HSC所合成的明胶酶活性.结果酶谱法能灵敏地检测到HSC分泌到培养基中的MMP-2和MMP-9,培养基中MMP-2活性高于MMP-9,并观察到药物作用以后酶活性的改变.结论酶谱法是研究HSC调节肝纤维化过程中细胞外基质(ECM)代谢的有效手段. 【期刊名称】《泰山医学院学报》【年(卷),期】2010(031)007 【总页数】2页(P513-514) 【关键词】肝纤维化;肝星状细胞;明胶酶;酶谱法【作者】王晓丹;时晓明;曲显俊;程艳娜;史桂云;高允生【作者单位】泰山医学院,山东,泰安,271016;泰山医学院,山东,泰安,271016;山东大学药学院,山东,济南,250014;山东大学药学院,山东,济南,250014;泰山医学院附属医院,山东,泰安,271000;泰山医学院,山东,泰安,271016 【正文语种】中文【中图分类】R282.71 肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)是继发于各种原因引起的肝脏炎症或损伤后组织修

复过程中的代偿反应,以细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在肝内过量沉积为病理特征[1]。近年的研究[2]表明肝星状细胞(HSC)在肝纤维化的病理生理过程中起着关键作用,HSC从静止转化为激活状态可合成肝脏几乎全部 ECM,因此 HSC的激活是肝纤维化发生的中心环节,同时合成大量 ECM,并通过其合成的基质金属蛋白酶(MMPs)和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)调节 ECM降解。为了研究 HSC在ECM降解中的作用及用 HSC研究具有促进 ECM降解的药物,我们尝试了 HSC明胶酶谱的测定方法。 1 材料与方法 1.1 实验材料明胶酶(gelatinase,17104-019,美国 Gibco BRL公司产品);TEMED(N,N,N,N-四甲基乙二胺),过硫酸胺(amnonium persulfate,AP,A-6761)均为美国 Sigma公司产品;考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue R-250),丙烯酰胺(acrylamide),甲叉双丙烯酰胺(bisacrylamide)均为美国 Bio.Basic.Inc.BBI 公司产品 ;Triton X-100、SDS等,美国SERVA公司产品。其余试剂均为分析纯。 1.2 试剂配制 1%明胶：称 1.0 g明胶溶于 100 ml蒸馏水,37℃溶解,4℃保存。样品缓冲液：0.25 mol/L Tris-HCl(pH 6.8),10%SDS,4%蔗糖,0.1%溴酚蓝。电泳缓冲液：0.025 mol/L Tris,0.192 mol/L甘氨酸(pH 8.5),0.1%SDS。洗脱缓冲液： 2.5%Triton X-100。明胶酶缓冲液：50 mmol/L Tris,10 mmol/L CaCl2,200 mmol/L NaCl,1μmol/L ZnCl2。染色液：0.25%考马斯亮蓝 R-250(溶于 1︰4.5︰ 4.5的冰乙酸、甲醇和 H2 O中)。脱色液：冰乙酸︰甲醇︰ H2O=1︰ 4.5︰4.5。 1.3 细胞培养 HSC细胞株购于中国医学科学院肿瘤研究所生物检测中心细胞库,生长于 DMEM培养基(Gibco BRL,Rockville,MD,USA)+15%胎牛血清(含 2 mM L-glutamine,penicillin and streptomycin)中 ,置37°C(5%CO2 ～ 95%air)培养箱生长,以0.05%EDTA-PBS分散成为单细胞。取处于对数生长期的细胞用于实验。

内皮细胞与单核细胞相互作用对MMP-2和TIMP-2分泌和活化的影响以及普伐他汀的作用

内皮细胞与单核细胞相互作用对MMP-2和TIMP-2分泌和活化的影响以及普伐他汀的作用目的很多研究认为动脉粥样硬化斑块的发生、发展以及不稳定斑块的形成和破裂与动脉粥样硬化斑块中基质金属蛋白酶（Matrix Metalloproteinase，MMPs）和／或组织型基质金属蛋白酶抑制物（Matrix Metalloproteinase Tissue Inhibitor，TIMPs）平衡失调有关。其中，单核／巨噬细胞与内皮细胞分泌的MMP-2（又称明胶酶A）及TIMP-2是决定斑块进程及斑块稳定性的最重要因素之一。单核细胞可以通过细胞间相互接触诱导周围细胞表达MMP-2，而动脉粥样硬化中内皮细胞MMP-2的过度表达与单核／巨噬细胞浸润的程度和范围高度一致，提示二者可能存在某种联系。本实验着重研究了单核细胞和内皮细胞相互作用后，MMP-2和TIMP-2分泌及活化的变化。调脂药物尤其是他汀类药物的作用具有多效性，临床上常用的普伐他汀可以稳定斑块，防止斑块破裂。但是它是否可以通过调节基质金属蛋白酶及其组织抑制物表达和分泌的途径来发挥其稳定斑块的功能，目前未见报道，本实验对此进行了初步探讨。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC），待细胞生长至亚融合状态后，将人单核细胞白血病细胞（THP-1）以不同比例与之共同培养，取上清采用明胶酶谱法检测MMP-2活性及逆明胶酶谱法检测TIMP-2的活性。向按1：1比例培养的HUVEC和THP-1 中同时加入不同浓度的普伐他汀（0，0.1，0.5，1.0μmol／ml）作用24小时后，用同样的方法测定MMP-2和TIMP-2的活性。采用Fluorchem^TM Imaging System显微图像分析系统对明胶酶谱和逆明胶酶谱的实验结果进行扫

明胶酶谱法

明胶酶谱法明胶酶谱法是一种新型的蛋白质分析方法，它可以提供准确准确的蛋白质质量分析和分子量分析结果。明胶酶谱法可以快速有效地测定蛋白质中的氨基酸和糖基化激酶的活性。这种方法通过使用蛋白质，核酸和其他复合物构成的聚合物，结合相关的酶诱发反应，来分析蛋白质的质量和分子量。这些复合物可以在单独的氨基酸片段中用来测量激酶反应，从而识别活性位点，反映了蛋白质质量和分子量分析的结果。明胶酶谱法的原理是基于胶质酶结合物，它由多种蛋白质，核酸和其他复合物组成，使用酶诱发反应来分析蛋白质的质量和分子量。该方法由激酶和聚合物组成，它们分别催化了激酶和聚合物的反应，从而产生了激酶的活性。此外，该方法还能够测量氨基酸片段的活性，这将有助于评估蛋白质的质量和分子量。明胶酶谱法的应用可以追踪物质的合成和分解的变化，从而发现蛋白质结构及其功能的改变。它可以用来研究蛋白质结合位点分布、激动酶及蛋白质与酶类分子识别蛋白质、以及酶促反应的参与者等，这些结果将有助于改善蛋白质的性能，这将有助于提高药物的疗效和安全性，以及有效防止药物毒性事件的发生。明胶酶谱法在蛋白质质量和分子量分析方面具有优越性。它可以快速有效地识别活性位点，由此提供了精确的蛋白质质量和分子量的分析结果。同时，该方法可以提供有效的数据，可以评估蛋白质的功能和结构。它还可以用来研究药物及其代谢物的代谢，改善药物的性

能和安全性，以及有效防止药物毒性事件的发生。由此可见，明胶酶谱法已成为药物研究和分析的一种重要的手段。明胶酶谱法的应用可以提供准确的蛋白质质量和分子量分析结果，从而有助于研究者分析蛋白质的功能和结构，并改善药物的性能和安全性。明胶酶谱法是一种有效的、快速的、有精度的、具有易操作性的蛋白质质量和分子量分析方法，因此它已经成为药物研究和分析的一种重要手段。

明胶酶谱法

B.浓缩胶的配制浓缩胶6ml ddH2O 4.5ml 30%储备胶0.75ml 1mol/l Tris-HCL( PH 6.8) 0.76ml 10% SDS 60ul 10%过硫酸铵60ul TEMED 6ul （3）5×Tris –甘氨酸电极缓冲液 0.125mol/l Tris-HCL，1.25mol/l 甘氨酸，0.5%SDS（PH 8.3）（4）4 ×上样缓冲液 0.32% Tris-HCL 6.4ml 4%SDS（PH7.2）8ml 16%甘油3.2 ml 溴酚蓝0.024g ddH2O 2.4ml (5)洗脱液:2.5% Triton X-100，50mmol/L Tris-HCl<6.057g/L> ，5mmol/L CaCl2<0.5549g/L>，pH7. 6 （40分钟两次，中间换液）（6）漂洗液：50mmol/L Tris-HCl，5mmol/L CaCl2，pH7. 6 （20分钟2次）（7）孵育液：50mmol/LTris,pH7.5,150mmol/LNaCl,10mmol/LCaCl2,0.02%NaN3（孵育42小时）（8）染色液：0.05% Coomassic 亮蓝R-250，30%甲醇，10%乙酸（染色3小时）（9）脱色液A、B、C：甲醇浓度分别为30%、20%、10 % ,乙酸浓度分别为10 %、10 %、5% （分别30min、1h、2h脱色）

MMP明胶酶谱

MMP明胶酶谱 MMP-2&MMP-9明胶酶谱法检测试剂盒这步操作很关键哦！基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以无活性的酶原形式分泌，活化后能够降解细胞外基质的胶原蛋白，又称胶原酶。通过影响细胞外基质，胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组织重塑等过程，并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的MMP-2、MMP-9参与各种生理与病理过程，其在临床诊断和治疗中的意义日益受到重视。检测步骤 1、制备含MMP底物蛋白的SDS-PAGE凝胶：推荐分离胶浓度为8%。按照标准程序制备SDS PAGE凝胶。将10 × substrate G 融化，并90 ºC 加热5分钟。分别在浓缩胶和分离胶中额外加入10 × substrate G 并使之稀释10倍，混匀后加入过硫酸铵和TEMED，等待凝胶聚合。 2、待测样品1:1 稀释于2 × SDS-PAGE non-reducing buffer (用完后可自行配制：4% SDS, 100 mM Tris-Cl pH6.8, 20% glycerol, 0.02% bromophnol blue)，混合后直接上样。切勿加热变性，并且仅使用不加还原剂的上样缓冲液。可通过预试验确定加样量，使用普通蛋白预染Marker 即可。阳性对照(可选步骤)：可取人、小鼠、大鼠或兔100μl 全血与100μl 2 × SDS-PAGE nonreducing buffer 等体积混合，取5-15μl 上样。

注：因为全血成分复杂,MMP活性较低，的方法是将全血中白细胞进行分离做阳性对照 3、低电流恒流电泳，每一块小胶电流为20 mA/gel。溴酚蓝跑出凝胶前沿时结束电泳。 4、洗涤凝胶：取出凝胶，去除浓缩胶，放入容器内。可先用适量蒸馏水冲洗凝胶，然后加入10 ml 1× Buffer A(用蒸馏水稀释)，室温漂洗凝胶2 × 30 分钟。中间换液。 5、孵育：倒掉Buffer A。加入10 ml 1× Buffer B(蒸馏水稀释)，室温或37ºC 孵育1~5 小时。阳性对照或者血中的MMP 通常37ºC 孵育1 小时即可显示。如MMP 活性低，应延长孵育时间为10小时或过夜。 6、显色：倒掉Buffer B，加入SDS-PAGE凝胶蛋白质考马斯亮蓝染色液（操作步骤见后面所附SDS-PAGE凝胶蛋白质考马斯亮蓝染色液说明书）。凝胶的大部分区域被深染，在有MMP 条带的位置不被染色而形成透亮区域。透明区域的位置和范围指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。阳性对照将在66~72 (MMP-2)、92 (MMP-9)、130 (proMMP-9)、225 (proMMP-9) kDa位置出现透明条带。 7、条带扫描：将凝胶放在扫描仪上扫描。虽然MMP条带透明，但凝胶背景并非真正全黑。解决办法：可用非透射光扫描，或用软件图像处理程序调整背景显示为灰度显示，并尽量设置为黑色。MMP 条带则为白色，这种背景黑条带白的格式是英文论文中zui常见的格式。

Transwell实验原理与操作步骤

Transwell实验原理与操作步骤Transwell实验，也被称为细胞侵袭实验，是一种研究细胞迁移和侵袭能力的实验方法。其基本原理是将小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。上室内添加上层培养液，下室内添加下层培养液，并将研究的细胞种在上室内。由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞生长、运动等。在进行不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜的实验时，可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。在肿瘤细胞侵袭实验中，需在聚碳酸酯膜上侧铺一层基质胶，用以模仿细胞外基质。肿瘤细胞必须分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质消化了才能进入下室（这与体内情况较为相似）。最后通过计算进入下室的细胞量即可反应细胞的侵袭能力。有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。建议实验前先用明胶酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP-2的表达。 Transwell实验的具体操作步骤如下： 1.实验前的准备工作：需要提前一天将Matrigel胶（一种人工合成的细胞外基质）从冰箱中取出，放置在冰盒上融化。同时，将24孔板、枪头、离心管等实验器材也放置在冰盒中预冷。 2.基质胶铺板：将融化好的Matrigel胶与无血清培养基按照1:8的比例混合，然后用预冷的枪头将混合液均匀铺设在Transwell小室的上室底部，注意要避免产生气泡。铺好后将小室放入37℃的培养箱中孵育30分钟，使 Matrigel胶凝固。 3.细胞处理：将需要研究的细胞进行传代或复苏，并用无血清培养基洗涤两次，然后用胰酶消化并计数。 4.接种细胞：将计数好的细胞用无血清培养基重悬，然后取适量细胞悬液加入到Transwell小室的上室中，注意要保证每个小室的细胞数量一致。

脑缺血再灌注论文：脑缺血再灌注乌司他丁基质金属蛋白酶9血脑屏障明胶酶谱

脑缺血再灌注论文：脑缺血再灌注乌司他丁基质金属蛋白酶9 血脑屏障明胶酶谱【中文摘要】背景与脑梗死是危害人类健康的常见病、多发病,以病死率、致残率和复发率高为特点,给社会、家庭及个人带来了严重的经济与精神负担,因此积极寻找有效的治疗措施成为当前研究重点。为挽救缺血半暗带内损伤较轻的脑组织,及早溶栓重新恢复缺血组织灌注给脑梗死患者带来了希望,但同时也带来了更严重的再灌注损伤问题。目前研究认为血脑屏障(BBB)通透性在脑缺血再灌注损伤的病理生理过程中起重要作用。血脑屏障位于脑实质和其供血血管之间,由毛细血管内皮细胞及其之间的紧密连接、连续的基底膜和基底膜外侧的星形胶质细胞终足构成。血管基底膜由细胞外基质分子(ECM)组成,对维持BBB的完整性起重要作用,而ECM正是基质金属蛋白酶(MMPs)的主要作用底物。近年来研究发现脑缺血及再灌注后出现MMPs 表达增加,尤其是MMP-9与血脑屏障通透性的增加有关。MMP-9基因敲除可减小鼠缺血后的脑梗死体积；MMP-9可降解ECM,导致BBB受损引起出血和水肿,并能促进中性粒细胞浸润,引起局部炎症反应,加重组织损伤。因此寻找以MMP-9为作用靶点,减轻血脑屏障通透性进而减轻脑损伤的神经保护剂意义重大。乌司他丁是一种蛋白酶抑制剂,已有许多研究证实乌司他丁对肝、肾、心、肠、肺等组织缺血再灌注损伤有器官保护作用。在脑缺血再灌注损伤方面也有少量研究,多侧重于减轻炎性因子、清除自由基对机体的损伤方面,但对BBB通透性及MMP-9活性的影响方面还不清楚。本实验采用大脑中动脉线栓法制

备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,检测损伤侧脑组织MMP-9活性与BBB通透性的变化,并观察乌司他丁治疗后的效果,探讨乌司他丁对脑缺血的神经保护作用机制,为脑梗死的治疗开辟一条新的途径。材料与方法健康清洁级SD大鼠72只,体重250g-300g,根据Zea Longa 线栓法并加以改进制作大脑中动脉栓塞再灌注损伤模型。将大鼠随机分为三组：假手术组(sham,24只),缺血再灌注损伤模型组(MCAO/R,24只)和乌司他丁处理组(UTI,24只),每组均设4个亚组：6h、24h、48h、72h,每个亚组6只大鼠。将乌司他丁溶于生理盐水中制成溶液,治疗组于再灌注后5min内给予腹腔注射乌司他丁(10000U/kg)一次,以后每天一次。假手术组和模型组给予相应体积生理盐水(1ml/kg)。在各时间点处死前半小时给予舌下静脉注射2%伊文思蓝 (2%EB,2ml/kg),30min后相应时间点处死大鼠。通过测定损伤侧脑组织中EB渗出量来观察BBB通透性的改变,用明胶酶谱法检测同侧脑部MMP-9活性变化。所有数据均以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。多组数据比较采用单因素方差(One-Way ANOVA)分析,组间比较采用Bonferroni法,p<0.05有统计学差异。结果1 EB渗出量：大鼠舌下静脉注射伊文思蓝后,可见大鼠全身迅速变蓝。通过检测损伤侧脑组织伊文思蓝渗出量,结果表明缺血再灌注组伊文思蓝渗出量在24h达高峰。乌司他丁处理后EB渗出量明显降低,结果有统计学意义(p<0.05)。2 MMP-9活性表达：假手术组脑内MMP-9的活性在各时间点表达均较低；缺血再灌注6h后, 大鼠缺血部位脑组织内可见少量MMP-9的表达,24h明显升高,48h达

灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠明胶酶及血脑屏障通透性的影响

灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠明胶酶及血脑屏障通透性的影响卢晓梅;赵红;张海鹏【期刊名称】《中国医科大学学报》【年(卷),期】2006(035)005 【摘要】目的:通过检测脑缺血再灌注小鼠明胶酶A(MMP-2)、明胶酶B(MMP-9)的活性及脑组织中伊文思蓝的含量,探讨灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠明胶酶及血脑屏障(BBB)通透性的影响.方法:复制脑缺血再灌注模型,并于术前15 min腹腔注射灯盏花素注射液10 mg/kg,采用明胶酶谱分析法检测脑组织海马区明胶酶的活性,同时经尾静脉注射2%伊文思蓝,检测脑组织伊文思蓝含量.结果:脑缺血再灌注后明胶酶(A、B)活性增加;灯盏花素组MMP-9活性明显低于脑缺血再灌注组,而灯盏花素对MMP-2作用不显著.脑缺血再灌注后4 h起脑组织伊文思蓝渗出逐渐增多,48 h达高峰,以后有下降趋势.灯盏花素组于术后伊文思蓝渗出明显低于相应时间的脑缺血再灌注组(P＜0.05).结论:灯盏花素具有降低脑缺血再灌注小鼠明胶酶B 的活性、降低血脑屏障通透性的作用. 【总页数】3页(P481-483) 【作者】卢晓梅;赵红;张海鹏【作者单位】中国医科大学基础医学院病理生理学教研室,辽宁,沈阳,110001;中国医科大学基础医学院病理生理学教研室,辽宁,沈阳,110001;中国医科大学基础医学院病理生理学教研室,辽宁,沈阳,110001 【正文语种】中文

【中图分类】R285.5;R743.31 【相关文献】 1.高压氧对脑缺血再灌注小鼠明胶酶、一氧化氮合酶及血脑屏障的影响 [J], 赵红;朱丽娜;陈学新;卢晓梅;张海鹏 2.通窍活血汤对脑缺血再灌注小鼠血脑屏障通透性及脑内单胺类神经递质含量的影响 [J], 刘亚芳;汪宁 3.高压氧对急性脑缺血再灌注小鼠AQP-4表达及血脑屏障通透性的影响 [J], 赵红;曹士信;卢晓梅;张海鹏;陈学新 4.人参三七配伍对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障通透性及脑组织炎症反应的影响[J], 张楠;黄鑫;戴雨霖;越皓;于洋;刘淑莹 5.芳香开窍药对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障通透性的影响 [J], 倪彩霞;曾南;汤奇;许福会;苟玲;王建;夏厚林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买

明胶酶谱实验

1) 母液配制： 1. 10X明胶溶液（50ml）：称取500mg明胶，加入高压灭菌三蒸水约 40ml，室温放置2h，使其吸水膨胀，然后置于65°C水浴，在15min之内溶成均匀的液体，最后定容至终浓度10mg/ml，于4°C备用。注：样本量较多时一次性配制50ml，分装于5ml EP管中-20°C备用。 2. 10X 50mM Tris-HCl母液（2L）：即0.5M Tris-Hcl。称取121.14g Tris-base，双蒸水溶解后浓盐酸调节pH值至7.5，定容至2L。 3. 20X 5mM CaCl2母液（1L）：即100mM CaCl2（分子量111）。称取11.1g CaCl2，双蒸水溶解后定容至1L。 4. 2000X 1uM ZnCl2母液（1L）：即2mM/L ZnCl2（分子量136.30）。称取0.2726g ZnCl2，双蒸水溶解后定容至1L。（注：使用浓度实在太小，只好配大体积的母液增加精准度。ZnCL2在水中呈絮状，用前剧烈震荡均匀） 5. 10X 2.5% Triton X-100母液（400ml）：即25%TritonX-100。 100mlTriton X-100原液双蒸水稀释至400ml。4度保存备用。 6. 10X Brij-35 0.02%母液（500ml）：即0.2%Brij-35。称取1g Brij-35至400ml双蒸水，65度水浴加热至完全溶解后定容至500mL。4度保存备用。 2) 使用液配制： 1. 5×loadingbuffer配方:用培养细胞上清等浓度较低样本检测 Tris-HCl(PH6.8) 0.4M SDS 10% Glycerol 50% Bromophenol blue 0.03%

酪蛋白酶谱MMP检测实验

酪蛋白酶谱MMP（3/10）检测实验实验技术服务方法：基质金属蛋白酶（MMP）酪蛋白酶谱法（casein-zymography）电泳分析试剂是一种旨在通过酪蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法，在分离、蛋白复性、底物水解、染色等一系列步骤下，观察并半定量深蓝色背景中的白色清晰的基质金属蛋白酶条带，根据分子量确定特异基质金属蛋白酶及其活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取样品（动物、人体、植物、昆虫等）、培养上清悬液、血清和关节滑液或脑脊液等基质金属蛋白酶－1，3，7 以及12等活性及其抑制剂的检测。【晶莱生物】实验技术背景：基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases；MMPs）是一类结构高度同源的分泌型或膜相关性锌内肽酶的总称，因含有金属（锌、钙）离子而得名。迄今为止发现的MMPs 至少有28 种，几乎能降解除多糖以外的全部细胞外基质（extracellular matrix）成分，同时参与胚胎发育、形态形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、组织再吸收（tissue resorption）、疾病发生，例如关节炎、癌细胞浸入转移等。根据降解的底物不同可将MMPs 分为4 大类：（1）胶原酶：MMP1、MMP8、MMP13 主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和蛋白多糖；（2）明胶酶（Ⅳ型胶原酶）：MMP2、MMP9，又称明胶酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和弹性纤维；（3）基质溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11，主要作用于纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹力纤维、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ胶原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金属蛋白酶：MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP，主要作用于明胶、Ⅳ型胶原、MMP2。体内绝大多数细胞并不储备MMPs，当需要MMPs 的信号传递到细胞后才临时合成，合成的MMPs 以无活性的酶原（proenzyme）形式分泌到细胞外，随后被多种蛋白酶和非蛋白酶水解以及热处理激活，一种激活的MMPs 可激活另一种MMPs，形成瀑布效应。酪蛋白酶谱法（casein-zymography）电泳分析技术使用β－酪蛋白作为酶的底物，具有简便，无需抗体，同步观察多种酶以及活化与否的优势。酪蛋白酶谱法MMP3/10检测实验案例介绍：本实验采用酶谱法(zymography)检测MMP-3、MMP-7、MMP-10活性，Zymography是一种基于SDS-PAGE电泳的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM (10~100 pg)，高于ELISA方法。通过制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶，含蛋白酶的样品在凝胶进行电泳，电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育，凝胶进行考马斯亮蓝染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-3/10的大小位置(酶谱)及活性。

基质金属蛋白酶9(MMP—9)的研究及临床应用进展

基质金属蛋白酶9（MMP—9）的研究及临床应用进展基质金属蛋白酶9（MMP-9）属于基质金属蛋白酶超家族成员中明胶酶的一种，又称明胶酶B，因其作用底物广泛，表达细胞众多参与多种疾病及恶性肿瘤的侵袭和转移而备受重视，成为最近国际国内研究的焦点之一。因此，深入了解MMP-9及其与疾病的关系有助于疾病的及时发现、诊断和治疗。本文就其生物学特点、检测技术及临床应用进行了综述。标签：基质金属蛋白酶9；检测技术；临床应用基质金属蛋白酶（MMPs）是一类活性依赖于锌离子和钙离子的蛋白水解酶，其主要的生理作用是降解细胞外基质。现已发现26种MMPs（MMP-1～26），称为MMP家族，MMPs几乎能降解细胞外基质的所有成分，如胶原、明胶、黏性蛋白、纤维黏连蛋白、蛋白多糖等，参与人体许多生理和病理过程[1]。在MMPs 中MMP-9，属于基质金属蛋白酶超家族成员中明胶酶的一种，是人体内最重要的蛋白酶之一。 1 MMP-9的生物学特点[2-3] 1.1概述MMP-9是MMPs家族成员之一，是Reponen和Sahlbergl994年在小鼠胚胎发育中的破骨细胞内发现的。分子量Mr92×103，根据作用底物又名明胶酶B，依据发现的先后顺序MMP-9又名基质金属蛋白酶9，主要作用是保持酶的稳定性。MMP-9前体可由单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、血管平滑肌细胞、内皮细胞、泡沫细胞、成纤维细胞、小胶质细胞及肿瘤细胞等分泌，在87位氨基酸残基或附近被酶解激活，参与炎性反应、组织构形、创伤修复、基质结合的生长因子的动员及细胞因子的表达。 1.2 MMP-9的基因结构和功能人MMP-9基因全长26000bp，位于20q11.2～q13.1，含有13个外显子和12个内含子，编码相对分子质量为92×103的蛋白。MMP-9的启动子区位点，人的MMP-9启动子区还有核因子κB、表达序列标签结合位点和转化生长因子β控制元件。MMP-9表达的原始调控是在转录水平上，这些启动子区的特定反应元件是多种刺激调控MMP-9的最终作用靶点。 1.3 MMP-9的蛋白结构和功能MMP-9的蛋白组成从N端到C端主要包括信号肽序列、前肽序列、催化域（包含锌离子结合位点）、纤维粘连蛋白样功能域（可结合明胶）和Ⅴ型胶原样功能域（提供多种低聚糖结合位点）。Ⅴ型胶原样功能域为MMP-9所特有，借此与MMP-2（即明胶酶A）相区别，而前肽序列在MMP-9的酶原活化中有重要作用。MMP-9是降解Ⅳ型胶原的最主要成员之一，其底物包括变性的Ⅰ型胶原（凝胶）、天然Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ和Ⅺ型胶原、纤维蛋白原、层粘连蛋白及多功能蛋白聚糖等。 1.4 MMP-9的活性调节MMP-9在机体内的激活、表达及对底物的分解均受到严格调控。在正常成人体内，其表达水平很低，但在特定的生理或病理重塑过

蛋白酶活性电泳实验

蛋白酶活性电泳活性电泳（明胶酶谱法）一、实验原理明胶酶谱法的基本过程是先将样品进行非还原性SDS-PAGE （含0.1%明胶）电泳分离，然后在缓冲系统中使样品中的酶恢复活性，在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶，最后用考马斯亮蓝将凝胶染色，再脱色，在蓝色背景下可出现白色条带，条带的强弱与酶的量和比活成正比。复性原理：在电泳过程中，SDS与样品中的酶结合（可逆性结合），破坏其氢键、疏水键而使酶不能发挥其分解明胶的作用，而只有当将胶置Trit on中震荡洗脱时，由于SDS被Triton结合而去除，从而使酶恢复了活性，此步注意上样缓冲液中不能含有DTT等还原性物质。通过不同孔径凝胶电泳达到分离蛋白的目的，而活性电泳又能保证蛋白的活性，在孵育条件下，酶对明胶的水解使后期染色出现白色条带，得以定位目的酶。通过对该位置酶的回收与质谱鉴定，得到该酶部分氨基酸序列。二、材料与方法 1试剂与溶液配制 1.1试剂和仪器：酪氨酸，酪蛋白，明胶（猪源），Tris，Glycine, TEMED，SDS,过硫酸铵，考马斯亮蓝R250 购自sigma公司，为电泳纯；Triton X-100，CaCI2 2H2O，Brij-35 （十二烷基聚乙二醇醚），NaCl，乙酸，乙酸钠，碳酸钠，甲醇，乙酸，盐酸，三氯乙酸，福林试剂均为国产分析纯；30%丙烯酰胺溶液（29:1），非还原性5 x蛋白上样缓冲液，预染彩虹蛋白marker等购自康为世纪公司。水为去离子水或超纯水。主要仪器：紫外分光光度计电泳仪垂直电泳槽高速离心机milipore超滤管等 1.2溶液配制 1.2.1 5X SDS-PAGE电泳缓冲液配法：称取Tris 15.1g，Glycine 94g,加适量去离子水溶解，加入SDS 5.0g,力卩水至约800ml，注意尽量减少气泡生成，完全溶解后定容至1000ml，室温保存。使用时用去离子水稀释至1X,新配置的电泳液可重复使用1-2次，最好使用新鲜配制的电泳液。 1.2.2 明胶储液（10 mg/ml）配法：称取明胶0.1 g,加去离子水10 ml，溶解，配好后储存于4C。若凝固成胶冻状可用温水浴解冻。 1.2.3 10 %过硫酸铵（W/V）

明胶酶A、B与乙肝相关性肝癌的研究进展

明胶酶A、B与乙肝相关性肝癌的研究进展基质金属蛋白酶（matrimxetaloProteinases，MMPs）是一组锌离子依赖性内肽酶，它们共同作用特点是可降解所有的细胞外基质成分。其中，明胶酶A （MMP-2）和明胶酶B（MMP-9）因为能够降解IV/V型胶原进而受到广大学者的瞩目，大量研究证实明胶酶和肿瘤的侵袭、转移有关。乙肝是导致肝癌的重要生物因素，乙肝引起的肝癌病程进展快，肝外转移明显。本文就明胶酶A和明胶酶B在乙肝相关性肝癌中发生发展的角色及其作用机制的研究进展作一综述。标签：明胶酶A/基质金属蛋白酶A（MMP-2）；明胶酶B/基质金属蛋白酶B （MMP-9）；乙型肝炎病毒；肝癌基金支持：湛江市财政资金科技专项竞争性分配项目财政编号：（2012C0302）研究表明，肿瘤细胞分泌的基质金属蛋白酶中，Ⅳ型胶原酶（包括MMPs-2、MMPs-9）主要参与Ⅳ型胶原的降解，而后者是ECM（细胞外基质）的主要成分，所以肿瘤侵袭转移的能力与其产生或诱导产生Ⅳ型胶原酶的能力密切相关。因此MMP-2、MPP-9被认为是参与肿瘤侵袭、转移过程中最为直接、最为重要的基质金属蛋白酶。乙肝引起的肝癌的过程中，MMPs起到了重要的作用，针对MMPs 进行深入研究对全面认识其在乙肝引起的肝癌中的作用，进而应用到肝癌临床具有现实意义。 1.MMPs的生物学特性及结构 MMPs由肿瘤细胞、内皮细胞、单核巨噬细胞、中性粒细胞、结缔组织细胞等合成与分泌，是迄今为止发现的唯一能分解纤维类胶原的酶，MMPs是一组具有类似结构和共同生物化学性质的金属依赖性蛋白水解酶超基因家族，是ECM 的主要降解酶系统，可以降解几乎所有的ECM成分。MMPs家族中已被发现的成员近30种，根据MMPs的作用底物不同，分为五类：（1）间质胶原酶类（2）Ⅳ型胶原酶（明胶酶）（3）基质溶解素类（4）膜型MMPs （membrane-type matrix metalloproteinases）类（5）其他MMPs。其结构组成：（1）信号肽疏水区（2）前肽结构域（除了MMP-14，其余前肽结构域N端含有信号肽）（3）催化结构域（4）铰链区与类红血素结核蛋白区（5）疏水跨膜结构域图（1-1）[1]。信号肽 ↓ ↑ ↑ ↑ ↑ ↑ 前肽结构域含锌离子的催化铰链区类红血素MT-MMPs

成纤维细胞活化蛋白(FAP)的研究进展

成纤维细胞活化蛋白（FAP）的研究进展 ? 1866? (59—464. [24]KumsawaM,NumazawaS,TaniY,eta1.ERKsignalingmedi. atestheinductionofinflammatoryeytokinesbybufalininhuman monoeyticceUs[J].AmJPhysiolCellPhysiol,2000,278(3): C50o一508. [25]JingY,WatabeM,HashimotoS,eta1.Cellcyclearrestandpm. teinkinasemodulatingeffectofbufalinonhumanleukemiaML1 cells[J].AntlcaneerRes,1994,14(3A):1193—1198. [26]LiuY,Qux,WangP.WT1downregulationduringK562cell MODERNONCOLOGY,Sep.2010.VOI.18,NO.09 differentiationandapoptosisinducedbybufalin[J].Zhonghaa XueYeXueZaZhi,2002,23(7):356—359. [27]AmanoY,ChoY,MatsunawaM,eta1.Increasednuclearexpres—sionandtransaetivafionofvitaminDreceptorbythecardiotonic steroidbufalininhumanmyeloidleukemiacells[J].JSteroid BiochemMolBiol,2009,114(3—5):144—151. [28]LeeDY,YasudaM,YamamotoT,eta1.Bufalininhibitsendo- thelialcellproliferationandangiogenesisinvitro[J].LifeSei, 1997,6O(2):127—134.(编校:何蛛) 成纤维细胞活化蛋白(FAP)的研究进展张红霞,郭佑民 Researchprogressinfibroblastactivationprotein zHANGHong—xia.GUOYou—min DepartmentofRadiology,BengChaoyangHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing10