稀释涂布平板法原理
稀释涂布平板法原理
稀释涂布平板法原理
稀释涂布平板法是微反应器中常用的一种方法,它利用涂布过程产生的熱效应来提高反应性能。简单来说,原理是将反应物从液体变为固体形式,并将反应物涂布在一个温控平板上。反应物按一定的浓度和体积布满在整个温控平板的表面上。当平板的温度发生变化时,表面积会稍稍变大,从而熔融部分反应物,使反应物开始勃发反应,然后加热提高温度,从而转化为金属温度,使进一步熔融反应物,最终实现完全熔融。由此可见,稀释涂布平板法可以有效地提高反应的连续化工程化能力。
稀释涂布平板法有以下几点优点：(1)该方法燃料经济;(2)可以提高反应连续化工程化能力;(3)可以实现产品的高精度控制。
另外,稀释涂布平板法是一种非常准确可控的热敏反应技术,可以相应时间很短,且变化范围广,温度处理范围0~1200度左右,精确控制温度涨落不超过10度。
总的来说，稀释涂布平板法是一种简单有效的方法,它能有效提高反应的连续化工程化能力,很好的满足了微反应器当今发展的需求。
稀释涂布平板法计数公式
本文格式为Word 版，下载可任意编辑 第 1 页 共 1 页 稀释涂布平板法计数公式 “微生物数量测量”是2017年高考大纲中的新内容，也是教学中的重要难点。稀释涂板 法是计数微生物的常用方法，用于计数样品中活菌的数量。当样品的稀释度足够高时，在培 养基表面上生长的菌落来自样品稀释液中的活细菌。通过计算平板上的菌落数，我们可以猜 测样品中有多少种活细菌。 但是，菌落计数结果的处理常常成为学生容易出错的地方。典型示例：在从土壤中分离 产生脲酶的细菌的实验中，将10g 土壤样品溶液进行梯度稀释，并将0.1mL 稀释倍数为105 的土壤样品溶液接种在三个中板上。培养一段时间后，平板上的细菌菌落数分别为42、200 和256。1g 土壤样品中的细菌数为。 在PEP 高中生物学选修课“生物技术实践”中，有这样一条陈述：用稀释包被板法计数 菌落：为了确保结果的准确性，菌落数在30到30之间通常选择300和300进行计数。但是， 如果我们理所当然地认为42、200和256个数据都在30?300范围内，那么直接对它们求平均 并乘以稀释倍数就可以得出错误的结果1.66×108。这也是许多学生犯错误的原因。 实际上，教材中的相关表述仅说明了可计数菌落数的适当范围。在一定稀释度下，三个 平板中的菌落数不能简单地直接平均，应注意稀释度的设定和计数结果的允许差异。 为了确保准确确定有效活菌计数，必须设置三个稀释度并进行分级，并且每个梯度应设 置三个重复。为了确定土壤中细菌的数量，通常使用104、105和106倍的稀释剂进行平板培 养。为了确定放线菌的数量，通常使用103、104和105倍的稀释度。为了确定真菌的数量， 通常使用102、103和104倍的稀释度。 如果平板中的菌落数太少，必然会导致计数误差太大；相反，如果培养皿中的菌落太多， 将导致计数困难。因此，世界上菌落计数的基本原理是对稀释的平板进行计数，其中平板上 有30?300个菌落。同时，相同稀释度重复3次的平板上菌落数的标准差应小于允许的差。也 就是说，在平板计数试验中，如果在相同稀释度下三个重复菌落的数量在30?300之间，但是 数据相差很大，则需要将其丢弃。 如果在平板上重复3次的平均菌落数少，则容许误差也小。相反，如果平均菌落数较大， 则允许误差将较大。如果选择了适当的稀释计数，则三个重复的标准差应小于规定的允许差。 如果三个重复的标准差大于指定的允许差，则无法正确计算它们，必须重新测量。
(完整版)稀释平板计数法
实验十一稀释平板计数法 实验目的 学习稀释平板菌落计数的基本原理和方法。 实验内容 用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。 实验原理 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。 实验器材 酿酒酵母菌悬液 马铃薯培养基 1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。 实验步骤 1．无菌器材的准备 (1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。 (2) 无菌移液管的准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1.5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面的微生物吹入。棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。然后将移液管尖端放在4~5cm宽的长纸条一端呈45o角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。 (3) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。 2．样品稀释液的制备 (1) 编号 取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
土壤稀释涂布平板法
实验概要 分离、纯化及初步鉴定土壤中的拮抗植物病原菌的放线菌。 实验原理 土壤是微生物的“天然培养基”，也是最丰富的菌种资源库，我们可以从中分离出众多放线菌，尤其是可以从耕作土壤中筛选出拮抗植物病原菌的放线菌。 以耕作有武运粳和苏沪香粳的土壤为样品，应用稀释涂布平板法分离各种微生物。菌落计数后，通过菌落形态观察并挑取放线菌进行划线分离纯化，多次重复后得到单菌落。在进行放线菌形态等初步鉴定后，将纯化的菌株接入斜面传代保藏。最后，分离纯化的放线菌，初步鉴定其拮抗性。 拮抗植物病原菌的放线菌的分离纯化在农业增产、作物种植等方面都有着重要的意义。 主要试剂 1. 培养基： 高氏1号培养基、马铃薯葡萄糖培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基 2. 其他试剂： 银染液A液B液（细菌鞭毛染色） 40%KOH 5%α-萘酚（V.P.实验） 主要设备 培养皿 试管 锥型瓶 接种环 移液管 震荡器 电炉 载玻片 超净工作台 恒温培养箱 高压蒸汽灭菌锅 显微镜等 实验材料
土样： 苏沪香粳1，2组 杨稻6号93113，4组 武运粳5，6组 实验步骤 1.稀释涂布平板法(Spread Plate Method) 稀释涂布平板法是一种将菌体按比例制备成若干个稀释度，再分别经涂棒涂布培养而进行微生物分离纯化的方法。 (1) 倒平板； (2) 制备土壤稀释溶液连续不断稀释，得到不同稀释度的土壤溶液； (3) 涂布分别吸取三种稀释度菌液，均匀涂于培养基表面； (4) 培养； (5) 划线分离，直到获得纯培养。 2. 平板菌落计数法 平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。 这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品检定（如杀虫菌剂），生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。但平板菌落计数法的手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。
常用的微生物分离纯化方法
(一)常用的微生物分离纯化方法 菌种分离纯化的方法有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离法、选择培养分离法等。其中前三种方法最为常用,不需要特殊的仪器设备,分离纯化效果好,现分别简述如下 1.稀释混合倒平板法 平板是指经熔化的固体培养基倒入无菌培养皿中,冷却凝固而成的盛有固体培养基的平皿。该法是先将待分离的含菌样品,用无菌生理盐水作一系列的稀释(常用十倍稀释法,稀释倍数要适当),然后分别取不同稀释液少许(0.5-1.0ml)于无菌培养皿中,倾入已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基,迅速旋摇,充分混匀。待琼脂凝固后,即成为可能含菌的琼脂平板。 于恒温箱中倒置培养一定时间后,在琼脂平板表面或培养基中即可出现分散的单个菌落。每个菌落可能是由一个细胞繁殖形成的。挑
取单一个菌落,一般再重复该法1-2次,结合显微镜检测个体形态特征,便可得到真正的纯培养物。若样品稀释时能充分混匀,取样量和稀释倍数准确,则该法还可用于活菌数测定。 图4混合倒平板操作法示意图图5涂布平板操作法示意图 2.稀释涂布平板法 采用上述稀释混合倒平板法有两个缺点，一是会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间,缺乏溶氧而生长受影响,形成的菌落微小难于挑取；一是在倾入熔化琼脂培养基时，若温度控制过高,易烫死某些热敏感菌，过低则会引起琼脂太快凝固,不能充分混匀。
在微生物学研究中,更常用的纯种分离方法是稀释涂布平板法。该法是将已熔化并冷却至约50℃(减少冷凝水)的琼脂培养基,先倒入无菌培养皿中,制成无菌平板。待充分冷却凝固后,将一定量(约0.1ml)的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面,再用三角形无菌玻璃涂棒涂布,使菌液均匀分散在整个平板表面,倒置温箱培养后挑取单个菌落。 另一种简单快速有效的涂布平板法,可省去含菌样品悬液的稀释,直接吸取经振荡分散的样品悬浮液l滴加入1号琼脂平板上,用一支三角形无菌玻璃涂棒均匀涂布,用此涂棒再连续涂布2号、3号、4号平板(连续涂布起逐渐稀释作用，涂布平板数视样品浓度而定),翻转此涂棒再涂布5号、6号平板,经适温倒置培养后挑取单个菌落。该法可称之为玻璃涂棒连续涂布分离法。 3.平板划线分离法 先倒制无菌琼脂培养基平板,待充分冷却凝固后,用接种环以无菌沾取少量待分离的含菌样品,在无菌琼脂平板表面进行有规则的划线。划线的方式有连续划线、平行划线、扇形划线或其它形式的划线。通过这样在平板上进行划线稀释,微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少,并逐步分散开来。经培养后,可在平板表面形成分散的单
实验十 微生物稀释平板计数、划线分离
实验十微生物稀释平板计数、划线分离 实验十微生物稀释平板计数、划线分离 一、目的要求 1.学习平板菌落计数的基本原理和方法。 2.熟练掌握倒平板技术、系列稀释原理及操作方法，平板涂布及划线分离方法。 二、基本原理 平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。 这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品检定（如杀虫菌剂），生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。但平板菌落计数法的手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。 三、器材 大肠杆菌悬液，牛肉膏蛋白胨培养基， 1ml无菌吸管，无菌平皿，盛有4． 5 ml无菌水的试管，试管架和记号笔等。 四、操作步骤 （一）稀释平板计数 1．编号： 取无菌平皿 9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6各3套。另取6支盛有4．5ml 无菌水的试管，排列于试管架上，依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 2．稀释 用1ml无菌吸管精确地吸取0．5ml大肠杆菌悬液放入10-1的试管中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，管内液体外溢。然后仍用此吸管将管内悬液来回吸吹三次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。另取一支吸管自10-1试管吸0．5ml放入10-2试管中，吸吹三次，……其余依次类推。 3．取样
用3支1ml无菌吸管分别精确地吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌液0．2ml，对号放入编好号的无菌培养皿中。 4．倒平板 于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化后冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基约10—15ml，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，倒置于37℃温室中培养。 5．计数 培养24小时后，取出培养皿，算出同一稀释度三个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算： 每毫升中总活菌数=同一稀释度三次重复的菌落平均数×稀释倍数×5 一般选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释度计算每毫升的菌数最为合适。同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊。由10-4、10-5、10-6三个稀释度计算出的每毫升菌液中总活菌数也不能相差悬殊，如相差较大，表示试验不精确。 平板菌落计数法，所选择倒平板的稀释度是很重要的，一般以三个稀释度中的第二稀释度倒平板所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 平板菌落计数法的操作除上述的以外，还可用涂布平板的方法进行。二者操作基本相同，所不同的是涂布平板法是先将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，待凝固后编号，并于37℃温室中烘烤30分钟左右，使其干燥，然后用无菌吸管吸取 0．2ml菌液对号接种于不同稀释度编号的培养皿中的培养基上，再用无菌玻璃刮棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于实验台上20—30分钟，使菌液渗透入培养基内，然后再倒置于37℃的温室中培养。 （二）划线法分离 图Ⅴ-3 平板划线操作示意图 1、倒平板将加热融化的牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号合成培养基和马铃薯蔗糖培养基分别倒平板，并标明培养基的名称。 2、划线在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取经稀释10倍的土壤悬液-环在平 板上划线(图Ⅴ-3)。划线的方法很多，但无论哪种方法划线，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使形成单个菌落。常用的划线方法有下列二种：
稀释平板计数法
稀释平板计数法 实验目得 学习稀释平板菌落计数得基本原理与方法。 实验内容 用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。 实验原理 平板菌落计数法就是将待测样品经适当稀释之后，其中得微生物充分分散成单个细胞，取一定量得稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见得菌落，即一个单菌落应代表原样品中得一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数与取样接种量即可换算出样品中得含菌数。但就是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成得一个单菌落也可能来自样品中得2—3或更多个细胞。因此平板菌落计数得结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数得结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品得活菌含量。 平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素得影响，但就是，由于该计数方法得最大优点就是可以获得活菌得信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料与水〔包括水源水〕等得含菌指数或污染程度得检测。 实验器材 酿酒酵母菌悬液 马铃薯培养基 1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。 实验步骤 1．无菌器材得准备 (1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。 (2) 无菌移液管得准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1、5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面得微生物吹入。棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。然后将移液管尖端放在4~5cm宽得长纸条一端呈45º角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。 (3) 无菌水：取6支试管，分别装入4、5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。 2．样品稀释液得制备 (1) 编号 取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。另取6支盛有4、5m1无菌水得试管，依次标就是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 (2) 稀释
微生物的分离和纯化
微生物的分离和纯化 一、基本原理 在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。 为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。 土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量和种类都是极其多样的，因此，土壤是我们开发利用微生物资源的重要基地，可以从其中分离、纯化到许多有用的菌株。 二、器材 高氏1号琼脂培养基，肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基，盛9ml无菌水的试管，盛90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，10％酚，无菌培养皿，链霉素，土样等。 三、操作步骤 1．稀释涂布平板法 （1）倒平板将肉膏蛋白胨培养基、高氏1号琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基溶化，待冷至55—60℃时，向高氏1号琼脂培养基中加入10％酚数滴，向马丁氏培养基中加入链霉素溶液，使每毫升培养基中含链霉素30μg。然后分别倒平板，每种培养基倒三皿，其方法是右手持盛培养基的试管或三角烧瓶，置火焰旁边，左手拿平皿并松动试管塞或瓶塞，用手掌边缘和小指、无名指夹住拔出，如果试管内或三角烧瓶内的培养基一次可用完，则管塞或瓶塞不必夹在手指中。试管（瓶）口在火焰上灭菌，然后左手将培养皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待凝后即成平板。也可将平皿放在火焰附近的桌面上，用左手的食指和中指夹住管塞并打开培养皿，再注入培养基，摇匀后制成平板，如图Ⅶ-1所示。最好是将平板放室温2—3天，或 37℃培养24小时，检查无菌落及皿盖无冷凝水后再使用。 （2）制备土壤稀释液称取土样10g，放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇约20分钟，使土样与水充分混合，将菌分散。用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液注入盛有9ml无菌水的试管中，吹吸三次，使充分混匀。然后再用一支1ml无菌吸管从此试管中吸取1ml注入另一盛有9ml无菌水的试管中，以此类推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6各种稀释度的土壤溶液。 （3）涂布将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10-4、10-5和10-6三种稀释度，然后用三支1ml无菌吸管分别由10-4、10-5和10-6三管土壤稀释液中各吸取0．2ml对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，如图Ⅶ-2所示。 （4）培养将高氏1号培养基平板和马丁氏培养基平板倒置于28℃温室中培养3—5日，肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2—3日。 （5）挑菌将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到上述三种培养基的斜面上，分别置28℃和37℃温室中培养，待菌苔长出后，检查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物，若有其他杂菌混杂，就要再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。整个分离过程见图Ⅶ-3。 2．稀释混合平板法 此法与稀释涂布平板法基本相同，无菌操作也一样，所不同的是先分别吸取0．5ml10-4、10-5、10-6稀释度的土壤悬液对号放入平皿，然后再倒入溶化后冷却到45℃左右的培养基，边倒入边摇匀，使样品中的微生物与培养基混合均匀，待冷凝成平板后，分别倒置于28℃和37℃温室中培养后，再挑取单个菌落，直至获得纯培养。
稀释平板计数法
稀释平板计数操作方法 实验原理 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。 实验器材 LB液体、固体培养基 1m1移液器，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。 实验步骤 1．无菌器材的准备 (1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。 (2) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。 2．样品稀释液的制备 (1) 编号 取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 (2) 稀释 用1m1移液器吸取0.5m1己充分混匀的菌悬液(待测样品)，至10-1的试管中，此即为
10倍稀释。 将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。用1m1移液器在10-1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸入管底，吹时离开液面。混匀后吸取至10-2试管中，此即为100倍稀释。……其余依次类推，整个过程如图所示。 3．平板接种培养 平板接种培养有浇注平板培养法和涂布平板培养法两种方法。 (1) 浇注平板培养法 1) 取样 用三支1ml无菌吸管分别吸取10-4、10-5、和10-6的稀释菌悬液各1ml，对号放入编好号的无菌平皿中，每个平皿放。 不要用1ml吸管每次只靠吸管尖部吸稀释菌液放入平皿中，这样容易加大同一稀释度几个重复平板间的操作误差。 2) 倒平板 尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒人融化后冷却至45℃左右的培养基约15毫升／平皿，置水平位置迅速旋动平皿，使培养基与菌液混合均匀，而又不使培养基荡出平皿或溅到平皿盖上。待培养基凝固后，将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养。 由于细菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培养皿后，应尽快倒入融化并己冷却至45℃左右的培养基，立即摇匀，否则细菌将不易分散或长成的菌落连在一起，影响计数。
微生物分析—实验室操作—涂布平板技术
HMESC: 02.15.06.003 MICROBIOLOGICAL ANALYSIS – LABORATORY PRACTICES SURFACE SPREAD PLATING TECHNIQUE 微生物分析—实验室操作—涂布平板技术 1 SCOPE范围 A standard method for the detection of microorganisms in liquid samples containing from 10 to 10,000 microorganisms per ml. 此标准方法用于检测液体样品中的微生物含量，其微生物含量要求在10 ~ 10,000 个/ ml。 2 FIELD OF APPLICATION应用范围 The technique is applicable to any type of liquid brewery sample. It may be necessary to use the sample decimal dilution technique prior to plating. 此技术可用于啤酒厂所有的液体样品，样品在倒平板前可能需用十倍稀释技术。 3 PRINCIPLE原理 The sample is spread as a thin layer on a prepoured agar growth medium which is then incubated at an appropriate temperature and under suitable conditions. During incubation, the microorganisms grow and develop into distinct colonies on the surface of the agar medium. 涂一层薄薄样品到已倒好的琼脂培养基上，这样细胞围在培养基上。在适当的温度和条件下培养，微生物在培养基上生长成明显的菌落。 4 REAGENTS试剂 Safety note:安全备注 Powdered media may cause irritation to eyes, skin and respiratory system. Do not breathe dust, wear suitable protective clothing, weigh dry components in a fume cupboard or use an appropriate mask where exposure is reasonably probable. In case of contact with eyes, rinse immediately with plenty of water. After contact with skin, wash immediately with plenty of water. If inhaled, remove to fresh air.粉末培养基会刺激眼睛，皮肤以及呼吸系统。不要吸入粉尘，戴适当的防护罩，在通风橱里称干成分或使用适当的面具。万一接触眼睛，用大量水冲洗。接触皮肤，立刻用水冲洗，万一吸入，转移呼吸新鲜空气。 4.1 Prepoured agar growth medium in 9 cm petri-dishes. The medium may be selective, non-selective and/or differential; but not necessarily clear. 倒琼脂培养基与直径为9 cm培养皿中。培养基可以是选择性、非选择性以及鉴定性的。不一定要求清澈。 5 APPARATUS仪器 5.1 Volumetric sterile pipettes, 0.1-1.0 ml volume (scale 0.1).无菌移液管 5.2 Bunsen Burner气体喷枪 5.3 Incubator, a thermostatically controlled cupboard自动恒温控制培养箱 5.4 Thermostatically controlled water bath, or oven at 46 °C自动恒温控制水浴，或46 °C干燥箱 5.5 Drigalsky spreader (disposable, Sigma Z376779) Drigalsky涂布工具（一次性） 6 PROCEDURE程序 6.1 The agar medium is prepared in advance. (See 02.15.03 Microbiological Media) 提前准备好琼脂培养基。 ______________________________________________________________________________ Microbiological Analysis – Laboratory Practices – Surface Spread Plating Technique 微生物分析—实验室做法—涂布平板技术