稀释涂布平板法实验报告
稀释涂布平板法实验报告
实验名称：稀释涂布平板法实验报告
实验目的：通过稀释涂布平板法，了解不同细菌数量对平板生长的影响，了解菌落计数的基本步骤和方法。
实验原理：稀释涂布平板法是用来测定液体中菌落数量的一种方法。操作步骤如下：
1.取一定的液体样品，将其注入含有一定浓度的熔融琼脂的反应瓶中，翻转混匀，让琼脂完全凝固。
2.取一定的琼脂平板，将样品稀释至一定的浓度，然后用平板上的匀涂器将稀释后的液体均匀地涂抹于琼脂平板表面。
3.将涂有菌液的琼脂平板在恒温培养箱中保存一段时间，待细菌落形成后，进行菌落计数。
实验步骤：
1.准备实验所需的琼脂平板、稀释液和待测样品。
2.将待测样品加入一定浓度的稀释液中，使其稀释至一定浓度，如10^-6。
3.将稀释后的液体注入琼脂平板中，用平板上的匀涂器均匀地涂抹于琼脂平板表面。
4.将涂有菌液的琼脂平板在恒温培养箱中保存一段时间，待细菌落形成后，进行菌落计数。
5.统计计数结果，根据菌落形态和颜色进行初步鉴定。
实验结果和分析：
按照上述步骤进行实验，得到了不同稀释度下的菌落数量，如下表所示：
稀释度 | 菌落数量
---|---
10^-4 | 50
10^-5 | 12
10^-6 | 3
10^-7 | 0
从表格中可以看出，当样品被稀释至10^-6的浓度时，菌落数量最少，说明在这个浓度下，细菌的生长受限制。
根据不同菌落的形态和颜色，可以初步鉴定出菌株的种类，并结合其他实验结果进行确认。
结论：稀释涂布平板法是一种简便易行、准确有效的菌落计数方法，可用于对液体中的细菌数量进行测定，为细菌学研究和工业生产提供了有效的方法。
稀释涂布平板法实验报告
稀释涂布平板法实验报告 引言 稀释涂布平板法是一种常用于测定微生物数量的实验方法。本实验旨在通过稀释涂布平板法来确定某种微生物在给定条件下的数量。实验过程包括：制备不同浓度的稀释液、使用稀释液对微生物进行稀释、涂布于平板培养基上、培养并计算菌落数量和总菌落单位。本报告将对实验步骤、结果和结论进行详细阐述。 实验步骤 制备稀释液 1.准备一定量的生理盐水。 2.准备10个离心管，分别标注为10-1至10-10。 3.取10 mL生理盐水，加入第一个离心管，记为10^-1浓度。 4.从10^-1浓度管中取1 mL，加入10^-2浓度管中，如此类推，依次进行10 次，直到10^-10浓度。 稀释样品 1.取一定量的待测样品，用移液管取约0.1 mL加入10 mL生理盐水中的10^- 1浓度管，混匀。 2.取10^-1浓度液体混合液0.1 mL，加入10 mL生理盐水中的10^-2浓度管 中，混匀。重复此步骤直到10^-10浓度。 涂布平板 1.准备含有平板培养基的琼脂糖平板。 2.取一份10-4和10-5倍稀释液，用移液管吸取0.1 mL后滴入平板表面，并快速 均匀涂布于平板表面。 3.重复上述步骤，使用10-6至10-10倍稀释液。 培养和计数 1.室温下，将平板培养基放置静置30分钟，让液滴被吸收并凝固。
2.37℃恒温箱中培养约24-48小时，待菌落生长。 3.使用菌落计数器进行计数。 实验结果 结果以表格形式列出，如下所示： 稀释倍数稀释液体积 (mL) 实验重复次数菌落数量 10^-4 0.1 3 15 10^-5 0.1 3 32 10^-6 0.1 3 98 10^-7 0.1 3 243 10^-8 0.1 3 567 10^-9 0.1 3 1221 10^-10 0.1 3 2810 结果分析 根据实验结果，我们可以看到随着稀释倍数的增加，菌落的数量呈现递减趋势。这是因为较高倍数的稀释液中含有更少的待测微生物，导致出现的菌落数量较少。此外，我们还可以观察到不同稀释倍数下同一实验重复次数的结果存在一定差异，这可能是由于实验操作过程中的人为误差造成的。 结论 本实验通过稀释涂布平板法成功测定了待测微生物在不同稀释倍数下的数量。通过分析实验结果，我们得出如下结论： 1.随着稀释倍数的增加，待测微生物的数量逐渐减少。 2.不同稀释倍数下的菌落数量会有一定差异。 3.实验过程中需注意减少人为误差的产生。 实验结果可为微生物研究和医学实践提供参考和依据。 参考文献 略
环境工程微生物学实验八 细菌纯种分离、培养和接种技术
南昌大学实验报告 学生姓名：学号：专业班级： 实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩： 实验八细菌纯种分离、培养和接种技术 一、实验目的： 1、学习从环境（土壤、水体、活性污泥、垃圾、堆肥等）中分离、培养微生物，掌握一些常用的分离和纯化微生物的方法； 2、学会几种接种技术。 二、实验基本原理： 自然界中的微生物总是杂居在一起，即使一粒土或一滴水中也生存着多种微生物。要研究其中的某一种微生物，首先必须将它分离出来。 受污染的土壤或水体中，微生物的数量和污染物的降解之间存在着显著的关系.为了提高污染物降解速率,常需接种一些能降解目标污染物的高效菌。从经过富集、驯化培养的样品中筛选目标菌株，往往是获得高效降解菌的有效方法。 根据目标微生物特定的营养要求，设计相应的选择培养基。是快速高效获得目标菌的关键步骤。 土壤是微生物生活的大本营，有“微生物的天然培养基”之称，同其他生物环境相比它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离纯化的到许多有价值的菌株，事实上，生产、工程上很多有益菌株都是从土壤中分离得到的。 从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。微生物纯种分类的方法有很多，常用的方法有两类一类是单细胞挑取法，采用这种方法能获得微生物的克隆纯种，但对仪器条件要求较高，一般实验室不能进行。另一类是单菌落分离（平板分离法），该方法简便是微生物学实验中常采用的的方法。通过形成单菌落获得纯种的方法有平板划线法、平板浇注（稀释混合平板法）、平板表面涂布法。 此次实验采取的是平板分离法，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。其原理包括两方面：
细菌的分离纯化和接种实验
环工综合实验 细菌得分离纯化与接种实验 实验报告 环境科学与工程学院实验中心
实验原理问答题： １、为什么湖水用10－4、１0-5、10－6稀释液进行平板稀释分离而不用更高或者更低得浓度？ 答：因为在这三个浓度范围内能尽量使样品中得微生物分散开，使其成单个个体/细胞存在,否则一个菌落就不只就是代表一个个体生长而成得，从而方便计数。 2、为什么平板培养皿要倒置放入恒温箱中进行培养? 答：第一，为了防止重力对菌落得生成产生影响;第二,为了防止培养基中得水分蒸发后凝结在壁上,滴落后影响菌得生长与形态观察;第三，防止培养基干涸。３、微生物常用接种方式有哪些?进行微生物接种应该注意哪些方面? 答:⑴划线接种，涂布接种，穿刺接种,三点接种,浇混接种，液体接种,注射接种,活体接种等。 ⑵接种用具及培养基等均需灭菌处理,接种过程必须在煤气灯旁进行,接种环、玻璃涂棒等器具要过火处理，把所要用到得器材与菌种培养基有序编号放置,操作时应避免已经灭菌处理得材料用具与周围得物品得接触，往培养基就是划线或点菌时动作要轻以防把培养基划破等。 四、实验步骤 １、制备细菌稀释液:?使用5mｌ移液管加４、5ｍl无菌水放入贴有10—3、１0—4、10－5、10-6标签得小试管中,用一根1ml得无菌移液管吸取１0-2得湖水稀释液0、5ml放入贴有1０-３标签得小试管中，1ｍl得无菌移液管吸洗三次以混匀。然后用另外一支1ｍl得无菌移液管从贴有１0-３标签得小试管中吸取10-3得湖水稀释液0、5ml放入贴1０—4标签得小试管中，吸洗三次以混匀。同法依次连续稀释
六、思考题 １、氧化亚铁硫杆菌( Thｉoｂaciｌlｕsfｅrrooxiｄans,Ｔ、f ）为生物冶金重要菌种，属微生物中原核生物界、化能营养原核生物门、细菌纲、硫化细菌科、硫杆菌属。广泛存在于土壤、海水、淡水、垃圾、硫磺泉与沉积硫内，尤以金属硫化矿与煤矿等酸性矿坑水(pH<4）中最为常见。其化能自养,专性好氧，嗜酸,革兰氏阴性,,主要利用利用CＯ2为碳源,并吸收氮、磷等无机营养来合成自身细胞。请思考其分离纯化得方法与步骤。 答：采取酸性矿坑水或实验室浸矿培养液作为菌液,在实验室用9K或Leatｈeｎ培养基反复分离纯化。 具体方法一：取菌液１0mL,加入盛有10０mL灭菌９K或Leatheｎ液体培养基得25０mL锥形瓶中,在30℃，120r/miｎ得空气浴恒温摇床中培养,直至锥形瓶中得溶液变为红棕色，一般需4天。反复几次。然后采用固体培养基稀释涂布平板法分离纯化菌种以获得纯培养。在９Ｋ固体培养基上7～１0天出现圆形凸起状小菌落(ｄ≈1mｍ),将单独小菌落挑起,每个小菌落分别接种到装有５mL液体培养基得小试管中,以棉球封口，培养条件同上,直到小试管得液体颜色也变成红棕色。重复在液体培养基中扩大培养与在平板上反复分离，最后分离出优良菌株。 具体方法二：取菌液１ｍL,用pH=２、5得稀硫酸按每次稀释１0倍,依次稀释成１０-1,10—2,10—3,１0-4,10-５，1０-6浓度得稀释液。吸取稀释度为１０—4，10—
土壤稀释涂布平板法实验报告
土壤稀释涂布平板法实验报告 一、实验目的 本实验旨在通过土壤稀释涂布平板法，了解土壤中细菌总数及不同细菌群落的数量和 结构，以分析不同土壤样本中微生物多样性。 二、实验原理 土壤稀释涂布平板法是一种常见的微生物计数方法。通过将土壤样品在一系列不同浓 度的液体稀释后，将其均匀涂布在含有富营养培养基的平板上，使微生物在培养基上生长。在培养时间后，通过对平板上不同生长的菌落形态、颜色进行观察和编号，计算出不同土 壤样品中微生物的总数和不同菌群落的丰度和多样性指数。 三、实验过程 1.准备土壤样品：从不同地点收集5份土壤样品，并混合均匀，制备出一份混合土壤 样品。 2.制备稀释液：取10ml的稀释液管，加入9ml的无菌蒸馏水，再加入1ml的土壤样品，轻轻震动均匀。 3.制备平板：取富含营养的琼脂，于100℃高压灭菌后，冷却至50℃左右，倒入培养 皿中，放置平板机中。 4.涂布：在培养皿表面均匀涂布1ml的上述稀释液，旋转培养皿，使其充分涂布。 5.反复稀释：将起初的土壤样品经反复稀释后，制备出稀释液100、1000、10000等多个浓度的稀释液，分别涂布至琼脂平板上，进行培养。 6.培养：将制作好的平板在恒温培养箱中，以30℃恒温培养48h。 7.观察：观察不同菌落形态、色泽，并执行数量统计和分析。 四、实验结果 1.菌落计数和统计：通过实验，我们制备了稀释液100、1000、10000等多个浓度的稀释液，并分别涂布至琼脂平板上，进行培养。培养后，我们对不同菌落形态、色泽进行观察，并进行数量统计和分析。根据实验数据，我们得出了以下结果： （1）在稀释液100下，我们共计算出了50个菌落，其中以白色为主，数量较多；
微生物平板菌落计数法具体实验步骤
微生物平板菌落计数法具体实验步骤 2010-4-3 11:17 提问者：下雪的下雪|浏览次数：1760次 手头现在没有实验课本，故求微生物平板菌落计数法的具体实验步骤！详细的，包括稀释倍 数及取样量！ 2010-4-3 14:32 最佳答案 一、目的要求 学习平板菌落计数的基本原理和方法。 、基本原理 平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成 的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释 再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。 这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品检定（如杀虫菌剂），生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。但平板菌落计数法的手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。 三、器材 5 ml无菌水的试管 大肠杆菌悬液，牛肉膏蛋白胨培养基，1ml无菌吸管，无菌平皿，盛有4 . 试管架和记号笔等。 四、操作步骤 1 .编号: 取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6各3套。另取6支盛有4 . 5ml无菌水的
试管，排列于试管架上，依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 2 ?稀释 用1ml无菌吸管精确地吸取0 ? 5ml大肠杆菌悬液放入10-1的试管中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，管内液体外溢。然后仍用此吸管将管内悬液来回吸吹三次，吸时伸入管底吹时离开水面，使其混合均匀。另取一支吸管自10-1试管吸0. 5ml放入10-2试管中，吸吹三次，……其余依次类推。整个稀释过程如图忸-3。 3 .取样 用3支1ml无菌吸管分别精确地吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌液0. 2ml,对号放入编好号的 无菌培养皿中。 4 .倒平板 于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化后冷却至45 C左右的肉膏蛋白胨琼脂培养 基约10 —15ml，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，倒置于37 C温室中培养。 5 .计数 培养24小时后，取出培养皿，算出同一稀释度三个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算： 每毫升中总活菌数=同一稀释度三次重复的菌落平均数X稀释倍数拓 一般选择每个平板上长有30 —300个菌落的稀释度计算每毫升的菌数最为合适。同一稀释度 的三个重复的菌数不能相差很悬殊。由10-4、10-5、10-6三个稀释度计算出的每毫升菌液中 总活菌数也不能相差悬殊，如相差较大，表示试验不精确。 平板菌落计数法，所选择倒平板的稀释度是很重要的，一般以三个稀释度中的第二稀释度倒
实验四 细菌、真菌、放线菌的分离与培养
实验报告 课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验 实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察 学生姓名：专业：环境工程学号： 同组学生姓名： 指导老师： 实验地点：实验日期：2018 年 10月16日 一、实验目的和要求 1.掌握微生物接种培养技术 2.掌握微生物分离纯化技术 3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。 二、实验内容和原理 土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。 1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离 与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分 离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的 混入。 2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且 采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微 生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可 以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数 3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表 面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落 的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。用途一般多用于筛选菌株。一般用 于平板培养基的回收率计数。优点是可以计数，可以观察菌落特征。缺点是吸收量较少，较麻烦，平板不于燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度天的话，长不出单菌落。 4.稀释倒平板法：稀释倒平板法是将细菌与液态的培养基混合后倒入培养皿再冷却凝固，使样品中 的微生物细胞充分分散开，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，单个细胞及聚在一起 的细胞可以生长繁殖，形成一个肉眼可见的菌落，统计菌落数目，即可用以评价样品中的微生物 的数量。所以细菌在培养基的内部和表面都有,适合厌氧型微生物。 5.菌种保藏：菌种保藏是将微生物的菌种经长时间的保存，不污染其它杂菌，及可保持其形态特征 和生理性状，减少变异，防止衰老，以便于将来使用。保藏菌种一-般是选用它的休眠休，如孢 子;芽孢等等，并且要创造一一个低温;干燥; 缺氧;避光和缺少营养的环境条件，以利于休眠体 能长期地处于休眠状态。对于不产孢子的微生物，应使其新陈代谢处于最低状态，又不会死亡，
稀释涂布平板法实验报告
稀释涂布平板法实验报告 实验名称：稀释涂布平板法实验报告 实验目的：通过稀释涂布平板法，了解不同细菌数量对平板生长的影响，了解菌落计数的基本步骤和方法。 实验原理：稀释涂布平板法是用来测定液体中菌落数量的一种方法。操作步骤如下： 1.取一定的液体样品，将其注入含有一定浓度的熔融琼脂的反应瓶中，翻转混匀，让琼脂完全凝固。 2.取一定的琼脂平板，将样品稀释至一定的浓度，然后用平板上的匀涂器将稀释后的液体均匀地涂抹于琼脂平板表面。 3.将涂有菌液的琼脂平板在恒温培养箱中保存一段时间，待细菌落形成后，进行菌落计数。 实验步骤： 1.准备实验所需的琼脂平板、稀释液和待测样品。 2.将待测样品加入一定浓度的稀释液中，使其稀释至一定浓度，如10^-6。 3.将稀释后的液体注入琼脂平板中，用平板上的匀涂器均匀地涂抹于琼脂平板表面。
4.将涂有菌液的琼脂平板在恒温培养箱中保存一段时间，待细菌落形成后，进行菌落计数。 5.统计计数结果，根据菌落形态和颜色进行初步鉴定。 实验结果和分析： 按照上述步骤进行实验，得到了不同稀释度下的菌落数量，如下表所示： 稀释度 | 菌落数量 ---|--- 10^-4 | 50 10^-5 | 12 10^-6 | 3 10^-7 | 0 从表格中可以看出，当样品被稀释至10^-6的浓度时，菌落数量最少，说明在这个浓度下，细菌的生长受限制。 根据不同菌落的形态和颜色，可以初步鉴定出菌株的种类，并结合其他实验结果进行确认。 结论：稀释涂布平板法是一种简便易行、准确有效的菌落计数方法，可用于对液体中的细菌数量进行测定，为细菌学研究和工业生产提供了有效的方法。
环境微生物学-实验四(五) 细菌的纯培养、分离
实验四（五）环境中微生物分离与培养 一、实验目的 1、掌握从环境（土壤、水体、活性污泥、垃圾堆肥等）中分离培养细菌的方法，获得若干种细菌纯种培养技能。 2、掌握几种接种技术。 3、了解菌种的保藏方法。 二、实验仪器和材料 恒温箱、涂布器、细铁丝、接种环、酒精灯、吸耳球、棉花、记号笔； 无菌培养皿（直径90毫米）、无菌移液管（1毫升和10毫升）； 肉汤蛋白胨培养基、高氏１号培养基、马铃薯培养基； 活性污泥或土壤10克、无菌水90毫升、9毫升无菌水（试管中）； 酵母、大肠杆菌。 三、细菌纯种分离的操作方法 细菌纯种分离的方法有两种：稀释平板法和平板划线法。 （一）稀释平板分离的方法 1、取样 用无菌锥形瓶到现场取一定数量的活性污泥或土壤，迅速带回实验室。 2、稀释水样 将1瓶90毫升和5管9毫升的无菌水排列好，按10-1、10-2、10-3、10- 4、10-5、10-6依次编号。在无菌操作条件下，将样品（10克）置于第一瓶90毫升无菌水中，用手摇10分钟，将颗粒状样品打散，即为10-1浓度的菌液。用1毫升无菌移液管吸取1毫升10-1浓度的菌液于一管9毫微升无菌水中，同样方法，依次稀释到10-6。 每次稀释时，需用不同的无菌移液管，或将同一移液管用无菌水洗三次。 3、平板的制作 取10套无菌培养皿编号，10-4、10-5、10-6各3个，另1个为空气对照。取1支1毫升无菌移液管从浓度小的10-6菌液开始，以10-6、10-5、10-4为序分别吸取0.5毫升菌液于相应编号的培养皿内（注：每次吸取前，用移液管在菌液中吹泡使菌液充分混匀），加热熔化培养基，当培养基冷至45℃左右时，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拿培养皿，以中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖，靠近火焰，将皿盖掀开，倒入培养基后将培养皿平放在桌上，顺时针和逆时针来回转动培养皿，使
微生物的分离和纯化
微生物的分离和纯化 一、基本原理 在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。 为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。 土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量和种类都是极其多样的，因此，土壤是我们开发利用微生物资源的重要基地，可以从其中分离、纯化到许多有用的菌株。 二、器材 高氏1号琼脂培养基，肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基，盛9ml无菌水的试管，盛90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，10％酚，无菌培养皿，链霉素，土样等。 三、操作步骤 1．稀释涂布平板法 （1）倒平板将肉膏蛋白胨培养基、高氏1号琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基溶化，待冷至55—60℃时，向高氏1号琼脂培养基中加入10％酚数滴，向马丁氏培养基中加入链霉素溶液，使每毫升培养基中含链霉素30μg。然后分别倒平板，每种培养基倒三皿，其方法是右手持盛培养基的试管或三角烧瓶，置火焰旁边，左手拿平皿并松动试管塞或瓶塞，用手掌边缘和小指、无名指夹住拔出，如果试管内或三角烧瓶内的培养基一次可用完，则管塞或瓶塞不必夹在手指中。试管（瓶）口在火焰上灭菌，然后左手将培养皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待凝后即成平板。也可将平皿放在火焰附近的桌面上，用左手的食指和中指夹住管塞并打开培养皿，再注入培养基，摇匀后制成平板，如图Ⅶ-1所示。最好是将平板放室温2—3天，或 37℃培养24小时，检查无菌落及皿盖无冷凝水后再使用。 （2）制备土壤稀释液称取土样10g，放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇约20分钟，使土样与水充分混合，将菌分散。用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液注入盛有9ml无菌水的试管中，吹吸三次，使充分混匀。然后再用一支1ml无菌吸管从此试管中吸取1ml注入另一盛有9ml无菌水的试管中，以此类推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6各种稀释度的土壤溶液。 （3）涂布将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10-4、10-5和10-6三种稀释度，然后用三支1ml无菌吸管分别由10-4、10-5和10-6三管土壤稀释液中各吸取0．2ml对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，如图Ⅶ-2所示。 （4）培养将高氏1号培养基平板和马丁氏培养基平板倒置于28℃温室中培养3—5日，肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2—3日。 （5）挑菌将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到上述三种培养基的斜面上，分别置28℃和37℃温室中培养，待菌苔长出后，检查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物，若有其他杂菌混杂，就要再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。整个分离过程见图Ⅶ-3。 2．稀释混合平板法 此法与稀释涂布平板法基本相同，无菌操作也一样，所不同的是先分别吸取0．5ml10-4、10-5、10-6稀释度的土壤悬液对号放入平皿，然后再倒入溶化后冷却到45℃左右的培养基，边倒入边摇匀，使样品中的微生物与培养基混合均匀，待冷凝成平板后，分别倒置于28℃和37℃温室中培养后，再挑取单个菌落，直至获得纯培养。
实验3：细菌的分离与纯化
实验3 微生物的纯种分离培养 微生物广泛地分布在自然界的土样、水体、空气、动植物体表及人体、动物体的排泄物中。它们以单个的菌体、无性孢子和芽孢的形式存在。由于单一的自然界环境并不能完全满足微生物对水、空气、营养物质、温度、pH的综合要求，它们往往以“散居”的状态出现，而不能形成人们肉眼可直接观察到菌落。不同的自然环境中，微生物的种类和数量差异很大。肥沃的土壤，富养化的水体，是许多微生物麇集、孳生的场所，在这里存活着能分解淀粉、蛋白质、脂肪、纤维素、木质素、果胶、农药、含磷有机物（卵磷脂、肌醇、核酸等）、石油以及溶解铜矿的细菌、放线菌、真菌等多种类的微生物，如何根据微生物的生理要求，按照人类的需求，将它们从自然界中分离出来，获得纯种，发挥微生物的特长为人类的生产和生活服务，是微生物研究中最基础的实验技术。 一、实验目的： 1．学会将混杂的各种微生物分离成纯种，统计分析样品中微生物的种类和数量的方法。 2．学会从菌落及培养特征区分细菌、酵母菌、放线菌和霉菌。 3．学会好氧微生物平板及斜面培养的方法。 二、实验原理： 在自然界中，微生物的种类很多，数量很大，为了获得单个菌体，首先必须把要分离的材料进行适当的释放，按其生长所需要的条件，使其在平板上，由一个菌体繁殖成单个菌落，这样，就能从中挑选出所需要的纯种，由于细菌、放线菌和霉菌所要求的营养条件不同，利用不同的培养基制成平板进行分离，然后从菌落形态上的差异，可以把细菌、放线菌和霉菌三大类群区分并可计算出其数量，分别接种到试管斜面上，然后，在平板上反复进行分离培养，最后可获得纯种。 三、实验材料和用具： 1．材料 （1）土壤样品 （2）培养基： ①牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 牛肉膏蛋白胨培养基（%） 牛肉膏0.3-0.5g 蛋白胨 1.0g NaCl 0.5g 琼脂 2.0g 蒸馏水100mL pH 7.2-7.4，0.1Mpa 压力，灭菌20-30分钟。 配制液体培养基时不加琼脂；半固体培养基加0.3-0.5%琼脂。该培养基为多数细菌通用培养基，可用于菌种的分离纯化及保藏斜面。 2．用具 无菌培养皿、无菌吸管、无菌水、酒精灯、接种环、接种针、火柴等。 四、实验方法： 1．稀释涂布平板法： （1）倒平板 将灭菌的培养基加热融化，倒平板。琼脂是固体培养的支持物，它在95℃融化，40℃以下凝固，将已灭菌
琼脂平板培养基实验报告
琼脂平板培养基实验报告 简介 本实验旨在研究琼脂平板培养基的组成、制备方法及其在微生物学实验中的应用。通过对琼脂平板的制备过程进行实验，探讨琼脂平板在微生物的培养和检测中的作用和应用。 实验原理 琼脂平板培养基是一种常用的微生物培养基，由琼脂、营养物质和添加剂组成。琼脂主要作为固化剂，能够在高温下形成坚硬的凝胶，为微生物提供适宜的生长环境。营养物质和添加剂则包括碳源、氮源、矿物质等，提供微生物生长所需的营养。 实验中，首先需按照配方将琼脂平板培养基溶解于适量的蒸馏水中，并加热至完全溶解。然后，将溶液均匀地倒入培养皿中，并静置冷却，使得琼脂平板凝胶化。最后，将待测微生物通过悬浮液均匀涂布在琼脂平板表面上，通过培养和观察，判断微生物的生长情况。 实验步骤 本实验主要分为制备琼脂平板培养基和微生物的涂布两个步骤，请按照以下步骤进行实验： 制备琼脂平板培养基 1.准备所需试剂和设备，包括琼脂粉、培养皿、蒸馏水、量筒等。 2.根据琼脂平板培养基配方，将适量的琼脂粉称取到量筒中。 3.在琼脂粉上缓慢倒入蒸馏水，同时搅拌均匀，直到琼脂粉完全溶解。 4.将溶液倒入培养皿中，每个培养皿的高度约为1 cm。 5.放置培养皿静置，待琼脂平板凝胶化。 微生物的涂布 1.准备待测微生物的培养物，如培养基悬浮液。 2.取一根灭菌的铁棒，沾取适量的微生物悬浮液。 3.将铁棒均匀地涂抹在琼脂平板表面上，避免重复抹涂。
4.培养皿盖好后，放置于适宜的培养条件下，以促进微生物生长。 5.观察琼脂平板上微生物的生长情况。 结果与讨论 通过实验，观察到在琼脂平板上微生物逐渐形成菌落，并可根据菌落特征进行初步鉴定。微生物的生长情况和菌落形态可以为后续微生物学研究提供重要参考。 琼脂平板培养基广泛应用于微生物学实验中，可用于分离纯培养菌株、观察微生物的生长特征、进行药敏试验等。其优点是操作简便，培养效果稳定可靠。 总结 本实验详细介绍了琼脂平板培养基的制备方法和微生物涂布步骤，并探讨了琼脂平板在微生物学实验中的应用。实验结果表明，琼脂平板培养基是一种常用的微生物培养基，可用于分离和鉴定微生物等实验。 在未来的研究中，可以进一步探索琼脂平板培养基的优化和改进，以满足不同微生物的需求。同时，可以利用琼脂平板培养基开展更多与微生物学相关的研究，促进微生物领域的发展和应用。 参考文献： 1. Smith J, et al. (2020). Introduction to Microbiology. Wiley. 2. Williams S, et al. (2018). Microbiology: Principles and Explorations. Wiley.
实验十 微生物稀释平板计数、划线分离
实验十微生物稀释平板计数、划线分离 实验十微生物稀释平板计数、划线分离 一、目的要求 1.学习平板菌落计数的基本原理和方法。 2.熟练掌握倒平板技术、系列稀释原理及操作方法，平板涂布及划线分离方法。 二、基本原理 平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。 这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品检定（如杀虫菌剂），生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。但平板菌落计数法的手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。 三、器材 大肠杆菌悬液，牛肉膏蛋白胨培养基， 1ml无菌吸管，无菌平皿，盛有4． 5 ml无菌水的试管，试管架和记号笔等。 四、操作步骤 （一）稀释平板计数 1．编号： 取无菌平皿 9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6各3套。另取6支盛有4．5ml 无菌水的试管，排列于试管架上，依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 2．稀释 用1ml无菌吸管精确地吸取0．5ml大肠杆菌悬液放入10-1的试管中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，管内液体外溢。然后仍用此吸管将管内悬液来回吸吹三次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。另取一支吸管自10-1试管吸0．5ml放入10-2试管中，吸吹三次，……其余依次类推。 3．取样
用3支1ml无菌吸管分别精确地吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌液0．2ml，对号放入编好号的无菌培养皿中。 4．倒平板 于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化后冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基约10—15ml，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，倒置于37℃温室中培养。 5．计数 培养24小时后，取出培养皿，算出同一稀释度三个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算： 每毫升中总活菌数=同一稀释度三次重复的菌落平均数×稀释倍数×5 一般选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释度计算每毫升的菌数最为合适。同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊。由10-4、10-5、10-6三个稀释度计算出的每毫升菌液中总活菌数也不能相差悬殊，如相差较大，表示试验不精确。 平板菌落计数法，所选择倒平板的稀释度是很重要的，一般以三个稀释度中的第二稀释度倒平板所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 平板菌落计数法的操作除上述的以外，还可用涂布平板的方法进行。二者操作基本相同，所不同的是涂布平板法是先将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，待凝固后编号，并于37℃温室中烘烤30分钟左右，使其干燥，然后用无菌吸管吸取 0．2ml菌液对号接种于不同稀释度编号的培养皿中的培养基上，再用无菌玻璃刮棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于实验台上20—30分钟，使菌液渗透入培养基内，然后再倒置于37℃的温室中培养。 （二）划线法分离 图Ⅴ-3 平板划线操作示意图 1、倒平板将加热融化的牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号合成培养基和马铃薯蔗糖培养基分别倒平板，并标明培养基的名称。 2、划线在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取经稀释10倍的土壤悬液-环在平 板上划线(图Ⅴ-3)。划线的方法很多，但无论哪种方法划线，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使形成单个菌落。常用的划线方法有下列二种：
土壤中微生物的分离与鉴定实验报告
Sdu微生物大实验 土壤微生物的分离纯化与鉴定 【实验目的】 1、从各地区土壤中筛选含几丁质酶的真菌及含果胶酶的菌株； 2、通过从土壤中分离纯化菌株，掌握培养基的制备与灭菌技术、微生物的筛选、分离纯化方 法和无菌操作技术。 3、复习以前学过的各种染色方法，掌握生理生化试验的原理与方法。 4、掌握微生物的鉴定技术、菌种保藏技术。 【实验原理】 1、微生物的分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称 为微生物的分离与纯化。此次实验采取平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：a.选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部分不需要的微生物。 b.微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态，也可以用肉眼观察其菌落形态。前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。 2、霉菌：霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段 分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本实验采用载玻片培养观察法。 3、果胶酶筛选培养基：配制以果胶为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利 用果胶的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产果胶酶的菌株。刚果红（Congo Red,简称CR）是一种染料，它可与果胶形成红色复合物，但并不和果胶水解后的产物发生这种显色反应，在含有果胶的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的果胶形成红色复合物。当果胶被果胶分解菌分泌的果胶酶分解后，刚果红-果胶的复合物就将无法形成，从而在培养基中形成以果胶分解菌为中心的透明圈，这样我们就可以通过是否产生透明圈来筛选果胶分解菌。 4、几丁质酶筛选培养基：配制以几丁质为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分 解利用几丁质的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产几丁质酶的菌株。因为几丁质不能溶解于培养基，故在固体培养基平板上表现为浑浊，若菌株能够产生几丁质酶，
微生物平板划线法实验报告
微生物平板划线法实验报告 一、实验目的 1. 熟悉常用微生物培养基的配置方法。 2. 学习并掌握各种无菌操作技术，并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。 3. 用平板划线法和稀释法分离微生物。 4. 认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。 二、实验原理 土壤中有数量巨大、种类丰富的微生物，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的是平板分离法。 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。 三、实验器材 土样10g，牛肉膏蛋白胨培养平板20个，未知菌种平板，当天降雪；
平皿，涂棒，接种环，无菌200ul, 1000ul吸头，记号笔，酒精灯，取液器:1000ul 、200ul各一支，培养箱； 0.9% 无菌生理盐水，250ml三角瓶中装99ml生理盐水,每瓶加约20粒玻璃珠，250ml三角瓶中99ml生理盐水,作100倍稀释用。 四、实验步骤 1. 配置培养基：取牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，蒸馏水1000ml 配置培养基，调pH至7.2，灭菌。于讲课前倒板20块。 2. 采集野外样品：选择肥沃土壤,去表层土,挖5~20cm深度的土壤数10g,装入烧杯,带回实验室;取校河水装入烧杯，带回实验室；取新积雪中间层转入烧瓶，带回实验室。 3. 制备土壤稀释液：称取土样1.0g，放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，用手振荡5min使土壤均匀分散成为土壤悬液（10-2）。用200ul的无菌吸头从中吸取0.1ml土壤悬液，注入事先分装有0.9ml无菌水的试管中，吹吸3次，摇匀（10-3）。类推制得10-4、10-5的土壤悬液。 4. 涂板： 1）土壤稀释液（9块）：用无菌吸头，分别吸取10-3、10-4、10-5浓度土壤稀释液100ul，较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用无菌玻璃涂棒涂匀。每个浓度做3个平板。
平板菌落计数法实验报告
平板菌落计数法实验报告 实验目的，通过平板菌落计数法，对水样中的细菌进行定量分析，了解水质的卫生状况。 实验原理，平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，通过在富营养培养基上培养微生物，并对形成的菌落进行计数，从而得出水样中微生物的数量。该方法适用于水质、食品等样品的微生物检测。 实验步骤： 1. 准备工作，将所需培养基熔化并冷却至50℃左右，准备好平板培养皿和移液器等实验器材。 2. 取样，用无菌容器收集待检测水样。 3. 操作，将水样进行稀释，取适量的稀释液分别均匀涂布在不同的培养皿上，然后在培养箱中进行培养。 4. 计数，培养一定时间后，观察培养皿上形成的菌落数量，进行计数并记录。 实验结果： 经过培养后，观察到水样中形成了多个菌落，根据计数结果，得出水样中微生物的数量为XXX CFU/mL（CFU，菌落形成单位）。 实验分析： 根据实验结果，可以初步判断水样的卫生状况。若菌落数量较少，说明水质较好；若菌落数量较多，可能存在污染或者不洁净的情况。通过对不同水样的比较分析，可以进一步了解水质的情况，并采取相应的改善措施。 实验结论：
通过平板菌落计数法的实验，我们成功地对水样中的微生物数量进行了定量分析，得出了初步的水质卫生状况。这为我们提供了一种简便、有效的水质检测方法，对于监测和改善水质具有一定的指导意义。 实验注意事项： 1. 实验中需要注意无菌操作，避免外界微生物的污染。 2. 培养皿在培养过程中需要避免受到外界的震动和振动。 3. 实验结束后，实验器材需要进行严格的消毒和清洁。 实验改进方向： 1. 可以尝试不同的培养基和培养条件，以获得更准确的菌落计数结果。 2. 可以尝试将实验方法应用于其他样品的微生物检测，如食品、空气等。 总结： 平板菌落计数法是一种简单、快速的微生物定量分析方法，对于水质、食品等 样品的微生物检测具有重要的意义。通过实验，我们可以更好地了解水样中微生物的数量，为保障公共卫生和食品安全提供有力的支持。希望通过我们的努力，能够为微生物检测领域的研究和应用贡献一份力量。
环境中微生物的检测和分离纯化实验报告
环境中微生物的检测和分离纯化 一．实验原理 1.微生物的分离与纯化 土壤中含有丰富的微生物，可以从中分离纯化得到很多有价值的菌株。 微生物常用的分离方法是平板分离法，根据某种微生物对生长条件的不同要求供给它适宜的培养环境，再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离，纯化该微生物，直到得到纯菌株。 2.平板菌落计数法 将待测样品经适当稀释后，其中微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中含的菌落数。 二．实验材料与试剂 1.土壤稀释溶液 2.取液器（1000ml 1支），培养箱，培养皿（12个），无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂 棒，接种环，1000ml无菌吸头若干，记号笔，酒精灯，火柴，试管架。 三．实验步骤 （一）.无菌平板制备 1.采用叠皿法把牛肉冻蛋白膏培养基倒入灭好菌的培养皿中，制作无菌平板 （二）.周围环境中微生物的检测 2.取一平板，分成6个区，做好标记。同一个人同一根手指头按如下要求用力一致进 行操作：分别用未洗过的手指头，自来水打湿的手指头，自来水认真洗过的手指头，洗手液洗过一遍的手指头，洗过两遍的，洗手液洗过又用酒精棉球消毒后的手指头 在六个区上涂抹。（平板1） 3.取一平板，分区，分别用使用过的纸巾，硬币，旧纸币，餐卡在不同区拖动。（平 板2） 4.在培养基上方抖动头发数次。（平板3） 5.取一平板，分区，用无菌接种环分别蘸一滴自来水，河水，豆浆在不同区划线。（平 板4） 6.用无菌牙签取一点牙垢在培养基上划线。（平板5） 7.取两个平板，一个打开在实验台上放置30分钟，另一个在酒精灯火焰边打开皿盖1 分钟。（平板6） 8.取一平板，打开盖，咳几下。（平板7） （三）.从土壤中分离微生物 1.采土样 2.制备土壤稀溶液 3.涂布 吸取100ml稀释好的土壤稀溶液，较均匀地滴在平板上，再用无菌涂棒涂布均匀，涂1—2分钟 4.培养 将培养基平板倒置于37℃下培养24小时 5.菌落计数 四．实验结果
平板分离技术与活菌计数实验报告
平板分离技术与活菌计数实验报告 篇一：微生物学大实验实验报告 微生物学大实验 实验题目：土壤微生物的分离纯化与鉴定 一．实验目的： 1.巩固本学期所学的所有微生物实验操作技能。 2.再次强调无菌操作概念。 3.初步学习微生物鉴定纯化的方法和思路。 4.学会应用相关手册对微生物进行分类。 二．实验原理： 1. 培养基的制备、消毒与灭菌： 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对 pH 要求不一样，霉菌和酵母的培养基的 pH 一般是偏酸性的，而细菌和放线
菌的培养基的 pH 一般为中性或微碱性的 ( 嗜碱细菌和嗜酸细菌例外 ) 。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的 pH 调到合适的范围。此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌，如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。 2. 微生物的分离与纯化： 自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得只含有某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。土壤是微生物生活的大本营，所含微生物无论是数量还是种类都是及其丰富的。因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，人们可以从中分离到很多有价值的菌株。本实验将采用平板划线分离法。 3. 平板分离技术与活菌计数： 值得指出的是从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征等综合考虑。有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征
牛奶中细菌的分离实验报告
牛奶中细菌的分离实验报告 乳酸菌的分离和酸奶的制作 实验目的：1.掌握分离纯化微生物的基本方法2.掌握酸奶制作 的基本原理3.学会酸奶的制作方法。 实验设备与材料，1、仪器设备：三角瓶、平皿、试管、移液管、玻璃涂布棒、灭菌锅、超净工作台、培养箱、恒温摇床、冰箱等。 2、材料：市售酸奶、奶粉、白糖、棉花、酸奶瓶（自备，1个 /人）等。 3、培养基：乳酸菌分离用 乳酸菌分离用培养基：牛肉膏：0.5％；酵母膏：0.5％；蛋白胨：1％；葡萄糖：1％；乳糖：0.5％；NaCl：0.5％；琼脂：2.5％；pH6.8。配制250mL/组，装于2个三角瓶。 实验原理，酸奶制作的基本原理：（1）酸奶：以牛奶为主要原料，接入一定量乳酸菌，经发酵后制成的一种乳制品饮料。 生理生化原理：牛奶（乳糖）→接种乳酸菌→β-D-半乳糖苷酶 →乳糖（半乳糖和葡萄糖）→乳酸发酵（葡萄糖）→乳酸→破坏钙- 酪蛋白-磷酸复合物的稳定性→蛋白质凝结→酸奶 提供适宜的生长条件、采用一定的微生物分离纯化方法，就能 够从酸奶中分离出乳酸菌。 酸奶中含有乳酸菌的菌体及代谢产物，因而对人体的肠胃消化 道疾病有良好的治疗效果。 实验方法步骤：乳酸菌的分离纯化——稀释涂布平板法 1、倒平板（约6块/100ml） 2、制备酸奶稀释液：（1）将0.5mL酸奶吸入4.5mL无菌水 （自备）中，摇动5min；
（2）用无菌吸管吸出0.5mL酸奶悬液，加入盛有4.5mL无菌水 的试管中，充分混匀，制备得到10-2稀释液； （3）再从中吸出0.5mL加入盛有4.5mL无菌水的大试管中，混 匀后得到10-3稀释液； （4）以此类推，分别制备得到10-4、10-5、10-6酸奶稀释液。