土壤稀释涂布平板法实验报告
土壤稀释涂布平板法实验报告
一、实验目的
本实验旨在通过土壤稀释涂布平板法，了解土壤中细菌总数及不同细菌群落的数量和
结构，以分析不同土壤样本中微生物多样性。
二、实验原理
土壤稀释涂布平板法是一种常见的微生物计数方法。通过将土壤样品在一系列不同浓
度的液体稀释后，将其均匀涂布在含有富营养培养基的平板上，使微生物在培养基上生长。在培养时间后，通过对平板上不同生长的菌落形态、颜色进行观察和编号，计算出不同土
壤样品中微生物的总数和不同菌群落的丰度和多样性指数。
三、实验过程
1.准备土壤样品：从不同地点收集5份土壤样品，并混合均匀，制备出一份混合土壤
样品。
2.制备稀释液：取10ml的稀释液管，加入9ml的无菌蒸馏水，再加入1ml的土壤样品，轻轻震动均匀。
3.制备平板：取富含营养的琼脂，于100℃高压灭菌后，冷却至50℃左右，倒入培养
皿中，放置平板机中。
4.涂布：在培养皿表面均匀涂布1ml的上述稀释液，旋转培养皿，使其充分涂布。
5.反复稀释：将起初的土壤样品经反复稀释后，制备出稀释液100、1000、10000等多个浓度的稀释液，分别涂布至琼脂平板上，进行培养。
6.培养：将制作好的平板在恒温培养箱中，以30℃恒温培养48h。
7.观察：观察不同菌落形态、色泽，并执行数量统计和分析。
四、实验结果
1.菌落计数和统计：通过实验，我们制备了稀释液100、1000、10000等多个浓度的稀释液，并分别涂布至琼脂平板上，进行培养。培养后，我们对不同菌落形态、色泽进行观察，并进行数量统计和分析。根据实验数据，我们得出了以下结果：
（1）在稀释液100下，我们共计算出了50个菌落，其中以白色为主，数量较多；
（2）在稀释液1000下，我们共计算出了12个菌落，数量明显下降，以黄色和灰色为主；
（3）在稀释液10000下，我们共计算出了3个菌落，数量极低，以蓝色为主。
2.微生物多样性分析：根据实验结果，我们可以初步分析出不同细菌群落的结构和多样性。在稀释液100下，不同细菌群落的数量和多样性较高；在稀释液10000下，则显著下降。
五、实验结论
通过土壤稀释涂布平板法的实验，我们得出了以下结论：
1.土壤中微生物的总数可以通过稀释涂布平板法进行计数，能够初步分析出不同细菌群落的数量和结构。
2.土壤中微生物的种类和数量与土壤的环境条件密切相关，通过对不同地点的土壤样品进行实验，可以了解土壤微生物的多样性和存在问题，为土壤质量的评估和管理提供依据。
3.稀释涂布平板法是一种简单、快捷、有效的微生物计数方法，适用于不同类型的土壤样品，可以为微生物研究提供有力支持。
北京理工大学生物实验产蛋白酶菌种的分离与纯化
产蛋白酶菌种的分离与纯化--初筛 一、目的要求 1 学习蛋白酶产生菌的筛选方法。 2 掌握稀释涂布平板法从自然环境中分离纯化微生物的基本操作技术。 3 进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术。 二、基本原理 土壤是微生物生长的大本营，所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的，因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离纯化得到许多有价值的菌株。工业微生物菌种最初都来自于自然界。但是自然界中微生物种类繁多，而且都是混居在一起的，要获得工业发酵菌株，首先必须把它们从混杂的微生物群体中分离出来。 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有：简单单细胞挑取法和平板分离法。本实验用平板分离法。 平板分离法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理包括两个方面：(1)选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养，酸碱度，温度和氧等或加入某种抑制剂 造成只利于该微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 (2)微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此 可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂平板法或平板划线等技术完成。 值得指出的是从微生物群体中经分离生长在平板上的单菌落并不一定保证是纯培养。因此纯培养的确定要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。 蛋白酶是一类重要的工业用酶制剂，它能将蛋白质分解成短肽甚至氨基酸。根据三氯乙酸能将酪蛋白变性从而产生沉淀这一原理，可在平板培养基上直接筛选蛋白酶产生菌株。产酶菌株能将酪蛋白水解成小分子物质，菌落周围不形成沉淀蛋白而出现透明圈，根据透明圈大小还能判断产酶活力。 三、实验器材与试剂 1 样品 土壤样品。 2 培养基 酪素培养基配方如下： 葡萄糖0.5g NaCl 5g K2HPO4 0.5g KH2PO4 0.5g
稀释涂布平板法实验报告
稀释涂布平板法实验报告 引言 稀释涂布平板法是一种常用于测定微生物数量的实验方法。本实验旨在通过稀释涂布平板法来确定某种微生物在给定条件下的数量。实验过程包括：制备不同浓度的稀释液、使用稀释液对微生物进行稀释、涂布于平板培养基上、培养并计算菌落数量和总菌落单位。本报告将对实验步骤、结果和结论进行详细阐述。 实验步骤 制备稀释液 1.准备一定量的生理盐水。 2.准备10个离心管，分别标注为10-1至10-10。 3.取10 mL生理盐水，加入第一个离心管，记为10^-1浓度。 4.从10^-1浓度管中取1 mL，加入10^-2浓度管中，如此类推，依次进行10 次，直到10^-10浓度。 稀释样品 1.取一定量的待测样品，用移液管取约0.1 mL加入10 mL生理盐水中的10^- 1浓度管，混匀。 2.取10^-1浓度液体混合液0.1 mL，加入10 mL生理盐水中的10^-2浓度管 中，混匀。重复此步骤直到10^-10浓度。 涂布平板 1.准备含有平板培养基的琼脂糖平板。 2.取一份10-4和10-5倍稀释液，用移液管吸取0.1 mL后滴入平板表面，并快速 均匀涂布于平板表面。 3.重复上述步骤，使用10-6至10-10倍稀释液。 培养和计数 1.室温下，将平板培养基放置静置30分钟，让液滴被吸收并凝固。
2.37℃恒温箱中培养约24-48小时，待菌落生长。 3.使用菌落计数器进行计数。 实验结果 结果以表格形式列出，如下所示： 稀释倍数稀释液体积 (mL) 实验重复次数菌落数量 10^-4 0.1 3 15 10^-5 0.1 3 32 10^-6 0.1 3 98 10^-7 0.1 3 243 10^-8 0.1 3 567 10^-9 0.1 3 1221 10^-10 0.1 3 2810 结果分析 根据实验结果，我们可以看到随着稀释倍数的增加，菌落的数量呈现递减趋势。这是因为较高倍数的稀释液中含有更少的待测微生物，导致出现的菌落数量较少。此外，我们还可以观察到不同稀释倍数下同一实验重复次数的结果存在一定差异，这可能是由于实验操作过程中的人为误差造成的。 结论 本实验通过稀释涂布平板法成功测定了待测微生物在不同稀释倍数下的数量。通过分析实验结果，我们得出如下结论： 1.随着稀释倍数的增加，待测微生物的数量逐渐减少。 2.不同稀释倍数下的菌落数量会有一定差异。 3.实验过程中需注意减少人为误差的产生。 实验结果可为微生物研究和医学实践提供参考和依据。 参考文献 略
土壤稀释涂布平板法实验报告
土壤稀释涂布平板法实验报告 一、实验目的 本实验旨在通过土壤稀释涂布平板法，了解土壤中细菌总数及不同细菌群落的数量和 结构，以分析不同土壤样本中微生物多样性。 二、实验原理 土壤稀释涂布平板法是一种常见的微生物计数方法。通过将土壤样品在一系列不同浓 度的液体稀释后，将其均匀涂布在含有富营养培养基的平板上，使微生物在培养基上生长。在培养时间后，通过对平板上不同生长的菌落形态、颜色进行观察和编号，计算出不同土 壤样品中微生物的总数和不同菌群落的丰度和多样性指数。 三、实验过程 1.准备土壤样品：从不同地点收集5份土壤样品，并混合均匀，制备出一份混合土壤 样品。 2.制备稀释液：取10ml的稀释液管，加入9ml的无菌蒸馏水，再加入1ml的土壤样品，轻轻震动均匀。 3.制备平板：取富含营养的琼脂，于100℃高压灭菌后，冷却至50℃左右，倒入培养 皿中，放置平板机中。 4.涂布：在培养皿表面均匀涂布1ml的上述稀释液，旋转培养皿，使其充分涂布。 5.反复稀释：将起初的土壤样品经反复稀释后，制备出稀释液100、1000、10000等多个浓度的稀释液，分别涂布至琼脂平板上，进行培养。 6.培养：将制作好的平板在恒温培养箱中，以30℃恒温培养48h。 7.观察：观察不同菌落形态、色泽，并执行数量统计和分析。 四、实验结果 1.菌落计数和统计：通过实验，我们制备了稀释液100、1000、10000等多个浓度的稀释液，并分别涂布至琼脂平板上，进行培养。培养后，我们对不同菌落形态、色泽进行观察，并进行数量统计和分析。根据实验数据，我们得出了以下结果： （1）在稀释液100下，我们共计算出了50个菌落，其中以白色为主，数量较多；
实验四、土壤中放线菌的分离
实验四、土壤中放线菌的分离 一、实验目的 1、从土壤中分离、纯化放线菌；初步掌握药用微生物的分离纯化方法和操作技术。 2、了解不同生境条件中土壤放线菌的种类与数量。 二、实验内容 筛选放线菌永远是新抗生素研究的课题之一。迄今为止，已发现的抗生素约有80%来自于放线菌。土壤中放线菌最丰富，品种齐全。通常情况下，放线菌在比较干燥、偏碱性、含有机质丰富的土壤中数量居多。随着地理分布、植被及土壤性质的不同，放线菌的种类、数量和拮抗性也各不相同。从堆肥或过热的材料中如干草或蔗渣中可分离到大量的嗜热放线菌，从淡水和海洋环境中可分离到嗜碱性的和嗜酸性的菌种。土壤中含有的放线菌主要是链霉菌，人们通常将除链霉菌以外的其它放线菌统称为稀有放线菌，如小单孢菌、游动放线菌、诺卡氏菌等，它们是生物活性物质重要的产生菌。但往往由于样品中稀有放线菌的数量太少，常规的分离方法很难得到。 对样品进行风干、干热处理、培养基添加重铬酸钾等方法可以减少细菌和真菌的数量，以提高放线菌的获得率。用干热和苯酚处理可减少链霉菌数量和比例的方法，可以分离得到更多种类的放线菌。 土壤中分离放线菌的方法很多，其中包括稀释法、弹土法、混土法和喷土法等，本实验主要采用稀释法来获得放线菌。 注：从土壤中分出的放线菌要进一步鉴别是否为抗生菌。首先应根据筛选目的确定试验模型，然后利用培养基平板进行拮抗性测定。常用的方法有琼脂块法和滤纸片法。其主要依据是扩散原理，即观察在抗生菌周围是否会出现明显的抑菌圈。抑菌圈的大小和透明度则表明了该菌株抗菌活性的强弱。 三、实验原理、方法和手段 原理一：稀释涂布平板法；如图1。 原理二：对样品进行风干、干热处理以减少细菌和真菌的数量； 原理三：向培养基添加适量的重铬酸钾能抑制其他细菌、真菌的生长，但不影响放线菌的生长。 图1 稀释涂平板法示意图
土壤稀释涂布平板法
实验概要 分离、纯化及初步鉴定土壤中的拮抗植物病原菌的放线菌。 实验原理 土壤是微生物的“天然培养基”，也是最丰富的菌种资源库，我们可以从中分离出众多放线菌，尤其是可以从耕作土壤中筛选出拮抗植物病原菌的放线菌。 以耕作有武运粳和苏沪香粳的土壤为样品，应用稀释涂布平板法分离各种微生物。菌落计数后，通过菌落形态观察并挑取放线菌进行划线分离纯化，多次重复后得到单菌落。在进行放线菌形态等初步鉴定后，将纯化的菌株接入斜面传代保藏。最后，分离纯化的放线菌，初步鉴定其拮抗性。 拮抗植物病原菌的放线菌的分离纯化在农业增产、作物种植等方面都有着重要的意义。 主要试剂 1. 培养基： 高氏1号培养基、马铃薯葡萄糖培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基 2. 其他试剂： 银染液A液B液（细菌鞭毛染色） 40%KOH 5%α-萘酚（V.P.实验） 主要设备 培养皿 试管 锥型瓶 接种环 移液管 震荡器 电炉 载玻片 超净工作台 恒温培养箱 高压蒸汽灭菌锅 显微镜等 实验材料
土样： 苏沪香粳1，2组 杨稻6号93113，4组 武运粳5，6组 实验步骤 1.稀释涂布平板法(Spread Plate Method) 稀释涂布平板法是一种将菌体按比例制备成若干个稀释度，再分别经涂棒涂布培养而进行微生物分离纯化的方法。 (1) 倒平板； (2) 制备土壤稀释溶液连续不断稀释，得到不同稀释度的土壤溶液； (3) 涂布分别吸取三种稀释度菌液，均匀涂于培养基表面； (4) 培养； (5) 划线分离，直到获得纯培养。 2. 平板菌落计数法 平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。 这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品检定（如杀虫菌剂），生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。但平板菌落计数法的手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。
平板分离技术与活菌计数实验报告
平板分离技术与活菌计数实验报告 篇一：微生物学大实验实验报告 微生物学大实验 实验题目：土壤微生物的分离纯化与鉴定 一．实验目的： 1.巩固本学期所学的所有微生物实验操作技术。 2.再次强调无菌操作概念。 3.初步学习微生物鉴定纯化的方式和思路。 4.学会应用相关手册对微生物进行分类。 二．实验原理： 1. 培育基的制备、消毒与灭菌： 培育基是人工配制的适合微生物生长繁衍或积累代谢产物的营养基质，用以培育、分离、鉴定、保留各类微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实验和研究的目的不同，所以培育基的种类很多。可是，不同种类的培育基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对pH 要求不一样，霉菌和酵母的培育基的pH 一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培育基的pH 一般为中性或微碱性的( 嗜碱细菌和嗜酸细菌例外) 。所以配制培育基时，都要按照不同微生物的要求将培育基的pH 调到适合的范围。另外，由于配制培育的各类营养物质和容器等含有各类微生物，因此，已配制
好的培育基必需当即灭菌，若是来不及灭菌，应暂存冰箱内，以避免其中的微生物生长繁衍而消耗养分和改变培育的酸碱度所带来不利的影响。 2. 微生物的分离与纯化： 自然界中各类微生物混杂生活在一路，要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培育状态。从混杂的微生物群体中取得只含有某一株微生物的进程称为微生物的分离与纯化。土壤是微生物生活的大本营，所含微生物无论是数量仍是种类都是及其丰硕的。因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，人们可以从中分离到很多有价值的菌株。本实验将采用平板划线分离法。 3. 平板分离技术与活菌计数： 值得指出的是从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并非必然保证是纯培育。因此，纯培育的肯定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征等综合考虑。有些微生物的纯培育要通过一系列的分离与纯化进程和多种特征 鉴定方能取得。从混杂的微生物群体中取得只含有某一种或某一株微生物的进程称为微生物的分离与纯化。 平板分离法主要有：（1）平板划线分离法，（2）稀释涂布平板法。后者除能有效分离纯化微生物外，还可用于测定样品中活菌数量。
实验四 细菌、真菌、放线菌的分离与培养
实验报告 课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验 实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察 学生姓名：专业：环境工程学号： 同组学生姓名： 指导老师： 实验地点：实验日期：2018 年 10月16日 一、实验目的和要求 1.掌握微生物接种培养技术 2.掌握微生物分离纯化技术 3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。 二、实验内容和原理 土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。 1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离 与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分 离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的 混入。 2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且 采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微 生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可 以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数 3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表 面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落 的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。用途一般多用于筛选菌株。一般用 于平板培养基的回收率计数。优点是可以计数，可以观察菌落特征。缺点是吸收量较少，较麻烦，平板不于燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度天的话，长不出单菌落。 4.稀释倒平板法：稀释倒平板法是将细菌与液态的培养基混合后倒入培养皿再冷却凝固，使样品中 的微生物细胞充分分散开，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，单个细胞及聚在一起 的细胞可以生长繁殖，形成一个肉眼可见的菌落，统计菌落数目，即可用以评价样品中的微生物 的数量。所以细菌在培养基的内部和表面都有,适合厌氧型微生物。 5.菌种保藏：菌种保藏是将微生物的菌种经长时间的保存，不污染其它杂菌，及可保持其形态特征 和生理性状，减少变异，防止衰老，以便于将来使用。保藏菌种一-般是选用它的休眠休，如孢 子;芽孢等等，并且要创造一一个低温;干燥; 缺氧;避光和缺少营养的环境条件，以利于休眠体 能长期地处于休眠状态。对于不产孢子的微生物，应使其新陈代谢处于最低状态，又不会死亡，
稀释涂布平板法实验报告
稀释涂布平板法实验报告 实验名称：稀释涂布平板法实验报告 实验目的：通过稀释涂布平板法，了解不同细菌数量对平板生长的影响，了解菌落计数的基本步骤和方法。 实验原理：稀释涂布平板法是用来测定液体中菌落数量的一种方法。操作步骤如下： 1.取一定的液体样品，将其注入含有一定浓度的熔融琼脂的反应瓶中，翻转混匀，让琼脂完全凝固。 2.取一定的琼脂平板，将样品稀释至一定的浓度，然后用平板上的匀涂器将稀释后的液体均匀地涂抹于琼脂平板表面。 3.将涂有菌液的琼脂平板在恒温培养箱中保存一段时间，待细菌落形成后，进行菌落计数。 实验步骤： 1.准备实验所需的琼脂平板、稀释液和待测样品。 2.将待测样品加入一定浓度的稀释液中，使其稀释至一定浓度，如10^-6。 3.将稀释后的液体注入琼脂平板中，用平板上的匀涂器均匀地涂抹于琼脂平板表面。
4.将涂有菌液的琼脂平板在恒温培养箱中保存一段时间，待细菌落形成后，进行菌落计数。 5.统计计数结果，根据菌落形态和颜色进行初步鉴定。 实验结果和分析： 按照上述步骤进行实验，得到了不同稀释度下的菌落数量，如下表所示： 稀释度 | 菌落数量 ---|--- 10^-4 | 50 10^-5 | 12 10^-6 | 3 10^-7 | 0 从表格中可以看出，当样品被稀释至10^-6的浓度时，菌落数量最少，说明在这个浓度下，细菌的生长受限制。 根据不同菌落的形态和颜色，可以初步鉴定出菌株的种类，并结合其他实验结果进行确认。 结论：稀释涂布平板法是一种简便易行、准确有效的菌落计数方法，可用于对液体中的细菌数量进行测定，为细菌学研究和工业生产提供了有效的方法。
环境微生物学-实验四(五) 细菌的纯培养、分离
实验四（五）环境中微生物分离与培养 一、实验目的 1、掌握从环境（土壤、水体、活性污泥、垃圾堆肥等）中分离培养细菌的方法，获得若干种细菌纯种培养技能。 2、掌握几种接种技术。 3、了解菌种的保藏方法。 二、实验仪器和材料 恒温箱、涂布器、细铁丝、接种环、酒精灯、吸耳球、棉花、记号笔； 无菌培养皿（直径90毫米）、无菌移液管（1毫升和10毫升）； 肉汤蛋白胨培养基、高氏１号培养基、马铃薯培养基； 活性污泥或土壤10克、无菌水90毫升、9毫升无菌水（试管中）； 酵母、大肠杆菌。 三、细菌纯种分离的操作方法 细菌纯种分离的方法有两种：稀释平板法和平板划线法。 （一）稀释平板分离的方法 1、取样 用无菌锥形瓶到现场取一定数量的活性污泥或土壤，迅速带回实验室。 2、稀释水样 将1瓶90毫升和5管9毫升的无菌水排列好，按10-1、10-2、10-3、10- 4、10-5、10-6依次编号。在无菌操作条件下，将样品（10克）置于第一瓶90毫升无菌水中，用手摇10分钟，将颗粒状样品打散，即为10-1浓度的菌液。用1毫升无菌移液管吸取1毫升10-1浓度的菌液于一管9毫微升无菌水中，同样方法，依次稀释到10-6。 每次稀释时，需用不同的无菌移液管，或将同一移液管用无菌水洗三次。 3、平板的制作 取10套无菌培养皿编号，10-4、10-5、10-6各3个，另1个为空气对照。取1支1毫升无菌移液管从浓度小的10-6菌液开始，以10-6、10-5、10-4为序分别吸取0.5毫升菌液于相应编号的培养皿内（注：每次吸取前，用移液管在菌液中吹泡使菌液充分混匀），加热熔化培养基，当培养基冷至45℃左右时，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拿培养皿，以中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖，靠近火焰，将皿盖掀开，倒入培养基后将培养皿平放在桌上，顺时针和逆时针来回转动培养皿，使
土壤中微生物的分离与鉴定实验报告
Sdu微生物大实验 土壤微生物的分离纯化与鉴定 【实验目的】 1、从各地区土壤中筛选含几丁质酶的真菌及含果胶酶的菌株； 2、通过从土壤中分离纯化菌株，掌握培养基的制备与灭菌技术、微生物的筛选、分离纯化方 法和无菌操作技术。 3、复习以前学过的各种染色方法，掌握生理生化试验的原理与方法。 4、掌握微生物的鉴定技术、菌种保藏技术。 【实验原理】 1、微生物的分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称 为微生物的分离与纯化。此次实验采取平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：a.选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部分不需要的微生物。 b.微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态，也可以用肉眼观察其菌落形态。前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。 2、霉菌：霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段 分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本实验采用载玻片培养观察法。 3、果胶酶筛选培养基：配制以果胶为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利 用果胶的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产果胶酶的菌株。刚果红（Congo Red,简称CR）是一种染料，它可与果胶形成红色复合物，但并不和果胶水解后的产物发生这种显色反应，在含有果胶的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的果胶形成红色复合物。当果胶被果胶分解菌分泌的果胶酶分解后，刚果红-果胶的复合物就将无法形成，从而在培养基中形成以果胶分解菌为中心的透明圈，这样我们就可以通过是否产生透明圈来筛选果胶分解菌。 4、几丁质酶筛选培养基：配制以几丁质为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分 解利用几丁质的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产几丁质酶的菌株。因为几丁质不能溶解于培养基，故在固体培养基平板上表现为浑浊，若菌株能够产生几丁质酶，
微生物平板划线法实验报告
微生物平板划线法实验报告 一、实验目的 1. 熟悉常用微生物培养基的配置方法。 2. 学习并掌握各种无菌操作技术，并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。 3. 用平板划线法和稀释法分离微生物。 4. 认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。 二、实验原理 土壤中有数量巨大、种类丰富的微生物，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的是平板分离法。 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。 三、实验器材 土样10g，牛肉膏蛋白胨培养平板20个，未知菌种平板，当天降雪；
平皿，涂棒，接种环，无菌200ul, 1000ul吸头，记号笔，酒精灯，取液器:1000ul 、200ul各一支，培养箱； 0.9% 无菌生理盐水，250ml三角瓶中装99ml生理盐水,每瓶加约20粒玻璃珠，250ml三角瓶中99ml生理盐水,作100倍稀释用。 四、实验步骤 1. 配置培养基：取牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，蒸馏水1000ml 配置培养基，调pH至7.2，灭菌。于讲课前倒板20块。 2. 采集野外样品：选择肥沃土壤,去表层土,挖5~20cm深度的土壤数10g,装入烧杯,带回实验室;取校河水装入烧杯，带回实验室；取新积雪中间层转入烧瓶，带回实验室。 3. 制备土壤稀释液：称取土样1.0g，放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，用手振荡5min使土壤均匀分散成为土壤悬液（10-2）。用200ul的无菌吸头从中吸取0.1ml土壤悬液，注入事先分装有0.9ml无菌水的试管中，吹吸3次，摇匀（10-3）。类推制得10-4、10-5的土壤悬液。 4. 涂板： 1）土壤稀释液（9块）：用无菌吸头，分别吸取10-3、10-4、10-5浓度土壤稀释液100ul，较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用无菌玻璃涂棒涂匀。每个浓度做3个平板。
微生物的分离与活菌计数
微生物的分离与活菌计数 实验二微生物的分离与活菌计数 06级生科三班葛茜 40608136 一.实验目的 1、掌握倒平板的方法 2、几种常用分离纯化微生物的基本操作技术 3、学习平板菌落计数的基本原理和方法 二.实验原理 1 微生物的分离与纯化是指从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程 2 分离纯化微生物的常用方法 (1) 简易单细胞挑取法: 可以直接得到纯培养。它需要特制的显微操纵器来分离单细胞，或直接在普通显微镜下利用低倍镜分离单孢子的方法。 (2) 平板分离法: 选择适合于目标微生物生长的培养基 ; 设计获取单菌落的有效方法 ;可确认纯培养 3 活菌计数 将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数 4 涂布平板法是指摄取少量梯度的稀释菌悬液，置于以凝固的无菌平板培养基表面，然后用无菌的涂布棒把菌液均匀的涂布在整个平板的表面，经培养后，在平板培养基表面会形成许多独立分布的单菌落，然后挑取典型菌落进行移接到斜面。 5涂布平板法是使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀.
混合平板法操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好. 三.实验器材 1.材料:土壤 2.培养基:牛肉膏蛋白胨培养基 3.仪器或其他用具:无菌培养皿，盛有9ml无菌水的试管，1ml移液器，玻璃涂布器，恒温培养箱 四.实验步骤 1 采样 取表层以下5-10cm处的土样，放入灭菌的袋中备用，或放在4 ?冰箱中暂存。 2 倒平板(无菌操作) 将培养基加热溶化，待冷至55-60?倒入培养基于无菌培养皿中，从桌沿慢慢推入摇匀待冷却，每个约倒15ml 3 制备土壤稀释液(无菌操作) (1) 制备土壤悬液 将5g土溶于45ml无菌水，振摇约20min,使土壤与水充分混匀，可加入玻璃珠促进土壤分散溶解， (2)梯度稀释 用移液枪移取1ml土壤悬液于9ml无菌水 以此类推制成10-2 、10-3、10-4，10-5等不同稀释度的土壤溶液 4 平板分离单菌落(无菌操作) (1) 平板划线(各用10-2、10-3、10-4、10-5浓度) 在培养皿底用记号笔划分为四个面积不同的区域，且各角为120。挑取菌样选用平整圆滑的接种环挑取少量菌样，将平板置于煤气灯火旁，左手取出平板的皿底使平板表面大致垂直于桌面，面对火焰。右手持接种环在A区域划线，然后
实验二-----土壤中放线菌的分离
实验讲义5 土壤中枯草芽孢杆菌分离方法 取土样时最好选取如花坛等地方的土样，去掉表层5～10cm的土壤后取样. 放入100ml三角瓶中,加入30ml水，常压加热至水沸腾后维持20min，取出，置28-37摄氏度培养24—48h，液面则产生黄白色皮膜。 用接种环取皮膜适量于无菌水中分散，稀释涂布于蔗糖豆芽汁琼脂平皿，置28—37摄氏度培养24-48h，挑取典型菌落。 实验6土壤中放线菌的分离（实训） 实验目的：1掌握配制合成培养基的一般方法. 2掌握稀释倒平板法从土壤中分离放线菌的基本原理和基本操作技术。 3掌握平板划线法从土壤中分离放线菌的基本原理和基本操作技术。 4掌握涂布平板法从土壤中分离放线菌的基本原理和基本操作技术. 实验材料： 药品：可溶性淀粉、KNO3、NaCl、K2HPO4•3H2O、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、琼脂。 其他：高压蒸汽灭菌锅、扭力天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、三角瓶、试管、牛皮纸、硫酸纸、线绳、无菌培养皿、铁锹、小铲、酒精棉球、镊子、玻璃铅笔。 实验原理： 高氏一号合成培养基是培养放线菌的培养基.这种培养基是采用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基，高氏一号培养基：碳源为可溶性淀粉、氮源为KNO3 、NaCl 、K2HPO4•3H2O 、MgSO4•7H2O作为无机盐，FeSO4•7H2O作为微生物的微量元素,提供铁离子等组成。 放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中，其数量仅次于细菌，一般在中性偏碱性、有机质丰富、通气性好的土壤中含量较多。由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体,为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。分离放线菌常用稀释倒平板法。根据放线菌的营养、酸碱度等条件要求，常选用合成培养基或有机氮培养基。如果培养基成分改变，或土壤预先处理(120℃热处理1h），或加入某种抑制剂（如加数滴10%酚等），都可以使细菌，霉菌出现的数量大大减少，从而淘汰了其它杂菌.再通过稀释法，使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并可得到纯菌株。 实验步骤： 1.高氏一号合成培养基的制备 高氏一号琼脂培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉20g，硝酸钾1g，氯化钠0。5g，K2HPO4 •3H2O 0.5g，MgSO4•7H2O 0.5g，FeSO4•7H2O 0。01g，琼脂20g，水1000ml，pH7.2～7.4。 配制时，先用冷水,将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分,溶化后，补足水分至1000ml。112℃灭菌20分钟。 2。土壤中放线菌的分离 (1）待测样液的制备 选定取样点（最好是有机质含量高的菜地）,按对角交叉（五点法)取样。先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤.盛土的容器应是无菌的。将5点样品约1kg 充分混匀，除去碎石、植物残根等，土样取回后应尽快投入实验. 称土样1g于盛有99mL无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的三角瓶中，振荡10～20min,使土样中的菌体、芽孢或孢子均匀分散,此即为10—2浓度的菌悬液，静置30s。另取装有9ml无菌水的试
稀释培养和稀释平板测数法
稀释培养和稀释平板测数法 稀释培养测数法 一、实验目的 通过对好气性自生固氮菌的计数，了解稀释培养计数（MPN）的原理和方法。 二、实验原理 最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。见附表23-1）的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用。 MPN计数是将待测样品作一系列稀释，一直稀释到将少量（如lm1）的稀释液接种到新鲜培养基中没有或极少出现生长繁殖。根据没有生长的最低稀释度与出现生长的最高稀释度，采用“最大或然数”理论，可以计算出样品单位体积中细菌数的近似值。具体地说，菌液经多次10倍稀释后，一定量菌液中细菌可以极少或无菌，然后每个稀释度取3—5次重复接种于适宜的液体培养基中。培养后，将有菌液生长的最后3个稀释度（即临界级数）中出现细菌生长的管数作为数量指标，由最大或然数表（见附录九）上查出近似值，再乘以数量指标第一位数的稀释倍数，即为原菌液中的含菌数。 如某一细菌在稀释法中的生长情况如下； 稀释度 lO-3 10-4 10-5 lO-6 10-7 10-8 重复数 5 5 5 5 5 5 出现生长的管数 5 5 5 4 1 0 根据以上结果，在接种lO-3—10-5稀释液的试管中5个重复都有生长，在接种lO-6稀释液的试管中有4个重复生长，在接种10-7稀释液的试管中只有1个生长，而接种10-8稀释液的试管全无生长。由此可得出其数量指标为“541”，查最大或然数表得近似值17，然后乘以第一位数的稀释倍数（10-5的稀释倍数为100 000）。那么，1ml原菌液中的活菌数＝17×100 000 = 17×105。即每毫升原菌液含活菌数为l700000个。
土壤中微生物的分离与纯化
微生物学实验报告 实验名称：土壤中微生物的分离与纯化 课程名称环境微生物学实验 学院环境科学与工程学院 专业班级2011级环境科学（1）班 学号 3111007364 姓名刘迪鸿 联系方式 2013年 12 月 10 日
实验报告 土壤中微生物的分离与纯化 刘迪鸿 （广东工业大学11级环科（1)班） 摘要:各种微生物生长所需条件存在差异，根据需要配制不同的培养基可以得到只含目标菌株的纯培养. 关键词:选择培养基，分离，纯化 一、实验目的与要求 1.明确培养基的配制原理，并通过对微生物培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。 2.掌握根据需要选取不同的环境以找到目标菌株的基本方法，学习分离纯化微生物的基本操作技术，进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术，掌握微生物培养方法以及接种方法。 二、实验方案 1.实验原理 培养基是人工的将多种物质按各种微生物生长的需要配制而成的一种混合营养基质，用以培养或分离各种微生物，因此,培养基质应当有微生物所能利用的营养成分（包括碳源，氮源，能源，无机盐,生长因素。）和水，根据微生物的种类和实验目的地不同,培养基也有不同的种类和配置。 在土壤，水，空气及动、植物体中,不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起,当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分理它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。 为了获得某种微生物的纯培养,一般是根据该微生物对营养,酸碱度，氧等条件的要求不同,而供给它适宜的培养条件,或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离纯化微生物,直至得到纯菌株。 2.实验材料 1)培养基与试剂 牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏2.0g，蛋白胨4。0g,氢氧化钠2.0g，琼脂6~8g,水400mL。 高氏一号培养基配方：可溶性淀粉4g，硝酸钾0.4g，磷酸氢二钾0。2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0。2g,硫酸亚铁0。004g,琼脂6～8g，水400mL.
土壤中微生物分离纯化(电子版实验报告)土壤微生物实验
土壤中微生物分离纯化(电子版实验报告)土壤微生 物实验 微生物实验报告 土壤中微生物的分离与纯化 指导教师：李海花 周四晚第四组 实验成员: 杜玉琪__9 董天涵__8 蒋怡菲__8 逄颖__5 利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离和纯化，通过观察微生物的菌落形态特征判断菌的类型并通过平板划线进行分离纯化 【关键词】土壤、微生物、菌落观察、分离纯化 1.实验目的1）通过对几种培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。（2）掌握倒平板的方法、接种和无菌操作技术。 （3）初步观察来自土壤中的几类微生物的菌落形态特征，并能判断菌的类型。（4）学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能。 2.实验原理 （1）培养基的配制与灭菌 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分
离、鉴别、保存各种微生物或积累代谢产物。一般的培养基应包含适合微生物生长的 6 大 营养素即水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子。不同微生物对pH 要求不一样，霉 菌和酵母菌的培养基的pH 一般是偏酸的，而细菌和放线菌培养基的pH 一般为中性或微碱 性。所以配制培养基时还要根据不同微生物的要求将培养基的pH 调到合适的范围。已配制 好的培养基必须立即灭菌，如来不及灭菌，应暂存冰箱，以防止其中微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基酸碱度所带来不利影响。 （2）微生物的培养及鉴定 接种：将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。 接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。 接种的关键是要严格的进行无菌操作。 鉴定：常见与常用的微生物中,根据它们的主要形态可分为细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类。细菌菌落光滑，易于基质脱离；放线菌菌落质地致密，菌落较小，广泛延伸；酵母菌菌落较细菌菌落大而厚；霉菌形成的菌落较稀松，多成绒毛状，絮状。 （3）平板分离与活菌计数 倒平板：按稀释涂布平板法倒平板，并用记号笔标明培养基名称、土样编号和实验日期