【VIP专享】腺病毒包装流程及操作
腺病毒包装流程及操作
重组腺病毒是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。重组腺病毒具有以下几个显著优点：感染范围广，几乎可以感染所有的细胞系、原代细胞和部分组织；感染效率高达100%，可全面超越其他病毒载体工具和脂质体转染；对外源基因容载能力大（可以高达8Kb）；不整合基因组；滴度高，操作方便。因此，重组腺病毒是一种最具有潜力的基因递送工具。
目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型（Ad5），其基因组是36Kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维（fiber）和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从内吞体（endosome）转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。
目前最常用的腺病毒包装体系有AdEasy和AdMAX两种，其共同特点是目的基因首先克隆到穿梭载体，然后再重组到腺病毒的大骨架上。这两个系统均具有腺病毒早期转录复制基因E1和E3的缺陷(ΔE1, ΔE3)，其中E3基因对病毒产生并非必需。因此，腺病毒包装必需依赖表达E1的细胞系，例如HEK-293，HEK-293A等。
相对于Adeasy系统，AdMAX系统操作便利，并且可以获得更好的病毒滴度。本操作说明均基于AdMAX系统，该系统由pHBAd系列穿梭质粒、腺病毒骨架载体pBHGlox(delta)E1, 3Cre双载体组成。
一、整体实验流程
二、实验材料
该病毒包装系统为两质粒系统，组成为穿梭质粒（pHBAd系列，包括包括过表达、干扰等类型）和骨架质粒（pBHGlox(delta)E1, 3Cre)。
1、载体信息（见附1）
2、菌株：大肠杆菌菌株DH5α。用于扩增腺病毒载体和腺病毒骨架载体质粒。
3、细胞株：293A，腺病毒的包装细胞，表达腺病毒基因E1，为贴壁依赖型成上皮样细胞，经培养生长增殖形成单层细胞，生长培养基为DMEM+10% FBS+双抗（DMEM完全培养基）。293A细胞来源于一个用作空斑测定的亚克隆，具有易使用和易转染的特性。该细胞株对于高细胞密度很敏感，当细胞超过70%汇合时，一些细胞可能会丢失它们的表
型。
若细胞密度持续在70% 以下，则293A细胞能连续培养3～4个月维持原有的细胞特性。若以购买得到的293A作为第一代，则30代内都能得到最佳结果。随着传代次数的增加，293A细胞会出现生长状态变差、突变等现象。为了防止此类现象的出现，我们需要在初始阶段对细胞进行大量的冻存保种，以保证实验的稳定性和持续性。在细胞对数生长期进行冻存，可增加细胞复苏成活率。
注：为了达到最好的细胞状态，提高腺病毒出毒效率，推荐在培养基中加入汉恒生物的SaveIt TM抗支原体试剂。
三、腺病毒包装和浓缩
（一）质粒构建和扩增
构建有目的基因的腺病毒穿梭质粒和骨架质粒需经过大量抽提，浓度要求大于1 μg/μl，A260/280在1.7~1.8范围内方可用于病毒包装。推荐使用Qiagen大抽试剂盒进行质粒的大量去内毒素抽提（质粒质量会极大影响后续转染效率和病毒的滴度）。
注：质粒构建推荐使用汉恒生物HB-infusion TM无缝克隆试剂盒。
（二）腺病毒包装
事先准备好用于包装病毒的293A细胞（50-70%的汇合度）和病毒质粒，转染每个直径为6 cm的培养皿成分如下：
pHBAd系列穿梭质粒 2 μg
pBHGlox(delta)E1, 3Cre 4 μg
DMEM需在37℃水浴中预热，LipoFiter TM转染试剂需恢复至室温方可使用，并在使用前摇匀。转染6h后置换成新鲜培养液。
注：1、LipoFiter TM转染试剂为汉恒生物产品，使用说明参考LipoFiter TM说明书。
2、转染前细胞必须处于良好的生长状态。
（三）病毒收集
病毒收集前要观察病毒空斑是否形成。为了限制病毒的扩散而让空斑更好地形成，通常在培养液中加入低熔点琼脂糖，转染后一般在第10至21天可以在显微镜下看到小的空斑。如果穿梭质粒带有荧光蛋白（GFP或RFP），则在空斑形成之前观察荧光，以确定转染效率。空斑形成后将空斑与琼脂糖一起挑起，放入1 ml新鲜培养基中过夜。通常挑取3-6个空斑不等，然后比较滴度，使用滴度最高的一个空斑进行后续实验。
空斑示意图
注：高纯度的低熔点琼脂糖储液可以配制在无菌PBS中，终浓度5%；使用之前用沸水浴完全融化，然后自然降温到45℃待用。用37℃预热的完全培养基稀释5%的琼脂糖溶液到终浓度1.25%，混匀后马上加到去除培养基的细胞上，轻轻地覆盖均匀。6孔板每孔覆盖3 ml琼脂糖/培养基。
（四）病毒扩增
第二天，将培养基中病毒加入新鲜293A细胞培养液中进行病毒少量扩增。至细胞再次出现空斑，收集细胞及上清，反复冻融三次收集病毒，以此病毒为P1代病毒，以P1代腺病毒感染293A细胞，连续进行三代感染，至P4代进行腺病毒的大量扩增，待空斑形成后收集病毒并对病毒进行体外纯化和浓缩。
注：1、收集细胞的时候一般使用细胞刮，不能用胰酶消化，4℃500 g离心10 min，去除大部分上清，只留取2 ml上清重悬细胞沉淀进行-80℃（干冰或者液氮均可）冻融。
2、37℃冻融时一旦病毒融化就马上取出，长时间在37℃温育会降低病毒滴度，完全融化后可以剧烈震荡30s。冻融周期通常会持续2~4次才可以获得高滴度的病毒。
3、细胞冻融结束裂解液可以4℃500×g离心10 min，不立即使用的话可以冻存在-20℃或-80℃。
（五）病毒纯化
病毒纯化采用PEG8000沉淀-CsCl密度梯度离心-透析联用法纯化病毒，具体操作如下:
1、融化：提前1 天将病毒从-80℃冰箱拿出，室温水浴融化。收集全部细胞裂解物，7000×g 4℃离心10 min，弃细胞碎片，收集上清。
2、PEG8000沉淀：每100 ml上清加入50 ml PEG8000（20% PEG8000，2.5 M NaCl），冰上放置1h使病毒沉淀（可适当延长时间）。7000×g 4℃离心上述混合物20 min，弃上清，将沉淀物悬浮在10 ml 密度为1.10 g/ml 的CsCl 溶液中（溶剂为20 mM Tris-HCl，PH8.0）（溶液配置见下表），病毒液应呈粉红色。
三种不同密度CsCl溶液的配制
密度（g/ml）
浓度（mg/ml）CsCl的量（g）终体积（ml）(20℃)
1.40 548.3 5.483 10
1.30 40
2.4 4.024 10
1.10 143.8 1.438 10
3、CsCl 梯度离心：CsCl 梯度的制备方法如下：加入2 ml 密度为1.40 g/ml 的CsCl 溶液（溶剂同上），然后再缓慢加入3 ml 密度为1.30 g/ml 的CsCl 溶液（配置如下表），再加入5 ml 的病毒悬浮液。使用Beckman SW28转子，26,000 rpm，4℃离心2小时。
商品包装操作流程
商品包装操作流程商品包装操作流程
商品包装操作管理规 1.0目的 为有效控制商品发货的准确性，有效控制包装成本并且达到发货商品安全防护的要求。 2.0适用围 丰驰公司仓库销售发货时的包装管理与控制。对本公司各地区间的商品调拨时仓库发货的包装操作遵照此规执行。 3.0责任部门 3.1仓库： 3.1.1数据员责任：负责打印《销售单》并交由仓管员备货；商 品发货后单据及数据信息的整理和处理。 3.1.2仓管员责任：按《销售单》备货、清点及检验，配合包装。 3.1.3包装员责任：核单、清点、检验、包装。 3.1.4发运员责任：按销售员和客户的要求配送到物流代理点， 或通知物代上门提货配合包装。 3.2销售员：负责有效传达客户需求到仓库数据员处，对发货商品有检验的义务和责任。 3.3公司经理：负责审核审批仓库编制的《商品包装操作流程》并监督实施与考核。 4.0管理规
4.1仓管员备货 4.1.1仓管员严格按照《销售单》进行备货；并在《销售单》“仓管员”一栏签字确认。 4.1.2仓管员备货后将单与商品实物转移到商品包装区并交由包装员进行包装。 4.1.3仓管员在备货时，若发货需求的商品本部无库存或质量不符合发货要求的，仓管员必须立即通知销售员，由销售员视情况处理。 4.2包装员核单与清点 4.2.1包装员在接到仓管员移交的待发货商品和《销售单》，首先按照《销售单》所列明的商品编码与商品实物进行严格仔细的逐一核对，并同时清点商品数量。 4.2.1.1核对后无误的，必须清除商品上的原供应商及原物流的全部信息和标识，更换为本司标识和标签。 4.2.1.2核对发现商品实物与《销售单》有差异的，立即要求仓管员进行纠正。 4.2.1.3商品更换后，包装员必须再次对商品进行核对，直至单、货完全一致。 4.2.2包装员在核单的同时，必须严格清点待发货商品的数量，确保商品发货数量与《销售单》列明数量完全一致。 4.2.2.1包装员发现备货商品实物数量多于《销售单》需求数量的，立即通知仓管员，由仓管员收回多备货的商品。 4.2.2.2包装员发现备货商品实物数量少于《销售单》需求数量
包装车间工艺流程汇总
包装车间工艺流程 一．周转收货工艺流程； 1.清点工件数量和包装班组分配； 由制作车间反馈包装车间项目进度情况，包装依据信息按项目排产要求进行收货，由对皮带机工件熟知的工人，依据设备清单到制作车间进行清点数量和包装班组的分配。 2.制作车间周转运输喷砂车间； 清点工件完成后，由周转运输班组负责转运至抛丸车间进行除锈，班组针对不同的工件使用不同的周转底托和设备，对所周转运输的产品进行保护，确保工件完整的转运至车间。 3.抛丸车间周转运输涂装车间； 抛丸除锈结束以后，周转运输班组依据设备对应的包装班组，进行分配运输，合理的安排转运的时间，确保各个涂装班组可以正常生产，确保及时将工件转至涂装车间，以达到除锈后的涂漆时间，以免在此氧化生锈。 二．抛丸除锈工艺流程； 1.收货运输班组将产品工件转运抛丸车间，抛丸车间依据钢材表面锈蚀和除锈等级标准为国家标准GB8923-88《涂装前钢材表面锈蚀等级和除锈等级》。 2.标准将除锈等级分成喷射或抛射除锈、手工和电动除锈、火焰除锈三种类型。 3.喷射和抛射除锈，用字母“sa”表示，分四个等级： sa1——轻度的喷射后抛射除锈。钢材表面无可见的油脂、污垢、无附着的不牢的氧化皮、铁锈、油漆涂层等附着物。 sa2——彻底的喷射或抛射除锈。钢材表面无可见的油脂、污垢，氧化皮、铁锈等附着物基本清除。 sa21/2——非常彻底的喷射或抛射除锈。钢材表面无可见的油脂、污垢、氧化皮、铁锈、油漆涂层等附着物，任何残留的痕迹仅是点状或条状的轻微色斑。sa3——使钢材表面非常洁净的喷射或抛射除锈。钢材表面无可见的油脂、污垢、氧化皮、铁锈、油漆涂层等附着物，该表面显示均匀的金属色泽。 手工除锈等级： St2 彻底的手工和动力工具除锈 钢材表面应无可见的油脂和污垢，并且没有附着不牢的氧化皮、铁锈和油漆涂层等附着物。 St3 非常彻底的手工和动力工具除锈 钢材表面应无可见的油脂和污垢，并且没有附着不牢的氧化皮、铁锈和油漆涂层等附着物。除锈应比St2更为彻底，底材显露部分的表面应具有金属光泽。
包装印刷工艺流程工艺介绍
包装印刷工艺流程及工艺介绍 精美的包装同时也离不开包装印刷， 包装印刷是提高商品的附加值、增强商品竞 争力、 开拓市场的重要手段和途径。设计者应该了解必要的包装印刷工艺知识， 使设计出的包 装作品更加具有功能性和美观性。 1.印刷工艺流程 在包装成型之前，需要经过一系列有序的印刷工作: 工艺流程 图01 为了提高印刷质量和生产效率，在印刷前，应注意查看设计稿有无多余内容； 文字
和线条是否完整；检查套版线、色标及各种印刷和裁切用线是否完整等。只有这样，才能提高生产效率，保证印刷的顺利完成。
图02 不同的包装材料会有不同的印刷工艺，由于纸品包装材料在实际生活中运用最广，所以下面以纸品包装材料印刷工艺为例，为大家阐述印刷工艺的相关知识。 2.纸品包装印刷工艺 2.1.印刷方法 纸包装印刷的方法有很多种，方法不同，操作也不同，印出的效果也不同。传统使用的印刷方法主要分为以下四类： (1)凸版印刷 凸版印刷是指印版上的图文部分高于非图文部分，墨辊上的油墨只能转移到印版的图文部分，而非图文部分则没有油墨，从而完成印刷品的印刷。 (3)平版印刷 印版的图文部分和非图文部分保持表面相平，图文部分覆一层富有油脂的油膜，而非图文部分则吸收适当水分。上油墨时，图文部分排斥水分而吸收油墨，非图文部分因吸收了水分而形成抗墨作用。
图07 该印刷品具有线条或网点中心部分墨色较浓， 边缘不够整齐，色调再现力差, 鲜艳 度缺乏等特点。 El 文部分保苻一 非阪部分吸收 适 当的水分
图08 提示：由于平版印刷的方法在工作中简单，成本低廉，所以成为现在印刷上使用最多的方法。 （4）丝网印刷 丝网印刷是指在刮板挤压作用下，油墨从图文部分的网孔中漏到承印物上，而非图文部分的丝网网孔被堵塞，油墨不能漏至承印物上，从而完成印刷品的印刷。
商标印刷工艺流程介绍
商标印刷工艺流程 包装印刷中出现的一种新的印刷品种--印刷（tabet printing），是以商品标签标牌等为主要产品的印刷。它印在专用的复合纸上，为商品牌贴，标签粘贴方便的需要，在纸张背面涂上一层不干胶层，粘附在一层容易剥离的涂蜡的防粘纸上。所以，该方法又叫不干胶印刷。印刷后用刀线轧印，剥去空白多余部分，在防粘纸上留下一定形状的印成品，使用时只要将成品剥下来直接粘贴到商品或包装物上即可。除印在纸上外，还可印在铝箔上，彩色涤纶薄膜为承印材料的不干胶印刷品。 复合纸的制作和印刷流程如下： 印刷面纸卷→单面上光→涂布不干胶水→烘干 ↓烫金 →加压复合→印刷→模切→成品。 防粘纸原纸卷→喷涂聚乙烯薄膜→涂布防粘剂→烘 干↑复塑 印刷面纸一般采用90～100克铜版纸，涂布不干胶水后，在温度为80℃情况下，以每分钟一米的速度进行烘干，防粘纸原纸一般采
用20克鸡皮纸，涂布防粘剂后，在温度为120℃时，以每分钟一米的速度进行烘干，然后与印刷面纸复合。 印版是采用凸版感光性树脂版，印刷有专用的不干胶标签印刷机，采用圆压平，平压平等多种印刷方式，该印刷机使用卷筒纸，一次完成印刷、烫金、复合塑料薄膜、横切、收卷废料和裁切等工序，如图6-6。 图6-6 不干胶标签印刷机结构示意图 该机印刷时纸张走向与印刷滚筒旋转方向同一级印刷机不同。纸张是轴向跳格移动。 印版滚筒是垂直于走纸方向旋转。纸张在印刷台上每移跳一次，印版滚筒往复一次，印完一色。几色印刷，纸张就必须在印刷台上移动几次，才能完成套印工作，之后，便可进入烫金和复膜、模切。 模切是按商标图案所需要的外形进行裁切。模切装置是平压平结构，模切的深度并不把防粘纸层切断，而仅是切断印刷面纸层，使印刷后的成品仍可复卷裁切，给以后的撕贴工作带来方便。
产品包装安全操作规程
编号：SM-ZD-35264 产品包装安全操作规程Through the process agreement to achieve a unified action policy for different people, so as to coordinate action, reduce blindness, and make the work orderly. 编制：____________________ 审核：____________________ 批准：____________________ 本文档下载后可任意修改
产品包装安全操作规程 简介：该规程资料适用于公司或组织通过合理化地制定计划，达成上下级或不同的人员之间形成统一的行动方针，明确执行目标，工作内容，执行方式，执行进度，从而使整体计划目标统一，行动协调，过程有条不紊。文档可直接下载或修改，使用时请详细阅读内容。 1．包装前的准备工作 1.1认真核对分散缸上贴的标签与工程单上产品型号是否一致，防止搞错； 1.2按工程单要求准备好包装桶、过滤布等； 1.3检查包装桶内是否干净； 1.4开机搅拌，大缸10分钟，小缸5分钟以上，小缸中特殊产品如银磁油、金油、榕树金油等，搅拌后还需要用干净铁铲检查是否有沉淀； 1.5校准电子秤； 2．大缸包装 2.1检查过滤泵是否好用，询问带班长是否需要更换过滤袋； 2.2接好过滤机管道，扣紧各接口处的反扣，以免在包装过程中造成泄漏或喷射到人的眼睛，造成人身伤害；
2.3关闭过滤机上排气阀； 2.4打开过滤机循环阀，关闭包装枪阀； 2.5按一下防爆电源停止按钮，然后插上电源； 2.6打开入口阀； 2.7打开包装枪阀，开始包装，逐渐关闭循环阀； 2.8当一桶重量只差5-10kg时，打开循环阀控制流量，直到包满为止；包装第二桶时先打开包装枪阀，逐渐关闭循环阀； 2.9注意： 2.9.1在包装过程中，过滤机循环阀和包装枪不能同时关闭，如果同时关闭，会造成系统憋压，可能会因电机过载烧坏，或系统压力过大，从接口处冲破，涂料会四处飞溅，造成泄漏，甚至喷射到人体，造成人身伤害； 2.9.2刚开机时应排出2小桶倒进大缸，以混合包装机内滞存物； 2.9.3应把所有送样排出的涂料倒进大缸内一起包完； 2.9.4每个托板放置两个桶，先包秤的前面一桶，再包后面一桶；
包装印刷工艺流程及工艺介绍
包装印刷工艺流程及工艺介绍 精美的包装同时也离不开包装印刷，包装印刷是提高商品的附加值、增强商品竞争力、开拓市场的重要手段和途径。设计者应该了解必要的包装印刷工艺知识，使设计出的包装作品更加具有功能性和美观性。 1. 印刷工艺流程 在包装成型之前，需要经过一系列有序的印刷工作： 图01 为了提高印刷质量和生产效率，在印刷前，应注意查看设计稿有无多余内容；文字和线条是否完整；检查套版线、色标及各种印刷和裁切用线是否完整等。只有这样，才能提高生产效率，保证印刷的顺利完成。 图02
不同的包装材料会有不同的印刷工艺，由于纸品包装材料在实际生活中运用最广，所以下面以纸品包装材料印刷工艺为例，为大家阐述印刷工艺的相关知识。 2. 纸品包装印刷工艺 2.1.印刷方法 纸包装印刷的方法有很多种，方法不同，操作也不同，印出的效果也不同。传统使用的印刷方法主要分为以下四类： （1）凸版印刷 凸版印刷是指印版上的图文部分高于非图文部分，墨辊上的油墨只能转移到印版的图文部分，而非图文部分则没有油墨，从而完成印刷品的印刷。 （3）平版印刷 印版的图文部分和非图文部分保持表面相平，图文部分覆一层富有油脂的油膜，而非图文部分则吸收适当水分。上油墨时，图文部分排斥水分而吸收油墨，非图文部分因吸收了水分而形成抗墨作用。 图07 该印刷品具有线条或网点中心部分墨色较浓，边缘不够整齐，色调再现力差，鲜艳度缺乏等特点。
图08 提示：由于平版印刷的方法在工作中简单，成本低廉，所以成为现在印刷上使用最多的方法。 （4）丝网印刷 丝网印刷是指在刮板挤压作用下，油墨从图文部分的网孔中漏到承印物上，而非图文部分的丝网网孔被堵塞，油墨不能漏至承印物上，从而完成印刷品的印刷。 图09
腺病毒中文操作手册
腺病毒载体操作手册中文版 腺病毒重组系统 AdEasyTM操作手册 目录 第一章简介 1 第二章应用重组腺病毒的优点 2 第三章 AdEasyTM 技术 3 3.1 技术概况 3 3.2 AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程 3 第四章主要流程 4 4.1 将基因克隆入AdEasyTM转移载体4 4.1.1 克隆的一般原则 4 4.1.2 构建重组AdEasyTM转移载体 5 4.2 细菌内AdEasyTM重组子的产生 5 4.2.1 共转化的一般原则 5 4.2.2 共转化方法 5 4.2.3 预期结果 5 4.3 AdEasyTM重组质粒的筛选和扩增6 4.4 AdEasyTM重组子转染QBI-293A 细胞 6 4.4.1 细胞铺板 6 4.4.2 磷酸钙转化技术 7 第五章常用技术 8 5.1 QBI-293A细胞培养 8 5.1.1 QBI-293A细胞的初始培养8 5.1.2 QBI-293A细胞的维持培养和增殖 8 5.1.3 QBI-293A细胞的冻存 8 5.2 QBI-293A细胞的转染和病毒空斑的产生 9 5.2.1 感染QBI-293A细胞 9 5.2.2 病毒空斑形成 9 5.2.3 琼脂糖覆盖被感染细胞 9 5.3 MOI测定 10 5.4 腺病毒感染力测定 10
5.4.1 X-Gal染色 11 5.5 重组腺病毒的筛选和纯化 11 5.5.1 挑选最佳重组腺病毒：表达和基因输送 11 5.5.2 病毒空斑挑选和小量扩增12 5.5.3 Western杂交 13 5.5.4 Southern杂交和点杂交 13 5.5.5 病毒裂解产物PCR 14 5.5.6 免疫测定 14 5.5.7 功能测定 14 5.6 病毒颗粒在QBI-293A细胞中的大量扩增 15 5.7 两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒 16 5.7.1 不连续密度梯度离心 17 5.7.2 连续密度梯度离心 17 5.7.3 病毒溶液去盐和浓集 17 5.8 病毒滴度测定 18 5.8.1 O.D.260 nm (VP/ml) 19 5.8.2 空斑测定法 20 5.8.3 50%组织培养感染剂量法 20 第六章疑难解答 22 6.1 QBI-293A细胞培养 22 6.2 感染力测定 22 6.3 转移载体克隆 23 6.4 在BJ5183细胞中共转化和重组24 6.5 转染QBI-293A细胞 25 6.6 筛选和测定 25 6.7 在QBI-293A细胞中表达 26 6.8 重组腺病毒的扩增 26 6.9 纯化 26 6.10 病毒滴度测定 27 缩写英文全称中文全称 Ad Adenovirus 腺病毒 Ad5 Adenovirus serotype 5 血清5型腺病毒 AdV Adenoviral Vector 腺病毒载体Amp Ampicillin 氨苄青霉素 β-Gal β-Galactosidase β-半乳糖苷酶 bp Base Pair 碱基对
干燥包装工序安全操作规程(标准版)
干燥包装工序安全操作规程 (标准版) The safety operation procedure is a very detailed operation description of the work content in the form of work flow, and each action is described in words. ( 安全管理 ) 单位：______________________ 姓名：______________________ 日期：______________________ 编号：AQ-SN-0406
干燥包装工序安全操作规程(标准版) 1、日常巡检时，注意检查各工艺管道法兰、阀门、泵、槽、二次离心分离机、螺旋给料机、干燥机及成品料仓是否正常；发现泄漏，立即通知仪表室或班组长。 2、进入本区域作业，必须保证两人以上，并穿戴好专用内衣内裤、连身服和防尘口罩，必要时佩戴防毒面具。 3、清理环集管道和捕沫器时，必须有两人以上，并穿好连身服，戴好胶皮手套、防尘口罩。清出的三氧化二砷粉尘要放入专用容器内，及时返回系统回收处理；洒落的少量粉尘用湿抹布或湿拖把及时清理干净，湿抹布或湿拖把放入专用容器内。作业完毕，立即漱口、沐浴。 4、保持二次离心分离机滤网的完好。清理滤网结垢时，穿好连身服，戴好胶皮手套和防尘口罩；并注意防止大块结垢及清理工具
掉入螺旋给料机内；当离心分离机处于停止、微速或低速运转的状态时，严禁用水清洗滤网。作业完毕，立即更换连身服，并洗手漱口。 5、将成品样送中心化验室时，须两人同往，核对好批号、重量并签名；带回的试样及时返回系统回收处理。 6、库房内的产品堆放必须符合“五距”(顶距、灯距、墙距、柱距、堆距)要求，分期分批堆放。 7、严格执行产品出入库规定，做到手续齐备，帐、卡、物相符，对包装不符合要求的不得出库。 8、叉车作业严格执行通用分册中《叉车安全操作规程》。 XXX图文设计 本文档文字均可以自由修改
腺病毒中文操作手册
腺病毒载体操作手册中文版腺病毒重组系统 AdEasyTM操作手册 目录 第一章简介1 第二章应用重组腺病毒的优点2 第三章AdEasyTM技术3 3.1技术概况3 3.2AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程3 第四章主要流程4 4.1将基因克隆入AdEasyTM转移载体4 4.1.1 缩写英文全称中文全称 AdAdenovirus腺病毒 Ad5Adenovirusserotype5血清5型腺病毒AdVAdenoviralVector腺病毒载体 AmpAmpicillin氨苄青霉素 β-Galβ-Galactosidaseβ-半乳糖苷酶 bpBasePair碱基对 BSABovineSerumAlbumin小牛血清白蛋白cDNAComplementaryDNA互补DNA cccDNAClosedCircularCoiledDNA闭环螺旋DNA CPECytopathicEffect细胞病理效应CsClCesiumChloride氯化铯 DMEMDulbecco’sModifiedEagleMediumDMEM培养基DMSODimethylSulfoxide二甲基亚砜DTTDithiothreitol二硫苏糖醇EDTAEthyleneDiamineTetraaceticAcid乙二胺四乙酸EtBrEthidiumBromide溴化乙锭FBSFetalBovineSerum胎牛血清 HrHour小时 ITRInvertedTerminalRepeat反向末端重复KanKanamycin卡那霉素 kbKilobases千碱基对 KDaKiloDaltons千道尔顿LBLuria-Bertani(broth)LB培养基MCSMultipleCloningSite多克隆位点 MinMinute分钟 MOIMultiplicityofInfection(Virus/Cell)感染复数mRNAMessengerRNA信使RNA MWCOMOIecularWeightCut-off PAGEPolyAcrylamideGelElectrophoresis聚丙烯凝胶电泳PBSPhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液PFUPlaqueFormingUnit空斑形成单位 piPostInfection感染后RCAReplicationCompetentAdenovirus增殖性腺病毒RITRRightInvertedTerminalRepeat右侧反向末端重复SDSSodiumDodecylSulfate十二烷基硫酸钠TBETrisBorate/EDTA三羟甲基氨基甲烷硼酸盐/乙二胺四乙酸 TCID50TissueCultureInfectiousDose5050%组织培养感染剂量 TCPTotalCellularProtein细胞总蛋白 TETris/EDTATE溶液 wtWildType野生型 X-Gal5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-Galactopyranoside5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷 第一章简介 当今基因输送技术的发展日趋复杂，一些治疗药物（生长激素、干扰素、抗病毒和抗癌复合物）和诊断性蛋白（单克隆抗体）的设计、发展与合成需要更高效的基因输送工具。人类基因组计划和正不断发展的基因治疗同样急需发展快速有效和治疗性的分析工具。为解决这一问题，基因输送技术(通常使用病毒载体如增殖缺陷的腺病毒)通过基因工程不断发展，致力于生产基因表型药物。重组腺病毒提供了一类在基因转移系统发展中有极大潜力的新的生物治疗剂。 1953年对普通感冒病因的探索和研究导致了腺病毒的发现。迄今为止已发现了40多种不同血清型和93种不同种类的腺病毒，它们通常感染眼、呼吸道或胃肠上皮（Fields等，1996）。1977年，FrankGraham博士建立了一种细胞株，可在无辅助病毒的情况下产生重组腺病毒（Graham等，1977）。此后，腺病毒载体作为极具潜力的哺乳动物基因转移载体而得到广
腺病毒中文操作手册
腺病毒中文操作手 册
腺病毒载体操作手册中文版腺病毒重组系统 AdEasyTM操作手册 目录 第一章简介 1 第二章应用重组腺病毒的优点 2 第三章AdEasyTM 技术 3 3.1 技术概况 3 3.2 AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程 3 第四章主要流程 4 4.1 将基因克隆入AdEasyTM转移载体 4 4.1.1 克隆的一般原则 4 4.1.2 构建重组AdEasyTM转移载体5 4.2 细菌内AdEasyTM重组子的产生5 4.2.1 共转化的一般原则 5 4.2.2 共转化方法 5 4.2.3 预期结果 5 4.3 AdEasyTM重组质粒的筛选和扩增 6 4.4 AdEasyTM重组子转染QBI-293A 细胞 6 4.4.1 细胞铺板 6 4.4.2 磷酸钙转化技术7 第五章常见技术8 5.1 QBI-293A细胞培养8 5.1.1 QBI-293A细胞的初始培养8 5.1.2 QBI-293A细胞的维持培养和增殖8 5.1.3 QBI-293A细胞的冻存8 5.2 QBI-293A细胞的转染和病毒空斑的产生9 5.2.1 感染QBI-293A细胞9 5.2.2 病毒空斑形成9 5.2.3 琼脂糖覆盖被感染细胞9 5.3 MOI测定10 5.4 腺病毒感染力测定10
5.4.1 X-Gal染色11 5.5 重组腺病毒的筛选和纯化11 5.5.1 挑选最佳重组腺病毒：表示和基因输送11 5.5.2 病毒空斑挑选和小量扩增12 5.5.3 Western杂交13 5.5.4 Southern杂交和点杂交13 5.5.5 病毒裂解产物PCR 14 5.5.6 免疫测定14 5.5.7 功能测定14 5.6 病毒颗粒在QBI-293A细胞中的大量扩增15 5.7 两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒16 5.7.1 不连续密度梯度离心17 5.7.2 连续密度梯度离心17 5.7.3 病毒溶液去盐和浓集17 5.8 病毒滴度测定18 5.8.1 O.D.260 nm (VP/ml) 19 5.8.2 空斑测定法20 5.8.3 50%组织培养感染剂量法20 第六章疑难解答22 6.1 QBI-293A细胞培养22 6.2 感染力测定22 6.3 转移载体克隆23 6.4 在BJ5183细胞中共转化和重组24 6.5 转染QBI-293A细胞25 6.6 筛选和测定25 6.7 在QBI-293A细胞中表示26 6.8 重组腺病毒的扩增26 6.9 纯化26 6.10 病毒滴度测定 27 缩写英文全称中文全称 Ad Adenovirus 腺病毒Ad5 Adenovirus serotype 5 血清5型腺病毒AdV Adenoviral Vector 腺病毒载体Amp Ampicillin 氨苄青霉素β-Gal β-Galactosidase β-半乳糖苷酶bp Base Pair 碱基对BSA Bovine Serum Albumin 小牛血清
外卖产品操作流程及标准 (1)
百度外卖产品操作操作流程 接单： 1：平台会提前一小时下单，（前期是电话下单，后期会接入点餐系统）门店在接单后制作产品，对产品按计量包装好后放入制定位置，平台骑手会在规定的时间进行取餐 2：后厨在接单后15分钟内必须出完所有产品，打包好后装入食品袋放入门店指定的位置。 产品范围： 6种锅底:菌王糊辣鸳鸯锅、菌王柠檬鸳鸯锅、菌王酸汤鸳鸯锅、菌王鲜辣鸳鸯锅、菌王养颜木瓜鸳鸯锅、菌王滋补鸳鸯锅、菜单上除果汁与果酒所有产品。产品标准： 菌王糊辣鸳鸯锅 1：配制好的成品菌汤，包装规格900克/袋，（含香菇片，鸡油，配制标准同现有的菌汤标准） 2：糊辣底料一袋，包装规格900克/袋（含配糊辣锅的辅料，如子弹头，灯笼椒，醪糟，冰糖等，搅拌均匀装袋，标准和现有的标准一样）
菌王柠檬鸳鸯锅 1：配制好的成品菌汤，包装规格900克/袋，（含香菇片，鸡油，配制标准同现有的菌汤标准） 2：柠檬底料一袋，包装规格900克/袋,（含香茅草、柠檬叶、鲜红小米辣、搅拌均匀装袋、配制标准同现有的柠檬锅底标准） 菌王酸汤鸳鸯锅 1：配制好的成品菌汤，包装规格900克/袋，（含香菇片，鸡油，配制标准同现有的菌汤标准） 2：配制成品酸汤900克（含香茅草、木姜子油、番茄片、香菜段，搅拌均匀装袋、配制标准同现有的酸汤锅底标准） 菌王鲜辣鸳鸯锅 1：配制好的成品菌汤，包装规格900克/袋，（含香菇片，鸡油，配制标准同
现有的菌汤标准） 2：鲜辣底料一袋，包装规格900克/袋（含鲜辣底料，高汤,泡小米辣，姜片，大葱，搅拌均匀装袋、标准和现有的鲜辣锅底标准一样） 菌王金汤鸳鸯锅 1：配制好的成品菌汤包装规格900克/袋，（含香菇片，鸡油，配制标准同现有的菌汤标准） 2：金汤锅底一袋，包装规格900克/袋（含，金汤底料，木瓜，枸杞，党参，当归，大枣，搅拌均匀装袋，标准和现有的金汤锅底标准一样） 菌王滋补鸳鸯锅 1：配制好的成品菌汤，包装规格900克/袋，（含香菇片，鸡油，配制标准同现有的菌汤标准） 2：配制好的成品滋补汤，包装规格900克/袋，（姜片，大枣，枸杞，鸡油，配制标准同现有的滋补锅标准一样） 打包器皿：
产品包装管理流程
产品包装管理流程 1.目的 1.1.包装的成品必须符合质量验收标准。 1.2.包装管理流程适用于各车间成品的包装工序设定、包装操作规程、包装品质过程控制，包装工艺纪律管理。 2.范围 2.1.舒比奇产品的包装类型分类： 2.1.1.单品独立包装 a.一片装的派送装或赠品装； 2.1.2.含其他标识包装 a.含卡产品（包装袋中投放刮刮卡片、宣传卡纸）； b.含标识产品（包装袋和包装箱粘贴标贴）； c.含奖品产品（赠品、代金卷、现金）； d.特殊包材包装产品（塑料盒、纸盒）。 3.管理规程 3.1.包装材料的管理 3.1.1.包装材料按物流流程进行分级管理，内容包括：入库、出库、使用、返库、保存等管理形式。 3.1.1.1.包装材料库凭供应商送货单和实物，经品控部门验收合格后，办理正式入库手续，并按品项分类保存，包材堆码、装卸、储存环境、物品安全必须符合标准要求。 3.1.1.2.对不符合质量标准的包材，根据品管部的判定方式，由生产部门与仓库办理相关授权放行、让步接收、拒收、降级接收、挑选使用等手续。 3.1.1.3.生产部门根据包装产能，按生产排产计划分期从仓库领取所需包材（包装袋、纸箱、其它包装材料），经双方清点实物及数量，办理领用手续。 3.1.1. 4.生产部门根据包材使用及耗用流程，办理转产后使用多出的包材、使用过程中剔除的包材质量次品等退库手续。 3.2.产品包装流程 3.2.1包装车间按公司编制的日或周生产排产计划，根据半成品的生产日期、班次、数量，下达给各包装班组生产计划，内容包括：包装产品的品种类别、包装装袋和装箱方案、成品数量（包或件）、产品批号标注信息、包材备用信息等。 3.2.2.作业流程 3.2.2.1.包装车间主管提前一天下达给各班组日计划排产表，内容包括：包装袋喷码、纸箱盖章生产批号和数量，包装喷码、纸箱盖章原则： a.喷码必须依照产品封样书、函件或实物封样所明确的喷码信息及区域位置
MicroRNA腺病毒表达系统使用手册0828
产品手册│ MirAd TM MicroRNA前体腺病毒表达系统 本产品仅限用于研究，严禁用于任何动物或人类疾病诊断。 本产品仅供购买方内部研究使用，未经ViGene生物科技有限公司书面许可，严禁转售。
目录│ 产品简介 4 产品组成 5 保存条件 5 使用安全注意事项 6 pMirAd 载体图谱 6 质粒扩增 6 病毒载体扩增 7 常见问题解答 8
产品有限责任担保 Vigene生物保证您收到的产品符合产品目录上的规格。本担保规定了Vigene 更换产品的责任。Vigene生物不提供其他任何形式的对于产品商业或健康用途的保证。Vigene生物不对任何由于使用或不正确使用本公司产品造成的直接、间接的、衍生的或偶然的损害所产生的后果负责。 产品订购和技术支持 山东维真生物科技有限公司暨美国ViGene Biosciences公司中国办事处 美国地址：12111 Parklawn Dr. Rockville, MD 20852 US 北京办事处：北京市海淀区北三环西路43号青云里满庭芳园D座1206室上海办事处：上海市徐汇区肇家浜路201弄11号602室 广州办事处：广州市天河区骏景花园骏景路棋乐街33号404室 山东办事处：济南市高新区开拓路2350号留学人员创业园717室 Email: service@https://www.360docs.net/doc/cb15032101.html, Phone: 400-077-2566 https://www.360docs.net/doc/cb15032101.html,(美国) https://www.360docs.net/doc/cb15032101.html,（中国） 欢迎您致电或发邮件，咨询产品技术信息。
产品简介 MicroRNAs（miRNAs）是一类长度为18-24个核苷酸的非编码RNA分子。MiRNA通过与靶基因mRNA上的互补序列结合，降解mRNA或抑制mRNA的翻译。MiRNAs在细胞分化、增殖、凋亡和癌细胞发生中发挥重要的调控作用。MiRNAs来源于具有60-80个核苷酸茎环结构的microRNA前体（premir）和序列更长一些的microRNA初级转录产物（primir）。MiRNA在核内由RNA聚合酶II（polII）转录生成，最初产物primir具有帽子结构和多聚腺苷酸尾巴。 ViGene生物的mirAD-腺病毒microRNA前体表达系统包括三个相关产品：microRNA前体穿梭载体、microRNA前体腺病毒载体和预制microRNA前体腺病毒。 重组腺病毒是进行基因转移和表达的工具，功能强大且易于操作。腺病毒独特的生物学特征使它成为“载体的首选”，被科研工作者广泛应用。首先，它能够感染包括分裂、非分裂细胞和干细胞在内的多种细胞。第二，病毒滴度高。第三，高滴度的病毒可获得高感染效率和高表达量。第四，病毒进入细胞后，病毒基因组不整合到细胞染色体上，因此瞬时表达外源基因的重组腺病毒不会诱导宿主细胞中染色体的变化。ViGene生物选用的是应用最广泛的复制缺陷型的人类血清5型腺病毒，该腺病毒载体缺失E1和E3基因。E1基因在组装感染性病毒颗粒时必不可少，可在HEK293T细胞病毒包装过程中得到补充，而E3基因可有可无。由于E1和E3基因的缺失，腺病毒载体可插入高达7.5kb的外源基因。 pMir-microRNA precursor是基于microRNA前体表达系统的质粒。microRNA前体天然的茎环结构被克隆到质粒的SgfI和MluI双酶切位点。为了保持推测的发卡结构和诱导正确的内源性反应，miRNA茎环结构的两侧具有它的150-200bp的天然序列。MicroRNA前体在CMV启动子启动下表达，其上游有GFP荧光标记，并具有SV40 poly（A）加尾信号。穿梭载体含有SV40启动子启动的puromycin嘌呤霉素标记，可以用来进行稳转细胞株的筛选。穿梭载体还含有两个腺病毒ITR序列和两个与腺病毒Ad5同源的序列，可
外包装工序作业指导书
外包装工序作业指导书 1、目的 规范外包装工序的操作，确保装箱后产品的质量符合标准要求。 2、适用范围 适用于外包车间所有工作和要求。 3、职责 3.1负责外包间产品的生产任务。 3.2负责装箱后成品的质量达到标准质量要求。 3.3负责打包机、收缩膜机的使用、清洗、维护和保养。 3.4负责本岗位的安全文明作业和环境卫生等。 4、工艺流程 计划分工→领取半成品→ 证→封箱→打包→注明品种→入库 5、关键控制点 5.1外包间温度不高于26℃，湿度不高于60%。 5.2每箱产品须经质检员检验合格放入合格证后方可封箱入库。 5.3装袋（盒）、装箱过程中每种品种随机抽取检查2次/小时。 6、作业程序 6.1准备工作 6.1.1进入外包车间必须洗手消毒并严格穿戴工作服。保持地面卫生整洁，物体摆放整齐，台面随时保持整洁，所有原料半成品不允许直接接触地面。 6.1.2领料：根据生产计划和生产主管安排分组班长领取相应的包装袋或盒。 6.1.3清理消毒：首先将操作台面、封口机、封塑机表面残留的杂质清理干净，然后用消毒毛巾把台面擦拭一遍。 6.2调试机器 6.2.1每天开工提前半小时开启电源，调好封口机加热温度、机器运转速度，加热温度一般控制在150—220℃。 6.2.2调试好封口机待温度达到预设范围后先试封几个根据情况在具体调试温度和速度。
6.2.3需要打印日期的包装袋先调换好当天日期预热后试打印几个检查日期有误错误、位置颠倒或放倒的等。 6.2.4需要封塑的包装盒操作工应提前20分钟调试封塑机保证封塑机能够正常运转。6.3装盒、袋过程及注意事项 6.3.1装盒中途应注意观察包装袋，有无脏袋、滥袋、封口不严、白边、印刷问题、歪包斜包、长短包、空包等。如发现上述问题应及时挑拣出放到相应塑料箱中，并及时通知内包间操作工采取相应的措施。 6.3.2在装盒过程中清楚自己所装产品的包数，不要少包影响产品质量，装完一箱后要及时清理台面上的粉末避免将粉末带进包装盒中。 6.3.3装好的盒子根据检验标准或客户需要统一贴标签，贴标签时操作人员应注意检查日期是否清晰可见，是否有歧义等。 6.3.4贴好标的盒子跟据检验标准或客户需要进行封塑，在封塑之前再次检查标签或日期，并将盒外表用干毛巾擦拭干净。 6.3.5封塑标准依据《产品检验标准》执行。 6.3.6需装袋的产品进行对应装袋，确保所装产品的数量符合标准要求。 6.3.7装袋过程中检查有无滥袋、封口不严、夹料等现象如发现上述问题应及时挑拣出放到相应塑料箱中，并及时通知内包间操作工采取相应的措施。 6.3.8包装袋、盒的质量标准依据《原理检验标准》执行。 6.4封塑、封口、装箱、打包过程及注意事项 6.4.1封塑过程中注意切刀处的安全，手不要往里面放。封好的盒注意检查有无起皱、滥、气泡等，如有挑拣出调试机器再次封塑直至合格为止。 6.4.2封口过程中应注意封口机的温度是否达到预设温度，若达不到应停机等待或降慢封口机速度。每封10包应抽检一次检查是否有炸开。 6.4.3封箱之前要确保数量达到规定数量且正面朝上，待质检员放入合格证后方可封箱。封好箱后将防伪码统一贴在外箱的右上角。 6.4.4打好的包带应紧一些这样在装运过程中不容易散箱。外箱注明品种规格等。 6.5卫生 6.5.1每天上下班对机器、台面各清理一次，应先用抹布擦去余料浮灰，再用消毒毛巾擦拭，做到机见本色。 6.5.2每周六下班前对机器、台面、地面进行彻底清理，对死角内的存料余灰进行清理，
印刷制作完整工艺流程
印刷制作完整工艺流程（附图） 印刷制作已经彻头彻尾的进入我们生活，而且位置很高，对于印刷制作完整的工艺流程是许多人关注的，我们来看看晖凰印刷专家给出的官方介绍：晖凰印刷专家表示：印刷工艺基本流程主要有以下步骤： 设计成图——发片——打样——拼版——晒版——上机印刷——印后加工——交货 一、发片（即发菲林片）： 发菲林片就是把制作好的版面，通过设备输出到可以印刷的PC胶片上，专业术语叫菲林片。菲林片：印刷制版所用的胶片，被称为菲林片，用菲林片晒PS 版即可上机印刷，就相当于照片的底片一样。在精度印刷时是必不可少一道工序。彩色印刷菲林片通常包含4张（CMYK各一张）。 二、打样：在印刷生产过程中，用照相方法或电子分色机所制得并作了适当修整的底片，在印刷前印成校样或用其他方法显示制版效果的工艺。目的是确认印刷生产过程中的设置、处理和操作是否正确，为客户提供最终印刷品的样品，并不要求在视觉效果和质量上与最终印刷品完全一样。打样大体可以分为三种方法，即打样机打样、（色粉）简易打样、数字打样。 打样机打样 最传统的也是最可靠的一种打样方法。它使用与正式印刷机相似的设备、印版、纸张和油墨，但打样机一般都是单色或双色机(一次运行只能得到一种或两种颜色)，自动化程度不高，需要很高的操作技能和经验，而且必须事先制作印版，因此打样机打样效率低、需要恒温恒湿环境控制、成本较高。这种打样方法在中国、日本等国家应用广泛。 简易打样 一种利用光化学反应获得影像和彩色的打样技术，主要有叠层胶片打样和色粉打样两种。这两种方法的共同特点是将分色网点胶片(如黄版)与附着在胶片或纸张底基上的感光高分子涂层叠合(采用抽真空的方法)，通过分色加网胶片一侧用紫外光源进行曝光，使曝光部分成为不可溶或失去黏着性，然后经过溶液显影或色粉显影，即可得到彩色影像。所不同的是，前者使用分别携带有黄、品红、青、黑颜料的感光高分子涂层的四张胶片，将曝光、溶液显影处理后的胶片叠合在一起即可得到一张透射型彩色样张；后者使用一张与实际印刷品相同的纸张，将无色黏性高分子涂层(类似于不干胶)附着在上面(采用专用的覆膜机)，经过曝光、色粉显影处理，重复四次，即可得到一张反射型彩色样张。色粉打样起始于20世纪70年代中期，在欧、美等国家应用广泛，但由于成像过程与实际印刷过程相差甚远，很难做到样张与印刷品完全一致。 数字打样 不同于上述两种方法，既不需要中介的分色网点胶片，也不需要印版。将数字印前系统(计算机)中生成的数字彩色图像(又称数字页面或数字胶片)直接转换成彩色样张，即从计算机直接出样张。数字打样分为软打样和硬打样。软打样是将数字页面直接在彩色显示器(如计算机显示屏)上进行显示，它能够做到与计算机处理实时显示，具有速度快、成本低的优点，但因为是加色法显色原理，而且材质和观察条件也与实际印刷品相差较远，如今出现利用液晶显示屏的软打样，已有改进。硬打样如同计算机彩色喷绘一样，直接将数字页面转换成彩色硬拷贝(采用喷墨打印、染料升华、热蜡转移、彩色静电照相等成像技术)。由于计
慢病毒转染手册
慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。 基本概述 慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。 慢病毒的应用 目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的siRNA半衰期短，体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达siRNA的载体, 然后转移到细胞内转录siRNA的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的siRNA表达载体中，是由RNA聚合酶Ⅲ启动子来指导RNA合成的，这是因为RNA聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的RNA不会带poly A尾。当RNA聚合酶Ⅲ遇到连续4个或5个T时，它指导的转录就会停止，在转录产物3’端形成1~4个U。U6和H1 RNA启动子是两种RNA聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～21ntRNA和～50ntRNA茎环结构（stem loop）。在siRNA表达载体中，构成siRNA的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录,然后两条链互补结合形成siRNA；也可由载体直接表达小发卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA), 载体包含位于RNA聚合酶Ⅲ启动子和4～5T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有1~4 个U 3 ’ 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成siRNA。构建载体前通常要通过合成siRNA的方法，寻找高效的siRNA，然后从中挑选符合载体要求的序列，将其引入siRNA表达载体。 慢病毒载体
包装操作规范.doc
包装操作规范 一、目的 制定标准的包装操作规范，使货物包装后所起的效果最大化。 二、范围 仓储组全体工作人员。 三、岗位/权责 1. 仓储经理权责：不断优化包装操行规范，使货物包装后所起的 效果最大化。 2. 仓储主管权责：严格监督包装人员的《包装操作规范》，同时 对于包装操作规范的优化提出合理建议。 3. 包装人员：熟知各类产品的包装操作规范，熟练掌握各项包装 技能，完全执行《包装操作规范》。 四、流程 1. 一般货物包装规范： 1.1 客户交运的货物提供纸箱外包装。 A. 规定纸箱包装后的长度不得小于25厘米，宽度不得小 于15厘米，高度不得小于10厘米，若不符合以上要 求，则须另加符合要求的纸箱外包装。 B. 每件货物的纸箱边、角、封封口等处必须全部封闭， 以防止货物在装卸运输过程中掉漏而导致货物遗失或 偷盗；若未达到标准必须加封粘贴封箱带，封箱带的
宽度必须大于各开口、接口处缝隙的5倍以上，使纸 箱各接口点全部封闭。 C. 纸箱货物外包装必须用公司塑制打包带加固，小件货 物（单件重量小于8公斤）每件两根打包带交叉加固 （十字型）；大件货物（单件重量大于8公斤，小于30 公斤），打“井”字型的包装带。 D. 单件外形尺寸大于0.8立方米的货物，必须在原有外 包装基础上，底部添加大托盘以便于运输过程中装卸、 搬运。 E. 对于商品价值特别高的货物，外包装各边角须加角条， 保证其纸箱外包装在打包带紧固时不变形，从而保护 商品和商品包装。 F. 对某些特殊类电子产品或贵重物品（如手机、电脑、 打印机等），为防止偷盗或避免一些不必要的检查，须 对外包装进行中性化；使用不透明塑料薄膜、编织袋 等包装材料加以掩盖，甚至使用公司定制中性纸箱另 加包装以达到对外包装中性化。 1.2 客户交运的货物未提供纸箱外包装。 A. 根据货物的具体形状、尺寸、重量等因素，使用相应规 格的纸箱进行包装，并在内部添加避震填充材料，使货 物不串动以起到保护商品、方便运输的作用。 B. 货物包装的内部填充材料，可根据不同货物特性选用相