微管实验protocol中文版

流式protocol

收获P3代生长状态良好细胞，0.25%胰酶消化，4 ℃离心，1 000 r/min，5 min。 ↓ 用PBS(含1%BSA)清洗细胞3次，计数细胞。 ↓ 各管依次加入单克隆抗体CD29、CD34、CD45、CD90。 ↓ 同时每管样品设立同型阴性对照。 ↓ 避光冰上孵育45 min。 ↓ 用PBS(含1%BSA)洗涤细胞3次，以除去未结合抗体，用500 μL PBS(含1%BSA)重悬细胞，流式细胞仪进行检测分析。（四个CD抗原分子，四个阴性对照，一个空白对照。九个EP管）细胞一定要足够量，一般要求1×106个细胞。对于直接标记单色样本，应该设置空白对照、阴性对照（同型抗体对照）和待测样本。对于直接标记多色样本，在单色基础上另加补偿对照。阴性对照的设置：在实验过程中，假设做直接标记法，可将实验组细胞，取一管，加上与实验抗体所标记的荧光颜色相同的同型对照来作为阴性对照。空白对照：即不进行任何标记的细胞。但是我们买的是pe和fitc荧光标记的抗体，那一管样品内可以同时加两中不同标记的抗体，那它们的同型对照怎么设置？我们的样品可以放在EP管里面吗？检测时，样品至少需要多少量？取第3代第3～5d BMSCs，胰蛋白酶-EDTA消化成为单细胞悬液； ↓ PBS（1到2ml）洗三次，离心，1000rpm，5min弃液； ↓ 4%多聚甲醛1ml室温下固定40min，1000r/min,离心5min后弃去上清液 ↓ PBS（1到2ml）洗两次，离心，1000rpm，5min弃液； ↓ 分别加入500ul已经稀释的大鼠CD29、CD34、CD45及CD90单克隆抗体； ↓ 避光孵育30min ↓ 用PBS洗涤细胞两次，以除去未结合抗体； ↓ 用PBS重悬细胞，流式细胞仪进行检测分析。 PBS洗涤细胞的过程中细胞丢失？

13 ADAMS_CAR模块详细实例教程(柔性体篇)

13柔性体介绍 (253) 13.1柔性体引入ADAMS建模 (253) 13.1.1打开原有的X5后悬架模板 (253) 13.1.2将小连杆的模态中性文件导入ADAMS (254) 13.2利用Hyper Mesh及Motion View软件来生成模态中性文件MNF (256) 13.2.1创建小连接杆的CAD模型 (256) 13.2.2将iges格式文件导入到Hyper Mesh划分网格 (257) 13.2.3创建材料 (268) 13.2.4创建刚性单元 (273) 13.2.5给刚性中心节点编号 (282) 13.2.6导出nastran模板格式文件 (283) 13.2.7创建h3d文件及MNF文件 (284) 252

《柔性体篇》 13柔性体介绍在模型中引入柔性体可以提高仿真的精度。柔性体可采用模态中性文件（MNF）来描述。该文件是一个二进制文件，包含了以下信息：几何信息（结点位置及其连接）；结点质量和惯量；模态；模态质量和模态刚度。可以利用ANSYS、NASTRAN、ABAQUS等限元软件包进行分析并将结果写成模态中性文件，输入到ADAMS/View或ADAMS/Car中，建立相应零件的柔性体。 13.1柔性体引入ADAMS建模在模型中引入柔性体首先要在ADAMS/Car中读入模态中性文件，然后ADAMS/Car会创建必要的几何实体用以显示柔性体。然后在模型中与其它刚体部件之间施加约束。本教程以后悬架的小连接板为例。 13.1.1打开原有的X5后悬架模板 253

13.1.2将小连杆的模态中性文件导入ADAMS 在ADAMS/Car中读入模态中性文件的过程如下： Parts>Flexible Body>New 1）从Build菜单中选择设定对话框如下，在Left Modal Neutral File和Right Modal Neutral File里右击鼠标选择自己已经创建好的MNF文件，点击OK。 254

Wireshark抓包实验报告.

第一次实验：利用Wireshark软件进行数据包抓取 1.3.2 抓取一次完整的网络通信过程的数据包实验一，实验目的：通过本次实验，学生能掌握使用Wireshark抓取ping命令的完整通信过程的数据包的技能，熟悉Wireshark软件的包过滤设置和数据显示功能的使用。二，实验环境：操作系统为Windows 7,抓包工具为Wireshark. 三，实验原理： ping是用来测试网络连通性的命令，一旦发出ping命令，主机会发出连续的测试数据包到网络中，在通常的情况下，主机会收到回应数据包，ping采用的是ICMP协议。四，验步骤： 1.确定目标地址：选择https://www.360docs.net/doc/ef8890142.html,作为目标地址。 2.配置过滤器：针对协议进行过滤设置，ping使用的是ICMP协议，抓包前使用捕捉过滤器，过滤设置为icmp,如图 1- 1

图 1-1 3.启动抓包：点击【start】开始抓包，在命令提示符下键入ping https://www.360docs.net/doc/ef8890142.html,, 如图 1-2

图 1-2 停止抓包后，截取的数据如图 1-3 图 1-3 4，分析数据包：选取一个数据包进行分析，如图1- 4

图1-4 每一个包都是通过数据链路层DLC协议，IP协议和ICMP协议共三层协议的封装。DLC协议的目的和源地址是MAC地址，IP协议的目的和源地址是IP地址，这层主要负责将上层收到的信息发送出去，而ICMP协议主要是Type和Code来识别，“Type:8,Code：0”表示报文类型为诊断报文的请求测试包，“Type:0,Code:0”表示报文类型为诊断报文类型请正常的包。ICMP提供多种类型的消息为源端节点提供网络额故障信息反馈，报文类型可归纳如下：（1）诊断报文（类型：8，代码0；类型：0代码：0）； (2）目的不可达报文（类型：3，代码0-15）；（3）重定向报文（类型：5，代码：0--4）；（4）超时报文（类型：11，代码：0--1）；（5）信息报文（类型：12--18）。

(完整版)泛素化蛋白检测方法

泛素化蛋白检测方法蛋白质泛素化简介蛋白质泛素化修饰过程在人体免疫系统调节过程中起到了关键性的作用。与磷酸化修饰过程一样，泛素化修饰过程也是一种可逆的共价修饰过程，它能够调节被修饰蛋白的稳定性、功能活性状态以及细胞内定位等情况。泛素蛋白是一个由76 个氨基酸残基组成的非常保守的多肽，它能在E1、E2、E3 酶等一系列酶促反应催化下与细胞内靶蛋白上的一个或多个赖氨酸残基发生共价连接。泛素蛋白本身也含有7 个赖氨酸残基，因此它们之间也可以通过这些位点互相连接，形成多泛素蛋白链（polyubiquitin chain）。目前研究显示，如果多泛素蛋白链与被修饰蛋白上的第48 位赖氨酸残基相连，会介导靶蛋白进入蛋白酶体而被降解；如果与被修饰蛋白上其它位点，比如第63 位赖氨酸残基相连，则靶蛋白可以发挥信号通路功能而不会被降解。与磷酸化修饰途径一样，泛素化修饰途径也是可逆的，即可以通过去泛素化酶（DUB ）将泛素蛋白修饰物去除掉。靶蛋白经泛素化途径修饰之后，连接在靶蛋白上的泛素蛋白单体或多聚体可以被各种泛素蛋白结合结构域（UBD ）所识别和结合。人类蛋白质组中含有两种E1酶、50种E2酶、600种E3酶、90 种DUB 酶和20 种UBD ，这说明泛素修饰途径在细胞调控中起到了多么重要的作用。E3 酶是泛素修饰途径中决定底物特异性的关键酶，它可以分为两大类，即含有HECT 结构域的E3 酶和其它含有RING 结构域或RING 样结构域（比如U-box 或PHD 结构域）的E3 酶。这两种E3 酶都在免疫调控过程中起到了关键性的作用。蛋白质泛素化的检测方法研究蛋白质的泛素化首先需要明确的三个基本点：哪些蛋白发生了泛素化；发生了泛素化的蛋白质，具体是哪个位点的赖氨酸残基发生了泛素化；进行定量。明确了上述几点后，进一步需要弄清楚的是，我们感兴趣的泛素化蛋白，是如何发生泛素化的，影响这一泛素化过程的关键分子是什么？或者说这一过程中的E3 酶是什么？然后需要研究的是，这一蛋白质发生泛素化之后可以产生那些分子效应？对下游

【Adams应用教程】第10章ADAMS参数化建模及优化设计

第10章 ADAMS参数化建模及优化设计

本章将通过一个具体的工程实例，介绍ADAMS/View的参数化建模以及ADAMS/View 提供的3种类型的参数化分析方法：设计研究(Design study)、试验设计(Design of Experiments, DOE)和优化分析(Optimization)。其中DOE是通过ADAMS/Insight来完成，设计研究和优化分析在ADAMS/View中完成。通过本章学习，可以初步了解ADAMS参数化建模和优化的功能。 10.1 ADAMS参数化建模简介 ADAMS提供了强大的参数化建模功能。在建立模型时，根据分析需要，确定相关的关键变量，并将这些关键变量设置为可以改变的设计变量。在分析时，只需要改变这些设计变量值的大小，虚拟样机模型自动得到更新。如果，需要仿真根据事先确定好的参数进行，可以由程序预先设置好一系列可变的参数，ADAMS自动进行系列仿真，以便于观察不同参数值下样机性能的变化。进行参数化建模时，确定好影响样机性能的关键输入值后，ADAMS/View提供了4种参数化的方法：（1）参数化点坐标在建模过程中，点坐标用于几何形体、约束点位置和驱动的位置。点坐标参数化时，修改点坐标值，与参数化点相关联的对象都得以自动修改。（2）使用设计变量通过使用设计变量，可以方便的修改模型中的已被设置为设计变量的对象。例如，我们可以将连杆的长度或弹簧的刚度设置为设计变量。当设计变量的参数值发生改变时，与设计变量相关联的对象的属性也得到更新。（3）参数化运动方式通过参数化运动方式，可以方便的指定模型的运动方式和轨迹。（4）使用参数表达式使用参数表达式是模型参数化的最基本的一种参数化途径。当以上三种方法不能表达对象间的复杂关系时，可以通过参数表达式来进行参数化。参数化的模型可以使用户方便的修改模型而不用考虑模型内部之间的关联变动，而且可以达到对模型优化的目的。参数化机制是ADAMS中重要的机制。 10.2 ADAMS参数化分析简介参数化分析有利于了解各设计变量对样机性能的影响。在参数化分析过程中，根据参数化建模时建立的设计变量，采用不同的参数值，进行一系列的仿真。然后根据返回的分析结果进行参数化分析，得出一个或多个参数变化对样机性能的影响。再进一步对各种参数进行优化分析，得出最优化的样机。ADAMS/View提供的3种类型的参数化分析方法包括：设计研究(Design study)、试验设计(Design of Experiments, DOE)和优化分析(Optimization)。 10.2.1 设计研究(Design study) 在建立好参数化模型后，当取不同的设计变量，或者当设计变量值的大小发生改变时，仿真过程中，样机的性能将会发生变化。而样机的性能怎样变化，这是设计研究主要考虑的内容。在设计研究过程中，设计变量按照一定的规则在一定的范围内进行取值。根据设计变

wireshark抓包分析实验报告

Wireshark抓包分析实验若惜年一、实验目的： 1.学习安装使用wireshark软件，能在电脑上抓包。 2.对抓出包进行分析，分析得到的报文，并与学习到的知识相互印证。二、实验内容：使用抓包软件抓取HTTP协议通信的网络数据和DNS通信的网络数据，分析对应的HTTP、TCP、IP协议和DNS、UDP、IP协议。三、实验正文： IP报文分析：从图中可以看出： IP报文版本号为:IPV4 首部长度为:20 bytes 数据包长度为:40 标识符：0xd74b 标志：0x02 比特偏移：0 寿命：48 上层协议：TCP 首部校验和：0x5c12 源IP地址为：119.75.222.18 目的IP为：192.168.1.108

从图中可以看出：源端口号：1891 目的端口号：8000 udp报文长度为：28 检验和：0x58d7 数据长度：20 bytes UDP协议是一种无需建立连接的协议，它的报文格式很简单。当主机中的DNS 应用程序想要惊醒一次查询时，它构造一个DNS查询报文段并把它给UDP，不需要UDP之间握手，UDP为报文加上首部字段，将报文段交给网络层。

第一次握手：从图中看出：源端口号：56770 目的端口号：80 序列号为:0 首部长为: 32 bytes SYN为1表示建立连接成功当fin为1时表示删除连接。

第二次握手：从图中看出：源端口号是：80 目的端口号为：56770 序列号为：0 ack为：1 Acknowledgement为1表示包含确认的报文Syn为1表示建立连接。

第三次握手：从图中看出：源端口：56770 目的端口：80 序列号为：1 ACK为：1 首部长为：20bytes Acknowledgement为1表示包含确认的报文所以，看出来这是TCP连接成功了 Tcp是因特网运输层的面向连接的可靠的运输协议，在一个应用进程可以开始向另一个应用进程发送数据前，这两个进程必须先握手，即它们必须相互发送预备文段，建立确保传输的参数。

蛋白质泛素化研究进展—探索蛋白修饰的秘密

蛋白质泛素化研究进展——探索蛋白修饰的秘密泛素是一种含76个氨基酸的多肽，存在于除细菌外的许多不同组织和器官中，具有标记待降解蛋白质的功能。被泛素标记的蛋白质在蛋白酶体中被降解。由泛素控制的蛋白质降解具有重要的生理意义，它不仅能够清除错误的蛋白质，还对细胞周期调控、DNA修复、细胞生长、免疫功能等都有重要的调控作用。 2004年，以色列科学家Aaron Ciechanover、Avram Hershko和美国科学家Irwin Rose就因发现泛素调节的蛋白质降解而被授予2004年诺贝尔化学奖。正是因为泛素调节的蛋白质降解在生物体中如此重要，因而对它的开创性研究也就具有了特殊意义。目前，在世界各地的很多实验室中，科学家不断发现和研究与这一降解过程相关的细胞新功能。现在，研究人员已发现泛素具有多种非蛋白水解功能，包括参与囊泡转运通路、调控组蛋白修饰以及参与病毒的出芽过程等。鉴于蛋白质降解异常与许多疾病，例如癌症、神经退行性病变以及免疫功能紊乱的发生密切相关，而基因的功能是通过蛋白质的表达实现的，因此，泛素在蛋白质降解中的作用机制如能被阐明将对解释多种疾病的发生机制和遗传信息的调控表达有重要意义。《生命奥秘》本月专题将介绍泛素系统的来源、研究进展，并重点介绍以“泛素-蛋白酶”为靶位的抗癌疗法，希望能给相关领域的研究人员带来崭新的思路。一、泛素样蛋白的来源及功能 1. 泛素样蛋白及其相关蛋白结构域 2. 泛素样蛋白连接后的结果 3. 泛素样蛋白修饰途径的起源 4. 前景展望二、泛素化途径与人体免疫系统调节 1. 泛素修饰途径与NF-κB信号通路的关系 2. 泛素蛋白在天然免疫中的作用 3. 泛素化修饰途径在获得性免疫机制中的作用

植物(拟南芥水稻)原位杂交详细protocol试验方法

植物材料的固定、包埋和制片一、植物材料的固定和包埋在此过程应注意避免Rnase的污染。所使用的熔蜡管（管盖不能耐受180℃烘，只需高压湿热灭菌即可）、量筒、三角瓶和药勺均需180℃烘5小时以上。所用蒸馏水无需用DEPC处理。所固定的材料越小越好，尽可能切除多余的材料。材料取下后应立即固定。取材后若不能立即固定，则应置于冰上运输。配试剂前请计算一下所需用量，用多少配多少，节约试剂。 300 ml量为例） 1、先打开一个60℃左右的水浴锅。 2、在通风橱中往三角瓶中加入12 g多聚甲醛(终浓度为4%)。 3、用量筒配300 ml PBS缓冲液（30 ml 10×PBS+270 ml水），另加1粒NaOH，盖好锡箔纸后，轻轻摇动，稍微溶化后置于水浴锅中溶解。 4、完全溶解后，取出，加0.1% Tween-20 (300 ul)和0.1% Triton(300 ul)混匀（包埋水稻时还要再加3 ml 25%的戊二醛）。 5、置于冰上或4℃冰箱降至室温，然后用硫酸调pH 至7.0。 6、把配制好的甲醛溶液分装到小瓶中，（一般用10 ml的小瓶）。 7、分装好的甲醛溶液应放置在冰浴中当天使用。二、固定材料 1、取植物新鲜材料，去除不需要的部分至适当大小。注意：所固定的材料越小越好，尽可能去除无用多余的部分。 2、把取好材料放入冰浴的装有甲醛溶液的小瓶中。注意每瓶中的切块数：太多固定不好；太少则浪费固定液（固定液:材料≥20:1）。 3、材料放入固定液后，应通过抽真空（1至数分钟，视具体情况而定：尽可能短时间，以材料沉入固定液中为准），帮助固定液进入组织中，以达到迅速固定植物材料的目的。抽气减压时，尽量不要使液体过分沸腾。抽真空时，材料一般在固定液中浮起；抽完真空的材料应该沉入固定液中，有时可能要反复多次抽真空，直至材料沉没在固定液中。一般抽真空多于5分钟大部份材料还不沉没在固定液中的情况极少见，如果此情况发生，建议抽真空达10分钟后，继续做步骤4。 4、抽真空后需要更换一次新鲜的固定液。 5、更换新鲜固定液后，材料在4℃过夜。注意：甲醛有剧毒，因此药品的称取和溶液的配置必须在通风橱中进行！多聚甲醛极易飞散；称取时通风橱可暂不抽风；要避免将多聚甲醛洒落在天平或台面上造成污染，如有洒落，要及按以下序列对材料进行脱水（水为高压灭过菌的双蒸水）。 0.85% NaCl 冰浴，30 分钟 2、50%乙醇/0.85% NaCl 冰浴，5 小时 3、70%乙醇/0.85% NaCl 冰浴，5 小时 4、85%乙醇/0.85% NaCl 4℃，过夜 50%乙醇后，材料应开始脱色。 /水 4℃，5小时 2、100%乙醇 4℃，5小时 3、100%乙醇 4℃，过夜注：第三天起，每个脱水步骤时间可延长至一天。两次100%乙醇脱水后，材料应为无色。

计算机网络实验Wireshark

计算机网络实验指导书

目录实验一Wireshark的安装与使用 (3) 实验二使用Wireshark分析以太网帧与ARP协议 (7) 实验三使用Wireshark分析IP协议 (11) 实验四利用Wireshark分析ICMP (19) 实验五使用Wireshark分析UDP协议 (25) 实验六使用Wireshark分析TCP协议 (29) 实验七利用Wireshark分析协议HTTP (35) 实验八利用Wireshark分析DNS协议 (40) 实验九使用Wireshark分析FTP协议(选作) (44) 实验十使用Wireshark分析SMTP与POP3协议(选作) (48)

实验一Wireshark的安装与使用一、实验目的 1、熟悉并掌握Wireshark的基本使用; 2、了解网络协议实体间进行交互以及报文交换的情况。二、实验环境与因特网连接的计算机,操作系统为Windows,安装有Wireshark、IE等软件。三、预备知识要深入理解网络协议,需要观察它们的工作过程并使用它们,即观察两个协议实体之间交换的报文序列,探究协议操作的细节,使协议实体执行某些动作,观察这些动作及其影响。这种观察可以在仿真环境下或在因特网这样的真实网络环境中完成。观察正在运行的协议实体间交换报文的基本工具被称为分组嗅探器(packet sniffer),又称分组捕获器。顾名思义,分组嗅探器捕获(嗅探)您的计算机发送与接收的报文。图1显示了一个分组嗅探器的结构。图1 图1右边就是计算机上正常运行的协议与应用程序(如:Web浏览器与FTP客户端)。分组嗅探器(虚线框中的部分)主要有两部分组成:第一就是分组捕获器,其功能就是捕获计算机发送与接收的每一个链路层帧的拷贝;第二个组成部分就是分组分析器,其作用就是分析并显示协议报文所有字段的内容(它能识别目前使用的各种网络协议)。 Wireshark就是一种可以运行在Windows, UNIX, Linux等操作系统上的分组嗅探器,就是一个开源免费软件,可以从、wireshark、org下载。

清华大学实验动物研究和使用计划(AnimalProtocol)(201312

清华大学实验动物研究及使用计划（Animal Protocol）（201312版）此处供IACUC使用：研究计划编号批准日期终止日期 1)为节省审批时间和节约纸张，请首先e-mail本申请书电子版至清华大学实验动物使用与管理委员会（IACUC）工作邮箱（lac@https://www.360docs.net/doc/ef8890142.html,）。 2)接收后将由IACUC秘书进行格式审查，假如符合要求，将递交给IACUC委员会所有成员进行审阅。IACUC秘书将收集修改意见反馈给申请者。时间间隔一般为2周。 3)研究计划被批准后，PI签字后正式生效。请递交一式一份纸质版到实验动物中心1182房间订购动物。 A.管理信息：□初次申请□3年复审，请填写已有的研究计划号：（）列出在本计划中所有动物实验操作人员：注：职责可为：课题设计、主要操作、辅助操作、手术操作、小鼠管理等列出每个人相对于职责，已有的实验经验和资格 B.研究或教学的目的：以一般非生物医学背景人员为对象，简述研究目的，以及对人类或动物的健康与解决的科学问题。一般只需要以非科学术语描述做什么以及做这个实验的必要性。 C.危险试剂或感染性试剂： □本计划不使用任何有害物质 □本计划使用有害物质，假如使用危险试剂的使用需要取得清华大学生物安全委员会的认可。危险试剂包括下列几个范畴： □1. 放射性性物质□2. 致癌物/致突变物□3. 感染物质□4. 重组DNA □5. 肿瘤等细胞系□6. 组织或抗血清□7.其他有害物质 1.请详细描述具体的试剂名称、拟使用剂量，以及给药或使用方式： 2. 请详细描述对人或动物的潜在毒性、并简述安全操作和处理受污染动物及材料的方法及程序：

ADAMS_实例教程--中文01

英文资料翻译：MSC.ADAMS/View使用入门 MSC.ADAMS/View 使用入门练习欢迎浏览MSC.Software的网址美国总部：https://www.360docs.net/doc/ef8890142.html, 中国办事处：https://www.360docs.net/doc/ef8890142.html,

目录第一章弹簧挂锁设计问题介绍总论--------------------------------------------------------------------------------1 你将学习的内容----------------------------------------------------------------------1 你将创建的模型----------------------------------------------------------------------2 设计要求------------------------------------------------------------------------3 弹簧挂锁的工作原理--------------------------------------------------------------3 第二章建模总论--------------------------------------------------------------------------------5 建造曲柄和手柄----------------------------------------------------------------------5 启动ADAMS/View并建立一个新的数据文件-------------------------------------------6 熟悉ADAMS/View的界面 ----------------------------------------------------------6 设置工作环境--------------------------------------------------------------------7 创建设计点----------------------------------------------------------------------8 建造曲柄（pivot）---------------------------------------------------------------9 重新命名曲柄（pivot）-----------------------------------------------------------9 建造手柄（handle）--------------------------------------------------------------9 用转动副连接各个构件------------------------------------------------------------9 模拟模型的运动-----------------------------------------------------------------10 观察参数化的效果---------------------------------------------------------------10 建造钩子（Hook）和连杆（Slider）---------------------------------------------------10 建造钩子和连杆-----------------------------------------------------------------11 用铰链连接各构件---------------------------------------------------------------12 模型运动仿真-------------------------------------------------------------------12 存储你的数据文件-------------------------------------------------------------------12 第三章测试初始模型总论-------------------------------------------------------------------------------13 生成地块(Ground Block)-------------------------------------------------------------14 加一个Inplane 虚约束---------------------------------------------------------------14 加一个拉压弹簧---------------------------------------------------------------------15 加一个手柄力-----------------------------------------------------------------------15 弹簧力的测试-----------------------------------------------------------------------16 角度测试---------------------------------------------------------------------------17 生成一个传感器---------------------------------------------------------------------18 存储模型---------------------------------------------------------------------------18 模型仿真---------------------------------------------------------------------------18 第四章验证测试结果总论-------------------------------------------------------------------------------20 输入物理样机试验数据---------------------------------------------------------------20 用物理样机试验数据建立曲线图-------------------------------------------------------21 编辑曲线图-------------------------------------------------------------------------22 用仿真数据建立曲线图---------------------------------------------------------------22 存储模型--------------------------------------------------------------------------23

自噬与泛素化蛋白降解途径的分子机制及其功能

HEREDITAS (Beijing) 2012年1月, 34(1): 5―18 ISSN 0253-9772 https://www.360docs.net/doc/ef8890142.html, 综述收稿日期: 2011?06?03; 修回日期: 2011?08?19 基金项目:转基因生物新品种培育重大专项(编号：2009ZX08009-148B)资助作者简介:陈科, 博士研究生, 研究方向：动物发育遗传学。E-mail: chenke@https://www.360docs.net/doc/ef8890142.html, 通讯作者:周荣家, 教授, 博士生导师, 研究方向：动物发育遗传学。E-mail: rjzhou@https://www.360docs.net/doc/ef8890142.html, 网络出版时间: 2011-8-24 11:11:40 URL: https://www.360docs.net/doc/ef8890142.html,/kcms/detail/11.1913.R.20110824.1111.004.html DOI: 10.3724/SP.J.1005.2012.00005 自噬与泛素化蛋白降解途径的分子机制及其功能陈科, 程汉华, 周荣家武汉大学生命科学学院, 武汉 430072 摘要: 细胞内所有的蛋白质和大多数的细胞外蛋白都在不断的进行更新, 即它们在不断地被降解, 并被新合成的蛋白质取代。细胞内蛋白的降解主要通过两个途径, 即自噬和泛素蛋白酶体系统。自噬是一种由溶酶体介导的细胞内过多或异常蛋白质的降解机制。在细胞内主要有3种类型的自噬, 即分子伴侣介导的自噬、微自噬和巨自噬。泛素蛋白酶体系统是由泛素介导的一种高度复杂的蛋白降解机制, 它参与降解细胞内许多蛋白质并且这个过程具有高度特异性。细胞内蛋白质的降解参与调节许多细胞过程, 包括细胞周期、DNA 修复、细胞生长和分化、细胞质量的控制、病原生物的感染反应和细胞凋亡等。许多严重的人类疾病被认为是由于蛋白质降解系统的紊乱而引起的。文章综述了自噬和泛素化途径及其分子机制, 以及蛋白质降解系统紊乱的病理学意义。关键词: 蛋白质降解; 自噬; 泛素蛋白酶体系统 Molecular mechanisms and functions of autophagy and the ubiq-uitin-proteasome pathway CHEN Ke, CHENG Han-Hua, ZHOU Rong-Jia Life Science College , Wuhan University , Wuhan 430072, China Abstract: All proteins in eukaryotic cells are continually being degraded and replaced. Autophagy and the ubiq-uitin-proteasome system are two mechanisms for intracellular protein degradation. Autophagy is mediated by lysosome, and is further divided into chaperone-mediated autophagy, microautophagy and macroautophagy. The ubiquitin-proteasome system is highly complex and mediated by ubiquitin, which participates in intracellular protein degradation in a specific manner. It is now known that degradation of intracellular proteins is involved in regulation of a series of cellular processes, including cell-cycle division, DNA repair, cell growth and differentiation, quality control, pathogen infection, and apoptosis. The aberrations in the protein degradation systems are involved in many serious human diseases. The present review sum-marizes the mechanisms of protein degradation and related human diseases. Keywords: protein degradation; autophagy; ubiquitin-proteasome system 细胞内所有的蛋白质和大多数的细胞外蛋白都在不断的进行更新, 即它们在不断地被降解和被新合成的蛋白质取代。虽然不断降解细胞内的蛋白似乎很浪费, 但是这个过程在功能上却是非常重要

AFLP实验流程protocol(精)

AFLP实验流程protocol Step1 DNA提取（DNA extraction） Using CTAB method （这个我们现在都是用试剂盒提取了，不知道你们用什么提取，还是发给你，AFLP对DNA纯度和浓度的要求很高，CTAB很难满足这个要求，尤其是纯度要求） 1.裂解液的制备：检查水浴锅是否有水，打开设温65℃，将CTAB母液预热溶解，按照每管1ml的体积取CTAB母液，加入3％PVP（即0.03g/管），加热溶解，使用前．．．加入1～2％β-巯基乙醇（即10～20μl/管） 2.取样：称取0.02~0.025g（即20~30mg）硅胶干燥的样品，放入fastprep管中，做好标记。※NOTE：样品在放入管中时，挑取幼嫩的叶片，尽量不要将叶脉等维管组织放入，切误将一个管中的样品溅入另一个管中。 3.打碎：将称好的样品放入fastprep打碎机中打碎，speed 5.0 time 30s, 取出加入制备好的 CTAB裂解缓冲液800μl/管，（※NOTE：裂解液的体积应该在fastprep管的一半以上，注意盖好管冒，防止裂解液在打碎和裂解的时候溢出。），混匀，使裂解液和样品充分接触，再打一次speed 5.0 time 30s。 4.裂解：水浴65℃，1h，注意在裂解的过程中每隔10min要混匀一次，（※NOTE：越到裂解的后期动作越要温和，防止DNA剪切破碎。） 5.抽提：取出水浴样品，冷却至室温．．．．．，加入-20℃等体积（800μl/管）氯仿：异戊醇（24： 1），手摇晃混合均匀．．．．．．．，离心：室温，12000r/min，10min。 6.再次抽提：取上层液体约550μl，（※NOTE：尽量少取，不要将杂质一并取出）转入一个灭菌1.5ml离心管中，做好标记，加入等体积加入－20℃等体积（800μl/管）氯仿：异戊醇（24：1），手摇晃混合均．．．．．．匀．，离心：4℃，14000r/min，10min。 7.初沉：取上清约。。。μl，转入一个灭菌1.5ml离心管中，做好标记，加入4℃ 0.1倍体积NaAc （3mol/L pH 5.2）,-20℃ 0.6倍体积异丙醇，-20℃沉淀40min，离心：4℃，12000r/min，10min。 8.干燥：弃上清，用小枪头吸干，在超经工作台中倒置干燥40min。打开水浴锅37℃水浴锅，预热TE。 9.除RNA： 10.抽提RNAse 11.再沉 12.洗涤 13.干燥 14.溶解 15.检测 Using 试剂盒

Adams柔性体例子—机器人Adams虚拟实验详细步骤

一.ADAMS软件简介 (2) 1.1ADAMS软件概述 (2) 1.2用户界面模块（ADAMS/View） (3) 1.3求解器模块（ADAMS/Solver） (5) 1.4后处理模块（ADAMS/PostProcessor） (6) 1.5控制模块（ADAMS/Controls） (8) 二.典型机器人虚拟实验 (9) 2.1串联机器人 (9) 2.1.1 运动学分析 (9) 2.1.2 动力学分析 (14) 2.1.3 轨迹规划 (17) 2.1.4 基于ADAMS和MATLAB的联合运动控制 (22)

一.ADAMS软件简介虚拟样机仿真分析软件ADAMS（Automatic Dynamic Analysis of Mechanical Systems）是对机械系统的运动学与动力学进行仿真的商用软件，由美国MDI （Mechnical Dynamics Inc.）开发，在经历了12个版本后，被美国MSC公司收购。ADAMS集建模、计算和后处理于一体，ADAMS有许多个模块组成，基本模块是View模块和Postprocess模块，通常的机械系统都可以用这两个模块来完成，另外在ADAMS中还针对专业领域而单独开发的一些专用模块和嵌入模块，例如专业模块包括汽车模块ADAMS/Car、发动机模块ADAMS/Engine、火车模块 ADAMS/Rail、飞机模块ADAMS/Aircraft等；嵌入模块如振动模块 ADAMS/Vibration、耐久性模块ADAMS/Durability、液压模块ADAMS/Hydraulic、控制模块ADAMS/Control和柔性体模块ADAMS/AutoFlex等[3]。 1.1ADAMS软件概述 ADAMS是以计算多体系统动力学（Computational Dynamics of Multibody Systems）为基础，包含多个专业模块和专业领域的虚拟样机开发系统软件，利用它可以建立复杂机械系统的运动学和动力学模型，其模型可以是刚体的，也可以是柔性体，以及刚柔混合体模型。如果在产品的概念设计阶段就采取ADAMS进行辅助分析，就可以在建造真实的物理样机之前，对产品进行各种性能测试，达到缩短开发周期、降低开发成本的目的。 ADAMS，即机械系统动力学自动分析（Automatic Dynamic Analysis of Mechanical Systems）该软件是美国MDI公司（Mechnical Dynamics Inc.）开发的虚

wireshark 实验 HTTP

Wireshark Lab: HTTP Version: 2.0 (Sept. 2009) ? 2009 J.F. Kurose, K.W. Ross. All Rights Reserved Computer Networking: A Top- down Approach, 5th edition . Having gotten our feet wet with the Wireshark packet sniffer in the introductory lab, we’re now ready to use Wireshark to investigate protocols in operation. In this lab, we’ll explore several aspects of the HTTP protocol: the basic GET/response interaction, HTTP message formats, retrieving large HTML files, retrieving HTML files with embedded objects, and HTTP authentication and security. Before beginning these labs, you might want to review Section 2.2 of the text. 1. The Basic HTTP GET/response interaction Let’s begin our exploration of HTTP by downloading a very simple HTML file - one that is very short, and contains no embedded objects. Do the following: 1. Start up your web browser. 2. Start up the Wireshark packet sniffer, as described in the Introductory lab (but don’t yet begin packet capture). Enter “http” (just the letters, not the quotation marks) in the display-filter-specification window, so that only captured HTTP messages will be displayed later in the packet-listing window. (We’re only interested in the HTTP protocol here, and don’t want to see the clutter of all captured packets). 3. Wait a bit more than one minute (we’ll see why shortly), and then begin Wireshark packet capture. 4. Enter the following to your browser https://www.360docs.net/doc/ef8890142.html,/wireshark-labs/HTTP-wireshark-file1.html Your browser should display the very simple, one-line HTML file. 5. Stop Wireshark packet capture. Your Wireshark window should look similar to the window shown in Figure 1. If you are unable to run Wireshark on a live network connection, you can download a packet trace that was created when the steps above were followed.1 1 Download the zip file https://www.360docs.net/doc/ef8890142.html,/wireshark-labs/wireshark-traces.zip and extract the file http-ethereal-trace-1. The traces in this zip file were collected by Wireshark running on one of the author’s