实验五_氢化可的松的抗炎作用及机制探讨
机能实验学
南方医科大学本科专业教学大纲机能实验学Functional Experimentation基础医学专业临床医学专业医学实验技术专业等医学相关专业执笔人：李明，金春华审定人：金春华学院负责人：冯天元南方医科大学教务处二○○六年十二月课程代码：B010010 (机能实验学一)/ B010011 (机能实验学二)一、课程简介机能实验学是一门主要研究机体功能变化规律的实验课程，主要涉及生理学、病理生理学和药理学这三门课程的实验内容，从正常-病理状态-药物影响三个不同角度系统地观察和探讨机体器官功能的变化规律。
教学的基本要求和目的是使学生学习和了解生理学、病理生理学和药理学这三门课程的经典实验内容，比较系统地学习和掌握以生理实验技术为基础的各种动物实验知识和操作技能，学习和模拟科研的基本过程，初步培养学生的综合实验能力和创新思维能力。
本课程的先修课程是解剖学、组织胚胎学、生理学、病理学、病理生理学、药理学、统计学等课程。
后续课程为诊断学及临床课程。
本课程适用基础医学、临床医学、医学实验技术、中医药学及其它医学相关专业。
教学时数为100学时，分成第四、第五两个学期上课，分别称为机能实验学(一)和机能实验学(二)。
第四学期主要上基础性实验，42学时，1.5学分；第五学期主要上综合性和探索性实验，58学时，1.5学分。
“Functional Experimentation” is an integrated experimental course with 3 credits and 100 class hours for the undergraduate students who are major in medicine-related subjects. The contents of the course consists of three levels of experiments, e.g. the basic and classical experiments of physiology, pathophysiology and pharmacology, the integrated experiments from those subjects and the self-designed experiments by students themselves. The aims of the course is to train the students to have a good command of the common animal experimental techniques and methods for determining the organ and system functions in animals, so as to enhance their experimental skills remarkably and study the research principles and methods to cultivate their preliminary innovative idea in medical science research.二、教学内容与要求本课程主要包括三部分的内容：第一部分，介绍实验基本知识、技术和方法。
实验一 硝酸士的宁D50的测定
实验一药理实验基础知识一、目的1.掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；2.更好地掌握药理学基本理论知识；3.培养科学思维二、基本要求1.实验前：预习实验内容并复习相关理论知识；2.实验时⑴实验器材要妥善保管；⑵实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录；⑶注意节约实验药品；⑷维持良好的课堂纪律。
3.实验后⑴各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室；⑵值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所；⑶书写实验报告。
三、实验报告的书写1.题目2.目的3.原理4.材料：实验动物，器材，药品5.方法：用自己的语言简单扼要描述出来；6.结果：要求真实、清楚；7.讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；8.结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。
四、实验设计基本原则1.随机原则使每一实验对象都有同等的机会抽到实验组或对照组中，除处理因素外其他因素尽可能均衡一致，从而抵消非实验因素的影响。
2.对照原则⑴组间对照：阴性对照，阳性对照，同因素不同水平对照；⑵自身前后对照3.重复原则五、实验动物1.动物的选择⑴小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。
也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。
⑵大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。
⑶豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。
也常用于离体心脏、心房、肠管实验。
又因它对结核敏感，常用于抗结核病药的实验。
⑷家兔：常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。
由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查。
⑸狗：狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。
还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。
在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。
实验五_氢化可的松的抗炎作用及机制探讨
实验四 氢化可的松的抗炎作用及机制探讨【目的和原理】炎症的基本病理改变是变性、渗出和增生。
大鼠足跖皮下注射致炎剂角叉菜胶，可引起大鼠足跖炎性肿胀。
通过测量踝关节处周长，可知肿胀程度，并可观察药物的抗炎作用。
PGE 是炎症介质，并在免疫调节中也起重要作用。
通过定量测定PGE 2含量，可知药物抑制PGE 2产生可能是其抗炎机制之一。
【实验对象】 雄性大鼠（120～180 g ）【实验药品】① 甲醇② 0.5 mol/L KOH-甲醇溶液③ 0.5% 氢化可的松注射液④ N.S.⑤ 1％ 角叉菜胶【实验器材】天平、鼠盒、台式恒温水浴、721紫外可见分光光度计、台式离心机、注射器（0.5 ml 、2 ml ）、刻度离心试管(20 ml)、手套、软尺、手术剪【实验方法】取大鼠16只，称重，编号，随机分为给药组及生理盐水组，每组8只。
给药组腹腔注射氢化可的松0.6 ml/100g ，对照组腹腔注射等容量生理盐水，各组均在给药前测量右后足踝关节处周长。
给药15分钟后于右后足皮下向关节方向注射1％角叉菜胶0.1 ml/只，分别于注射后15′，30′，45′，60′，90′，120′测量每组大鼠右后关节处周长，计算肿胀度。
处死大鼠，在踝关节上0.5 cm 处剪下右后足，称重后放入刻度试管中，用生理盐水5 ml 浸泡1小时。
取出足爪，3000 rpm/min 离心浸泡液3分钟。
吸取上清液0.1 ml,加入0.5 mol/L KOH-甲醇溶液2 ml 后,将试管置于50℃恒温水浴中异构化20分钟。
然后用甲醇稀释至20 ml ，在278 nm 处测其光密度（OD ）值。
PGE 2含量以每克炎性组织相当的吸收光密度值表示。
【实验结果】肿胀度= 注射角叉菜胶后周长－注射角叉菜胶前周长足爪重光密度值含量=OD PGE 2 1.计算出给药组与对照组右后足不同时间点的肿胀度，并将数据填入下表。
然后以肿胀度为纵坐标，时间为横坐标，绘出给药组与对照组作用时间曲线。
实验5：糖皮质激素的抗炎作用
实验5：糖皮质激素的抗炎作用糖皮质激素是一类重要的内源性激素，可以抑制免疫系统的活性，减轻炎症反应。
在炎症性疾病治疗中，糖皮质激素是一种重要的药物，被广泛应用于各种疾病的治疗，如哮喘、风湿性关节炎、炎症性肠病等。
糖皮质激素的抗炎作用主要通过其作用于细胞质内的糖皮质激素受体（GR）来实现。
GR是一种转录因子，它可以影响DNA转录的过程，进而影响细胞内的RNA合成和蛋白质合成。
在炎症反应中，糖皮质激素通过作用于GR，抑制炎症相关基因的转录，从而减轻炎症反应。
具体而言，糖皮质激素可以在以下方面发挥抗炎作用：1. 抑制细胞因子产生在炎症反应中，多种细胞因子的分泌增多，引起炎症的加剧。
糖皮质激素可以抑制多种细胞因子的产生，如肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素（IL）-1、IL-6等。
这些细胞因子在炎症反应中起着重要的作用，但过度的产生会导致炎症的加剧，因此糖皮质激素能够抑制这些细胞因子的产生，减轻炎症反应。
2. 抑制炎症细胞浸润糖皮质激素还可以抑制炎症细胞的浸润，如可以抑制巨噬细胞和中性粒细胞的迁移和浸润。
炎症细胞的浸润是炎症反应早期发生的现象，过度的炎症细胞浸润会导致炎症反应的加剧，因此糖皮质激素能够抑制炎症细胞的浸润，减轻炎症反应。
3. 抑制炎症相关基因的表达在炎症反应中，一些炎症相关基因的表达增加，如COX-2、TNF、IL-1等，这些基因的表达导致炎症反应的加强。
糖皮质激素可以抑制这些基因的表达，减轻炎症反应。
4. 增加炎症相关蛋白的降解总之，糖皮质激素的抗炎作用是通过多种机制实现的，可以抑制细胞因子的产生、抑制炎症细胞的浸润、抑制炎症相关基因的表达、增加炎症相关蛋白的降解等。
对于炎症性疾病，糖皮质激素是一种重要的治疗药物，但是糖皮质激素的应用需要慎重，在使用时需要考虑到其副作用。
氢化可的松的抗炎作用
【目的】1、习用鸡蛋清引起大鼠足跖急性炎症肿胀的实验方法2、观察氢化可的松的抗炎作用【原】1、常用炎症模型：（1）急性炎症模型：大鼠足跖角叉菜胶、异体蛋白致肿法，小鼠耳二甲苯致炎法（2）亚急性炎症模型：大鼠棉球肉芽肿法、大鼠皮下气囊法（3）免疫性炎症模型：大鼠佐剂性关节炎2、氢化可的松抗炎作用机制：氢化可的松进入细胞后，激活胞浆受体，变构后进入细胞核，与DNA反应元件结合，引起基因转录的抑制或诱导，使炎症相关蛋白的表达发生变化。
【材料】1、动物：大鼠，体重150～200g，雌雄各半2、器材：天平、鼠笼、注射器（2ml、0.25ml）、软尺、记号笔3、药品：50%氢化可的松溶液、生盐水、10%新鲜蛋清溶液、苦味酸溶液【方法】1、取实验动物，称重，标记。
2、将大鼠右后足拉直，用记号笔在踝关节处做标记，并用软尺在关节标记处测定周长2次，求其平均值作为给药前周长。
3、给大鼠分别给予如下药物：空白对照组给生盐水，受试组给氢化可的松。
给药方式为腹腔注射，给药剂量为0.5ml/100g体重。
4、30min后，在每鼠右后足掌心进针至踝关节附近，皮下注射10%新鲜蛋清溶液0.1ml/只，每隔15min测定踝关节处周长。
【结果】1、计算肿胀度。
肿胀度=（致炎后周长－给药前周长）/给药前周长×100% 2、全班结果汇总，绘制时效曲线，进行t检验。
（）。
抗炎实验
据－校零键－测下一只大鼠足跖容积。
注意事项：
1、务必防止被大鼠咬伤。 2、严格按仪器使用方法进行操作。 3、组长负责打扫好卫生：小组打扫本台卫生， 鼠粪等。
药物对蛋清所致 大鼠足跖肿胀的影响
(综合性实验)
[目的]
1、学习急性炎症的造模方法。 2、对比氢化可的松和双黄连的抗炎作用。 3、学习统计学处理方法（方差分析）－使用 SPSS软件。
[原理]
蛋清为异种蛋白，注入大鼠足跖内,可 以引起局部急性炎症,使局部组织水肿。
［材料］
动物：大鼠 （体重150-180g） 药物：氢化可的松注射液5mg/ml、双黄连注 射液、双黄连注射液稀释液、10％蛋清、生 理盐水 配药：双黄连注射液稀释液，以蒸馏水稀释 原液1倍；以蒸馏水稀释氢化可的松注射液5 倍。 器材：YLS-7A足跖容量测量仪、注射器、电 子天平、鼠笼
［方法]
1、取20只大鼠,分四组,每组5只,称重,标记， 生理盐组：腹腔注射生理盐水 1ml/100g。 氢化可的松组：腹腔注射氢化可的松1ml/100g 高剂量组：腹腔注射双黄连溶液1ml/100g。 低剂量组：腹腔注射双黄连稀释液1ml/100g。 2、测量左足容积。
3、给药后20分钟，开始致炎(每只大鼠足 跖部皮下注射蛋清0.02ml), 致炎后30min 测量给药后左足容积。
组别 剂量（ml) 动物数(只) 容积差(ml) p值
生理盐水组 氢化可的松 高剂量组 低剂量组
仪器使用方法:
1、连接电源
－－
2、打开电源开关
3、补蒸馏水至足跖容积管上下刻度线中间处。
4、校零：按运行键－校零键－将大鼠左足跖
置于足跖容积管液体内（以近踝部足跖突起的
上缘为准）－踏脚踏开关－记录显示屏显示数
氢化可的松作用
氢化可的松作用氢化可的松是一种常用的抗炎药物，能够通过抑制炎症反应和免疫系统的活性，起到治疗多种炎症性疾病的作用。
下面将详细介绍氢化可的松的作用机制和临床应用。
氢化可的松的作用机制主要是通过干扰炎症反应和免疫系统的活性来发挥治疗作用。
首先，氢化可的松能够抑制炎症反应中的炎症介质的合成，如前列腺素、白细胞介素等。
炎症过程中，这些介质的合成能够引起组织充血、水肿和疼痛等症状，而氢化可的松的抑制作用可以缓解这些炎症反应引起的不适。
其次，在免疫系统方面，氢化可的松可以抑制炎症反应中的免疫细胞的活性。
炎症反应时，免疫细胞如巨噬细胞和淋巴细胞会释放出一系列的炎症介质，进而引起炎症反应。
而氢化可的松可以通过抑制这些免疫细胞的活性，降低其释放炎症介质的能力，从而减轻炎症反应。
氢化可的松的临床应用非常广泛，可以用于治疗多种炎症性疾病。
首先，氢化可的松可以用于治疗风湿性疾病，如风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等。
这些疾病都是免疫系统异常活跃引起的，而氢化可的松的抗炎作用可以减轻炎症反应，缓解相关症状。
此外，氢化可的松还可以用于治疗过敏性疾病，如过敏性鼻炎和过敏性皮炎等。
过敏反应是由免疫系统异常敏感引起的，而氢化可的松可以通过抑制免疫细胞的活性，降低过敏反应的程度。
因此，氢化可的松可以缓解过敏症状，提高患者的生活质量。
此外，氢化可的松还可以用于治疗某些自身免疫性疾病。
例如，糖皮质激素依赖性的自身免疫性甲状腺炎就可以使用氢化可的松进行治疗。
这些疾病是由免疫系统对自身组织产生异常攻击的结果，而氢化可的松可以通过抑制免疫细胞的活性，减轻免疫系统对自身组织的损害。
综上所述，氢化可的松是一种常用的抗炎药物，能够通过抑制炎症反应和免疫系统的活性，起到治疗多种炎症性疾病的作用。
然而，使用氢化可的松需要在医生的指导下进行，以避免潜在的副作用。
患者在使用药物时应严格按照医生的指导剂量和时间进行，并定期回访医生进行效果和副作用的监测。
中药抗炎作用的分子机制研究
中药抗炎作用的分子机制研究一、引言：中药与现代医学的桥梁在探讨中药抗炎作用的分子机制之前，我们得先明确一点：中药，这个古老而又神秘的领域，它和现代医学之间其实有着千丝万缕的联系。
想象一下，那些流传千年的草药配方，是如何在今天这个科技日新月异的时代，依然能够发挥出令人惊叹的疗效呢？这背后，肯定隐藏着一些不为人知的秘密。
而我今天要做的，就是尝试揭开这层神秘面纱，带领大家一起走进中药抗炎作用的分子世界。
1.1 中药的复杂性与整体观1.1.1 中药成分的多样性：哎呀，说起来中药啊，它可真是个让人又爱又恨的存在。
爱的是它那神奇的疗效，恨的呢，则是因为它的成分实在太复杂了！就跟咱们中国的火锅一样，看起来就是一堆食材往锅里扔，但煮出来的味道却是千变万化，让人欲罢不能。
中药也是这样，它里面含有各种各样的化学成分，比如什么生物碱啊、黄酮类啊、苷类啊，还有挥发油、多糖等等，这些成分相互作用，共同发挥着治疗作用。
而且吧，同样的药材，产地不一样，采收的季节不同，加工的方式不同，最后得到的药效都会有所差异。
所以啊，研究中药，就得有那种既见树木又见森林的眼光，既要看到每一种成分的独特作用，又要理解它们之间的相互关系。
1.1.2 整体观念的重要性：中医治病啊，讲究的是一个“整体观念”。
意思就是说，你不能头疼医头、脚疼医脚，你得把人看作一个整体来对待。
就像咱们种菜一样，你不能只看叶子长得好不好，还得看根是不是扎实，土壤是不是肥沃，阳光雨露是不是充足。
同样的道理，人体健康也是多方面因素共同作用的结果。
所以啊，研究中药抗炎作用的时候，咱们也得从整体出发，考虑药物如何通过调节机体的整体状态来达到抗炎的效果。
1.2 现代科学视角下的中药研究1.2.1 分子生物学技术的发展：随着科技的进步啊，现在研究中药已经不是过去那种靠经验和直觉的时代了。
咱们有了各种先进的技术手段，比如高通量测序技术可以快速鉴定中药里的活性成分；分子对接技术能模拟药物分子和靶点的结合过程；细胞实验和动物模型则能帮助咱们验证这些成分的实际效果。
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实验四 氢化可的松的抗炎作用及机制探讨
【目的和原理】炎症的基本病理改变是变性、渗出和增生。
大鼠足跖皮下注射致炎剂角叉菜胶，可引起大鼠足跖炎性肿胀。
通过测量踝关节处周长，可知肿胀程度，并可观察药物的抗炎作用。
PGE 是炎症介质，并在免疫调节中也起重要作用。
通过定量测定PGE 2含量，可知药物抑制PGE 2产生可能是其抗炎机制之一。
【实验对象】 雄性大鼠（120～180 g ）
【实验药品】① 甲醇
② 0.5 mol/L KOH-甲醇溶液
③ 0.5% 氢化可的松注射液
④ N.S.
⑤ 1％ 角叉菜胶
【实验器材】天平、鼠盒、台式恒温水浴、721紫外可见分光光度计、台式离心机、注射器（0.5 ml 、2 ml ）、刻度离心试管(20 ml)、手套、软尺、手术剪
【实验方法】
取大鼠16只，称重，编号，随机分为给药组及生理盐水组，每组8只。
给药组腹腔注射氢化可的松0.6 ml/100g ，对照组腹腔注射等容量生理盐水，各组均在给药前测量右后足踝关节处周长。
给药15分钟后于右后足皮下向关节方向注射1％角叉菜胶0.1 ml/只，分别于注射后15′，30′，45′，60′，90′，120′测量每组大鼠右后关节处周长，计算肿胀度。
处死大鼠，在踝关节上0.5 cm 处剪下右后足，称重后放入刻度试管中，用生理盐水5 ml 浸泡1小时。
取出足爪，3000 rpm/min 离心浸泡液3分钟。
吸取上清液0.1 ml,加入0.5 mol/L KOH-甲醇溶液2 ml 后,将试管置于50℃恒温水浴中异构化20分钟。
然后用甲醇稀释至20 ml ，在278 nm 处测其光密度（OD ）值。
PGE 2含量以每克炎性组织相当的吸收光密度值表示。
【实验结果】
肿胀度= 注射角叉菜胶后周长－注射角叉菜胶前周长
足爪重
光密度值含量=OD PGE 2 1.计算出给药组与对照组右后足不同时间点的肿胀度，并将数据填入下表。
然后以肿胀度为纵坐标，时间为横坐标，绘出给药组与对照组作用时间曲线。
2.计算出给药组与对照组右后足PGE 2含量，并将数据填入下表。
对结果进行组间对照t 检验。
2
12121222211)(2)1()1(21n n n n n n s n s n s x x +⨯-+-+-=- )
(2
121x x s x x t --= 【注意事项】
1．用软尺量关节周长,应由专人来操作。
2.测量足跖或踝关节周长时,每次须在同一位置
3.剪下的肿胀足爪需剥皮、剪碎后再浸泡。