生物安全知识[1]

六、手和皮肤的消毒
一般应用肥皂刷洗，流水冲净，可 消除手上绝大部分甚至全部细菌。当被病 原微生物污染时，一般常用的消毒剂包括 75%乙醇擦手或用0.2～0.5‰洗必泰 、 0.1%新洁尔灭、0.5～1‰过氧乙酸 、3～ 5%来苏浸泡 5～10分钟 。
实验室基本管理
1. 实验室内的准入 （1）非实验有关人员和物品不得进入实 验室； （2）在实验室内不得进食和饮水，或者作者、进 修和学习人员在进入实验室及其岗位之前 必须经过实验室主任的批准。
个人生物安全防护
2. 在处理完感染性实验材料和动物后， 以及在离开实验室工作区域前，都必 须洗手。
3. 在进行可能直接或意外接触到血液、 体液以及其他具有潜在感染性的材料 或感染性动物的操作时，应戴上合适 的手套。手套用完后，应先消毒再摘 除，随后必须洗手。
个人生物安全防护
4. 为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞 物或人工紫外线辐射的伤害，必须戴安全 眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。 5. 严禁穿着实验室防护服离开实验室（如 去餐厅、咖啡厅、办公室、图书馆、员工 休息室和卫生间）
生物安全管理
北京大学医院 丛衍芬
生物安全

一、概念 防范、处理病原微生物及其毒 素对人体危害的综合性措施。 二、核心 防感染、防扩散。 三、目标 保护实验室工作人员、社会公 众和环境。


生物安全
四、综合性措施 1. 微生物危害评估
2. 安全设备、个体防护装置
3. 实验室的特殊设计和建设要求 4. 严格的管理制度和标准化的操作规程
实验室生物安全防护分级


一级生物安全防护实验室，简称BSL1或P1 二级生物安全防护实验室，简称BSL2或P2 三级生物安全防护实验室，简称BSL3或P3 四级生物安全防护实验室，简称BSL4或P4 一级最低，四级最高。
实验室的分级
1. 一级生物安全防护实验室


适用于对健康成年人已知无致病作用的 微生物，如用于教学的普通微生物实验 室等。 不需要生物安全柜 开放实验台
在二级以上的生 物安全防护实验室的 入口明显位置处必须 贴生物危害警告标志， 并标明级别。
实验室基本管理
2. 实验室工作人员的资格和培训 （1）实验室的工作人员必须是受过专业教 育的技术人员。在独立进行工作前还需在 中高级实验技术人员指导下进行上岗培训， 达到合格标准，方可开始工作。 （2）实验室的工作人员必须被告知实验室 工作的潜在危险并接受实验室安全教育， 自愿从事实验室工作。
2%碳酸钠
3. 间歇蒸气灭菌法


利用反复多次的流动热蒸气间歇加热以达 到灭菌的目的。 100º C，15~30min，37º C孵箱过夜×3次 适用于一些不耐热的含糖、牛奶等培养基。
二、干热灭菌法
1. 焚烧 用于废弃物品或动物尸体等 2. 烧灼 用于微生物学实验室的接种环、 试管口等的灭菌。
实验室相关感染（事例）

1993年国内某医院报告225名医院工作人员 HBV检测结果，医生护士、检验人员，其 中检验人员感染率最高，阳性率为81.2%。 多为主观估计错误及操作失误引发。


2003年 新加坡、台湾SARS实验室感染事件
2004年 北京SARS实验室感染事件
微生物危害评估
通过微生物危害评估确定对象微生物 应在哪一级的生物安全防护实验室中进行 操作；制定相应的操作规程、实验室管理 制度和紧急事故处理办法，必须形成书面 文件并严格遵守执行。
II级：中等个体危险，有限群体危险
能引起人或动物发病，但一般情况 下对健康工作者、群体、家畜或环境不 会引起严重危害的病原体。实验室感染 不导致严重疾病，具备有效治疗和预防 措施，并且传播风险有限。如沙门氏菌 属、志贺氏菌属、霍乱弧菌、乙型肝炎 病毒、流感病毒、麻疹病毒等。
微生物的危害等级
III级：高个体危险，低群体危险
微生物
微生物是存在于自然界的一大群体 形微小、结构简单、肉眼直接看不见， 必须藉助光学显微镜或电子显微镜放大 数百倍、数千倍，甚至数万倍才能观察 到的微小生物。
微生物的分布
微生物在自然界的分布极为广 泛，其中以土壤中最多。在人类和 动、植物的体表，以及与外界相通 的腔道中，亦有大量的微生物存在。
微生物与人类的关系
绝大多数微生物对人类和动、植 物是有益的 , 而且有些是必需的 ，如： 固氮菌；酿酒、制醋；抗生素、人体 的正常菌群。 有少数微生物能引起人类和动、 植物的病害，这些具有致病性的微生 物称为致病微生物或病原微生物。
感染
病原微生物侵入机体后，生长、繁 殖、释放毒性物质等，引起机体不同程 度的病理改变的过程，称为感染或传染。 细菌进入机体能否引起感染取决于 两方面的因素，一是机体的的免疫力， 二是细菌的致病力，其结局根据病原菌 和宿主两方面力量强弱而定。
实验室的分级
2. 二级生物安全防护实验室


适用于对人或环境具有中等潜在危害的微 生物 Ⅰ级生物安全柜、防护服、生物危害标志 开放实验台
实验室的分级
3. 三级生物安全防护实验室



适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重 的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素， 通常已有预防传染的疫苗。 HIV 的研究（血清学实验除外）应在三级 生物安全防护实验室中进行 Ⅱ级生物安全柜、特殊防护服、定向气流 （外界－HEPA－清洁区－半污染区－污 染区－ HEPA－外界）、生物危害标志
微生物的危害等级

危害等级分类的依据 病原微生物的毒力 传播方式和宿主范围 具有的有效预防措施 具有的有效治疗措施
微生物的危害等级

微生物的危害等级（分为四个等级）
I级：个体和群体低危险
是指在通常情况下不会引起人或 者动物疾病的微生物。如大肠杆菌、 肺炎球菌等。
微生物的危害等级
实验室相关感染
感染途径 气溶胶吸入感染 皮肤、粘膜接触感染 食入感染

实验室相关感染

导致感染最多的4种实验室事故 • 溢出和泼洒 • 针头和注射器 • 锐器、碎玻璃 • 动物的咬伤或抓伤
实验室相关感染
敏感宿主 免疫系统 疫苗接种状况 年龄 必须有录用前或上岗前的体检。 记录个人病史，并进行一次有目的的 职业健康评估。根据需要提供主动或 被动免疫。
四、化学消毒灭菌法
（一）高效消毒剂 1.含氯消毒剂；2.过氧化物消毒剂； 3.醛类消毒剂；4.环氧乙烷 （二）中效消毒剂 1.含碘消毒剂；2.醇类消毒剂 （三）低效消毒剂 1.季铵盐类；2.氯已定；3.高锰酸钾
五、室内空气的消毒
1. 自然通风 2. 紫外线灯照射 3. 化学消毒法 （1） 15％过氧乙酸加热熏蒸或0.5%过氧 乙酸喷雾 （2） 3%过氧化氢喷雾 4. 滤过除菌
消毒与灭菌

消毒

利用理化因素杀死物体或环境中病 原微生物的措施。并不一定能杀死含芽 胞的细菌或非病原微生物。 灭菌 利用理化因素杀死物体上所有微生 物的过程，包括芽胞。
消毒与灭菌




防腐 防止或抑制细菌生长繁殖的方法 清洁 通过除去尘埃和污秽减少微生物数量 无菌 不存在任何活菌，是灭菌的结果。 无菌操作 防止细菌进入人体或物品的操作技术
6. 不得在实验室内穿露脚趾的鞋子
废弃物处置
1. 所有弃置的实验室生物样本、培养物 和被污染的废弃物在从实验室中取走之 前，应使其达到生物学安全。
2. 生物学安全可通过高压蒸汽灭菌或其 他被承认的技术达到。
废弃物处置
3. 可重复使用的物品和污染的器具应置 于装有次氯酸钠1:10稀释液或其他合适的 消毒剂的不锈钢容器内，然后进行高压 蒸汽灭菌、清洗和再次灭菌。 4. 实验室废弃物应置于适当的密封且防 漏容器中安全运出实验室。运输感染性 物质时，应使用金属的或塑料材质的二 层容器。
感染途径
1．呼吸道
如肺结核、百日咳
痰、唾沫、喷嚏 → 空气 → 人呼吸道
2．消化道 如伤寒、霍乱、食物中毒
粪便污染的食物 → 人胃肠道 ，即粪—口途径
3．皮肤粘膜
病原菌 伤口 人，如破伤风杆菌
4. 血液；5. 经节肢动物媒介；6. 性传播
实验室相关感染
感染来源 培养物和储存物 实验动物 标本 被上述内容污染的物品
安全设备
生物安全柜是最重要的安全设备， 形成最主要的防护屏障。实验室应按 要求分别配备Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级生物安全 柜，防护能力逐级提高。不得用超净 工作台代替生物安全柜。
超净台


气流从顶部或底部经过 过滤器后从操作区正面 流向工作台面，被样品 污染的气流排出柜外， 没有循环气流。 超净台保护样品不受污 染，适用于普通实验室 或1级生物安全水平中 对人员和环境无保护要 求的实验。
Ⅰ级生物安全柜
只提供对操作者的保护， 不对产品进行保护。
气流从操作员处流入柜体 高效空气过滤器（High efficiency particulate air Filter，HEPA）过滤 的气体排放到环境中。
Ⅱ级生物安全柜
对操作员和产品进行保护 气流从操作人员处流入安 全柜中 HEPA过滤后的气体排放 到环境中
一、湿热灭菌法
1. 高压蒸气灭菌法


高压蒸气灭菌器是一个密闭、 耐高压蒸锅。 103.4kPa （ 1.05kg/cm2 ） 温 度可达121.3º C，15~20min， 可杀灭包括细菌芽胞在内的 所有微生物。
2. 煮沸法


100º C，5min 杀死细菌繁殖体 100º C，1~2h 杀灭细菌芽胞 加入 2% 碳酸钠 沸点为 105℃，防金属物 品生锈。
感染的类型
三、根据感染的结果分类 2. 显性感染
当宿主体抗感染的免疫力较弱，或 侵入的致病菌数量较多、毒力较强，以 致机体的组织细胞受到不同程度的损害， 生理功能也发生改变，出现一系列的临 床症状和体征。又称临床感染。