外周血内皮祖细胞在去细胞猪主动脉瓣膜上种植的体外观察
猪外周血内皮祖细胞的分离培养和鉴定
猪外周血内皮祖细胞的分离培养和鉴定
陈书艳;王飞;周卿;颜雪芸;许勤;舒红;荣烨之
【期刊名称】《细胞生物学杂志》
【年(卷),期】2005(27)1
【摘要】从猪外周血分离出单个核细胞,置于EGM-2培养基中培养,通过挑选细胞集落并对之进行免疫组织化学染色和荧光染色来鉴定内皮祖细胞。
结果显示猪的内皮祖细胞为长梭形或纺锤形并呈集落生长,能够吞噬已酰化低密度脂蛋(ac-LDL)并结合凝结素BS-1,同时具有内皮细胞标志CD31、flk-1和von willebrand factor(vWF)。
这些结果表明能够从猪的外周血中分离培养出内皮祖细胞,为自体内皮祖细胞移植促进猪慢性心肌缺血模型血管新生的研究打下了基础。
【总页数】3页(P66-68)
【关键词】内皮祖细胞;外周血;集落;分离培养;吞噬;血分;CD31;纺锤形;挑选;生长【作者】陈书艳;王飞;周卿;颜雪芸;许勤;舒红;荣烨之
【作者单位】上海第二医科大学附属新华医院心内科
【正文语种】中文
【中图分类】Q813.1;R329
【相关文献】
1.大鼠外周血内皮祖细胞分离培养与鉴定 [J], 杜公文;高维陆;张辉;尹宗生
2.猪外周血内皮祖细胞的分离培养及生物学特性 [J], 陈柏松;张胜利;耿红全;潘骏;吴少峰;陈方
3.人外周血内皮祖细胞的分离、培养及鉴定 [J], 乔威;冉峰;刘长建
4.人外周血内皮祖细胞的分离、培养及鉴定 [J], 乔威;冉峰;刘长建;
5.猪外周血内皮祖细胞的体外分离培养及鉴定 [J], 蒋东桥;蒋希萌;Thomas Cimato;王雯
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外周血内皮祖细胞治疗下肢缺血性疾病的疗效
闫醒军
〔摘
边忠平
要〕 目的
（ 唐山市工人医院心脏血管外二科 ， 河北
唐山 063000 ）
2008 年 1Βιβλιοθήκη 月至观察外周血内皮祖细胞治疗下肢缺血性疾病的疗效 ， 比较内皮祖细胞两种不同移植方式的治疗效果。 方法
2010 年 1 月在我院治疗 30 例患者的 34 条缺血的下肢 ， 16 例 18 条患肢采用小腿肌肉局部注射， 16 例 17 条患肢采用下肢动脉腔 选择两种移植方法， 内注射。结果 二组患者总的疼痛缓解改善率分别为 83. 3% （ 15 /18 ） 和 93. 8% （ 15 /16 ） 。对缓解或改善患者的冷、 凉感觉， 二组患者总的有效率均 内皮祖细胞 14 /14 ） 。二组患者总的保肢率分别为 88. 9% （ 16 /18 ） 和 93. 75% （ 15 /16 ） 。 术后两种移植方法的踝肱比值 （ ABI ） 增加的例数分别 为 100% （ 16 /16 ， 为 38. 8. 4% （ 8 /18 ） 和 37. 5. 2% （ 6 /16 ） 。有 15 例患者 16 条患肢接受了下肢动脉造影， 发现均有不同程度的新生侧枝血管形成。结论 移植治疗下肢缺血性疾病是一种简单 、 安全、 有效的方法。两种移植方法疗效没有明显的差异。 〔关键词〕 内皮祖细胞； 下肢缺血性疾病 ； 下肢肌肉局部注射； 下肢动脉腔内注射 〔中图分类号〕 R654. 4 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 10059202 （ 2012 ） 07137302 ；doi：10. 3969 / j. issn. 10059202. 2012. 07. 021
， 传统采用动脉搭桥或动静脉转流术对下肢缺血
性疾病进行手术和介入治疗 ， 但这些方法不能改善微循环障 不能处理下肢远端动脉广泛病变 ， 因而其临床效果并不十 碍， 分理想
应用猪主动脉去细胞瓣膜支架体外构建组织工程心脏瓣膜
应用猪主动脉去细胞瓣膜支架体外构建组织工程心脏瓣膜赵东锷;刘维永;金振晓;汪钢;俞世强;魏旭峰;谭红梅【期刊名称】《中国胸心血管外科临床杂志》【年(卷),期】2002(9)4【摘要】目的探讨应用猪去细胞瓣膜支架体外构建组织工程心脏瓣膜的可行性。
方法采用去垢剂、渗透压改变和核酸酶消化的方法制备猪主动脉瓣去细胞瓣膜支架 (实验组 ) ,用去内皮细胞主动脉瓣作对照 (对照组 ) ,并对两组含水量、可溶性蛋白含量、热皱缩温度、力学性能和组织相容性进行测定。
培养犬主动脉壁间质细胞和内皮细胞 ,将其种植于实验组去细胞支架上 ,观察细胞生长情况 ,并测定内皮细胞合成前列环素的功能。
结果实验组瓣膜细胞成分完全从瓣膜中去除 ,与对照组新鲜瓣膜相比 ,含水量增高 (P<0 .0 5 ) ,可溶性蛋白含量减少 (P<0 .0 5 ) ,热皱缩温度和抗张强度无明显变化。
实验组瓣膜组织相容性试验显示 ,材料组织相容性好 ,体内降解时间为 10周 ;犬主动脉壁间质细胞和内皮细胞在瓣膜表面生长良好 ,内皮细胞具有合成分泌前列环素的功能。
结论采用去垢剂、渗透压改变和核酸酶消化的方法制备猪主动脉瓣去细胞瓣膜支架 ,在去除细胞和可溶性蛋白质的同时保持了瓣叶的基本结构和力学性能 ;以其为支架体外构建组织工程心脏瓣膜的细胞不仅能在材料表面生长 ,还能合成、分泌血管活性物质 ,是具有生理功能的组织工程心脏瓣膜。
【总页数】4页(P265-268)【关键词】猪;主动脉;去细胞瓣膜支架;构建;组织工程;心脏瓣膜【作者】赵东锷;刘维永;金振晓;汪钢;俞世强;魏旭峰;谭红梅【作者单位】第四军医大学西京医院心血管外科【正文语种】中文【中图分类】R654.2【相关文献】1.骨髓间充质干细胞和猪去细胞瓣膜支架构建组织工程瓣膜 [J], 孙晓宁;赵强;徐德民;陈安清;翟万银;常江2.聚乙二醇改性去细胞猪主动脉瓣膜构建复合支架及其体外细胞毒性试验 [J], 周建良;邹明晖;周诚;陈思;卢翠芬;史嘉玮;董念国3.人细胞外基质包被猪去细胞瓣膜支架构建的组织工程心脏瓣膜 [J], 李秋泽;徐志云;黄盛东;张宝仁;杨立信;刘晓红;袁扬;龚德军4.应用人骨髓间质干细胞与脱细胞猪主动脉瓣膜支架体外构建组织工程心脏瓣膜[J], 刘洪涛;黄盛东;张宝仁;徐志云5.去细胞猪主动脉瓣支架及兔骨髓干细胞构建组织工程心脏瓣膜的初步研究 [J], 康凯;谭震;蒋树林;谢宝栋;韩振;田伟忱因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人外周血内皮前体细胞的分离与体外培养的开题报告
人外周血内皮前体细胞的分离与体外培养的开题报告
介绍：
外周血内皮前体细胞（EPC）是一种具有自我更新和分化能力的干细胞，具有成为内皮细胞和多种间质细胞的潜力。
由于其易于获取和生长，已成为一种研究血管再生和血
管疾病治疗的重要细胞源。
本报告旨在探讨EPC的分离和体外培养方法。
方法：
EPC可以通过梯度离心、骨髓抽取、磁珠分离等方法从人外周血中获得。
其中，Ficoll
梯度离心法是最常用的方法，具体步骤如下：
1.采集外周血并加入抗凝剂；
2.制备高密度Ficoll溶液，并与外周血混合；
3.离心分离，分层收集上清液中的白细胞；
4.使用抗体识别和磁珠分离等技术从白细胞中分离得到EPC。
分离得到的EPC可进行体外培养。
常用的培养基包括Endothelial Cell Growth Medium-2 (EGM-2)、EBM-2、M199等。
其中，EGM-2是一种富含细胞因子的培养基，可促进EPC的增殖和分化。
体外培养期间，需要定期更换培养基，并添加适当浓度的
血清以促进细胞生长。
结果：
通过以上方法，可以从外周血中获得EPC，并在体外培养中得到大量的细胞。
体外培
养的EPC需要经过鉴定，包括抗原、形态和功能等方面的检查，以确定其是否具备内
皮细胞的特性。
结论：
EPC是一种潜在的干细胞源，具有重要的医学应用前景。
分离和体外培养 EPC 是一项关键技术，对于研究其生物学特性和致病机制，以及开发相关治疗方案具有重要的意义。
猪外周血内皮祖细胞的分离培养及生物学特性
猪外周血内皮祖细胞的分离培养及生物学特性陈柏松;张胜利;耿红全;潘骏;吴少峰;陈方【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2008(028)010【摘要】目的从小型猪外周血中分离、培养内皮祖细胞(EPCs),并进行相关鉴定,分析其生物学特性.方法采用密度梯度离心法获得小型猪外周血单个核细胞并进行体外传代培养,分别采用倒置相差显微镜观察、免疫荧光染色、流式细胞仪分析及Matrigel实验和DiI-acLDL摄取实验,对其细胞表型及功能进行相关鉴定.结果外周血单个核细胞在培养过程中出现梭形贴壁和铺路石样形态;培养第14天,约80%的细胞DiI-acLDL吞噬实验阳性,且CD133、CD34、flk-1、CD31、CD144的表达阳性率分别达到25.1%、55.9%、97.7%、82.0%和95.4%;细胞培养于凝固的Matrigel表面7 d后,形成特征性的网格状结构.结论该实验成功从小型猪外周血单个核细胞中分离培养出EPCs,在其体外扩增诱导的过程中,表达EPCs和成熟内皮细胞的特征性标志.【总页数】4页(P1228-1230,1241)【作者】陈柏松;张胜利;耿红全;潘骏;吴少峰;陈方【作者单位】上海交通大学,医学院,新华医院泌尿外科,上海,200092;上海交通大学,医学院,新华医院泌尿外科,上海,200092;上海交通大学,医学院,新华医院泌尿外科,上海,200092;上海交通大学,医学院,新华医院泌尿外科,上海,200092;上海交通大学,医学院,新华医院泌尿外科,上海,200092;上海交通大学,医学院,新华医院泌尿外科,上海,200092【正文语种】中文【中图分类】Q813【相关文献】1.小型猪外周血内皮祖细胞的体外培养与分化研究 [J], 李崇剑;杨跃进;秦学文;高润霖;刘玉清;宋晓东;闫笑梅;孟亮;宋来凤;阮英茆;陈纪林2.兔外周血与骨髓源性内皮祖细胞培养鉴定及生物学特性的研究 [J], 周晨阳;陈忠;辛毅;杨燎;王盛;唐小斌;成伟;刘丹3.人骨髓来源内皮祖细胞的分离培养及生物学特性的鉴定 [J], 唐欲博;陈孝;黄保丁;冯鑫;彭龙云;彭新生;邹学农4.同时分离和培养兔外周血平滑肌祖细胞和内皮祖细胞 [J], 杨斌;陈贇;周六化;孙则禹;戴玉田5.猪外周血内皮祖细胞的分离培养和鉴定 [J], 陈书艳;王飞;周卿;颜雪芸;许勤;舒红;荣烨之因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人外周血内皮祖细胞的分离、培养、扩增和鉴定
人外周血内皮祖细胞的分离、培养、扩增和鉴定目的：研究人外周血内皮祖细胞的分离、培养、扩增和鉴定方法。
方法：采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，用EGM-2培养基在多聚赖氨酸包被的培养板中进行诱导培养，动态地观察贴壁细胞的生长状况，免疫组织化学技术检测培养细胞表面标志物的表达。
结果：人外周血单个核细胞经体外培养至第2天，呈贴壁生长，细胞形态为大小相近的圆球体；第4天一些细胞开始出现尾状物，形态呈蝌蚪样改变，部分细胞聚集形成细胞簇；至第7天细胞形态变长，呈梭形改变，细胞间相互围绕呈环形，并有集落出现，免疫组织化学染色CD133、CD34、VEGFR-2和Ⅷ因子表达均呈阳性。
结论：运用本实验方法可以成功实现人外周血内皮祖细胞的分离、培养和扩增。
标签：内皮祖细胞；外周血；细胞培养内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells，EPCs）是血管内皮细胞的前体细胞，亦称血管母细胞（angioblast），EPCs不仅参与胚胎血管生成，而且也参与出生后的血管新生过程。
近些年来人们对EPCs在血管形成、心脑血管疾病和创伤愈合等方面的作用进行了广泛的研究[1]，EPCs移植技术已成为治疗心脑血管疾病的一种新兴的方法[2]，具有广阔的临床应用前景。
但由于EPCs的来源有限，目前的培养方法尚不能满足基础研究和临床治疗的需要，在本实验中，笔者研究从来源相对广泛的人外周血中分离培养EPCs，为EPCs的应用提供一种便捷有效的分离方法。
1 材料和方法1.1 材料：主要试剂和仪器：内皮细胞培养基（Endothelial Cell Growth Medium-2，EGM-2）（Lonza公司）。
人淋巴细胞分离液（天津灝洋生物制品有限公司）。
鼠抗人CD133单克隆抗体、血管内皮生长因子受体2（Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2，VEGFR-2）（北京博奥森生物技术有限公司）。
静态与动态下脱细胞猪主动脉瓣种植人成纤维细胞初步研究
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生 物 医 学 工 程 与 临 床 ２０ ０２年 ６月 第 ６卷 第 ２期
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人外周血内皮祖细胞的培养与鉴定
人外周血内皮祖细胞的培养与鉴定王辉;王岭;李开宗;凌瑞;孙宝华;马福成;李晓军【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2006(010)029【摘要】目的:探讨人外周血内皮祖细胞体外诱导分化及鉴定的方法,为自体外周血内皮祖细胞移植的临床应用打基础.方法:实验于2004-09/2005-05在解放军第四军医大学西京医院肝胆外科实验室完成.采集献血员抗凝外周血,经Ficoll密度梯度离心法获取单个核细胞,在含有体积分数为0.1胎牛血清、20μg/L的血管内皮细胞生长因子和4μg/L的碱性成纤维细胞生长因子的M199培养液中培养和扩增,分别在培养的第6和14天,流式细胞仪检测其KDR,CD133,CD34和vWF阳性率,并通过检测其对异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素的吸附和内吞DiI-acLDL来进行细胞功能学的鉴定.结果:①人外周血单个核细胞经体外诱导分化,培养第6天的贴壁细胞表达KDR,CD133,CD34和vWF,流式细胞仪检测其阳性率分别为(46.4±9.3)%、(33.8±11.7)%、(73.5±6.3)%和(38.9±8.2)%,能特异性吸附异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素并内吞DiI-acLDL.②培养第14天的贴壁细胞表达KDR,CD34和vWF,不表达CD133,流式细胞仪检测其阳性率分别为(81.5±7.6)%、(88.9±5.4)%和(78.3±13.6)%,能特异性吸附异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素并内吞DiI-acLDL.结论:外周血来源的单个核细胞在一定的培养条件下可以分化为内皮祖细胞,为自体外周血内皮祖细胞移植的临床应用打下基础.【总页数】4页(P47-49,插2)【作者】王辉;王岭;李开宗;凌瑞;孙宝华;马福成;李晓军【作者单位】解放军第四军医大学西京医院血管内分泌外科,陕西省西安市,710033;解放军第四军医大学西京医院血管内分泌外科,陕西省西安市,710033;解放军第四军医大学西京医院肝胆外科,陕西省西安市,710033;解放军第四军医大学西京医院血管内分泌外科,陕西省西安市,710033;解放军第四军医大学西京医院血管内分泌外科,陕西省西安市,710033;解放军第四军医大学西京医院病理科,陕西省西安市,710033;解放军第四军医大学西京医院血管内分泌外科,陕西省西安市,710033【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.人外周血内皮祖细胞分离培养与鉴定 [J], 郭新宾;崔维韵;刘庆国;张建宁;刘丽2.人外周血内皮祖细胞的分离、培养及鉴定 [J], 乔威;冉峰;刘长建3.人外周血内皮祖细胞的分离、培养、扩增和鉴定 [J], 李文志; 董勇; 辛毅4.人外周血内皮祖细胞的分离、培养、扩增和鉴定 [J], 李文志; 董勇; 辛毅5.人外周血内皮祖细胞的分离培养及鉴定 [J], 王红祥;邵诗颖;李宾公;赵湜;唐晓琼;赵智刚;邹萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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种 植于 支架 材料 之上 ， 得该 瓣 膜 在植 入 人 体后 仍 使 能保 持 生物 活性 ，能 随 机 体 的发 育 而 生 长 ］较 现 ，
有 的机 械瓣 和 生 物 瓣 更 加 理 想 。 自内 皮 祖 细 胞 发
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医药 卫 生
外 周 血 内皮 祖 细 胞 在 去 细 胞 猪 主 动 脉 瓣 膜 上 种植 的 体 外 观 察
王 进 郑奇 军 顾春 虎 刘 洋 康 晓军 刘维永
（ 四军 医大学西京 医院心脏外科 ， 第 西安 ７ ０ ３ ） １ ２ ０
摘
要
为在体 外观察 外周血 内皮祖细胞种植到 去细胞 猪 主动脉瓣上 的生长 情况。采用 Ｔ ｔ Ｘ １０联合胰 蛋 白酶 、 ｉ ｎ ０ ｒｏ － 核酸 酶
去 除猪 主动脉瓣膜 细胞 。从 志愿者外周血 中分 离培养 内皮祖细胞 ， 免疫 荧光鉴定 细胞后 。将从 外周血培 养 的 Ｅ Ｃ种植 到去 Ｐ 细胞猪主动脉瓣膜上 ， Ｈ 免疫 组化染色和免疫荧光染 色观 察种植效果。结果显 示猪主动脉 瓣 内的细胞 去 除彻底 ， 纤维 用 Ｅ、 但 支架保存 良好。人外周血培养 出的细胞 ， 免疫荧 光染 色示 ａ－Ｄ ｃＬ Ｌ和 Ｕ Ａ １阳性 ， 示为 内皮祖细胞 ， 植后行 ＨＥ染色 可见 Ｅ． 提 种 到去细胞猪主动脉瓣膜表面单层 内皮 细胞 生长 ， 并且表达 ｙｎＷｉｅｒｎ ｏ ｌ ｂａ ｄ因子和 Ｃ ３ 。 ｌ Ｄ １
Ｔ ｔ Ｘ一０ ｉ ｎ ｆ ｏ １ ０溶 液 中持续 振荡 ２ Ｈ ｎ ｓ液充 分 洗 ４ｈ， ａ ｋ
涤 （０ｍｉ ８次 ） 制 成 去 细胞 瓣 膜 支架 材 料 ， ６ ｎ× ； 经∞
第一作者简介 ： 王 进 （ ９２ ） 男 ， 汉 族）， １８ ～ ， （ 山西 大 同人 ， 四军 第
关键词 组织工程心脏瓣膜 中图法分类号 Ｒ４ ． ； ５ １４
去细胞 基质 文献 标志码
内皮祖 细胞 Ａ
组 织工 程 心 脏 瓣 膜 是 利 用 有 生 物 活性 的 细 胞
Ｄ Ａ酶 、 Ｎ Ｎ Ｒ Ａ酶和 ＦＴ ． Ｅ 一 ＩＣ Ｕ Ａ １均购 自 Ｓｇ ｉ ｍａ公 司 ，
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１ ｐ ｓ 司 ） ｙ ｕ公 ｍ 。
现 以来 ， 人们 发 现其 能 够 分 化 为 内皮 细 胞 。而 且 外 周血 内皮 祖 细胞 ， 伤 小 、 疫 原 性 小 ， 加 符 合 种 损 免 更
子 细胞 的 选 取 要 求 。 去 细 胞 猪 主 动 脉 瓣 也 是 目前 较好 的生 物支 架 材 料 。本 研 究 拟 体 外 培 养 外 周 血
个 核 细胞 用 淋 巴细 胞 分 离 液 通 过 密 度 梯 度 离 心 的
￥通信作者简介： 维永 ，— ｉ：ｅｙｎｌ ｍ ｕ ｅｕ ｃ 。 刘 Ｅ ｍａ ｗ ｉ ｇ＠ｆ ｍ ．ｄ ． ａ ｌ ｏ
１ ２ 去细 胞瓣 膜 支架 的获 取 ．
采 集 新鲜 屠 宰 的猪 心 剪 下 完 整 的猪 主 动脉 瓣 ，
检 查 无 病 损后 ， 瓣 膜 浸入 ４ Ｈ ｎ ｓ 液 中洗 涤 将 ℃ ａｋ 溶
内皮 祖 细胞 ， 观察 其 在 去 细胞 猪 主 动 脉 瓣 上 种 植 并
后 的生长状 况 。