原代内皮细胞分离
心脏内皮细胞的分离_概述说明以及解释
心脏内皮细胞的分离概述说明以及解释1. 引言1.1 概述心脏内皮细胞是构成心脏血管系统的重要组成部分，具有维持血管结构稳定、调节血压和参与免疫反应等多种功能。
因此，研究心脏内皮细胞的分离方法对于心血管疾病的诊断、治疗以及药物筛选等方面具有重要意义。
本文旨在概述并解释心脏内皮细胞的分离方法，包括定义和功能介绍、分离方法的概述以及它们之间的优劣比较。
此外，我们还将详细讨论心脏内皮细胞分离过程中的步骤和操作技巧，如材料准备、操作环境要求、细胞分离酶选择与使用方法以及培养基配制与使用注意事项等。
在实验结果和数据解读部分，我们将介绍心脏内皮细胞分离后效率和纯度评估指标，并展示实验结果并进行详尽解读。
此外，我们还会将结果与预期进行比较，并探讨其与现有研究进展之间的联系。
最后，在结论与未来展望部分，我们将总结心脏内皮细胞分离方法的优缺点，并探讨其在心脏内皮细胞研究中的潜在应用前景。
同时，我们还会提出该领域研究进一步发展的方向和探索的方向。
通过本文的阐述，希望能够为研究人员提供有关心脏内皮细胞分离方法的全面指导，促进对心脏内皮细胞功能和相关疾病机制的深入理解，并为相关治疗方法的开发和改进提供新思路。
2. 心脏内皮细胞的分离：心脏内皮细胞是一种位于血管内壁上的细胞，其主要功能包括调节血管张力、维持心脏功能和参与免疫反应等。
在很多研究中都需要对心脏内皮细胞进行分离以便进一步的实验操作和研究。
本部分将概述心脏内皮细胞的定义和功能，并对常用的心脏内皮细胞分离方法进行简要介绍，并对这些方法进行优劣比较。
2.1 心脏内皮细胞的定义和功能：心脏内皮细胞是一种存在于血管壁以及相关组织中的特化上皮细胞，其具有重要的生理功能。
首先，它们构成了血管内壁，起到隔离并调控外部环境与体液之间物质交换的作用。
其次，心脏内皮细胞可以通过释放各种生物活性物质来参与调节血管张力，因此在血压控制和循环系统平衡方面发挥着关键作用。
此外，它们还可以通过分泌细胞外基质和参与免疫反应等方式对心脏功能进行支持和调节。
血清饥饿对原代人脐静脉内皮细胞周期同步化的影响
血清饥饿对原代人脐静脉内皮细胞周期同步化的影响覃乙芯;吴卓敏;徐茜;廖文婕;贺帅;岑柏宏;廖路敏;王震;季爱民【摘要】目的：探讨人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）的最佳饥饿条件，以建立高效稳定的HUVECs体外分离提取方法，并为HUVECs相关实验提供研究基础。
方法用0.1%Ⅱ型胶原酶灌注脐静脉腔消化15 min，收集细胞并用内皮细胞专用培养基（含5%内皮细胞基础培养基、1%内皮细胞生长因子、1%青链霉素），置37℃，5%CO2培养箱培养。
在倒置显微镜下观察细胞形态特点，并用细胞免疫荧光方法对所得细胞进行鉴定。
用流式细胞术检测所得HUVECs的纯度，并检测0%、0.1%、0.5%、1%血清浓度的培养基饥饿处理0、6、12、18、24 h对细胞周期的影响。
结果0.1%Ⅱ型胶原酶消化可以得到HUVECs，细胞培养呈典型的铺卵石状排列，细胞较密处呈涡旋状排列。
免疫荧光检测细胞VIII因子相关抗原表达呈阳性。
流式检测细胞纯度高达99.67%。
不同血清浓度培养基培养6 h可获得70%左右的G0/G1期细胞；培养12 h可获得80%~90%的G0/G1期细胞；培养18、24 h可获得95%左右的G0/G1期细胞。
结论0.1%Ⅱ型胶原酶充盈静脉管腔可以获得高纯度的原代HUVECs。
完全无血清培养基培养12 h即可获得纯度超过80%的G0/G1期HUVECs。
%Objective To investigate the optimal starvation conditions of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and establish a highly efficient and stable method for separating HUVECs. Methods HUVECs harvested from human umbilical cords by digestion with 0.1%collagenaseII for 15 min were cultured in endothelial culture medium (ECM) containing 5%fetal bovine serum (FBS), 1%endothelial cell growth factor (ECGS) and 1%penicillin/streptomycin solution(P/S) at 37℃in 5%CO2. The cells wereobserved for cell morphology under an inverted microscope and identified with immunofluorescence assay. The purity of HUVECs was detected using flow cytometry (FCM). The cell cycles of HUVECs cultured in the presence of 0, 0.1%, 0.5%, and 1%FBS for 0, 6, 12, 18, and 24 h were analyzed with flow cytometry. Results The purity of HUVECs harvested by digestion with 0.1%collagenase II reached 99.67%. The primary HUVECs showed a cobblestone or volute appearance in vitro. Immunocytochemistry showed that HUVECs highly expressed VIII-related antigen. Cell culture in the presence of different concentrations of FBS for 6 h resulted in 70%G0/G1 phase cells, which increased to 80%-90%at 12 h of cell culture, and further to around 95% at 18 and 24 h. Conclusion Digestion with 0.1% collagenase II can obtain high-purity primary HUVECs. Culturing HUVECs in serum-free medium for 12 h can result in a high purity (over 80%) of G0/G1 phase cells.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2016(036)008【总页数】4页(P1140-1143)【关键词】人脐静脉内皮细胞;细胞原代培养;血清饥饿;细胞周期【作者】覃乙芯;吴卓敏;徐茜;廖文婕;贺帅;岑柏宏;廖路敏;王震;季爱民【作者单位】南方医科大学珠江医院药剂科，广东广州 510282;南方医科大学珠江医院药剂科，广东广州 510282;南方医科大学珠江医院药剂科，广东广州510282;南方医科大学珠江医院药剂科，广东广州 510282;南方医科大学珠江医院药剂科，广东广州 510282;南方医科大学珠江医院药剂科，广东广州 510282;南方医科大学珠江医院药剂科，广东广州510282;南方医科大学珠江医院药剂科，广东广州 510282;南方医科大学珠江医院药剂科，广东广州 510282【正文语种】中文人脐静脉内皮细胞（HUVECs）是血管形成实验的经典模型细胞。
人脐静脉内皮细胞分离培养及鉴定技术
２ １ ４月 ０ ０年
第１ ４卷
第 ４期
一
５ｌ 一 Ｉ
文 章 编 号 ：０７— ２７２ １）４ ５ １ ３ １０ ４ ８ （００ ０ —０ １ —０
人 脐 静 脉 内皮 细 胞 分 离 培 养 及 鉴 定 技 术
吴金 义 张 ， 蕾 ， 张秀英 曲丽梅 ，
（． １吉林大学 中 日联谊 医院 心内科 ， 吉林 长 春 １０ ３ ； ． ３０３ ２ 一医院 病理科 ） 摘要： 目的 探讨人脐静脉 内皮 细胞 （ Ｖ Ｃ 体外 分离 原代 培养 的方法 ， ￣ＪＥ ） 并总结对培养 的细胞 鉴定 方法。方法
通过胰酶灌注法从人脐带获取 内皮 细胞 进行分离培养 ， 并采用免疫组 化法及 光镜和透射 电镜观察 超微结构 鉴定所获
得 的细胞系 。结果
分离 的 Ｈ Ｖ Ｃ在体外 ７ ０天左右可长成单层 ， ＵＥ —１ 光镜下 胞体 为单层铺 路石状排列 。第 ＶＩ 因子 Ｉ Ｉ
用胰酶灌 注法是获
相关抗原 的检测 为阳性 。透射 电镜下 观察培养的内皮细胞胞浆内可见 Ｗｅ ｅ—ａ ｄ 小体 。结论 ｉｌ ｌｅ ｂ Ｐａ 得脐静脉 内皮细胞 的有效 方法 。本 方法 为血 管内皮细胞的研究提供 了实验模型 。
（ ’ Ｌ ｂＤ ａ ｎ ２ １ ，４ ０ １ ） Ｃ Ｊ ａ ／ ， ０ １ ： １ ｇ ０ ５
ｃｅ ａ ｎ ｔｅ ｃ ｉ ｐ ａ ｍ ｕ ｄ ｒｅｅ ｔ ｎ—ｍ ｃｏ ｃ ｐ ｈ ｃ ｅ ｅ ｉｅ ｔ ｅ Ｃ ． ｎ ｌ ｓ ｎ Ｔ ｅｄ ｇ ｓ ｏ ｆ ａ ｃ ｅ ｔ ｅ ＿ ｌ ｓｗ ｓ ｉ ｅｌ ｌ ｅ ｌｃｒ ｈ ｓ ｎ ｏ ｉ ｒｓ ｏ ｙｗ ｉｈ ｗ ｒ ｄ ｎｉ ｄ ａ Ｅ ｓ Ｃｏ ｃ ｉ ｈ ｉ ｔ ｎ ｏ ｎ ｒａｉ ｐ ｄ — ｉ ｆ ｓ ｕ ｏ ｅｉ ｐ ｎ ｕ ｓ ｎ ｉ ａ ｆ ｃ ｖ ｔ ｏ ｏ ｇ ｉ Ｃ ， ｄ ｔｉ ｍｅ ｏ ｒ ｖｄ ｓｅ ｐ ｒ ｎａ ｄ ｌｆｒＶ Ｃｌ Ｃ ｅ ｅ ｒ ｈ ｉ ｅ ｅ ｔ ｅ ｍｅｈ ｄ ｔ ａｎ Ｅ ｓ ａ ｈｓ ｔ ｄ ｐ ｏ ｉｅ ｘ ｅ ｉ ｔ ｍｏ ｅ ｏ ａ ｌａ Ｅ ｓｒ ｓ ａｃ ． ｏ ｓｎ ｉ ｎ ｈ ｍｅ ｌ ｓ ｌ ｒ Ｋｅ ｒ ｓ ｈ ｍａ ａ ｃ ｌｒ ｎ ｏｈ ｌ ｅｌｉ ｍｂｌ ａ ｖ ｉ ｃ ｌ ｃ ｔｒ ；ｄ ｎ ｉ ｃ ｔ ｎ ｙ ｗｏ ｄ ： ｕ ｎ ｖ ｓ ｕ ａ ｄ ｔｅｉ ｃ ｌ ｎ ｕ ｉ ｃ ｅｎ； ｅ ｕ ｕ ｅ ｉ ｅ ｔ ａｉ ｅ ｌ ａ ｉｌ ｌ ｉ ｆ ｏ
肿瘤原代血管内皮细胞提取
肿瘤原代血管内皮细胞提取
肿瘤原代血管内皮细胞提取是指从肿瘤组织中分离和培养原代血管内皮细胞。
下面是一种常见的方法：
1. 收集肿瘤组织样本：从患者手术切除的肿瘤组织或者小鼠移植的肿瘤样本中切取一小块组织。
2. 组织消化：将切取的肿瘤组织块放入含有酶消化液（如胰酶、胶原酶等）的培养皿中，静置一段时间（通常为30分钟至1
小时），使组织细胞分解。
3. 细胞收集：将消化后的组织液过筛或通过离心的方法分离细胞。
离心后，上清液中包含了原代血管内皮细胞。
4. 细胞培养：将分离得到的原代血管内皮细胞接种于预先涂覆了基质的培养皿中。
培养基可以选择适合血管内皮细胞生长的培养基，如内皮细胞培养基。
5. 细胞培养与扩增：将培养皿置于恒温培养箱中，提供适当的培养条件（如37℃恒温、5% CO2、高湿度等），定期更换培
养基，并观察细胞生长情况。
原代内皮细胞通常需要经过数代扩增，以获得足够量的细胞。
以上是一种常见的肿瘤原代血管内皮细胞提取方法，具体操作细节可能根据实验目的和实验室条件的不同而有所调整。
原代HUVECs分离培养关键影响因素分析
的原代 ＨＵ Ｅ ｓ Ｖ Ｃ 的培 养方 法 ， 并探讨 影 响脐 静脉 内皮 细胞 分离 培养 成败 的关 键 因素 ．
１ 实验 材 料
１ １ 材 料 ．
２１ ０ １年 ２月
中央 民族 大 学学 报 （ 自然 科 学 版 ）
Ｊ ｕｎ ｌ ｆ Ｃ（ ａｕａ Ｓ ｉ ｃ ｓＥ ｉｏ ） ｏ ｒａ ｏ ＭＵ Ｎ ｔｒｌ ｃｅ０ １
Ｖｏ＿０ １ ２ Ｎｏ １ ．
第２ ０卷
第 １ 期
脐带 由北 京市 海淀 区妇 幼保 健 院手 术室 提供 ， 选择 羊水 无 污染 的健康 新 生儿脐 带 ．
１ ２ 试 剂 ．
胎牛 血清 （ ｙｌｎ ， 国 ） 内皮 细胞 生长 因子 （ ｎ ｏ ｅ ａ ｃｌｇｏ ｔ ｃ ｒＥ Ｇ ， ｏｈ ， 国 ） 明 Ｈ ｃ ｅ美 ｏ ； ｅ ｄｔ ｌ ｌ ｅ ｒｗｈｆ ｔ ， Ｃ Ｆ Ｒ ｃ ｅ 美 ｈ ｉ ｌ ａｏ ； 胶 （ ｉ ａ 美 国） Ｓｇ ， ｍ ；Ｍ１９培养 基 、 ９ 高糖 Ｄ Ｍ培 养基 （ ｉｃ ＭＥ Ｇｂ ｏ美 国公 司 ） Ｉ型胶 原 酶 （ｎｉｏ ｅ ， 国 ） ； ｖ ｒｇｎ 美 Ｉ ｔ 、 胰酶 、 Ｄ Ａ（ ｍ ｅｃ ， 国 ） 兔 抗人 Ⅷ 因子抗 体 、 ＩＣ标记 的羊抗兔 二抗 （ ａｔ ｒｚ 美 国 ） Ｅ Ｔ Ａ ｒｓｏ 美 ； ＦＴ Ｓ ｎ Ｃｕ ， ａ ．
原 代 Ｈ Ｖ Ｃ 分 离培 养关 键 影 响 因素 分 析 Ｕ Ｅｓ
朱 丹 ， 丽 丽 ， 秀兰 古 黄
（ 央 民族 大 学 中 国少 数 民族 传 统 医 学 研 究 院 ，北 京 １０ ８ ） 中 ０ ０ １
原代人脐静脉内皮细胞培养方法经验总结
原代人脐静脉内皮细胞培养方法经验总结刘文;陈瑞云;王志伟【摘要】目的建立分离培养原代人脐静脉内皮细胞的方法.方法采用0.125％胰酶+0.01％乙二胺四乙酸(EDTA)消化液灌注法,获得原代人脐静脉内皮细胞,用免疫组织化学方法进行细胞鉴定.结果原代培养的脐静脉内皮细胞呈典型的铺路石样排列;细胞鉴定可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应.结论 0.125％胰酶+0.01％EDTA消化法能够获取大量且纯度高的原代人脐静脉内皮细胞,为体外实验提供可靠的细胞模型.【期刊名称】《中国医学工程》【年(卷),期】2016(024)008【总页数】3页(P11-13)【关键词】原代人脐静脉内皮细胞;分离;细胞培养【作者】刘文;陈瑞云;王志伟【作者单位】山东省青岛科技大学校医院内科,山东青岛266044;山东省青岛大学第二附属医院胃肠外科,山东青岛266042;山东省青岛大学第二附属医院肛肠外科,山东青岛266042【正文语种】中文【中图分类】Q813.11血管内皮细胞（endothelial cell, EC）是血管内表面的单层扁平上皮，构成了血管壁与血液之间的机械屏障，EC能吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织，能分泌很多生物活性物质以调节血管通透性、参与凝血和动脉粥样硬化过程，还能通过调节血管的收缩和舒张以调节血压等。
为研究人体大血管内皮功能需要体外建立人血管内皮细胞模型，而内皮细胞株ECV304,在形态学、基因学等生物特性上与内皮细胞存在明显差异[1]，因此，体外分离培养原代人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）是获取内皮细胞的重要途径。
本实验总结了体外培养HUVECs的方法，应用消化酶灌注法,成功分离了人脐静脉内皮细胞，获取了大量的HUVECs，创建了研究内皮细胞的模型。
1 材料与方法1.1 标本来源脐带均来自于剖宫产的新生儿脐带，于无菌条件下获取，迅速转移至细胞室超净台中，进行分离培养。
内皮细胞增殖实验步骤
一、脐带内皮细胞的分离1. 脐带收集用无菌止血钳夹闭脐带两端，在止血钳外侧剪断脐带，放入盛有4 ℃Cord Buffer 的饭盒内。
脐带在4 ℃放置不应超过24 小时。
2. 脐带内皮细胞分离（1）带无菌手套，取出脐带，在止血钳内侧用碘酒和酒精棉球消毒后，用无菌剪刀将两端脐带剪除。
（2）在脐带一端找到静脉，插入脐带静脉插管，用2 根粗丝线扎牢，用Cord Buffer 抽吸有的30 ml注射器冲洗静脉腔，至将脐血洗净。
（3）赶出静脉腔内残余液体，将脐带另一端用止血钳夹闭，用10 ml注射器连接针头，注入37 ℃预热的0.1 ％胶原酶约6-8 ml，放入37 ℃Cord Buffer中保温6-10 min。
（4）吸出静脉腔内胶原酶所消化的细胞悬液，加入预加有20 ml Cord Buffer的离心管中，冲洗静脉腔，一并加入离心管中。
（5）离心，1500 rpm，10 min弃上清，用5～7 ml 20 ％FCS，RPMT 1640重悬细胞，转入培养瓶，放5 ％CO孵箱。
二、牛下丘脑内皮细胞生长因子粗提物的制备1. 取新鲜牛下丘脑，加1.5倍体积的冰生理盐水用组织匀浆机匀浆，每次0.5 min，共6次。
2. 在4 ℃条件下用震荡器机械震荡约1.5 h。
3. 离心，10000 g，40 min，收取上清液。
4. 按0.5 ％加硫酸链霉素，4 ℃过夜。
5. 离心，20000 g，40 min，收取上清液。
6. 用紫外分光光度测280 nm，260 nm OD值按公式计算蛋白含量。
7. 过滤，分装，-20 ℃保存备用。
三、内皮细胞的培养与鉴定1. 培养瓶包被明胶培养瓶（25 cm）中加入0.2 ％明胶3 ml，使其铺满瓶底，放4 ℃备用。
用前弃去明胶溶液。
2. 原代培养将从脐带静脉中收集到的内皮细胞移入包被明胶的培养瓶（25 cm），加5～7 ml 20 ％小牛血清199培养基，按终浓度分别为20 μg/ml和100 μg/ml加入内皮细胞生长因子粗提物和肝素。
原代细胞分离方法及原理
原代细胞分离方法及原理嘿，咱今儿就来唠唠原代细胞分离的那些事儿！你知道不，原代细胞那可是生物学研究里的宝贝呀！先来说说酶消化法吧。
这就好比是给细胞来一场温和的“拆解行动”。
通过特定的酶，把组织慢慢地分解开来，让细胞们能一个个地“蹦跶”出来。
就好像是把一个大拼图慢慢地拆成小块，然后把那些我们想要的小拼图挑出来。
是不是挺神奇的呀？这种方法就像是一把精巧的钥匙，能打开细胞世界的大门呢！还有组织块培养法，这可有意思啦！把小小的组织块直接放到培养皿里，就像是给细胞们安了个家。
然后呢，细胞们就会自己慢慢地从组织块里迁移出来，开始它们的“新生活”。
这不就像是一颗种子，只要给它合适的环境，它就能生根发芽嘛！机械分离法呢，就像是个大力士，用一些简单粗暴的手段把细胞给弄出来。
虽然简单直接，但也得小心别伤着了那些娇贵的细胞哟！那为啥要搞这些原代细胞分离呢？这可太重要啦！就好比你要盖一座大楼，原代细胞就是那最基础的砖块呀！只有有了这些高质量的原代细胞，我们才能更好地研究细胞的各种特性，探索生命的奥秘呀！你想想，如果没有这些分离方法，我们怎么能深入了解细胞的行为和功能呢？那不就像是在黑暗中摸索，啥都看不清嘛！这些方法让我们能清楚地看到细胞的“一举一动”，就像给我们配上了一副神奇的眼镜，让我们能看清细胞世界的精彩。
而且哦，不同的方法都有它们各自的优缺点呢！酶消化法可能会比较温和，但要是酶用得不对，那可就麻烦啦！组织块培养法虽然简单，但需要耐心等待细胞们慢慢地“搬家”。
机械分离法快捷，但得掌握好力度呀！所以说呀，搞原代细胞分离可真是个技术活，得细心、耐心，还得有足够的专业知识。
这可不是随随便便就能搞定的事儿呢！咱再回过头来想想，要是没有这些分离方法，我们的生物学研究得落后多少呀！那好多疾病的研究、药物的开发不都得受影响嘛！总之呢，原代细胞分离方法及原理那可是生物学领域里的重要宝藏呀！咱可得好好掌握它们，让它们为我们的科学研究和人类健康服务哟！你说是不是这个理儿呢？。
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牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-消化刮脱法[复制链接]
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发表于 2011-8-16 10:45:30 |只看该作者|倒序浏览
关键词：分离消化细胞血管培养内皮
牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-消化刮脱法
实验材料：
1. 牛或猪
2. ，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml
3. 0.1%Ⅰ型胶原酶
4. 眼科剪，眼科镊
5. 慕丝线
6. 离心管（15ml、50ml）
实验方法：
1. 分离牛或猪的主动脉等大血管，长15-20cm，用丝线结扎血管各分支后，取出主动脉。
放入盛有含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml的平皿中，纵向切开血管壁，内皮朝上，用冲洗3次。
2. 在另一平皿中加入少量0.1%Ⅰ型胶原酶溶液。
37℃下消化5-10min，然后加入培养液终止消化。
3. 刮取内皮细胞。
用刮刀轻轻刮内膜表面，刮刀与血管表面成60°，刮刀要轻而均匀地推进。
不可刮得过深，也不要刮到血管的边缘处，以免成纤维细胞被污染。
4. 将刮下的内皮细胞悬液浮于培养液中，1000r/min，离心10min。
吸去上清；再加入15ml培养液，用滴灌轻轻吹打，以便分散细胞团，再离心1次，并吸去上清。
加入5ml培养液悬浮细胞，制备细胞悬液。
5. -原代内皮细胞特制基础培养基
6. -原代内皮细胞培养特制添加剂
7. -原代细胞分离试剂盒。