原代内皮细胞分离

牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-消化刮脱法[复制链接]

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发表于 2011-8-16 10:45:30 |只看该作者|倒序浏览

关键词：分离消化细胞血管培养内皮

牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-消化刮脱法

实验材料：

1. 牛或猪

2. ，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml

3. 0.1%Ⅰ型胶原酶

4. 眼科剪，眼科镊

5. 慕丝线

6. 离心管（15ml、50ml）

实验方法：

1. 分离牛或猪的主动脉等大血管，长15-20cm，用丝线结扎血管各分支后，取出主动脉。放入盛有含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml的平皿中，纵向切开血管壁，内皮朝上，用冲洗3次。

2. 在另一平皿中加入少量0.1%Ⅰ型胶原酶溶液。37℃下消化5-10min，然后加入培养液终止消化。

3. 刮取内皮细胞。用刮刀轻轻刮内膜表面，刮刀与血管表面成60°，刮刀要轻而均匀地推进。不可刮得过深，也不要刮到血管的边缘处，以免成纤维细胞被污染。

4. 将刮下的内皮细胞悬液浮于培养液中，1000r/min，离心10min。吸去上清；再加入15ml培养液，用滴灌轻轻吹打，以便分散细胞团，再离心1次，并吸去上清。加入5ml培养液悬浮细胞，制备细胞悬液。

5. -原代内皮细胞特制基础培养基

6. -原代内皮细胞培养特制添加剂

7. -原代细胞分离试剂盒