复方百部止咳糖浆检验操作规程
复方百部止咳糖浆成品质量标准
质量部
1．目的：建立复方百部止咳糖浆成品的质量标准。
2．范围：复方百部止咳糖浆成品。
3．职责：QC、QA人员、质量部长对该品种的检验及结果负责。
4．规程：
检验依据：《部颁标准》中药成方制剂第六册WS3-B-1184-92 产品名称：复方百部止咳糖浆
产品代码：807
产品规格：每瓶装100ml
产品包装形式：每瓶装100ml: 聚乙烯瓶：100ml/瓶×1瓶/盒×120
查
平均装量不少于标 平均装量不少于
T-OP-ZY621-02
最低装 量
示 装量，每瓶装量不 少于标示装量的 97%。
标示 装量，每瓶装量 不少于标示装量
的97%。
大肠埃
希菌 微
细菌数 生 物 霉菌和 限 酵母菌 度数
活螨检
查
不得检出 ≤100cfu/ml ≤100cfu/ml
不得检出
不得检出 ≤80cfu/ml ≤80cfu/ml
不得检出
T-OP-ZY603-02
T-OP-ZY617-02
贮藏：密封，置阴凉处。 有效期：三年。
辽宁良心（集团）德峰药业有限公司
DEFENG PHARMACEUTICAL CO.,LTD LIAONING LIANGXIN GROUP
复方百部止咳糖浆成品质量标准
文件编号 T-TP-ZY-807-03
制定人
制定日期
页码
1/1
生效日
审核人
审核日期
批准人
批准日期
分发部门：质量部、中心化验室
期
颁发部 门
盒/箱
《取样操作规程》（ ）
《检验操作规程》（T-OP-ZY-807-03）
检验项目 法定标准
止咳糖浆产品检验操作规程
止咳糖浆产品检验操作规程
《止咳糖浆产品检验操作规程》
一、检验目的
为了确保止咳糖浆产品的质量，符合国家标准和企业要求，保障产品安全有效，制定本检验规程。
二、检验范围
本规程适用于止咳糖浆产品的原料、生产工艺、成品检验。
三、检验设备
1. pH计
2. 粘度计
3. 倒计时器
4. 电子天平
5. 显微镜
四、检验项目及方法
1. pH值测定
取适量止咳糖浆样品，用pH计测定其酸度是否符合标准要求。
2. 粘度测定
采用粘度计测定止咳糖浆的流动性，确保产品质地符合要求。
3. 药材成分检验
利用显微镜等设备对止咳糖浆中的药材成分进行检验，确保成分准确。
4. 毒素检验
采用适当方法对止咳糖浆中可能存在的毒素进行检验，确保产品安全。
5. 水分测定
采用电子天平测定止咳糖浆的水分含量，确保产品稳定性。
五、检验要求
1. 检验过程中需保证检验环境的干净整洁，防止污染样品。
2. 检验人员需经过专业培训，熟悉检验操作规程。
3. 检验记录应真实可靠，确保产品质量追溯。
六、检验报告
检验过程完成后，应编制详实的检验报告，记录产品各项检验结果，并将报告存档备查。
七、附则
本规程经公司质量部确认后，可执行实施，相关人员应遵守规程内容，确保产品质量。
对规程内容做出任何修改需经过公司质量部确认并重新发布。
八、审查
本规程由公司质量部定期进行审查，如有必要，可根据实际情况进行修订。
以上为《止咳糖浆产品检验操作规程》，希望对所有相关人员能够严格按照规程执行，确保产品质量。
小儿止咳糖浆检验操作规程
[代号] C19[品名]小儿止咳糖浆[拼音] Xiao,er Zhike Tangjiang[规格及包装] 10ml/支，塑料瓶装。
[处方] 甘草流浸膏 150ml 桔梗流浸膏 130ml氯化铵 10g 橙皮酊 20ml [制法]以上四味，取蔗糖650g，加水适量，煮沸溶液后，滤过，放冷。
滤液加甘草流浸膏、桔梗流浸膏、橙皮酊、氯化铵与苯甲酸钠5g（用适量水溶解），搅匀，滤过，加水制成1000ml即得。
[处方依据]《卫生部药品标准》中药成方制剂第五册[法定标准及标准依据]【性状】本品为红棕色半透明粘稠液体；味甜。
检查方法：取本品10ml置比色管中，在自然光下观察，颜色应符合规定；用舌尖舔少许样品，性味应符合规定。
【鉴别】取本品2ml，加水6ml，摇匀，滤过，滤液照下述方法试验：（1）取滤液1ml，加稀盐酸数滴，生成沉淀，再加氨试液适量，沉淀可溶解。
（2）滤液显铵盐与氯化物的鉴别反应：I、铵盐：①取供试品，加过量的的氢氧化试液后，加热，即分解，发生氨臭；遇湿润的红色石蕊试纸，能使之变蓝色，并能使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色。
②取供试品溶液，加碱性碘化汞钾试液1滴，即生成红棕色沉淀。
II、氯化物：①取供试品溶液，加硝酸使成酸性后，加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨式液即溶解，再加硝酸，沉淀复生成。
如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐，须先徊氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤除去，取滤液进行试验。
②取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，即发生氯气，能使湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。
【检查】1、相对密度应为1.20--1.30检验方法：取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶，装满供试品（温度应低于20℃或各品种项下规定的温度）后，插入中心有毛细孔的瓶塞，用滤纸将从塞孔溢出的液体擦干，置20℃(或各品种项下规定的温度)恒温水浴中，放置若干分钟，随着供试液体温度的上升，过多的液体将不断从塞孔溢出，随时用滤纸将瓶塞顶端擦干，待液体不再由塞孔溢出，迅速将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸将比重瓶的外面擦净，精密称定，减去比重瓶的重量，求得供试品的重量后，将供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照上法测得同一温度时水的重量，按下式计算，即得。
复方百部止咳冲剂中黄芩和陈皮的鉴别及黄芩苷的含量测定
量,文中在有关物质检查中将鸟嘌呤单独限量。
根据多批样品的测定结果,将鸟嘌呤的检查限度定为1%,其他有关物质的检查限度定为1 5%。
药品中有关物质检查的试验条件选择原则,应尽可能多的检出杂质。
现通过对流动相强度、pH 值、盐浓度、检测波长、供试品进样浓度、色谱图记录时间等试验条件进行筛选,确定了更昔洛韦葡萄糖注谢液中有关物质检查的最佳试验条件。
该法专属性强、灵敏度高、精密度好、简便快速,可用于该药品的质量控制。
参考文献:[1] Stephen AS.Ganciclovir therapy for CMV infecti on[M ].New york:Marcel Dekker Inc,1991 1[2]李春元.更昔洛韦的临床应用进展[J].国外医药一合成药生化药(制剂分册),1998,19(3):172收稿日期:2004-11作者简介:侯小涛(1969-),女,讲师,从事药物分析的教学和科研工作。
复方百部止咳冲剂中黄芩和陈皮的鉴别及黄芩苷的含量测定侯小涛,李耀华,卢小芳(广西中医学院药学院,广西南宁530001)摘要:目的 研究复方百部止咳冲剂中黄芩和陈皮的鉴别及黄芩苷的含量测定。
方法 用TLC 进行定性鉴别,用HPLC 进行含量测定。
结果 在薄层色谱上,制剂中的斑点相对应。
黄芩苷在进样量0.02172~0.3258 g 范围内线性关系良好(r =0 9991)。
平均加样回收率为100.3%,R SD =0.56%(n =5)。
结论 方法简便、可靠、准确,可用于该制剂的质量控制。
关键词:复方百部止咳冲剂;黄芩;黄芩苷;陈皮;薄层鉴别;高效液相色谱法中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:1006-0103(2005)02-0165-03Identification of Scutellaria baicalensis Georgi and Citrus reliculate Blanco and determination of baicalin in Compou nd Baibu Zhike granuleHOU Xiao-tao,LI Yao-hua,LU Xiao-fang(Guangxi Traditional Chinese Medical University ,N anning 530001,China)Abstract:OBJECTIVE To establish the identification and determination method for Compound Baibu Zhike granules.METHODS T he granules were identified by TLC.The baicalin in the granules was determined by HPLC.RESULTS The chromatogram obtained with the test solution of the 2materials in the granules showed the same characteristic spots i n color and position wi th the control ones respectively while the blank solution showed no corresponding spots.Within the range of 0.02172-0.3258 g ,baicalin presented a fine linear relationship (r =0 9999).The average recovery of sample was 100.3%with RSD =0.56%(n =5).CONCLUSION The methods are simple,reliable,accurate and can be used for the quality control of this preparation.Key words:Compound Bai bu Zhike granule;Scutellaria baicalensis Georgi;Baicalin;Citrus reliculate Blanco;TLC;HPLC CLC number:R917Document code:AArticle ID:1006-0103(2005)02-0165-03复方百部止咳冲剂是由百部、黄芩、陈皮、苦杏仁、桔梗等11味中药材加工制成的复方纯中药制剂,用于治疗肺热咳嗽、痰黄黏稠、百日咳等。
百部、蜜百部质量标准及检验操作规程
7检验操作规程：
7.1试药与试剂：盐酸、水、氢氧化钠滴定液、甲基红乙醇溶液指示剂。
7.2仪器与用具：二氧化硫测定仪。
7.3性状：取本品适量，自然光下目测色泽，嗅闻气味。
7.4检查：二氧化硫残留量照二氧化硫残留量测定法（附录58）测定，不得过150mg/kg。
同法定标准
包装
中药饮片袋
同法定标准
性味与归经
甘、苦，微温。归肺经。
同法定标准
功能与主治
润肺下气止咳，杀虫灭虱。用于新久咳嗽，肺痨咳嗽，顿咳；外用于头虱，体虱，蛲虫病，阴痒。蜜百部润肺止咳。用于阴虚劳嗽。
同法定标准
用法与用量
3～9g。外用适量，水煎或酒浸。
同法定标准
复验期
36个月。
同法定标准
贮藏
置通风干燥处，防潮。
2代码：百部蜜百部
3取样文件编号：
4检验方法文件编号：
5依据：《中国药典》（2015年版一部）。
6质量标准：
项目
法定标准
内控标准
制法
百部除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥。
蜜百部取百部片，照蜜炙法（通则0213）炒至不粘手。
每100kg百部，用炼蜜12.5kg。
同法定标准
性状
百部本品呈不规则厚片、或不规则条形斜片；表面灰白色、棕黄色，有深纵皱纹；切面灰白色、淡黄棕色或黄白色，角质样；皮部较厚、中柱扁缩。质韧软。气微、味甘、苦。
蜜百部本品形同百部片，表面棕黄色或褐棕色，略带焦斑，稍有黏性。味甜。
同法定标准ຫໍສະໝຸດ 检查二氧化硫残留量照二氧化硫残留量测定法（通则2331）测定，不得过150mg/kg。
同法定标准
包装规格
3g/袋；5g/袋；10g/袋；100g/罐；160g/罐；200g/罐；0.5kg/袋；1kg/袋；10kg/袋；15kg/袋；18kg/袋；20kg/袋；25kg/袋；30kg/袋；50kg/袋
HPLC法测定百部止咳糖浆中苦杏仁苷的含量
HPLC法测定百部止咳糖浆中苦杏仁苷的含量百部止咳糖浆为泰州市姜堰中医院肺病科与药剂科共同研制，具有清肺止咳功效，用于急慢性支气管炎，小儿百日咳。
苦杏仁苷为苦杏仁的主要活性成分，苦杏仁苷经肠道微生物或苦杏仁本身所含苦杏仁酶能分解产生微量的氢氰酸，对呼吸中枢有抑制作用，该作用与镇咳、平喘效应有关。
过量的氢氰酸可引起中毒，抑制细胞呼吸，形成“细胞内窒息”组织缺氧。
因此本文采用高效液相色谱法测定百部止咳糖浆中苦杏仁苷的含量，以完善百部止咳糖浆的质量控制标准。
1仪器与材料11仪器*****日本岛津高效液相色谱仪，检测器为SPD-10AVP，双泵LC-10ATCP，大连依利特色谱工作站。
电子分析天平（Max 220g，Min 10mg，e=1mg，d=01mg）。
12材料甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂为分析纯；苦杏仁苷对照品由中国药品生物制品检定所提供；百部止咳糖浆由江苏省泰州市姜堰中医院提供（批号：***-*****、***-*****、***-*****）。
2方法与结果21色谱条件与系统适应性试验色谱柱：Kromasi C18柱（5μm，46mm×250mm）；流动相：甲醇-水（20∶80）；流速：10ml/min；柱温：25℃；检测波长：215nm。
在该色谱条件下苦杏仁苷与相邻杂质峰的分离度R15，理论塔板数3000，基线平稳，阴性样品在此条件下无干扰峰。
22对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的苦杏仁苷对照品2mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度摇匀，制备成02mg/ml的对照品溶液。
23供试品溶液的制备精密量取百部止咳糖浆50ml于50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用045μm微孔滤膜过滤，取滤液即得供试品溶液。
24线性关系精密量取上述对照品溶液02、04、06、08、10、12ml 分别至10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度摇匀。
分别精密量取10μl 进样，记录色谱图，以峰面积（A）对质量浓度（C）绘制标准曲线。
HPLC法测定小儿百部止咳糖浆中橙皮苷和黄芩苷的含量
HPLC法测定小儿百部止咳糖浆中橙皮苷和黄芩苷的含量华捷
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2009(21)6
【摘要】目的建立小几百部止咳糖浆中橙皮苷和黄芩苷的含量测定方法.方法色谱柱:Kromasil C18(4.6mm×250mm);流动相:乙腈-水-磷酸(33:67:0.2).流
速:0.8mL·min-1,检测波长:283nm,进样量20μL.结果橙皮苷和黄芩苷分别在
10μg·mL-1～61μg·mL-1和25μg·mL-1～153μg·mL-1浓度范围内,两者
r=0.9999,黄芩苷的平均回收率为99.67%,RSD为2.0%,橙皮苷的平均回收率为100.94%,RSD为2.2%.结论该法操作简便,结果可靠,可用于小儿百部止咳糖浆中橙皮苷和黄芩苷的含量测定.
【总页数】2页(P83-84)
【作者】华捷
【作者单位】福建省三明市药品检验所,三明,365000
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.HPLC法测定百部止咳糖浆中苦杏仁苷的含量 [J], 李月琴;周九兰
2.HPLC法测定百部止咳糖浆中苦杏仁苷的含量 [J], 金涛
3.高效液相色谱法测定小儿百部止咳糖浆中橙皮苷的含量 [J], 邓亚利;丁世全;周莉
玲
4.反相高效液相色谱法测定小儿百部止咳糖浆中橙皮苷含量 [J], 赵向阳
5.HPLC测定小儿百部止咳糖浆中橙皮苷含量 [J], 陈慧
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
反相高效液相色谱法测定小儿百部止咳糖浆中橙皮苷含量
２ ３ 方 法 学 考 察
药成方制剂（ ４册） 收载的品种 Ｉ由百部 、 第 》 ， 苦杏仁 、 陈皮 、 桔梗 、
甘 草 、 白皮 、 冬 、 桑 麦 黄芩 、 知母 、 南 星 、 壳 １ 中药 制 成 ， 有 天 枳 １味 具 清肺 、 咳 、 痰 之 功 效 ， 于 小 儿肺 热 咳 嗽 、 日咳 、 多 黄 稠 。 止 化 用 百 痰 原 标 准 中只 有 ２个 理 化 鉴 别 ， 少 一 些 主 药 的 含 量测 定 。 有 效控 制 缺 为 药 品质 量 ， 者 建 立 反 相高 效 液 相 色 谱 （ Ｐ—Ｈ Ｌ 法 对 其 主要 成 笔 Ｒ Ｐ Ｃ） 分陈 皮 中 的橙 皮 苷进 行 含 量 测 定 。 １ 仪 器与 试 药 Ｌ ｌＡ ｖ 效液相 色谱仪 （ Ｃ— Ｏ Ｔ ｐ高 日本 岛 津 ）Ｓ Ｄ一１Ａ ｐ检 测 ，Ｐ ０ｖ 器 ； ２０ Ｎ ０ ０色 谱 工 作 站 （ 江 大 学 ） Ｕ 浙 ； Ｖ一２ ５ ５ ０紫 外 分 光 光 度 汁
９ 虬 二 ～
ｆ ｕｈｕ Ｉｓｔｔ ｆｒＤｒｇ Ｃ ｎｒｌＳｚｏ， ｎ ｕ ｈｎ ２ ４ ０ ） ｚｏ ｎｔｕ ｏ ｕ ｏ ｔ ， ｕｈ ｕ Ａ ｈ ｉ ｉａ ３ ０ ０ Ｓ ｉ ｅ ｏ ，Ｃ
Ａ ｓ ａ ｔ０ｂｅｔ ｅ Ｔ ｓ ｂｉ ｔ ｅ ｒ ｎｔｎ ｍ ｔｏ ｆｈ ｓｅｉｉ ｎ Ｃ ｉ ａ ｕ Ｃ ｕｈ Ｓｒｐ Ｍｅｈ ｄ Ｈ Ｌ ａ ｓ ａｄ ｂｔ ｃ： ｊｃｉ ｏ ｅｔ ｌｈ ｈ ｄｔｍｉａｏ ｅ ｄ ｏ ｅｐｒ ｎ ｈｄ Ｂ ｉ ｏ ｇ ｙ ． ｔｏ ｓ ｒ ｖ ａ ｓ ｅ ｅ ｉ ｈ ｄ ｉ ｌ ｂ ｕ Ｐ Ｃ ｗ ｓ ｕｅ ｎ ｄ
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
[代号] C16[品名]复方百部止咳糖浆[拼音] Fufang Baibu Zhike Tangjiang[规格及包装]1×100ml×100盒，玻璃瓶装。
[处方]百部（蜜制）100g 苦杏仁 50g 桑白皮 50g 麦冬25g 知母 25g 黄芩 100g 陈皮 100g 甘草25g天南星（制）25g 枳壳（炒）50 g 桔梗 50g [制法]以上十一味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。
另取蔗糖650g，加水适量，煮沸，滤过，浓缩制成糖浆，与上述浓缩液混匀，煮沸，放冷，加入防腐剂、香精适量，搅匀，加水稀释至1000ml,即得。
-B-1184-92 [处方来源]《卫生部药品标准》中药成方制剂第六册 WS3[法定标准及标准依据]【性状】本品为褐色的粘稠溶液；味甜。
检查方法：取本品10ml置比色管中，在自然光下观察，颜色应符合规定；用舌尖舔少许样品，性味应符合规定。
【检查】 1、PH值应为4.0～4.5检验方法：（1）邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液的配制精密称取在115℃±5℃干燥2～3小时的邻苯二甲酸氢钾10.12g，加水使溶解并稀释至1000ml。
（2）按仪器的使用操作规程进行操作。
（3）标准缓冲液一般可保存2～3个月，但发现有浑浊、发霉或沉淀等现象时，不能继续使用。
标准依据：来源于《中国药典》二000年版一部附录VII G）。
2、相对密度应为1.26--1.28检验方法：取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶，装满供试品（温度应低于20℃或各品种项下规定的温度）后，插入中心有毛细孔的瓶塞，用滤纸将从塞孔溢出的液体擦干，置20℃(或各品种项下规定的温度)恒温水浴中，放置若干分钟，随着供试液体温度的上升，过多的液体将不断从塞孔溢出，随时用滤纸将瓶塞顶端擦干，待液体不再由塞孔溢出，迅速将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸将比重瓶的外面擦净，精密称定，减去比重瓶的重量，求得供试品的重量后，将供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照上法测得同一温度时水的重量，按下式计算，即得。
供试品的相对密度= 供试品重量水重量标准依据：来源于（《中国药典》二OOO年版一部附录VII A）。
3、装量差异取供试品3瓶，开启时注意避免损失，将内容物分别倾入预经标化的干燥量筒（量入型）中，黏稠液体倾出后，将容器倒置15分钟，尽量倾净。
读出每个容器内容物的装量（取三位有效数字），并求出其平均装量，应不少于标示量的95%，每个容器的装量不得少于标示装量的93%，如有一个不符合规定，则另取3个复试，应全部符合规定。
W＝W1+W2+W33标准依据：来源于（《中国药典》二OOO年版一部附录XII C）。
4、其他应符合糖浆剂项下有关的各项规定（《中国药典》二OOO年版一部附录I H）。
【生物限度检查】按二OOO年版《中国药典》方法检验，结果应符合以下要求：杂菌总数：≤100个/ml霉菌总数：≤100个/ml大肠杆菌：不得检出活螨. 不得检出检验操作方法：1、操作前准备（1）将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、吸管（1ml、10ml）、量筒、稀释剂等移至无菌室内。
每次试验所用物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作中出入操作间。
编号后将全部外包装（牛皮纸）去掉。
（2）开启无菌室紫外杀菌灯和空气过滤装置，并使其工作不低于30min。
（3）操作人员用肥皂冼手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋。
再用0.1%苯扎溴铵溶液或其他消毒液洗手或用乙醇棉擦手，穿戴无菌衣、帽、口罩、手套。
（4）操作前先用乙醇棉球擦手，再用碘伏棉球（也可用乙醇棉球）擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌手术镊或剪将供试品启封。
2、试液的制备（1）液体供试品取供试品10ml，置灭菌锥形瓶中，加入90ml稀释剂，摇匀，作为1：10供试液。
（2）固体、半固体或粘稠供试品称取供品10g，置于匀浆杯或适当灭菌容器中，加入100ml0.9％无菌氯化钠溶液，用匀浆仪（3000~5000r/，2/4min）,振荡器或乳钵研磨等方法分散混匀。
3、供试液的稀释（10倍递增稀释法）（1）取2～3支灭菌试管，分别加入9ml灭菌稀释剂（此时操作一般为：左手执试管并将塞打开，倾斜，右手执10ml吸管吸量，注意：勿在乙醇灯焰将供试管中菌细胞杀灭）。
加完稀释剂后，试管塞应立即塞上。
（2）另取1支1ml灭菌吸管吸1：10均匀供试液1ml，加入装有9ml灭菌稀释剂的试管中混匀，即为1：100供试液。
以此类推，根据供试品污染程度，可稀释至1：10、1：100、1：1000等适宜稀释级（至少共3级），每递增1稀释级，必须另换一支吸管。
在作10倍递增稀释时，吸管插入1级稀释液内不低于液面2.5cm，反复吸吹约10次。
吸液时，应先吸至高于吸管上部刻度少许，然后提起吸管，贴于试管内壁调整液量至刻度，再沿第2级稀释管的内壁靠近液面（勿接触液面）缓慢地吹出全部供试液（吸管内应无粘附或残留液体），然后将吸管放入消毒缸内。
4、注平皿在进行10倍递增稀释的同时，以刻稀释吸管，吸取各级稀释液各1ml至每个灭菌平皿中（从高稀释级至低稀释级吸液时可用1支吸管），每一稀释级注2～3个平皿（此时，一般为左手执平皿，将盖半开，右手执吸管），注平皿时，将1ml供试液慢慢全部注入平皿中，管内无残留液体，防止反流到吸管尖端部。
注平皿时，将1ml供试液慢慢全部注完毕，另2个作霉菌、酵母菌数阴性对照，如另用YPD琼脂测定酵母菌数时，则再增加2个平皿作酵母菌数阴性对照）。
5、倾注培养基将预先配制好的培养基（细菌计数用营养琼脂，霉菌、酵母菌计数一般用玫瑰红钠琼脂）熔化，冷至约45℃时，倾注上述各个平皿约15ml，以顺时针或反时针方向快速旋转平皿混匀，注意，混匀时勿将培养基溅到皿边及皿盖上，置操作台待凝。
6、培养细菌计数平板倒置于30～35℃培养箱中培养48小时。
霉菌、酵母菌计数平板于25～28℃培养箱中培养72小时。
7、菌落计数（1）一般将平板置菌落计数器上或从平板的背面直接以肉眼点计，以透射光衬以暗色背景，仔细观察。
勿漏计细小的琼脂层内和平皿边缘生长的菌落。
注意细菌菌落与霉菌菌落和酵母菌菌落以及它们与供试品颗粒、培养基沉淀物、气泡等的鉴别。
必要时用放大镜或用低倍显微镜直接观察或挑取可疑物涂片镜检。
（2）供试品如为微生物制剂，应将有效微生物菌落排除，不可点计在细菌、霉菌和酵母菌数内。
排除的方法需按该制剂微生物品种而定，并须观察菌落特征及染色形态。
（3）供试品稀释液常含有不溶性原料、辅料，培养基注皿后亦可能产生沉淀物，经过培养后的时形成数量很多且难与菌落肉眼相鉴别的有形物。
为了有利于菌落计数，可在操作时将适宜稀释级的供试液多增加注皿（1~2个平皿），注皿后不经培养而放置于冰箱（勿结冻）中，在计数菌落时作为对照。
或用0.001％TTC营养琼脂注皿，经培养后可将细菌菌落与其他有形物区别开来。
有些软膏等非水溶性供试品，经营养琼脂注皿后呈乳白色，培养后生长的菌落不易辨认和点计，为防止这种情况，也可用0.001％TTC营琼脂注皿，经培养后生长的菌落为红色，衬于白色背景上易于点计。
（4）若平板上有2个或2个以上菌落重叠，肉眼可辨别时仍以2个或2个以上菌落计数；若平板生长有链状菌落，菌落间无明显界线，一条链作作为一个菌落计，但若链上出现性状与链状菌落不同的可辨菌落时，仍应分别计数，若生长蔓延的较大的片状菌落或花班样菌落，一般不宜作为计数用。
（5）记录各稀释级平板的菌落数，求出各稀释级2个或3个平板菌落的平均数。
当菌落数在15以上的同稀释级二平板菌落数相差1倍时，该稀释级菌落数不得作为计数依据；当2个平板菌落数均在15（含15）以下时，两个平板菌落数的差值允许范围为0～4，1～7，2～9，3～10，4～12，5～14，6～15。
超出以上范围即视为操作误差，不得作为计数依据。
（6）下列情况下、点计菌落时间需提前或延长培养时间：①菌落生长呈蔓延趋势者，细菌点计需在24小时，霉菌点计需在48小时作初步点计（点计霉菌菌落数时，动作宜轻，勿反复翻转平板或造成震动，使早期形成在孢子散落在平板的其他部位，又萌生新的霉菌菌落，导致计数误差）。
②在48小时点计细菌，72小时点计霉菌时，菌落极小不易辨认，需延长培养时间4～7 天，再点计菌落数。
③对有疑议的供试品以YPD培养基作酵母菌计数时，可培养至1周再点计菌落数。
（7）供试品按营养琼脂平板点计细菌菌落数；固体供试品按玫瑰红钠琼脂平板点计霉菌菌落数，一般液体供试品按玫瑰红钠琼脂平板点计霉菌及酵母菌总数。
8、菌数报告规则（1）细菌数选取平均菌落数在30～300之间的稀释级，霉菌、酵母菌数选取平均菌落数在30～100之间的稀释级作为报告菌数的依据。
如只有1个稀释级平均菌落数在30～300（30～100）之间，则将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。
（2）如有2个相邻稀释级平均菌落数在30～300（30～100）时，则按比值计算。
当比值≤2时，则以2个稀释的平均菌落数均值报告。
当比值＞2时，则以低稀释的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
比值=高稀释级平均菌落数×稀释倍数低稀释级平均菌落数×稀释倍数（3）如有3个稀释级平均菌落数均在30～300（30～100）之间，则以后2个稀释级计算级间比值报告。
（4）如各稀级平均菌落数均在300（100）以上，则按最高稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。
（5）如各稀释级平均菌落数均不在30～300（30～100）之间，则以最接近30或300（100）的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。
（6）如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于1时，应报告菌数﹤10个/g或ml。
如供试品原液平板均未生长霉菌及酵母菌，报告未检出霉菌及酵母菌/ml。
（7）当各稀释级平均菌落数均小于30时，如高稀释级平均菌落数大于或等于低稀释级平均菌落数时，应以培养基稀释法重新测定，按测定结果报告菌数。
培养基稀释法：取低稀释级供试品（原液或1：10、1：100供试液）3份，每份各1ml，分别注入5个或5个以上平皿中（每皿0.2ml或＜0.2ml），每1个平皿倾注营养琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后，倒置培养，计数。
5个或5个以上平板点计的菌落之和，即为每1ml菌落数，共得3组数据。
以3份低稀释级供试液菌数的平均值乘以稀释倍数报告。
9、结果报告（1）菌落数在100以内时，按实有数据报告。
（2）菌落数大于100时，取两位有效数字报告，第三位按数字修约规则处理。
10、复试供试品细菌数、霉菌及酵母菌数其中任一项一次检验不合格，应重新取2倍包装量供试品，依法作单项复试两份，以三次检验结果的均值报告。