实验十 细菌常用生理生化反应实验培养基的制备
微生物生理生化实验培养基配方
配方1（用于细菌葡萄糖发酵---半固体穿刺培养）：蛋白胨2g，NaCl5g，K2HPO40.2g，1%溴酚蓝3ml，葡萄糖10g，琼脂8g，水1000ml。
115度灭菌20分钟。
小提示：先将蛋白胨和NaCl溶于热水，调pH至7.4（这时总体积接近1000ml），再加入1%溴酚蓝3ml，再加入糖，溶解均匀后分装。
配方2（用于细菌乳糖发酵---半固体穿刺培养）：蛋白胨2g，NaCl5g，K2HPO40.2g，1%溴酚蓝3ml，乳糖10g，琼脂8g，水1000ml。
115度灭菌20分钟。
小提示：先将蛋白胨和NaCl溶于热水，调pH至7.4（这时总体积接近1000ml），再加入1%溴酚蓝3ml，再加入乳糖，溶解均匀后分装。
配方3:MR与VP试验-------请实验员准备蛋白胨5g，葡萄糖5g，NaCl5g，水1000ml，调pH至7.2-7.4左右，115度灭菌20分钟。
甲基红试剂（需新配）40%KOH，-萘酚（需新配）配方4:柠檬酸盐利用试验步骤（液体-直接观察现象）-------请实验员准备NaCl5g，MgSO4.7H2O0.2g，磷酸氢二铵1g，K2HPO41g，柠檬酸钠2g，水1000ml，调pH至6.8-7.0左右后加入1%溴酚蓝10ml。
1%溴酚蓝：称取0.08g溴酚蓝溶于0.5ml95%乙醇中，再加水至总体积到10ml。
以上成分加热溶解后，调pH至6.8，然后加入指示剂，摇匀。
制成后为黄绿色，分装试管，121度灭菌20分钟。
配方5:淀粉酶实验0.2%淀粉2g，蛋白胨1g，1.5%琼脂20g，调pH7.0至7.2，水1000ml。
小提示：可先将琼脂放入水中加热，待完全溶解后，加淀粉。
混匀后高压灭菌。
检测用卢戈氏碘液过氧化氢酶试验过氧化氢溶液配方6:吲哚试验-------胰蛋白胨10g，NaCl5g，水1000ml，调pH至7.2-7.4左右，121度灭菌20分钟。
检测用乙醚及吲哚试剂配方7:H2S试验：柠檬酸铁铵半固体培养基1000ml蛋白胨10g，氯化钠5g，Na2S2O3.5H2O0.5g，柠檬酸铁铵0.5g，琼脂8g，pH7.2，121度灭菌20分钟。
培养基制备的流程
培养基制备的流程
培养基制备的流程主要包括以下几个步骤：
1.计算配方：根据所需培养基的种类和实验需求，计算各成分的比例和用量。
2.称量：准确称取各种成分，如蛋白胨、牛肉膏、琼脂等。
3.溶解：将称取的成分放入适量的水中，搅拌均匀，使其充分溶解。
对于一些
不易溶解的物质，如琼脂，可能需要加热辅助溶解。
4.调pH：根据微生物的生长需求，调整培养基的pH值。
一般而言，细菌培养
基的pH值范围在6.5-7.5，真菌培养基的pH值范围在4.8-5.8。
5.过滤：将溶解好的培养基通过过滤器过滤，以去除可能存在的杂质。
6.分装：将过滤后的培养基倒入无菌的培养皿或瓶子中，注意留出适当的空隙，
以利于蒸汽的排出。
7.灭菌：将分装好的培养基进行灭菌处理，常用的方法有高压蒸汽灭菌和干热
灭菌。
灭菌过程中要注意保持培养基内部的温度和压力，确保微生物被有效杀灭。
8.检验：对制备好的培养基进行质量检验，如观察培养基的外观、透明度、pH
值等，确保符合实验要求。
9.储存：将检验合格的培养基在适当的条件下储存，如4℃冰箱或阴凉干燥处。
在使用前，如需再次检验，可进行细菌或真菌的接种试验。
需要注意的是，在培养基制备过程中要严格遵循无菌操作规程，避免微生物污染。
同时，根据实验需求选择合适的培养基类型和配方，以满足不同微生物的生长需求。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告培养基的制备与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基是不可或缺的工具。
培养基的制备和灭菌是保证实验结果准确性和可重复性的重要步骤。
本实验旨在探究培养基的制备方法和灭菌技术的应用。
一、培养基的制备1.1 选择合适的培养基成分培养基的成分根据微生物的需求而定。
常见的培养基成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基时，需根据所研究的微生物特性选择合适的成分。
1.2 制备培养基的步骤制备培养基的步骤主要包括称量、溶解、调pH、加热消毒和装瓶。
首先，按照配方称取所需成分，并逐一溶解于适量的蒸馏水中。
随后，根据微生物的需求，调节溶液的pH值。
最后，将溶液装入试管或培养皿中，并加热消毒。
二、灭菌技术的应用2.1 灭菌的目的灭菌是指将培养基、培养器具和实验室环境中的微生物杀灭或去除的过程。
灭菌的目的是为了避免外来微生物的污染，确保实验结果的准确性。
2.2 常用的灭菌方法常用的灭菌方法包括高温灭菌、化学灭菌和紫外线灭菌。
高温灭菌是指将培养基或器具在高温条件下进行加热消毒，常用的方法有烘箱灭菌和压力灭菌。
化学灭菌则是通过使用化学物质如酒精、乙醛等来杀灭微生物。
紫外线灭菌则是利用紫外线的辐射杀灭微生物。
2.3 实验中的灭菌操作在实验中，常用的灭菌操作包括培养基灭菌、器具灭菌和工作台灭菌。
培养基灭菌是将制备好的培养基加热消毒，以杀灭其中的微生物。
器具灭菌则是通过高温、化学物质或紫外线对实验器具进行消毒。
工作台灭菌则是通过紫外线辐射对实验台面进行灭菌处理。
结论：培养基的制备和灭菌是微生物学研究中的重要环节。
正确的培养基制备和灭菌操作可以确保实验结果的准确性和可重复性。
通过本实验，我们学习了培养基的制备方法和常用的灭菌技术，为今后的微生物实验打下了基础。
参考文献：[1] 陈晓玲, 赵莉, 邱晓红, 等. 基础微生物学实验教程[M]. 2版. 北京: 高等教育出版社, 2017.[2] 郭燕妮, 张晓红. 微生物学实验指导[M]. 北京: 高等教育出版社, 2019.。
细菌鉴定中常用的生理生化反应解读
5
胰蛋白胨水培养基
成分：胰蛋白胨 5g NaCl 2.5g 水 500ml 制法： 1．将上述成分混合于蒸馏水中加热溶解， 矫正pH至7.4—7.6。 2．分装于80支试管内，每管5m1， 0.06MPa灭菌30min。
6
硫化氢试验培养基
成分：蛋白胨 10g NaCl 2.5g 柠檬酸铁铵 0.25g 硫代硫酸钠 0.25g 琼脂 4g 水 500ml 制法： 1．用水先将琼脂和蛋白胨加热溶解，冷至60℃加入其他 成分，溶化后加水至所需量。 2．调pH至7.2后分装到80支试管，0.1MPa 20min灭菌后 备用。
7
明胶液化培养基
成分： 牛肉膏 2.5g 蛋白胨 5g NaCl 2.5g 明胶 60g 水 500ml 制法：将上述成分加热溶化，调pH7.27.4，分装到80支试管，每支5ml。 0.06MPa 30min灭菌。
8
淀粉培养基
成分：蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 可溶性淀粉 2g NaCl 5g 琼脂 20g 水 1000ml 制法： 1．取少量水将淀粉调成糊状，再加入到已溶化好的培养基中， 定容到1000ml。 2．调pH至7.2，分装于三角瓶，115℃、25min灭菌后冷却到 60℃左右，无菌操作倒入无菌培养皿中制作平板培养基。 用途：供淀粉水解试验用。
2
乳糖发酵培养基
成分：蛋白胨(或胰蛋白胨5g) 10g NaCl 2.5g 水 500ml 制法： 1．将上述成分混合于蒸馏水中加热溶解，矫正pH至 7.4—7.6。 2．加乳糖5g，加热溶解后加入0.5ml的1.6%溴甲酚紫乙 醇溶液，混匀。 3．分装于80支试管内，每管5ml。 4．每管倒置一个杜氏小管，加盖，115℃灭菌30min。 *溴甲酚紫指示剂[pH 5.2(黄色)——6.8(紫色)]
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。
生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。
本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。
二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。
三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。
四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。
结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。
若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。
2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。
3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。
4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。
结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。
培养基制备实验报告
培养基制备实验报告培养基制备实验报告一、引言培养基是微生物学研究中不可或缺的工具，它提供了微生物生长所需的营养物质和环境条件。
本实验旨在探究培养基的制备方法以及其对微生物生长的影响。
二、实验材料与方法2.1 实验材料- 葡萄糖- 蛋白胨- 磷酸二氢钾- 氯化钠- 硫酸镁- 碳酸钠- 琼脂- 紫菜酸钠- 菌种2.2 实验方法1. 按照所需培养基的成分配比，称取相应质量的试剂。
2. 将葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、氯化钠、硫酸镁、碳酸钠等试剂溶解于适量的去离子水中，得到培养基溶液。
3. 将培养基溶液倒入培养瓶中，加入适量的琼脂并充分搅拌均匀。
4. 用无菌纱布过滤培养基溶液，排除其中的固体颗粒。
5. 将过滤后的培养基溶液分装至无菌培养皿中，每个培养皿约倒入20 mL。
6. 在培养皿中加入适量的紫菜酸钠，以供微生物生长所需的营养物质。
7. 用无菌技术将菌种接种于培养皿中，封闭培养皿并进行培养。
三、实验结果与分析经过一段时间的培养，我们观察到培养皿中出现了微生物的生长。
这表明我们制备的培养基具备了支持微生物生长的营养物质和环境条件。
实验中添加的紫菜酸钠也能提供微生物所需的特殊营养物质，促进微生物的繁殖。
对于培养基的制备，我们需要注意以下几点：1. 成分配比：培养基中各种营养物质的配比需要根据不同微生物的需求进行调整。
不同的微生物对营养物质的需求不同，因此制备不同种类的培养基时需要根据实际情况进行配比调整。
2. pH值调节：微生物对pH值的敏感度较高，因此在制备培养基时需要根据微生物的需求调节其pH值，以提供适宜的生长环境。
3. 琼脂的添加：琼脂是为了使培养基凝固，便于微生物的生长观察。
在制备培养基时，需要充分搅拌琼脂，使其均匀分布于培养基中。
4. 紫菜酸钠的添加：紫菜酸钠是一种富含多种维生素和微量元素的营养物质，可以提供微生物所需的特殊营养物质。
在某些微生物的培养中，添加适量的紫菜酸钠可以促进微生物的生长和繁殖。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告细菌鉴定是微生物学中的一个重要分支，它是通过对细菌的形态、生理生化反应、生长特性等方面进行分析，来确定细菌种类的过程。
在细菌鉴定中，生理生化反应实验是一种常用的方法，它可以通过观察细菌在不同条件下的生长情况，来确定细菌的种类。
本文将介绍几种常用的生理生化反应实验。
1. 氧气需求实验氧气需求实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧气需求量。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧气浓度的培养基中，然后观察细菌的生长情况。
如果细菌只能在氧气充足的条件下生长，那么它就是一种需氧菌；如果细菌只能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种厌氧菌；如果细菌既能在氧气充足的条件下生长，也能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种兼性厌氧菌。
2. 糖类发酵实验糖类发酵实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌对不同糖类的发酵能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同糖类的培养基中，然后观察培养基的酸碱度变化。
如果培养基的酸碱度发生了变化，那么说明细菌对这种糖类进行了发酵。
通过这个实验，我们可以确定细菌对哪些糖类具有发酵能力，从而进一步确定细菌的种类。
3. 氧化还原实验氧化还原实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧化还原能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧化还原剂的培养基中，然后观察培养基的颜色变化。
如果培养基的颜色发生了变化，那么说明细菌对这种氧化还原剂具有反应能力。
通过这个实验，我们可以确定细菌的氧化还原能力，从而进一步确定细菌的种类。
4. 酶活性实验酶活性实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的酶活性。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同底物的培养基中，然后观察底物的变化情况。
如果底物发生了变化，那么说明细菌对这种底物具有酶活性。
通过这个实验，我们可以确定细菌的酶活性，从而进一步确定细菌的种类。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、实验目的本实验旨在掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续的微生物培养提供保障。
二、实验原理1. 培养基的制备方法：（1）选用适当的基质：如蛋白胨、肉汤、蔗糖等；（2）添加必需元素：如氮源、碳源、矿物质盐等；（3）调节pH值：使其接近微生物生长最适pH值；（4）加入琼脂：使液态培养基凝固成固态培养基。
2. 灭菌技术：灭菌是指将微生物及其孢子全部杀灭或去除，以保证培养基无菌。
常用的灭菌方法有高温灭菌法和化学药剂灭菌法。
三、实验材料和设备材料：蛋白胨、肉汤、琼脂、氧化钠等。
设备：量筒、天平、自动移液器、恒温水浴器等。
四、实验步骤1. 制备液态培养基：（1）称取所需的蛋白胨和肉汤，按比例混合加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀；（2）调节pH值至7.0-7.2，若pH值过高可加入适量的氧化钠溶液；（3）将制好的液态培养基分装到不锈钢培养皿中，每个培养皿约20ml；（4）将分装好的液态培养基在恒温水浴器中加热至沸腾，持续煮沸10分钟。
2. 制备固态培养基：（1）按照液态培养基制备方法制备好液态培养基；（2）将琼脂加入到液态培养基中，搅拌均匀；（3）将制好的固态培养基分装到无菌试管或无菌平板中；（4）在恒温水浴器中加热至琼脂完全溶解。
3. 灭菌：将制备好的液态和固态培养基放入高压灭菌锅中进行灭菌处理，温度和时间根据不同材料和设备而定。
五、实验结果经过灭菌处理后，制备好的液态和固态培养基均无菌，可以用于微生物培养。
六、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守无菌操作规范，以保证培养基无菌。
2. 制备液态培养基时，要注意加入必需元素的比例和pH值的调节。
3. 制备固态培养基时，要注意琼脂的加入量和溶解度。
4. 灭菌处理时，要根据实验材料和设备选择合适的灭菌方法和时间。
5. 实验结束后，要对实验器材进行消毒处理。
七、实验结论本实验通过制备液态和固态培养基以及灭菌处理等操作，掌握了培养基制备和灭菌技术。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验十细菌常用生理生化反应实验培养基的制备生物科学贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节
一、实验目的：
1 熟习生理生化反应培养基的配制原理和一般方法步骤
2 熟悉高压蒸汽灭菌的原理方法
３为生理生化反应实验准备培养基
二、培养基配方：
1、葡萄糖蛋白胨水培养基（用于V. P. 反应和甲基红试验）：蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，K2HPO40.2g, 水1000mL，pH7.2，115℃湿热灭菌20min
2、蛋白陈水培养基（用于吲哚试验）：蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，pH7.2-7.4，121℃灭菌20min
3、硫化氢实验培养基：蛋白胨10g，NaCl 5g，牛肉膏10g，柠檬酸铁铵5g,硫代硫酸钠, 5g, 蒸馏水1000mL，pH 7.0～7.4，分装试管，每管高度4～5cm。
11５℃灭菌20min
4、硝酸盐还原培养基：蛋白胨10g，NaCl 5g，KNO3（分析纯）1～2g，蒸馏水1000mL，pH7.4，分装小试管，121℃灭菌20min
5、柠檬酸盐培养基：NH4H2PO4 1g，K2HPO4 1g，NaCl 5g，MgSO4·7H2O 0.2g，柠檬酸钠2g，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，1%溴麝香草酚蓝酒精液10mL。
将上述各成分加热溶解后，调pH6.8，然后加入指示剂，摇匀。
制成后为黄绿色，分装试管，112℃灭菌20min
后制成斜面。
6、富氏明胶培养基：NaCl 5g，K2HPO4 1.5g，KH2PO4 0.5g，明胶4.0g，蛋白胨0.1g，牛肉膏5g，琼脂15-20g，葡萄糖0.05g，蒸馏水1000mL，pH7.2，115℃灭菌20min
7、淀粉培养基：蛋白胨10g，NaCl 5g，牛肉膏5g，可溶性淀粉2g，蒸馏水1000mL，琼脂15-20g，121℃灭菌20min
8、葡萄糖发酵培养基：蛋白胨10g，NaCl 5g，葡萄糖10g,蒸馏水1000mL，琼脂5g, pH7.4，加1%溴甲酚紫指示剂至紫色, 115℃灭菌20min
三、实验器材：
1、药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl 、1NHCl、1NNaOH
溶液等。
2、器材：小烧杯、1000mL不锈钢杯、电炉、天平、牛角匙、玻
棒、pH试纸、试管、分装漏斗、棉塞、三角瓶、橡皮圈。
3、高压灭菌锅
四、实验方法：
１葡萄糖蛋白胨水培养基(液体培养基,配200毫升,分装20支大试管): 换算---称量---溶解---调pH值---分装大试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(115℃,20分钟)
2 糖蛋白胨水培养基(液体培养基, 配200毫升,分装20支大试管):
换算---称量---溶解---调pH值---分装大试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(121℃,20分钟)
3 硫化氢实验培养基(配200毫升,分装20支小试管):
换算---称量---将蛋白胨琼脂溶解---稍冷加入其它成分---调pH值---分装小试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(115℃,20分钟)
4 硝酸盐还原实验培养基(液体培养基,配200毫升,分装20支小试管):
换算---称量---溶解---调pH值---分装小试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(121℃,20分钟)
5 柠檬酸盐培养基(固体斜面, 配200毫升,分装20支大试管):
换算---称量---溶解---调pH值---加溴麝香草酚蓝指示剂---分装大试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(121℃,20分钟)---灭菌后摆斜面6 富氏明胶培养基(制备固体平板,配200毫升,装入500毫升三角瓶中,制8-10个平板):
换算---称量---先将明胶溶解再溶解其它成分---调pH值---装入500毫升三角瓶中---加棉塞---包扎---待灭菌(115℃,20分钟)---灭菌后收藏
7 淀粉培养基(制备固体平板,配200毫升,装入500毫升三角瓶中,制8-10个平板):
换算---称量---先将淀粉溶解再溶解其它成分---调pH值---装入500毫升三角瓶中---加棉塞---包扎---待灭菌(121℃,20分钟)---灭菌后收藏
8 葡萄糖发酵培养基(半固体培养基,配200毫升,分装20支小试管)：
换算---称量---溶解---调pH值---加溴甲酚紫指示剂---分装小试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(115℃,20分钟)
灭菌:
按不同培养基的要求将培养基灭菌.
灭菌后将柠檬酸盐利用培养基摆斜面，其余垂直放置，收于实验台柜中．
五、思考题：
1 配置各种生理生化培养基时,分别应当注意什么事项?
答：各个物质添加后要完全溶解（如果有琼脂的话要加热比较久）在水中，调节pH到合适的范围，然后灭菌。
灭菌后分装或者铺平板的时候要在洁净操作台上进行，避免再次污染。
如果需要添加抗生素，一定要在灭菌后，冷却到大约五六十度的时候加。
2 配培养基时，为什么要先调好pH值在加指示剂？
答：通常会吧pH调制7-7.4，为菌类生长提供中性环境。
部分指示剂是非中性的，对培养基的pH值变化影响较大，所以要后加入。
３为什么有些培养基要在１１５℃灭菌？
答：因为若温度过高，培养基会遭到破坏，温度过低则灭菌效果不强。