实验5 细菌的生化反应实验
细菌的生理生化反应实验报告
细菌的生理生化反应实验报告【实验目的】了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
【实验原理】通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些第五的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物带血的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。
微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色化合物为.反应阳性。
有些细菌发酵糖类产生有机酸较多，使发酵液的pH下降到以下，当加入甲基红试剂后，时发酵液变红色，为甲基红反应阳性。
某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。
【实验材料和用具】1.菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。
2.培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂3.仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管、杜氏小管。
【实验方法】（一）V-P反应1.试管标记取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。
空白对照不接种。
置37度恒温培养箱中培养24-48h。
3.观察记录去除以上培养物，分别取出2ml培养液加入另外5支相应编号的空试管中，加入与培养液等量的V-P试剂，充分震荡2min。
放置37度恒温培养箱中培养30min观察记录结果。
（二）甲基红实验于V-P实验留下的培养液中，分别加入2-3滴甲基红指示剂，立即观察培养液的颜色变化（三）吲哚实验1.试管标记取5只装有蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
实训五 细菌的生化试验
实训五细菌的生化试验一、目的要求1．通过本试验加深对细菌生化反应原理和意义的理解；2．掌握常规细菌生化试验操作方法。
二、实训材料各种糖发酵管、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、接种环（针）、酒精灯、酒精棉球、小烧杯、固体石蜡、吲哚试剂、甲基红试剂、VP试剂、菌种（大肠杆菌，金黄色葡萄球菌）等三、实训操作步骤一、糖类发酵（分解）试验★原理：细菌含有分解不同糖（醇、苷）类的酶，因而分解各种糖（醇、苷）类的能力也不一样。
有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸（符号：+）、产气（符号：○），培养基由兰变黄（指示剂溴麝香草酚兰由兰遇酸变黄的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（符号：－），培养基仍为蓝色。
★方法：无菌操作将细菌的培养物用穿刺接种法接种于上述培养基的深部，用石蜡封口，于37℃温箱培养24小时。
观察结果，记录产酸产气情况。
二、V－P试验（二乙酰试验）★原理：某些细菌能从葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→2，3-丁烯二醇，在有碱存在时氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物起作用，产生粉红色的化合物。
其反应式为：2CH3COCOOH——→CH3COCHOHCH3十2CO2丙酮酸乙酰甲基甲醇CH3CHOHCHOHCH3→-KOH2HCH3COCOCH32，3-丁烯二醇丁二酮（二乙酰）★培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基（含葡萄糖、K2HPO4、蛋白胨各5g，完全溶解于1000ml水中后，分装试管内，间歇灭菌或10磅10分钟灭菌。
）★方法：1．无菌操作将菌种接种到蛋白胨水培养基中，于37℃温箱培养3-4天。
2．Barritt氏法试剂：甲液（6％α-奈酚酒精溶液），乙液（40％氢氧化钾）。
向经过3-4天的2.5ml培养液中加入甲液0.6ml和乙液0.2毫升，摇振混合2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1°C恒温箱，如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。
细菌生化反应
不变色
（无色）
β-半乳糖苷酶
（ONPG）
（无色）邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷→（黄色）邻-硝基酚
【β-半乳糖苷酶是一种诱导酶，它只催化它的“天然”底物乳糖及别的β-半乳糖苷化合物的水解，因此，当某细菌生长在含有乳糖的培养基中时，才有β-半乳糖苷酶的活力。本试验采用的菌种，以培养在三糖铁培养基为宜。】接种于ONPG培养基，培养12h-24h后观察
于洁净的玻片上滴加3%H2O21滴，再挑取固体培养基上的菌落于H2O2中混匀
大量气泡
（1分钟内）
不产生气泡
★苯丙氨酸
脱氨酶
苯丙氨酸→苯丙酮酸→绿色的螯合物
接种于苯丙氨酸培养基，培养18h-24h后，加入10% FeCl3约3mm高
与试剂交界面处呈绿色/褐色环
不变色
（无色）
动力
接种于半固体，培养8h-12h后观察；混浊，穿刺线不清晰、模糊、扩散生长为阳性，穿刺线与培养基界限清楚，无扩散生长为阴性
MIU是含胰蛋白、酚红、尿素的复合培养基和浸透科瓦克试剂的纸条。它用直金属丝通过培养基中心接种。非能动性细菌（如志贺菌属）只在接种线上生长，而能动性细菌（如大部分沙门菌属）长满培养基（扩散生长），使其变混浊。尿素酶阳性细菌（如变形杆菌属）使培养基变红。吲哚阳性细菌（如大肠埃希杆菌）使科瓦克试纸变红。
※糖氧化/发酵（O/F）
氧化型（分解）
产碱型（不分解）
发酵型（降解）
（用于G+球菌）
将被检菌接种于2支O/F培养基（糖、溴甲酚紫）（必须用水配制，G+球菌分解乙醇产酸）中，其中1支接种后封液体石蜡约1cm深，培养6h-24h后观察。
【该管采用半固体，可作产气观察】
发酵型
（两管均变黄色）
微生物学检验细菌的生物化学实验
所致疾病
侵袭性疾病 化脓性感染：疖、痈、甲沟炎、中耳炎、 脑膜炎、败血症等 毒素性疾病： 食物中毒、假膜性肠炎等
免疫性
有一定天然免疫力 病后获得的免疫力作用不强、不持久
微生物学检验
细菌鉴定的基本程序
标本
直接涂片 革兰染色镜检
分离培养 取可疑菌落
鉴定试验和药敏试验
结果报告
标本采集
根据病种不同，采集不同标本 脓液、创伤分泌液、穿刺液、血液、尿 液、痰液、脑脊液、粪便
抗原构造
★葡萄球菌A蛋白（SPA） 存在于金黄色葡萄球菌细胞壁 可与人和其它哺乳动物IgGFc段非特异性 结合，应用于协同凝集试验 抵抗吞噬细胞的吞噬
★多糖抗原 具有型的特异性,有助于金葡菌感染的诊 断
分类和分型
葡萄球菌包括32种及亚种 根据产生色素的不同分类 根据产生凝固酶与否进行分类 按噬菌体分型法分类
检验方法—分离培养
血标本－→增菌（葡萄糖肉汤）－→分 离培养（血平板） 生长现象：混浊、胶胨状凝固、溶血
金葡菌的鉴定依据
血平板上金黄色色素、β-溶血环 血浆凝固酶 + 发酵甘露醇 + 耐热核酸酶 +
凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）
条件致病菌 医院内感染的重要病原菌 对多种抗生素耐药
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和 耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 （MRCNS）是院内感染的重要病原菌之 一，MRSA、MRCNS对多种抗生素耐药， MRSA不仅对青霉素类、头孢菌素类等β－ 内酰胺类抗菌药物耐药，同时也对四环素、
红霉素、氯霉素、克林霉素及庆大霉素等
常用抗菌药物耐药，对利褔平和磺胺的耐 药率也达30％，但通常对万古霉素敏感。 MRSA、MRCNS常常引起院内感染与播散， 且难于治疗和控制，病死率高。
细菌的生理生化反应实验
细菌的生理生化反应实验一．目的与意义一般来说，对一株从自然界或其他样品中分离纯化的未知菌种的鉴定要做以下几个方面工作。
①个体形态观察，进行革兰氏染色，分辨是G（+）菌还是G（-）菌。
并观察其形状、大小、有无芽孢及其位置等；②菌种形态观察，主要观察其形态、大小、边缘情况、隆起度、透明度、色泽、气味等特征；③做动力试验，看他能否运动及其鞭毛着生类型（端生、周生）；④做生理生化反应及做血清学反应实验。
最后根据以上实验项目的结果，通过查阅微生物分类检索表，给未知菌进行命名。
此实验为生理生化反应实验，就是使不同种类的细菌在对营养物质的利用、代谢产物的种类、代谢类型等方面表现出差异，故利用这些差异作为细菌分类作为细菌分类鉴定的重要依据。
要求在此实验中了解细菌在不同底物环境中各种代谢途径和产物，加深理解细菌生化反应原理；根据细菌在培养基中生理生化特点，学会鉴定细菌。
生理生化反应的项目很多。
本实验结合肠道杆菌科的分类鉴定，选作其中重要的几项实验。
二．材料与用具1.菌种：大肠杆菌、沙门氏菌。
2.培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖）糖发酵半固体培养基（添加溴甲酚紫试剂）、葡萄糖蛋白胨水培养基、童汉氏蛋白胨水培养基、柠檬酸盐斜面培养基（添加溴麝香草酚蓝变色范围pH6.8 绿—pH7.6 蓝）、三糖铁琼脂培养基。
3.试剂：甲基红指示剂、40%NaOH、吲哚检验试剂（对二甲基氨基苯甲醛）、双氧水等。
4.用具。
酒精灯、接种环、接种针、试管等。
三．实验内容与方法1.糖（醇）类发酵实验多数细菌都能利用糖类作为碳源及能源，但各种菌因含有不同发酵糖（醇）类的酶，故表现出有的能分解或不分解某些糖类，有的分解糖产酸，并产气，或只产酸不产气，可根据这些特点鉴别细菌（培养基中指示剂溴甲酚紫pH6.8以上呈紫色，pH5.2以下呈黄色）。
大肠杆菌与沙门氏菌的生理生化鉴定区别操作：（葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖）糖发酵半固体培养基（添加溴甲酚紫试剂）中，无菌操作，穿刺接种，37℃培养1天。
生化反应鉴定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生化反应在微生物鉴定中的重要性。
2. 掌握常见生化反应的原理和方法。
3. 通过实验，对给定的微生物进行鉴定。
二、实验原理生化反应是指微生物在生长过程中，通过酶的催化作用，将营养物质转化为自身所需的物质，同时产生一些代谢产物。
这些代谢产物可以用来鉴定微生物的种类。
常见的生化反应包括糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂等。
- 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。
- 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等。
2. 仪器：- 酒精灯- 接种环- 超净工作台- 恒温培养箱- 高压灭菌锅- 试管- 移液枪- 滴管四、实验方法1. 菌种培养：将菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
2. 糖发酵试验：- 将培养好的菌种接种于糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖），置于恒温培养箱中培养24小时。
- 观察培养基颜色变化，记录发酵结果。
3. 吲哚试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入吲哚试剂，观察颜色变化，记录结果。
4. 甲基红试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入甲基红试剂，观察颜色变化，记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖发酵试验：- 大肠杆菌：发酵葡萄糖、乳糖，不发酵蔗糖。
- 金黄色葡萄球菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 枯草芽孢杆菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 变形杆菌：发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
2. 吲哚试验：- 大肠杆菌：吲哚试验阳性。
- 金黄色葡萄球菌：吲哚试验阴性。
- 枯草芽孢杆菌：吲哚试验阴性。
- 变形杆菌：吲哚试验阳性。
实验五 细菌生理生化反应
细菌鉴定中常用的生理生化反应生05 边晔 2010030026周四班同组成员：徐竞实验时间 2012年11月15日一、实验目的1.了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；2.通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样性；3.了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义；4.学习各种接种技术。
二、实验原理1.各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质分解能力也不一样，因而代谢的产物存在差别。
2.细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。
（具体原理略）3.用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
三、实验器材1.仪器和用具恒温培养箱。
试管：每个试验4根试管(3根接种，1根对照)。
接种环、接种针、酒精灯、试管架、记号笔、打火机、杜氏小管。
2.微生物大肠杆菌（Escherichia coli）、变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）、产气杆菌（Enterobacter aerogenes）和未知菌S3的各自悬液。
3.试剂甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂。
上次配制的试管培养基（葡萄糖/乳糖发酵培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，胰蛋白胨水培养基，硫化氢试验培养基，明胶液化培养基，柠檬酸盐培养基），淀粉培养基平板。
四、实验步骤1.培养基配制（上次实验制备）1)葡萄糖/乳糖发酵培养基（用于糖发酵实验）胰蛋白胨 5gNaCl 2.5g水 500ml制法：a)将上述成分混合于水中溶解，矫正pH至7.4—7.6。
b)加葡萄糖/乳糖5g，溶解后加入0.5ml的1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，混匀。
c)分装于60支试管内，每管5ml。
d)每管倒置一个杜氏小管，加盖，115℃灭菌30min。
2)葡萄糖蛋白胨水培养基（用于甲基红和VP实验）蛋白胨 2.5g葡萄糖 2.5g磷酸氢二钾 2.5g蒸馏水500ml制法：a)将上述成分混合于蒸馏水中，加热溶解后，调pH至7.2。
实验五细菌的生理生化（范文大全）
实验五细菌的生理生化（范文大全）第一篇：实验五细菌的生理生化实验五细菌的生理、生化试验实验目的：初步学会细菌生理、生化试验的操作、结果分析。
仪器材料：蛋白胨水培养基、糖发酵培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、醋酸铅蛋白胨水培养基、柠檬酸盐琼脂斜面培养基等；甲基红（MR）试剂、维-培（V-P）试剂、靛基质试剂等；大肠杆菌、产气杆菌、沙门氏菌的24h纯培养物等。
微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。
因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下：一、糖酵解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验。
试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。
接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。
本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。
一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。
二、淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。
淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1°C培养24~48h，或于20℃培养5天。
然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。
立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。
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（4）柠檬酸盐试验：培养48h后观察柠檬酸盐
斜面培养基上有无细菌生长和是否变色，蓝色
为阳性，绿色为阴性。
菌 名
吲哚试验
IMViC试验
甲基红试验 伏-普试验 柠檬酸试验
大肠杆菌 未知菌 对 照
（三）金黄色葡萄球菌的生化鉴定
以16种生化鉴定管检测金黄色葡萄球菌对各种物质的 利用情况，每组一套（尿素、蔗糖、精氨酸水溶液、木糖、乳
3. 37℃ ，24-48h。
4. 观察颜色变化及有无气体产生。
5. 结果： 将结果填入下表，“ ”表示产酸或产气；“+”表 示产酸不产气,“-”表示不产酸不产气。
糖类发酵 葡萄糖发酵 乳糖发酵 大肠杆菌 未知菌 对 照
OF :Oxidize and ferment
氧化发酵实验
（二）IMViC试验(吲哚、甲基红、伏-普、柠檬酸盐）
糖、甘露糖、木糖醇、麦芽糖、蕈糖、甘露醇、乙酰葡胺、硝酸盐、 蜜二糖、果糖、葡磷胨水、山梨醇），将实验结果记入表格
中。 接种方法：将鉴定管上端用砂轮划痕折断，后用接种 环取纯菌接种，置于灭菌平皿或小试管架上。 培养：35℃培养12-24h，观察记录结果。
葡萄球菌属TH编码鉴定结果记录表
实 4 2 1 4 2 1 4 验 尿 蔗 精 木 乳 甘 木 项 素 糖 水 糖 糖 糖 醇 目 结 果 2 1 4 麦 蕈 甘 芽 糖 醇 糖 2 1 乙 硝 酰 还 葡 胺 4 2 1 1 蜜 果 V 山 二 糖 P 醇 糖
总 值
养物之间产生红色环状物为阳性反应。
（2）甲基红试验：于培养24h后，将1支葡萄糖蛋白胨水
培养物内加甲基红试剂2滴，培养基变为红色者为阳性，变
黄色者为阴性。 （3）伏-普试验：于培养24h后，将1支葡萄糖蛋白胨水培 养物内加入5-10滴40%KOH，然后加入等量的5% α-萘酚， 用力振荡，再放入37℃温箱中保温5-10分，以加快反应速 度。若培养物呈红色者为V-P试验阳性。
1. 接种和培养 用接种针将大肠杆菌与未知菌分别接种于2支蛋白 胨水培养基（吲哚试验），2支葡萄糖蛋白胨水培养基 （甲基红试验和伏-普试验），2支柠檬酸盐斜面培养基，
置37℃ 培养2d。
2. 结果观察
（1）吲哚试验：于培养24h后的蛋白胨水培养基内 加3-4滴乙醚，摇动数次，静置1-3分，待乙醚上 升后沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂，在乙醚和培
明胶发酵培养基等。
试 等 其他材料：试管架、酒精灯、接种环等 剂：大肠杆菌IMViC鉴定管、金黄色葡萄球菌生化鉴定管、 甲基红指示剂、40%KOH、5%α -萘酚、乙醚、吲哚试剂
三、实验步骤
（一）糖发酵试验
1. 用记号笔在各试管上标明发酵培养基名称和所接种的细菌 2. 取葡萄糖发酵培养基管3支，分别接种大肠杆菌、未知菌， 第三支不接种，作为对照。另取3支乳糖发酵培养基，作 同样的操作。
与试剂中的对二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲
哚而呈红色
Leabharlann 反应结束加试剂0.5ml 两液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性
甲基红实验（M.R实验）
微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸——
pH下降——加入指示剂甲基红——红色
V.P实验原理
三、实验材料
菌 种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、未知菌斜面 培养基：葡萄糖发酵培养基试管、乳糖发酵培养基试管、 蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、
实验五
细菌的生化反应实验
一、实验目的
掌握细菌鉴定中常用生化实验的原理和方法 了解细菌生化试验在细菌鉴定及诊断中的重要 意义
二、实验原理
不同的细菌具有不同的酶系统，对糖类 和蛋白质的分解能力不同，最终形成的分解
代谢产物不同。
通过对代谢产物的检测，可鉴定细菌。
吲哚试验Indol
细菌分解培养基中的色氨酸，生成吲哚，吲哚可