柚木愈伤组织的EHA105转化条件

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不同抗生素对紫雨桦离体叶片愈伤组织诱导的影响

不同抗生素对紫雨桦离体叶片愈伤组织诱导的影响王芳;姜静【摘要】以紫雨桦无菌叶片为试材，研究头孢霉素、头孢曲松钠、羧苄青霉素和特美汀4种不同浓度的抑菌抗生素对紫雨桦离体叶片愈伤组织诱导的影响，分析4种抑菌抗生素对农杆菌 EHA105（pCHS）的抑菌效果。

结果表明，抗生素是头孢霉素、头孢曲松钠、特美汀比羧苄青霉素抑菌效果好，其中头孢霉素和头孢曲松钠的适宜浓度范围为200～400 mg／L、特美汀为400～800 mg／L。

30～40 mg ／L的卡那霉素、15～20 mg／L的G418或潮霉素还可用于紫雨桦为受体的遗传转化中筛选转化体。

%The effects of four kinds of antibacterial antibiotics,(Cefotaxime,Ceftriaxone,Carbenicillin and Timentin)on induction of callus were studied using the leaves of Betula pendula ‘Purple Rain’as explants,and the effects of the antibacterial antibiotics on inhibiting Agrobacterium EHA105 (pCHS)were also analyzed.The results indicated that the best antibacterial antibiotics were Cephalosporins, Ceftriaxone and Timentin in Agrobacterium-mediated transformation.The appropriate concentration of Cefotaxime or Ceftriaxone was 200 -400 mg/L,and Timentin was 400-800 mg/L.The results also showed that 30-40 mg/L kanamycin,15 -20 mg/L G418 or Hygromycin were the ideal pressure to screen transformant for Betula pendula ‘Purple Rain’.【期刊名称】《西南林业大学学报》【年(卷),期】2014(000)003【总页数】5页(P27-31)【关键词】紫雨桦;抗生素;离体;叶片;愈伤组织;诱导【作者】王芳;姜静【作者单位】林木遗传育种国家重点实验室东北林业大学，黑龙江哈尔滨150040;林木遗传育种国家重点实验室东北林业大学，黑龙江哈尔滨 150040【正文语种】中文【中图分类】S723.1转基因是获得植物新品种的方法之一，人们常采用农杆菌介导法来获得成功的林木转化子[1-4]，迄今为止，育种学家已利用该方法获得了抗逆、早花等性状的转基因株系[5-7]。

农杆菌介导转化愈伤组织获得抗除草剂转基因玉米植株

山地农业生物学报27(5):382~388,2008Jour nal of M oun tai n Agricu lture and B iology农杆菌介导转化愈伤组织获得抗除草剂转基因玉米植株*朱友银1,2,冯怡1,2,赵德刚1,2*(1.贵州大学生命科学学院贵州省农业生物工程重点实验室,贵州贵阳550025;2.贵州大学教育部绿色农药与农业生物工程重点实验室,贵州贵阳550025)摘要:对4个玉米基因型Q31@Z31、Q31@Z3、Z3、B73胚性愈伤组织进行农杆菌介导基因转化,根据G us基因表达水平,研究了影响农杆菌介导遗传转化玉米愈伤组织的因素。

结果表明,在选用的玉米基因型中,不同基因)为型转化效率存在显著差异,其中Q31@Z31、Q31@Z3、B73转化效率较高,Z3较低。

农杆菌菌液浓度(OD6000.4~0.6、侵染时间为10m i n、23e暗培养3d是较佳转化条件。

通过农杆菌介导遗传转化,获得再生玉米植株,并对再生植株离体叶片进行除草剂抗性检测,发现转基因再生植株叶片可以抵抗200mg/L B asta。

关键词:玉米愈伤组织;农杆菌;遗传转化;G us基因;Pat基因中图分类号:S513;Q789文献标识码:A文章编号:1008-0457(2008)05-0382-07Callus Transfor m ation of A grobac t eriu m-m ediated and P lants R esistant to Herbicide i n Zea m ays L.Z H U You-y in1,2,FEN G Y i1,2,ZHA O D e-gang1,2*(1.Gu izhou K e y Laboratory of A gro-B ioengineer ing,C olleg e of L i f e Sciences,G uizhou Un iver sity,G uiyang Gu izhou550025,Ch ina;2.K ey L abo ra tory of Green P esticide andA gr icu lturalB io eng ineering,M i n istry of Educa tion,Guizhou Un ivers ity,Gu i y ang G i zhou550025,China)Abstrac t:In t h i s report,four g enotypes of m a i ze(Z ea may s L.)e mbryon ic ca lliw ere transfor m ed v ia Ag robacter i u m tu-m efac i ens.T he expression leve l of B-g l ucuron i dase(G us)g ene was used as the ev al uation index of infl uenc i ng trans-for m ati on e fficiency.T he resu lts sho w ed that there w as do m i nan t d ifference a m ong differentm a ize geno types.The hybri d li ne Q31@Z31、Q31@Z3and li ne B73w ere m ore sensiti ve than li ne Z3.I mproved transf o r m ati on effi c i encies w ere ob-=0.4~0.6)for10m i n i n ta i ned when the e m bryonic ca lliw ere incubated w it h A grobacter i u m suspensi on cells(OD600the infecti on m edi um.O pti m ized co-culture cond iti on w as tha t infecti on w as per f o r m ed at23e i n dark f o r3days.The transgenic ma ize plan ts w ith basta-resistant w ere obta i ned v ia Ag robacter i u m-med i ated transfor m a ti on.K ey word s:M a ize(Zea m ays L.);Embryon ic ca ll;i A grobactcri u m tu m efac iens;G ene ti c transfor m a tion;G us g ene;P at gene玉米Zea m ays L.是重要的粮食作物,也是重要的工业原料。

农杆菌介导转化水稻方法的改进

ｆｅｃｔｉｎｇｃａｌｌｕｓｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｂｅａｂｌｅｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｉｎｄｉｃａｒｉｃｅｔｅｓｔｅｄａｐｐａｒｅｎｔｌｙ．Ｃａｚａｎｄｍｅｍｂｒａｎｅｓｕｒｆａｃｅａｃｔｉｖａｔｏｒｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｐｒｏｍｏｔｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ａｆｔｅｒｉｍ — ｍｅｒｇｅｄａｎｄｉｎｆｅｃｔｅｄｉｎｃｏｃｕｈｕｒｅｍｅｄｉｕｍＡＡＭ．ＷｈｅｎｃａｌｌｉｗｅｒｅｉｍｍｅｒｇｅｄｉｎＣａＣｌ２ｗｉｔｈａｄｄｉｔｉｖｅ０．１９／６Ｔｗｅｅｎ２Ｏ，ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｃａｌｌｉｃａｎｂｅｒｅｍａｒｋａｂｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ；ｔｒａｎｓｆｅｒｍａｔｉｎ；ｉｎｄｉｃａｒｉｃｅ
织．以ＡＡＭ培养基作为共培养培养基，对于农杆菌ＥＨＡ１０５（ｐＵｂｌｍ）来说，菌液浓度为（）Ｄ６ｏｏ值＝０．８时，愈伤
组织的转化率最高．在农杆菌侵染愈伤组织过程中，通过负压处理可明显提高愈伤组织的转化频率．在愈伤组
程的研究．
第５卷第３期
王志成，等：农杆茵介导转化水稻方法的改进
第５卷第３期２００８年９月
长沙理工大学学报（自然科学版）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈａｎｇｓｈａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ）

农杆菌介导水稻遗传转化的影响因素及应用研究进展

基金项目上海市科技兴农项目（沪农科推字〔2021〕第1-3号）；安徽省科技重大专项（201903a06020011）。

作者简介陈思（1997—），女，安徽安庆人，助理农艺师，从事水稻遗传育种工作。

*通信作者收稿日期2022-06-17农杆菌介导水稻遗传转化的影响因素及应用研究进展陈思张从合*王慧吴浩然杨力黄艳玲管昌红（安徽荃银高科种业股份有限公司/农业农村部杂交稻新品种创制重点实验室，安徽合肥230088）摘要在水稻遗传转化过程中，农杆菌介导转化法与其他方法相比优势较多，比如转入的外源DNA 结构完整及表达比较稳定、操作简便、转化率高等，已被广泛应用于转基因技术中。

本文对根癌农杆菌介导水稻遗传转化的原理、影响遗传转化的因素进行了综述，并探讨了农杆菌介导转化法的应用前景。

关键词水稻；根癌农杆菌；农杆菌介导转化法；遗传转化中图分类号S511文献标识码A文章编号1007-5739（2023）05-0001-04DOI ：10.3969/j.issn.1007-5739.2023.05.001开放科学（资源服务）标识码（OSID ）：Research Progress on Influencing Factors of Agrobacterium-mediated GeneticTransformation of Rice and Its ApplicationCHEN SiZHANG Conghe *WANG HuiWU HaoranYANG LiHUANG YanlingGUAN Changhong(Anhui Win-all Hi-tech Seed Co.,Ltd./National Key Laboratory for New Variety Development of Hybrid Rice of Ministry of Agriculture and Rural Affairs ，Hefei Anhui 230088)AbstractIn the process of rice genetic transformation,agrobacterium-mediated transformation method has manyadvantages compared with other methods,such as the complete structure and relatively stable expression of the transferred exogenous DNA,simple operation and high transformation rate.It has been widely used in transgenic technology.This paper reviewed the principles of rice genetic transformation mediated by Agrobacterium tumefaciens and the factorsaffecting genetic transformation,and discussed the application prospects of agrobacterium-mediated methods.Keywordsrice;Agrobacterium tumefaciens ;agrobacterium mediated transformation method;genetic transformation水稻是世界上重要的粮食作物之一，是全球1/2以上人口的主食，也已经成为植物基因组学研究的重要对象[1]。

植物与微生物的相互作用

目的基因表达盒
双元载体系统
Hin dIII
多
Sph I (11083)
Pst I
克
Sal I
隆
Xba I Bam H I
位
Sma I (11052)
点
Kpn I
Sac I
Eco R I
Bst XI
tgacaggatatattggcgggtaaac RB Lac Zalpha tggcaggatatattgtggtgtaaaca LB
缺点：操作比较麻烦、难度大（原生质体制备、转化、再生）
Protoplast transformation of transgenic Valencia sweet orange plants with GFP by PEG-mediation
一、农杆菌介导的（Agrobacteriummediated ）转基因机理
土壤农杆菌（Agrobacterium
tumefaciens）是一种革兰氏阴性
土壤杆菌，在自然界中普遍存在，其特点是能感染双子叶植物，并引起植物形成肿瘤。
ห้องสมุดไป่ตู้
天然的植物遗传工程
土壤农杆菌的基因组与Ti质粒组成
原因：土壤农杆菌中Ti质粒上一段DNA（T-DNA，transfer DNA，编码生物碱和植物激素）转到了植物细胞基因组中，引起植物细胞旺盛分裂。
1.2 利用固氮菌提高作物产量
•化学固氮
转化条件苛刻：温度高于500℃，压力大于200atm。大量施入田间的肥料流失，最终流入海洋，导致水体严重污染以及水中微藻及其它微生物大量繁殖。
•生物固氮
无需消耗燃料或电等能源，不造成污染，过程复杂，需要酶（固氮酶和固氮酶的还原酶）的参与，消耗大量ATP，

农杆菌EHA105转化条件的优化及水稻愈伤组织遗传转化体系的初步建立

农杆菌EHA105转化条件的优化及水稻愈伤组织遗传转化体系的初步建立：以质粒PBI121和gfp作为外源DNA转化农杆菌EHA105，通过对EHA105生长状态的测定，并对重悬液Cacl浓度，速冻时间和热处理温度等实验条件逐一进行筛2选，以确定EHA105的最优转化条件。

然后，分别用被转化的农杆菌侵染水稻愈伤组织。

结果表明，农杆菌 OD值接近0.6经过20mmol/L Cacl2重悬细胞，液氮速冻5600分钟后于28?处理5分钟，农杆菌的转化效率最高。

愈伤组织经GUS染色或荧光观察，外源基因已经转入水稻种子中。

农杆菌；水稻愈伤组织；遗传转化: Agrobacterium tumefaciens EHA105 was transformed by the plasmid PBI121 and gfp. To difine the best experimental conditions for transformationof A.tumefaciens the growth rate of the A.tumefaciens EHA105 was measured ,andthe concentration of resuspension solution,freezing time and the thawingtemperature were tested. And then infected mature rice in order to inducecallus with Agrobacterium tumefaciens respective .Result: By resuspended inCaclbuffer, frozen in liquid nitrogen for 5 min and thawed in 28? for 5 2min, the efficiency of transformation was the best. The callus was dyed byGUS or seen by fluorescence, which can testify that exterior gene has beentransferred into rice.Agrobacterium tumefaciens; rice callus; Genetic transformation水稻是世界上重要的粮食作物，并已为分子生物学研究的模式作物之一。

植物表达载体转化农杆菌操作步骤

植物表达载体转化农杆菌操作步骤第⼀部分：农杆菌介导转化⽔稻1、农杆菌选择：LBA4404、EHA105、GV31012、农杆菌活化：将保存的农杆菌在固体LB培养基上画线（或加或不加抗⽣素，LBA4404:Rif或Str；EHA 105：Rif或Str；GV3103：庆⼤霉素。

如果不加抗⽣素就有可能造成这些菌株的Ti质粒丢失，导致农杆菌缺乏侵染性），抗⽣素浓度为：50µg/m l。

28℃培养。

3、农杆菌感受态细胞的制备：1）挑取单菌落接种于3ml LB液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养⾄OD600 =0.5。

2）吸取1.5ml菌液于离⼼管中，冰浴10min；3）5000（13000）rpm离⼼30s，弃去上清液；4）沉淀⽤1.5 ml 0.5M NaCl悬浮,冰浴20min；5）5000（13000）rpm离⼼30s，弃去上清液；6）每管⽤100µl 20mMCaCl2悬浮，⽤于转化；制备好的感受态细胞可马上使⽤，也可按每管200ul分装于⽆菌离⼼管中，于4℃保存48⼩时内使⽤，长期贮存时必须在液氮中速冻后转⼀70℃保存。

使⽤时从⼀70℃取出，置冰上融化后使⽤。

4、DNA直接转化农杆菌：1）50µl农杆菌感受态细胞中加⼊质粒DNA 0.1～1µg（5－10ul），之后冰浴30 min；2）放⼊液氮中5min（或1min），然后⽴即放⼊37℃⽔浴锅中⽔浴5min；3）取出离⼼管，加⼊0.5mlLB，28℃、220rpm振荡培养3～5hr；4）取出菌液于含相应抗⽣素的LB平板上涂板，在培养箱中28℃条件下倒置培养。

2天左右菌落可见。

（pEmu载体：AMP+Rif/Str；pK载体：Kan＋Rif/Str；pTCK载体：Kan＋Rif/Str）5、重组农杆菌鉴定：1）挑取单菌落，接种于含相应抗⽣素的LB液体培养基中，28℃振荡培养过夜。

（pEmu载体：AMP+Rif/Str；pK载体：Kan＋Rif/Str；pTCK载体：Kan＋Rif/Str）2）⼩量提取质粒DNA，加GTE同时加5µL溶菌酶（50µg "ml -1，贮藏浓度为50mg/ml或10mg/ml）。

一种基于农杆菌介导的拟南芥瞬时转化技术优化

一种基于农杆菌介导的拟南芥瞬时转化技术优化郭勇;王玉成;王智博【摘要】利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的拟南芥瞬时转化体系影响因素来确定最佳转化条件.以生长15日龄的拟南芥幼苗为试验材料,以转化pCAMBIA1301空载体的根癌农杆菌EHA105为目的菌株进行瞬时转化.研究了吐温20、菌液OD值、乙酰丁香酮(AS)及转化时间等对拟南芥瞬时转化效率的影响.结果表明:以体积分数为0.05％的吐温、菌液OD600值为1.0和120 μmol/L 的AS侵染拟南芥2.5 h后,再共培养72 h,能够得到高瞬时转化效果.【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2016(044)006【总页数】5页(P41-44,83)【关键词】拟南芥;GUS基因;瞬时表达;实时定量;农杆菌介导转化【作者】郭勇;王玉成;王智博【作者单位】林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学),哈尔滨,150040;林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学),哈尔滨,150040;林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学),哈尔滨,150040【正文语种】中文【中图分类】Q786拟南芥是重要的模式植物，很多植物基因的功能都是通过基因转入拟南芥中进行研究，而转基因又分稳定表达与瞬时表达两种方式[1]，稳定表达需要的培养、鉴定时间较长，而与之相比，瞬时表达具有简单、快捷、周期短、准确等优点[2]，并且表达效率较稳定，转化率高。

当需要在短时间内进行基因功能的分析或者蛋白间的互作以及蛋白与基因间互作等的研究时，瞬时表达的方法可作为一种高效的手段[3]。

基于瞬时转化技术使基因在宿主体内瞬时表达，是一种快速的研究基因表达、蛋白质亚细胞定位及基因间互作的一种重要手段,与传统的转基因相比,瞬时表达不需要整合到染色体上，而且瞬时表达还不受基因的位置效应和基因沉默的影响，也不会产生可遗传的子代,生物安全性高[4]。

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ｏｔｍｒ－ｕｔｒｍｅｆｒｃｌｓｉｄｃｏｔｍｅｔｏｘｌｎｓｉ１ｏ１ａｓｐｍｕｐｅｃｕｅｔｏａｌｎｕｔｎｏｓｅｓｃｎｅｐａｔｓｔ３ｄｙ，Ｄ６ｖｌｅｏａｔｒｍｎｃｕｓｌｔｎｉｌｉｕｉｆｉ１０ｏａｕｆｂｃｅｉｉｏｕｍｏｕｉｕｌｏ
ｄｆｒｎｕｃｐｂｌｙｔｅｉｆｔｎｏｉｅｅｔｓｓｅｔｉｔｏｔｎｅｉＥＨＡ１５ａｄｃｏｅｔｉｈｓｓｅｔｉｔｈｕｄｂｅｅｔｄＳａｈａｓｒａｉｎｉｉｈｃｏｆ０ｌｎｓｗｈｈｓｕｃｐｂｌｓｏｅｓｌｅＯｔｔｔｅｔｎｆｍｔｎｉｉｉｙｌｃｈｒｏｏ
中图分类号：Ｑ４．９３Ｉ文献标识码：Ａ文章编号：１０３９２０）４—０４００１— ８Ｘ（０７０３９— ６
Ｇｅｅｉｒｎｆｒａｉｎｏｅｋｃｌｕｅｉｔｄｂｎｔｃｔａｓｏｍｔｏｆｔａａｌｓｍｄａｅｙ
曾炳山，裘珍飞，李湘阳，刘英
（中国林业科学研究院热带林业研究所，广州龙洞５０２）１５０
摘要：对农杆菌ＥＡ０Ｈ１５转化柚木愈伤组织的适宜条件进行了优化。ＥＡ１５转化柚木愈伤组Ｈ０
织的适宜预培养时间为ｌ — ３ｄ１１，菌液光密度Ｄ０６为０４一．，共培养时间为７— ，共培０．Ｏ５９ｄ养的ｐＨ为６０６２Ｈ１５共培养对柚木愈伤组织有一定的毒害作用，共培养时间超过１． — ．。ＥＡ０Ｏｄ，可导致愈伤组织和茎段外植体的严重死亡。不同无性系对ＥＡ０Ｈ１５侵染的敏感性不一样，选择适宜的无性系可显著提高转化效率。关键词：柚木；农杆菌；愈伤组织；遗传转化

ＡｒｂｃｅｉｍｕｆｃｎｔａｎＥｇｏａｔｕｔｍｅｅｉｓｓｒｉＨＡ１５ｒｅ０
ＺＮｉ — ａ，ＱＵＺｅｆｉＩａｇｙｎ，ＬＵＹｎＥＧＢｎｓｎＩｈｎｅ，Ｌｎ —ａｇＩｉｇｇｈＸｉ
（ｈｅｅｒｈＩｓｔｔｏｒｐｃｌｏｓｙ，ｕｎｚｏ，Ｇａｇｏｇ５０２ＣｉａＴｅＲｓａｃｔｕｅｆｏｉａｒｔＧａｇｈｕｕｎｄｎ１５０，ｈｎ）ｎｉＴＦｅｒ
柚木（ｅｏａｒｎｉＬｆ）Ｔｃｎｇａｄ．．是世界著名的热带珍贵用材树种，生长迅速且材质优良，广泛用于造船、ｔｓ桥梁、建筑、高级家具、高档车厢、雕刻、贴面板和镶贴板等。柚木也是我国热带地区的主要造林】和经济树种，我国９省６个县（）引种栽培，总面积约２万多ｈ】０多市有ｍ２２。Ｌ我国的柚木栽培经常受到土壤酸性、低温冻害、锈病、台风、野螟等问题的困扰Ｊ，必须加强常规育种，选育适合于各种立地条件的种源、家系和无性系。同时，在常规育种的基础上，开发柚木的转基因技术，研制抗寒、抗虫、抗病、速生的转基因新品种，对于我国柚木的推广栽培也具有重要意义。从叶盘、茎段、胚轴、子叶等外植体上诱导愈伤组织，转化愈伤组织，并再生出转基因植株一直以来是植物转基因的重要方法。本文优化了柚木茎段愈伤组织的农杆菌转化条件，为柚木转基因技术研究和转基因育种奠定基础。
维普资讯
福建林学院学报
２０，７４：４３４０７２（）３９— ５
第２７卷第４期
２００７年１０月
Ｊｕｎ１ｆｕｉｏｅｅｏｏｓｙｏｒａｏｊｎＣｌｇｆｒｔ．ＦａｌＦｅｒ
柚木愈伤组织的ＥＡ０Ｈ１５转化条件
ｅｃｅｃｆｔａａｒａｙｉｒｖｄｉｆｉｎｙｏｋｃｂｇｅｔｍｐｏｅｅｎｅｌ
Ｋｅｏｄ：ＴｃｎｒｎｉＡｒａｔｉｍｔｍｆｃｎ；ａｕ；ｅｅｃｔｎｆｒａｏ．ｙｗｒｓｅｔａｇａｄ；ｇｏｃｒｅｅｅｓｃｌｓｇｎｔａｓｍｔｎｏｓｂｅｕｕｉｌｉｒｏｉ
ＡｂｔａｔｈｅｅｃｔｎｆｒａｏｆｔａａｕｅｉｔｙＡｒｂｃｒｍｔｍｆｃｎｔｉＨＡ０ａｄｓｕｓｄｈｓｃ：ＴｅｇｎｔｒｓｍｔｎｏｋｃｌｓｍｄａｄｂｇｏａｔｉｕｅｅｅｓｓａＥ１５ｗｓｉｓ．Ｔｅｒｉａｏｉｅｌｅｅｕｉｒｎｃｅ
ｉｂｔｅ．ｏ０５，ｃ－ｕｔｒｍｅｉｏ９ｄｙｄｐｖｕｃ－ｕｔｒｄｕｉ６０ｔ．．Ｔｅｉｆｃｏｆｓｅｗｅｎ０４ｔ．ｏｃｌｅｔｓｔａｓａＨａｅｏｏｃｕｅｍｅｉｍ．ｏ６２ｈｎｅｔｎｏＥＨＡ１５ｉｕｉ７ｎｌｆｌｓｉ０ｓｔｘｃｔｘｌｎｓａｄｔｅｅｗｉｅｈｓｅｔａｅｏｘｌｎｓｉｔｅｃ－ｕｔｒｉｓｌｎｅｈ０ｄｙ．Ｄｆｒｎｌｎｓｈｖｏｉｏｅｐａｔｎｈｒｌｂｉｈｄａｈｒｔｅｐａｔｆｈｏｃｕｅｔｆｌｍｅｉｏｇｒｔａ１ａｓｎｉｅｅｔｃｏｅａｅ