Purification and Characterization of β-Glucosidase from a Newly Isolated Strain Tolypocladium c
摘要-昆明医科大学
姓名:武静出生年月：1983年1月基本情况：昆明医科大学，基础医学院，讲师，博士，硕导社会职务：无招生专业：生物化学与分子生物学研究领域：多肽和蛋白质的结构与功能研究培养研究生情况：无电子邮件：wujing_205@个人简介：受教育经历：2006.9-2012.1 中国科学院昆明动物研究所，动物模型与人类疾病机理重点实验室，多肽和蛋白质的结构与功能研究，硕士-博士；2001.9-2005.7 云南大学，生命科学学院，生物科学，学士。
研究工作经历2012.7-至今，昆明医科大学，基础医学院生物化学与分子生物学系。
主持或参加科研项目及人才计划项目情况：1. 项目类别：国家基金（地区基金）；项目批准号：81360253；项目名称：蚋唾液腺中免疫调节多肽的结构和功能研究；起止时间：2014.01-2017.12；资助经费：49万；项目状态：在研。
代表性论著期刊论文：1. Wei L, Che HL, Han Y, Lv J, Mu LX, Lv LC, Wu J*, Yang HL. The first anionic defensin from amphibians. Amino Acids. 2015 Mar 24. (共享通讯作者)2. Wei L, Mu L, Wang Y, Bian H, Li J, Lu Y, Han Y, Liu T, Lv J, Feng C, Wu J*, Yang HL. Purification and characterization of a novel defensin from the salivary glands of the black fly, Simulium bannaense. Parasit Vectors. 8(1):71, 2015. (共享通讯作者)3. Wei L, Huang C, Yang H, Li M, Yang J, Qiao X, Mu L, Xiong F, Wu J*, Xu W.A potent anti-inflammatory peptide from the salivary glands of horsefly. Parasit Vectors. 2015; 8:556.（通讯作者）4. Wu J, Mu L, Zhuang L, Han Y, Liu T, Li J, Yang Y, Yang H, Wei L. A cecropin-like antimicrobial peptide with anti-inflammatory activity from the black fly salivary glands. Parasit Vectors. 2015; 8:561.5. Wei L, Wu J, Liu H, Yang H, Rong M, Li D, Zhang P, Han J, Lai R.A mycobacteriophage- derived trehalose-6,6'-dimycolate-binding peptide containing both antimycobacterial and anti-inflammatory abilities. FASEB J. 27(8):3067-3077, 2013. (共享第一作者)6. Wu J, Liu H, Yang H, Yu H, You D, Ma Y, Ye H, Lai R. Proteomic analysis of skin defensive factors of tree frog Hyla simplex. J Proteome Res.10(9): 4230-4240.(2011)7. Wu J, Wang Yipeng, Liu H, Yang H, Ma D, Li J, Li D, Yu H, Lai R. Two immunoregulatory peptides with antioxidant activity from tick salivary glands. J Biol Chem. 285(22):16606-16613.（2010）Name: Jing WuDate of Birth: January, 1983E-mail: wujing_205@Research Interests：Structure-Function Relation of Bioactive Peptides and Proteins Education and Appointments：2012.7-Current, School of Basic Medical Sciences, Kunming Medical University, lecturer2006.9-2012.1, Kunming Institute of Zoology, Chinese Academy of Sciences, M.S. & Ph.D2001.9-2005.7, College of Life Science and Technology, Yunnan University, B.S. Selected Publications：1、Wei L, Che HL, Han Y, Lv J, Mu LX, Lv LC, Wu J*, Yang HL. The first anionic defensin from amphibians. Amino Acids. 2015 Mar 24. (Co-corresponding author)2、Wei L, Mu L, Wang Y, Bian H, Li J, Lu Y, Han Y, Liu T, Lv J, Feng C, Wu J*, Yang HL. Purification and characterization of a novel defensin from the salivary glands of the black fly, Simulium bannaense. Parasit Vectors. 8(1):71, 2015. (Co- corresponding author)3、Wei L, Wu J, Liu H, Yang H, Rong M, Li D, Zhang P, Han J, Lai R.A mycobacteriophage- derived trehalose-6,6'-dimycolate-binding peptide containing both antimycobacterial and anti-inflammatory abilities. FASEB J. 27(8):3067-3077.（2013）(Co-first author)4、Wu J, Liu H, Yang H, Yu H, You D, Ma Y, Ye H, Lai R. Proteomic analysis of skin defensive factors of tree frog Hyla simplex. J Proteome Res.10(9): 4230-4240.(2011)5、Wu J, Wang Y, Liu H, Yang H, Ma D, Li J, Li D, Yu H, Lai R. Two immunoregulatory peptides with antioxidant activity from tick salivary glands. J Biol Chem. 285(22):16606-16613.（2010）。
3-羟基异丁酸脱氢酶
Purification and Characterizationof 3-Hydroxyisobutyrate Dehydrogenase from Rabbit Liver*
(Received 87)
Paul M. Rougraff, Ralph PaxtonS, Martha Kuntz, DavidW. Crabb, and Robert A. Harris8 J. From the Departments of Biochemistry and Medicine, Indiana University School of Medicine, Indianqpolis,Indiana 46223 3-Hydroxyisobutyrate dehydrogenase (3-hydroxy- tural, kinetic, and regulatory features. In 1957, Robinson and 2-methyl propanoate: oxidoreductase, NAD+ EC Coon (1)reported on the characteristics of HIB dehydrogen1.1.1.31) was purified 1800-fold from rabbitliver by ase isolated from pig kidney. Pseudomonas aeruginosa (2) and detergent extraction, differential solubility in polyeth- Candida rugosa (3) enzymes have also been studied. Addiylene glycol and (NH4)%S04, column and chrotional characterization of mammalian HIB dehydrogenase is phenyl-Sepharose, matography on DEAE-Sephacel, of interest because 3-hydroxyisobutyrate increases in serum CM(carboxymethy1)-Sepharose,Affi-Gel Blue, and U1- and urine in ketoacidosis (4),and it is a good substrate for trogel AcA-34. The enzyme had a native Mr 74,000 hepatic gluconeogenesis (5). Furthermore, the exact pathways of and appeared to be a homodimer with subunit M, = for complete catabolism of the R- and S-isomersof 3-hydrox34,000. The enzyme was specific for NAD+. It oxidizedyisobutyrate remain uncertain for want of a description of the both S-3-hydroxyisobutyrate and R-3-hydroxyisobu- kinetics and substrate specificities of the enzymes involved tyrate, butthe kc.JKm was approximately 360-fold higher for the S-isomer. Steady state kinetic analysis (6). Recently, it was shown that HIB dehydrogenase is a major indicates an ordered Bi Bi reaction mechanism with contaminant in commercial preparations of RhodopseudomoNAD+ binding before 3-hydroxyisobutyrate. The enzyme catalyzed oxidation of S-3-hydroxyisobutyrate nas spheroides 3-hydroxybutyrate dehydrogenase (EC between pH 7.0 and 11.6 with optimal activity between 1.1.1.30; Ref. 7). Since the latter is used for enzymatic determination of serum ketone bodies @), serum and tissue 3pH 9.0 and 11.0. The enzyme apparently does not have hydroxybutyrate concentrations may have been significantly a metal ion requirement. Essential sulfhydryl groups may be present at both the 3-hydroxyisobutyrate and overestimated in numerous studies because of the contribution by 3-hydroxyisobutyrate. For this reason and because of NAD+binding sites since inhibitionbysulfhydryla binding agents w s differentially blocked by each sub- our limited understanding of the physiological regulation of strate. The enzymeis highly sensitive to product inhi- valine catabolism, it is important to determine 3-hydroxyisobition by NADH which may play an important physbutyrate concentrations in biological samples. Because HIB iological role in regulating the complete oxidation of dehydrogenase willprove useful for this purpose and for valine beyond the formation of 3-hydroxyisobutyrate. elucidating 3-hydroxyisobutyrate catabolism, we sought an inexpensive source and purification procedure for this enzyme. Rabbit liver is relatively rich in HIBdehydrogenase (1) and is commercially available in the frozen state. We report here the homogeneous purification and characterization of 3-Hydroxyisobutyrate dehydrogenase (3-hydroxy-2-meth- rabbit liver HIB dehydrogenase. ylpropanoate: NAD’ oxidoreductase, EC 1.1.1.31; HIB dehydrogenase)’ catalyzes an NAD’-dependent, reversible oxidaEXPERIMENTAL PROCEDURES’ tion of 3-hydroxyisobutyrate to methylmalonate semialdehyde. This mitochondrial enzyme, essential for valine catabolism, has not been well characterized with respect to strucRESULTS
01-博士研究生课-高级生物化学与分子生物学-专题-mRNA分子的选择性剪接-黄东阳
剪接体的剪接
• 大部分剪接是依赖剪接体（spliceosome),这类内 含子称为剪接体内含子（spliceosomal introns)。 • 剪接体：由一些特殊的RNA-蛋白质复合体——小 核内核糖核蛋白（small nuclear ribonucleoproteins，snRNP, 常发音为snurps) 与一些其它蛋白质构成。 • 每个snRNP含有一个100-200核苷酸长度的小核 内RNA（small nuclear RNAs, snRNAs)。 • 真核细胞细胞核内比较常见的剪接体snRNA有5 种，因富含U，故称U1,U2,U4, U5和U6。每种 snRNA至少与7个蛋白质亚单位（共约50种蛋白） 构成复合体snRNP ，这是一些从酵母到人类都高 度保守的核酸和蛋白质序列。
• 一个核糖2’-或3’羟基对RNA骨架中的磷 （phosphorus)发动亲核攻击（nucleophilic attack),原磷酸二酯键断开，形成新的磷酸二 酯键。 • Group I 剪接反应需要一个鸟嘌呤核苷即核 苷酸辅助因子（nucleotide cofactor )的3’羟 基作为剪接第一步的亲核基团 （nucleophile)，而不是作为能量。鸟苷3’羟 基与内含子的5’末端形成磷酸二酯键。露出 的外显子的3’羟基即可作为亲核基团去攻击 内含子的3’末端。最后导致内含子被精确切 除，外显子连接在一起。 • Group II内含子的反应形式与Goup I相似， 不同的是，第一步亲核攻击是由内含子当中 的adenosine (A)残基中的2’羟基担当并形成 一个分支的索套结构作为中间体。
• 原始转录本（primary transcript)：一个新合成 的RNA分子。真核生物的mRNA、tRNA分子和细 菌的tRNA分子的原始转录本受到广泛的修饰。 mRNA分子的原始转录本也称前体mRNA （precursor mRNA)，一般包含一个基因的全序 列，尽管编码多肽的序列可能是非连续的。 • 内含子（Intron）：一个转录本的分隔编码区域 的非编码序列。真核细胞基因的大部分都含有内 含子，但有少数例外，如：组蛋白基因(histone) 和酵母的一些基因。内含子长度一般在50-20,000 核苷酸之间。 • 外显子（exon):一个转录本的编码序列 （片段）。 真核生物的mRNA分子外显子的长度多在1000核 苷酸以下，以100-200核苷酸居多。 • 剪接（splicing)：将内含子从原始转录本移去并 将外显子连接在一起, 形成一个成熟的、功能性 RNA分子的过程。
汞离子对草鱼血清和肾脏溶菌酶活性的影响
汞离子对草鱼血清和肾脏溶菌酶活性的影响刘占才1,2,牛俊英1,孔祥会2,郭彦玲2,郭春丽2(1.焦作师范高等专科学校生物系,河南焦作454001;2.河南师范大学生命科学学院,河南新乡453007)摘要 测定暴露于不同汞离子质量浓度(0、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25m g/L)下草鱼血清和肾脏溶菌酶(LSZ)活性。
在试验剂量和时间范围内结果显示,汞对草鱼血清和肾脏LSZ活性有剂量—效应关系和H orm ensis现象。
在0.05和0.10m g/L浓度胁迫下,分别对血清和肾脏LSZ有激活作用;在高于0.05和0.15m g/L浓度胁迫下分别对血清和肾脏LSZ有显著的抑制作用(P<0.01)。
试验表明汞离子对草鱼具有显著的免疫毒性。
关键词 H g2+;草鱼;溶菌酶;血清;肾脏中图分类号 S917 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2007)09-02615-02E ffect of H g2+on Lysozym e A ctivity in Serum and K idney of G rass C arpLIU Zh an2cai et al (Departm ent of Biology,Jiaozu o T eachers C ollege,Jiaozu o,H enan454001)Abstract In this study,the biochem istry m eth ods were ad opted to determ ine the activity of Lys ozym e(LSZ)in serum and kidney of G rass carp (Ctenopharyngodon idella)ex posed at different H g2+concentrations for32week.T he results sh owed that w ith in a range of ex posure d osages and duration, there existed linearity relationship between d osage2response in term of H g2+on LSZ in serum and kidney.LSZ activity in serum was significantly increased at0.05m g/L(P<0.05)and in kidney significantly increased at0.10m g/L(P<0.01).W hile LSZ activity in serum was m arkedly descended at m ore than0.05m g/L(P<0.01),and in kidney m arkedly decreased at0.20m g/L and0.25m g/L(P<0.05and P<0.01).All the results indicated that H g2+possessed obviously immun o2toxicity to G rass carp.K ey w ords H g2+concentration;Lys ozym e;S erum;K idney;G rass carp 汞作为鱼类生长发育的非必需元素,是当前最危险的环境污染物之一。
学术期刊版式设计中应遵循的基本原则
学术期刊版式设计中应遵循的基本原则李凤琴(应用生态学报编辑部,辽宁沈阳110016)摘要结合学术期刊的版式特点,阐述了学术期刊版式设计应遵循的基本原则:内容与形式和谐统一;层次清晰,节奏分明;比例协调, 对称有度;静动相宜,虚实互补,强调了版式设计中应注重人本主义因素。
关键词学术期刊;版式设计;基本原则;人本主义中图分类号G232. 3 文献标识码 A 文章编号0517 - 6611 (2008) 13 - 05676 - 02Basic Principles for the F ormat Design of Academic JournalsLI F eng2q in ( Ed itorial Departmen t of C hinese Journal of A pplied Ec olog y ,S henyang Liaoning 110016)Abstract C omb ining with the forma t characteristics of acad emic jou rnal , the basic principles in the forma t desig n of academic jou rnal should b e follow ed as harmoniou s unity of content and form , clear layer and rhythm , harmoniou s proportion and mod erate symmetry , d ynamic and static balance , the recipro 2 cal o f false and true. I t was emphasized that attention should b e paid to the hu manistic factors in the forma t d esig n.K ey w ords Acad emic journal ; Forma t d esig n ; B asic principle ; Hu manism学术期刊作为一种信息和知识的载体,对现代科学研究中信息的传播和交流起着非常重要的作用[1 - 2 ] 。
核心原料：生物源胶原蛋白-RHC
生物源胶原蛋白(关键词：生物源、胶原蛋白、胶原) 〔备选名称：RHC、酵母胶原蛋白、发酵型胶原蛋白〕1. 生物源胶原蛋白1.1 生物源胶原蛋白定义胶原蛋白被称为“骨中之骨，肤中之肤”，是人体最重要的结构蛋白质，约占蛋白总量30%，广泛存在于人体的皮肤、骨骼、肌肉、软骨等组织中，起支撑、修复、保护等重要作用，在肌肤细胞的生长、更新过程中起着重要作用。
20岁时真皮层中胶原蛋白含量达70%以上，随着年龄增长，胶原蛋白不断流失，25岁进入流失高峰，40岁时已不足年轻时一半。
科学合理的补充胶原蛋白能稳固肌底支撑，提供肌肤营养，起到保湿锁水，滋润皮肤，延缓衰老，消除皱纹等成效。
生物源胶原蛋白，又称RHC〔Recombinant Human-source Collagen〕，是根据人胶原蛋白的结构特性，利用先进生物科学技术和国际领先发酵技术，通过微生物〔如活性酵母〕高密度发酵，绿色别离纯化工艺生产的一种高分子的生物源蛋白，与人胶原蛋白高度一致。
1.2 生物源胶原蛋白特点1.2.1 同质性生物源胶原蛋白是根据人胶原蛋白的特点进行结构设计，因此与人胶原蛋白结构高度一致，生物相容性好，亲和性和渗透性好，无排异反应，不易致敏。
1.2.2 无病毒隐患从动物组织提取的胶原蛋白存在携带病毒的隐患，直接限制了其应用领域。
生物源胶原蛋白是利用酵母高密度发酵获得，从根源上防止了病毒隐患，所使用的原料来源可控，成分简单，具有良好溯源性，不存在动物源杂质，弥补了传统胶原蛋白的缺陷，成为更安全的新型高科技胶原蛋白。
1.2.3 纯度高，分子量确切纯度可达99.5%以上，不含其它杂蛋白。
分子量与人胶原蛋白相近，犹如人体自身物质。
1.2.4 水溶性好通过生物发酵技术获得的胶原蛋白为水溶性蛋白，与各种性质的功能原料都能良好的复配，可加工性强，在下游应用和产品开发上更具优势。
1.2.5 无排异反应生物源胶原蛋白是利用生物科学技术，根据人胶原蛋白结构特性进行设计，摒弃了容易引起免疫排异反应的氨基酸残基，不存在动物胶原蛋白序列，其应用于人体时不会发生排异反应。
文献阅读(血红素铁)
血红素检测一般基于改良的碱性溶液方法，血红素转化为均一显色产物。
在400nm颜色同样品的血红素浓度直接线性相关，经优化的配方显著减少其他物质对检测结果的交叉反应并提供更高的灵敏度:血液和尿液血红素检测试剂盒（北京博尔诚公司）也可以用Elisa法:QuantiChrom Heme Assay Kit 血红素检测试剂盒（上海优维宁公司）血红素标准品可以购买sigma公司的产品。
如果长期用可以从猪血中分离提取氯化血红素。
方法可以参照马永征，宋宏新，李敏康（陕西科技大学）的报告：猪血的抗凝处理、红细胞和血浆的分离。
收集经检验合格的新鲜猪血，用0.38％的柠檬酸钠溶液与血液按体积比1：9混合抗凝，抗凝血在转速为4000r/min(离心力为1790g)下，离心10min，分别收集红细胞和血浆，用于提取氯化血红素和凝血酶。
研究了氯化血红素的提取条件。
优化后的条件为：(1)加入红细胞体积1/5的去离子水，实验条件下，超声波功率200W，破碎10min，得到血红蛋白溶解液。
(2)选用鞣酸法从超声波破碎红细胞得到的血红蛋白溶解液中提取氯化血红素。
向血红蛋白溶液中加入红细胞体积5倍的丙酮，用1mol/L 稀HCl调其pH值为2.2，抽滤，收集提取液。
向提取液中加入5％鞣酸，静置12h 后产生沉淀。
抽滤，收集沉淀，并对其用去离子水、50％的乙酸、95％乙醇、乙醚依次各洗涤二次，所得产品放入干燥器避光干燥，最后得到红紫色固体。
通过分析对比氯化血红素标准品和样品的红外光谱图和紫外/可见光谱图，确定所得产品为氯化血红素。
猪血中高纯度血红素的提取工艺(1) 【摘要】目的：确立最佳溶血方法，建立高产量、高纯度血红素提取工艺。
方法：新鲜抗凝猪血为原料，比较了水溶胀法、乙醇法以及超声波法对红细胞溶血效果，以盐酸丙酮配比，盐酸丙酮与溶血液体积比对猪血中血红素提取的影响。
结果：确立超声波法进行红细胞溶血，36.5%浓盐酸与丙酮的体积为1%的血红素抽提液，与溶血液的体积比为5∶1抽提10分钟，最终可从新鲜猪血中得到红素6.0 g/L，纯度达99.8%。
identification and characterization中文
identification and characterization中文"Identification and characterization" 的中文翻译为“鉴定和表征”。
在科学研究中，“identification” （鉴定）是指确定或确认一种
物质、物体、生物体等的身份、属性、存在或类型。
这包括使用各种技术和方法，如化学分析、光谱分析、DNA分析、图
像处理等来获得可靠的信息和证据，从而准确地识别和区分不同的物质、物体或生物体。
与此类似，”characterization”（表征）是指对一种物质、物体、生物体等进行全面和详细的描述和解析。
通过表征，科学家们可以研究和确定物质的可观测性质、结构、组成、形态、性能等，以及其在不同条件下的行为和反应。
表征方法包括光学显微镜、电子显微镜、X射线衍射、核磁共振、质谱分析等。
“Identification and characterization” 是科学研究中常用的两个重
要步骤，它们为我们提供了深入了解和研究各种物质、物体和生物体的工具和技术。
通过鉴定和表征，科学家们能够获得关于物质性质、结构和功能的全面信息，为进一步的研究和应用奠定基础。
酵母蔗糖酶的提取方法
酵母蔗糖酶的提取方法摘要：采用甲苯自溶法、冻融法、SDS抽提法3种方法从酵母中提取蔗糖酶，经质量分数50%的乙醇分级沉淀、MonoQ阴离子交换柱层析纯化后，制得高纯度的酵母蔗糖酶。
比较了上述3种提取方法并对该酶的部分性质进行了研究。
纯化的酶经等电聚焦测定，等电点为5.6，SDS-PAGE鉴定其相对分子质量为60kD。
以蔗糖为底物测得酵母蔗糖酶的表观米氏常数Km为0.013mol／L。
结果显示3种提取方法各有优劣，冻融法和SDS抽提法的提取效率远高于传统的甲苯自溶法。
其中SDS抽提法的效率最高，加之其操作简便，更适合于酵母蔗糖酶大规模的制备提取。
关键词：酵母；蔗糖酶；提取；纯化蔗糖酶(Sucrase，EC 3．2．1．26)又称转化酶(Invertase)。
可作用于B一1，2糖苷键，将蔗糖水解为D-葡萄糖和D-果糖。
由于果糖甜度高，约为蔗糖的1．36～1．60倍，在工业上具有较高的经济价值。
可用以转化蔗糖，增加甜味，制造人造蜂蜜，防止高浓度糖浆中的蔗糖析出，制造含果糖和巧克力的软心糖，还可为果葡糖浆的工业化生产提供新的方法。
目前关于酵母中蔗糖酶提取纯化方面的研究较多，以甲苯自溶法最为常见。
作者采用甲苯自溶法、冻融法、SDS抽提法3种不同的方法从酵母中提取蔗糖酶，将冻融法和SDS法提取的蔗糖酶进一步纯化，并对其基本性质进行了研究。
通过不同提取方法的比较，为酵母蔗糖酶在食品工业中的应用和蔗糖酶基因工程产品的下游技术开发，提供了实验依据。
1材料与方法1．1材料酵母，安琪酵母股份有限公司提供；MonoQ(10／10)阴离子交换层析柱、PhastGelIEF3-9胶，Amersham公司提供。
1．2主要化学试剂和仪器十二烷基硫酸钠(SDS)，Serva公司提供；等电点标准品，Amersham公司提供；其余试剂均为国产分析纯或生化试剂。
UV一2201型紫外可见光分光光度计，Shimadzu公司制造；Waters650型高级蛋白纯化系统，Waters公司制造；PhastSystem全自动快速水平电泳仪，Amersham公司制造；高速冷冻离心机，Hitachi公司制造；冷冻干燥器，Labconco公司制造；电泳仪，Bio-Rad公司制造；精密酸度计，Orion公司制造。
嗜水气单胞菌胞外蛋白酶ECPase54的纯化及特性分析
南京农业大学学报 1996,19(3):88～94 J ournal of N anj ing A gricultur al Univer sity嗜水气单胞菌胞外蛋白酶ECPase54的纯化及特性分析李焕荣 陈怀青 陆承平**(南京农业大学动物医学院,南京210095)摘要 嗜水气单胞菌(A h)J-1株的液体培养物上清在56℃或与乙二胺四乙酸(EDT A)或丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PM SF)作用,其胞外蛋白酶(ECP ase)的活力有不同程度的下降。
将酪蛋白掺入丙烯酰胺聚合后,加A h J-1上清作SD S-PA G E,37℃原位消化,染色,显示上清中存在至少5种分子量不同的蛋白酶。
A h J-1株的培养上清经硫酸铵沉淀、D EAE-纤维素离子交换层析和Sephadex G-200分子筛层析,获得一种纯化的蛋白酶。
不经2-巯基乙醇处理后,分子量约为54000,而经2-巯基乙醇处理的样品,分子量为35000,且酶活性丧失。
该酶对热稳定,EDT A可抑制其活性,PM SF对其无影响。
此酶属于热稳定金属蛋白酶(T SM P),建议命名为ECPase54。
它的最适pH为7.5,米氏常数(K m)为1.77m g/ml,对Ver o细胞有毒性,腹腔注射能致死小白鼠。
关键词 嗜水气单胞菌;胞外蛋白酶;纯化;特性分析中图分类号 S852.61PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF EXTRACELLULAR PROTEASEECPASE54FROM AEROMONAS HYDROPHILALi Huanrong,Chen Huaiqing and Lu Cheng ping(Colleg e of Veter inary M edicine,Nanjing Agric Univ,Nanjing210095) ABSTRACT A t lea st fiv e ex tr acellular pr oteases(ECPase)in A eromonas h y d rop hila str ain J-1culture su-per natant w er e assa yed by in situ pr oteo ly tic act ivity on SDS-PA G E containing0.1%casein.O ne of the ECPases fr om the supernatant w as pur ified by ammonium sulfate precipit atio n,a nion-ex chang e chr o-mato gr aphy on DEA E-cellulo se and Sephadex G-200g el filt ration chr o matog ra phy.SDS-P A GE of the pu-rified pr otease indicated that2-M E reduced sample migr ated at35000,w hile non-reduced sample migr ated at54000.T his pr ot ease was accor dingly desig nat ed ECPase54.T he activit y o f ECP ase54w as inhibited by EDT A,but not by P M SF o r by heating at56℃fo r30min.It sho w ed that the ECPase54w as a ther-mostable metallo pr o tease(T SM P).T he ECPase54w ith optimum pH7.5and K m1.45mg/ml po ssessed pro tyo ly tic and cy tot ox ic activ ities.It also elicit ed lethal t ox icit y to mice.Key words A er omonas hy dr op hila;ex tr acellular pro tease;purificatio n;character ization 嗜水气单胞菌可引致人和多种动物发病,在公共卫生上占有一定地位。