兽用疫苗保护剂和佐剂
04第四章 灭活剂、保护剂和免疫佐剂(兽医生物制品学)
温度越高，灭活越快，灭活作用随温度上升而加速。在低温时，温 度每上升10C，细菌死亡率可成倍增加。每升高10C，金属盐类的灭菌 作用增加2-5倍，石炭酸的杀菌作用增加5-8倍。但是，如果温度超过 40C 或更高，对微生物的抗原性将有不利影响。
(五)pH
在微酸性时灭活速度慢，抗原性保持较好，在碱性时灭活速度快，但 抗原性易受破坏。灭活初期损失较快，以后逐渐减慢，尤其甲醛溶液浓度 高时，在碱性溶液中抗原性损失更大。
附：
用乙烯亚胺衍生物对病毒进行灭活，当灭活结束时，应中止灭活并 除去其残存物，以免继续作用而损害疫苗的免疫原性。采用的方法是： 在乙烯亚胺衍生物灭活的病毒液中加入过量的硫代硫酸钠或亚硫酸钠， 不论是0.05%AEI或0.02%BEI，病毒液中硫代硫酸钠最终浓度均为2%， 以中断灭活剂灭活作用。
此外，-丙内脂（-propiolactone）也是一种良好的病毒灭活剂， 它是一种不稳定的液体，于37C 2h后能自行水解为无毒物质。
注意：这里指的是甲醛的浓度，并非福尔马林的浓度！
(二) 苯酚
酚类是以羟基取代苯环上的氢而形成一类化合物。苯酚(phenolum)， 又称石炭酸(acidum carbolicum)，为具有特殊气味的无色结晶，易潮解， 溶于水及有机溶剂，见光则颜色变深，置于空气中易被氧化，颜色也变深， 所以应避光保存。
三、影响灭活作用的因素
(一) 灭活剂的特异性
某些灭活剂只对一部分微生物有明显的灭活作用，而对另一些微生物 则效力很差。如酚类能抑制和杀灭大部分细菌的繁殖体，5%石炭酸溶液 于数小时内能杀死细菌的芽胞。阳离子表面活性剂抗菌谱广，效力快，对 组织无刺激性，能杀死多种革兰氏阳性菌和阴性菌，但对绿脓杆菌和细菌 芽胞作用弱。
生物制品的灭活剂、佐剂及保护剂
第四章兽医生物制品的灭活剂、佐剂及保护剂【知识目标】·熟悉兽医生物制品生产中常用的灭活剂、佐剂及保护剂；·理解灭活剂、佐剂及保护剂在兽医生物制品生产中的作用；·掌握·灭活剂、佐刺、保护剂的概念；·影响灭活剂作用的因素；·影响保护剂效能的因素。
·了解·佐剂的基本要求及类型；·保护剂的组成、效能。
【能力目标】·能进行白油佐剂的乳化。
第一节灭活与灭活剂为了提高兽医生物制品的安全性、防止散毒，许多疫苗通常通过灭活制成无毒力和无感染性的制品，灭活乃是兽医生物制品中的一项基本技术。
一、灭活及灭活剂的概念灭活(inanimation)，是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力及致病性，但尽可能不影响其免疫原性，用以制备灭活疫苗。
广义的灭活尚包含灭能(inactivation)，即使一些活性物质(微生物及其代谢产物、激素、酶、血清因子和抗体等)丧失活力的过程。
各种灭活疫苗、诊断抗原等的制造过程均属于灭活；血清经56℃加热30min处理，使补体丧失活性、破坏某些抑制因子的过程，以及破伤风毒素经甲醛处理后即失去致病性成为类毒素的过程均为灭能。
用来灭活的药物称为灭活剂，又称化学灭活剂。
化学灭活是制备灭活苗最重要的手段。
二、灭活的类型按其灭活作用的性质可将灭活分为物理灭活和化学灭活两类，尤以化学灭活法效果确实、方法简便而最为常用。
但不同的微生物、活性物物质采取灭活方法、灭活剂也不尽相同，因此，选择合适的灭活剂和灭活方法对研制灭活兽医生物制品十分重要。
(一)物理灭活一般常用热灭活、超声波灭活、紫外线灭活和γ射线灭活等方法杀死微生物或消除其毒性。
热灭活最早由Smith等研制猪霍乱灭活菌苗时提出，后来发现热灭括容易发生菌体蛋白质变性。
过去用加热灭活方法者较多。
该法简单易行，但加热杀死微生物的方法比较粗糙，容易造成菌体蛋白质变性，凶而免疫原性受到明显影响。
新型兽用疫苗佐剂的研发
新型兽用疫苗佐剂的研发随着养殖业的快速发展，动物养殖中的疫病问题也越来越突出，给养殖业带来了巨大的经济损失和风险。
为了有效控制动物疫病的传播，兽用疫苗成为了重要的手段。
兽用疫苗的研发面临着多种挑战，其中一项重要的挑战是疫苗佐剂的研发。
兽用疫苗佐剂是指将抗原与辅助物质混合，形成疫苗的主要组成部分。
它不仅可以增强疫苗的免疫原性，还可以提高疫苗的稳定性和安全性。
目前常用的兽用疫苗佐剂包括氢氧化铝、卵磷脂等。
这些佐剂在应对一些疫病时存在一定的局限性，因此需要不断进行研发，寻找更加优化的佐剂。
最近的研究表明，一种新型的兽用疫苗佐剂从植物中提取的植物体内超声振荡法提取到一个相对贫酸了原料中，保留了植物中活性物质的特点。
相比传统的佐剂，这种新型植物佐剂具有以下几个特点：这种新型植物佐剂可以更好地提高兽用疫苗的免疫原性。
通过植物的超声振荡提取法，可以将植物中的活性物质充分提取，并保留其活性。
这些活性物质能够与抗原发生有效的相互作用，增强免疫原性，从而提高疫苗的免疫效果。
这种新型植物佐剂具有较好的稳定性和安全性。
相比传统的佐剂，这种植物佐剂更加稳定，并且不容易发生剂量过大或过小的问题。
植物佐剂来源广泛，具有较好的安全性，不会对动物产生毒副作用。
这种新型植物佐剂具有较好的经济性。
植物佐剂可以通过简单的提取和制备过程获得，成本较低，适用于大规模生产，能够为兽用疫苗的推广和应用提供更好的经济支持。
尽管这种新型植物佐剂在兽用疫苗领域具有巨大的潜力，但仍然需要进一步的研发和实验验证。
在研发过程中，需要考虑不同类型疫苗的特点和需求，进行合理的配方设计和优化。
还需要开展临床试验，评估其在兽用疫苗中的效果和安全性。
新型兽用疫苗佐剂的研发对于提高兽用疫苗的效果和安全性具有重要意义。
通过采用植物体内超声振荡法提取的植物佐剂，可以提高疫苗的免疫原性、稳定性和经济性，为兽用疫苗的推广和应用提供更好的支持。
这一领域的深入研究将有助于推动兽用疫苗的发展和应用，保障养殖业的健康发展。
兽用疫苗保护剂与佐剂(57页)
• 50＜：运动粘度71112 / 3左右 *紫外吸收八25()-35()＜(). 1 %，紫外消光系数＜12X108； •单环芳烃 与双环芳烃含量低干0.5%，无多环芳烃； •小鼠腹腔注射0+51111或家免皮下注射2.01111^油，观察60山 表现正
常。
乳剂配方与乳化方法
(1) 剂在水屮法： 将乳化剂直接溶于水中，在激烈搅拌下将油加入，可直接生 成0州乳剂。若欲
得从/0型，可继续加入油，直到发生变型。该 法通常用匀浆器或胶体磨，高速搅
拌而得到较好的乳ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。
(2) 剂在油屮法：
将乳化剂溶于油相，将油相直接加入水相屮得如水相 直接加入油相，得到〜
/0型，如欲得0/〜，继续加入至变型。该 法制成的乳剂，一般均匀颗粒直径在 0.5^0!左右，比较稳定。
蔗糖76.626、磷酸二氢钾0.528,磷酸氢二钾1.648、谷氨酸钠0.»相、牛血 淸白蛋 白10心 加去离子水至1000111],混合溶解，过滤除菌、
免度佐剎
一、佐剂概念与作用机理
1.佐剂（新概念）：凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物 质称为佐剂。
佐剂（旧概念）：当一种物质先于抗原或与抗原混合或同 时注射于动物 体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗 原的特异性免疫应答，发挥 其辅佐作用的物质.
施汽吹沸熟化10111«»调节卩14 6.9土
6万皁升沸水屮，搅拌均 匀;倒入
0.1，继续熟化3111111»稳定卩?1
硫酸100kg,爆沸至棕 褐色，经30
6.9 十 0+1
〜后，加温 水，边加边搅拌约垔
总踅为 357；升：用前加水稀杼
至 100万品扑，温度约为80°0, 盛
兽用疫苗保护剂和佐剂讲解
一些常用的冷冻干燥保护剂
分类
保护剂
复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物
脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) 等
助于抗原性物质在胞内被加工，被 MHC 分子特异性的结合、保护、运输并递 呈给效应细胞。
②抗原寻的（ antigen targeting ）
指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包括 吸引巨噬细胞到达组织部位、活化吞噬细胞、促进抗原 与细胞受体的结合等有重要作用。
③免疫调节（immune modulation ） 是指任何可以修饰的免疫效应细
２、保护剂浓度：严格按照配方执行。 ３、保护剂配制方法：糖类不能用121℃高压灭菌处理。 ４、保护剂酸碱度（PH 值）：主要对M的影响。
三、常用的冻干保护剂（稳定剂） 明确不同种类微生物需要添加不同保护剂
（一）细菌的保护剂 ① 需氧或兼氧厌氧菌：５％蔗糖脱脂乳或５％蔗糖、 1.5％明胶； ② 厌氧性细菌：含1.5％谷氨酸钠的１％乳糖或10％脱 脂乳或7.5％葡糖血清。 注：脱脂乳：20％脱脂奶粉溶于水配制而成。
疫苗冻干保护剂组成
1. 营养液： ? 可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量水分； ? 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状， 增加溶解度 2. 赋形剂： ? 防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响 ? 使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度 3. 抗氧化剂： ? 抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性物质在冻干后贮存 期间的稳定性，如维生素C、维生素E和硫代硫酸钠等。
兽用疫苗佐剂的研究进展
兽用疫苗佐剂的研究进展随着人们对动物健康的关注不断增加，兽用疫苗的研究和发展也成为一个热门话题。
疫苗佐剂作为一种重要的辅助物质，在提高兽用疫苗效果和安全性方面发挥着重要作用。
在过去几年里，疫苗佐剂的研究也取得了一些重要的进展。
疫苗佐剂是一种需要与疫苗同时使用的物质，主要用于增强疫苗的免疫原性和免疫应答的持久性。
疫苗佐剂可以提高疫苗接种后免疫细胞的活性，增加免疫细胞的吞噬能力和产生更多的抗体。
疫苗佐剂可以帮助疫苗在免疫系统中更好地传递和被识别，从而提高疫苗的有效性。
目前，有多种疫苗佐剂正在研究和开发中。
其中一种被广泛研究的是佐剂免疫助剂（adjuvant），这种佐剂被证明能够提高免疫细胞的活性和动物对疫苗的免疫反应。
另外，一些新型的纳米颗粒佐剂也引起了研究人员的关注。
这些纳米颗粒佐剂具有较小的粒径和较大的表面积，可以更好地与免疫系统中的细胞发生作用，从而提高疫苗的免疫原性。
除此之外，一些生物活性佐剂，如细胞因子和抗原传送系统也被广泛研究。
近年来，针对兽用疫苗佐剂的研究也取得了一些进展。
研究表明，疫苗佐剂可以显著提高动物对疫苗的免疫应答。
举例来说，研究人员在家禽疫苗中使用了一种新型的纳米颗粒佐剂，发现其可以显著提高禽流感疫苗的免疫原性和免疫效果。
类似地，在比熊犬狂犬疫苗研究中，研究人员发现使用一种特定的疫苗佐剂可以显著增加疫苗的保护力。
这些研究结果为兽用疫苗佐剂的应用提供了新的思路和方向。
此外，疫苗佐剂的研究也面临一些挑战和难题。
首先，佐剂的安全性是一个重要的问题。
尽管疫苗佐剂可以提高疫苗的免疫效果，但一些佐剂可能会导致副作用或不良反应。
因此，在研究和开发新型疫苗佐剂时，需要充分考虑其安全性和毒副作用。
其次，疫苗佐剂的制备和生产也是一个挑战。
不同的疫苗佐剂可能需要不同的制备方法和生产流程，这对于工业化生产来说是一个难题。
综上所述，兽用疫苗佐剂的研究正在不断取得进展。
新型的佐剂免疫助剂、纳米颗粒佐剂以及生物活性佐剂等新技术被广泛研究，并且已经证明可以提高兽用疫苗的效果和安全性。
新型兽用疫苗佐剂的研发
新型兽用疫苗佐剂的研发随着农业的不断发展，畜禽养殖已经成为了许多家庭和农场的主要经济来源。
畜禽养殖中免疫疾病的发生严重影响着养殖业的发展。
为了防止和控制疾病的传播，兽用疫苗被广泛应用于畜禽生产中。
由于兽用疫苗的佐剂不尽完善，使得疫苗的免疫效果不尽如人意。
开发新型的兽用疫苗佐剂成为了当前研究的一个热点问题。
兽用疫苗佐剂是指能够增强疫苗免疫效果的辅助药物。
在疫苗接种过程中，佐剂是非常重要的，能够有效地改善免疫原的稳定性和持久性，提高疫苗的保护效果。
在过去的研究中，常用的兽用疫苗佐剂主要是铝盐类和油佐剂，它们虽然能够提高疫苗的免疫效果，但在生产中存在一定的局限性，如刺激性大、免疫原不能充分释放等问题。
科研人员对兽用疫苗佐剂进行了深入的研究，希望能够开发出更加有效的兽用疫苗佐剂，以提高畜禽免疫力，减少疾病的发生。
近年来，随着生物技术和纳米技术的快速发展，新型的兽用疫苗佐剂也在不断涌现。
微生物多糖、微胶囊技术、脂质体等，都被应用于兽用疫苗佐剂的研发中。
这些新型佐剂在提高疫苗免疫效果的还具有较低的毒性和刺激性，因此备受科研人员的关注。
微胶囊技术也被广泛应用于兽用疫苗佐剂的研发中。
微胶囊技术能够将疫苗包裹在微小的胶囊中，延缓疫苗在体内的释放速度，提高疫苗的稳定性和持久性。
微胶囊技术还可以改善疫苗的生物利用度，减少疫苗在体内的降解和排泄，从而提高疫苗的免疫效果。
除了上述的佐剂，还有许多其他新型的兽用疫苗佐剂正在不断涌现。
这些新型佐剂在提高疫苗的免疫效果的也在一定程度上解决了传统佐剂的局限性和不足之处。
对于这些新型佐剂的研究和开发，还存在许多问题需要进一步解决。
新型佐剂的安全性和毒性是研究人员关注的重点。
虽然新型佐剂在提高疫苗免疫效果的具有较低的刺激性和毒性，但其长期安全性尚未得到充分验证。
科研人员需要进一步对新型佐剂的毒性和安全性进行研究，确保其在使用过程中不会对动物的健康产生不良影响。
研究人员还需要不断改进新型佐剂的制备工艺，提高其产品的纯度和稳定性，以确保其在生产过程中的质量和稳定性。
第三章 灭活剂 保护剂 与免疫佐剂
真菌以及革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌对各类灭活剂的敏
感性并不完全相同；细菌的繁殖体及其芽孢对化学药物的 抵抗力不同；生长期和静止期的细菌对灭活剂的敏感程度 也有一定差别。此外，细菌的浓度也会影响灭活的效果。
灭活剂浓度：以甲醛为例，甲醛浓度越高，灭活脱毒越
快，但抗原损失量亦较大。有时可以将甲醛溶液分数次加 入，加量由小至大，PH值由低到高，温度由室温开始， 逐步提高到允许的最高温度，这样对于保护抗原的免疫原 性有一定好处。
灭活温度：通常情况下，灭活作用随温度上升而加速。
但如果温度超过40℃或更高，对微生物的抗原性将有不利 影响。
灭活时间：灭活时间与灭活剂浓度和作用温度密切相关。
赋形剂：主要起骨架作用，防止低分子物质的碳化和氧
化，保护活性物质不受加热的影响，使冻干制品形成多孔 性、疏松的海绵状结构，从而使溶解度增加，如蔗糖、山 梨醇、乳糖、PVP(聚乙烯吡咯啶酮）葡萄糖等。常为高 分子物质。
抗氧化剂：可抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性
物质在冻干后储存期间的稳定性，如维生素C、维生素E 和硫代硫酸钠等。
2、非渗透剂，如聚乙烯吡咯啶酮和蛋白质等，能防止细 胞等生物活性物质由外向内渗透溶质。
非渗透性保护剂按相对分子质量大小可分为：
高分子物质和低分子物质
按化学性质，可分为：
复合物、糖类、盐类、醇类、酸类和聚合物
一、冻干保护剂的组成与作用
营养液：可使因冻干而受损伤的细胞修复，对水分子其
缓解作用，并能使冻干生物制品仍含有一定量的水分；还 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状， 增加溶解度，如脱脂乳、蛋白胨、氨基酸和糖类等，常为 低分子有机物。
一般随着灭活剂浓度及作用温度升高，灭火时间则缩短。 在生物制品生产中，应以保证制品安全和效力，采用低灭 活剂剂量、低作用温度和短时间处理为最佳。
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兽医生物制品常用的保护剂
1．5%蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂
蔗糖（或乳糖） 5g，加脱脂乳至 100ml，充分溶解后，110~116℃高压灭菌 30~40 min。
2．明胶蔗糖保护剂
明胶 2%~3%（g/m1）、蔗糖5%（g/m1）、硫脲 1%~2%（g/m1）。先 将 12%~18%明胶液、 30%蔗糖液和 6%~12%硫脲液加热溶解， 116℃高压 灭菌30~40min；
1. 营养液： • 可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量水分；
• 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状，
增加溶解度 2. 赋形剂： • 防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响 • 使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度 3. 抗氧化剂： • 抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性物质在冻干后贮存
7．脂质分子类佐剂：脂多糖、Vit A和Vit E等脂溶性维生素
8．其他：霍乱毒素（CT）、百日咳毒素（PT）和破伤风类 毒素（TT）等；脂磷壁酸（LTA）；维生素B12等。
氢氧化铝胶 (铝胶）
合成方法:
（1）用铝粉加烧碱合成法
2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3· 18H2O
兽用疫苗冻干保护剂 和佐剂
冻干保护剂（稳定剂）
保护剂：又称稳定剂（stabilizer） ，是指一类能防止生 物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。（指对疫 苗生产、血清制备等） 保护剂用途（不同用途加不同保护剂, 主要针对活的微生 物或细胞） ① 菌种或毒种保存：常用甘油作保护剂 ② 细胞株保存：常用二甲基亚砜(DMSO) DMSO:二甲基亚砜，一种细胞的保护剂 ③ 疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二甲基亚 砜）和蔗糖等（不同国家有不同配方） ④ 干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖
油乳剂检验
（1）粘度测定：流出法、Saybolt粘度计法。
吸管内口直径为1.2mm，室温下吸满lml乳剂，垂直放出0.4ml所 需时间作为粘度单位。
以 2-6 S为合格，不得多于10-15 S。 （2）乳剂稳定性测定： ① 加速老化法：疫苗于37℃贮存10-30d不破乳。
②抗原寻的（antigen targeting） 指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包括 吸引巨噬细胞到达组织部位、活化吞噬细胞、促进抗原 与细胞受体的结合等有重要作用。
③免疫调节（immune modulation） 是指任何可以修饰的免疫效应细
胞对抗原或表位进行加工的机制。通过这种机制，可以改变特异性免疫应答 的本质或强度。T细胞有Th1和Th2两个亚类。同一抗原和不同佐剂一起使用 能够引起不同的免疫反应。因此，通过筛选特定的佐剂，可以达到诱导正确 的免疫应答的目的。
A12(SO4)3· 18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O
（2）用明矾加碳酸钠合成法
2 KAl(SO4)2+3 Na2CO3+3H2O→2Al(OH)3+3Na2SO4+3CO2↑
（3）用三氯化铝与氢氧化钠合成
A1C13+3NaOH→Al(OH)3↓+3NaCl
用铝粉加烧碱合成法： 2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3· 18H2O A12(SO4)3· 18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O
分类 保 护 剂
复合物
糖类 盐类
脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等
蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等
醇类
酸类 聚合物
山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等
柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等
疫苗冻干保护剂组成
• 注意:佐剂和免疫增强剂的关系? • 有时佐剂也是免疫增强剂.
作用特点：
① 明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生
特异性免疫应答。 ② 用最少的抗原和最少的接种次数，产生足 够的免疫应答。
免疫佐剂作用机理
作用方式
① 改变正常免疫机能，吸引大量巨噬细胞以吞噬抗原； ② 改变抗原的构型，使抗原物质降解，并加强其免疫原性； ③ 延长抗原在组织内的贮存时间，使抗原缓慢降解和缓释， 并发挥免疫系统的细胞间协同作用（巨噬细胞与T细胞， T细胞与B细胞）。
~2%硬脂酸铝，经高压灭菌后备用，注射前将配好的油佐剂与
抗原水相1：1混合，强力振摇，可配制成性状良好的乳剂疫苗。
大量生产乳剂疫苗:
• 油相: 94％白油、6％司本-80、1%~2％硬脂酸铝，灭菌即可；
• 水相：抗原液加2％~4ห้องสมุดไป่ตู้吐温-80
• 乳化：将油相与水相按3：1~2：1比例配制，先缓速混合，再 通过胶体磨充分乳化，可获得稳定的油包水乳剂苗。 或者将粘稠的W/O乳剂疫苗，再加2％吐温-80生理盐 水，通过搅拌或胶体磨乳化，可制成双相乳剂疫苗。
乳剂配方与乳化方法
（1）剂在水中法：
将乳化剂直接溶于水中，在激烈搅拌下将油加入，可直接生
成O/W乳剂。若欲得W/O型，可继续加入油，直到发生变型。该
法通常用匀浆器或胶体磨，高速搅拌而得到较好的乳剂。
（2）剂在油中法： 将乳化剂溶于油相，将油相直接加入水相中得 O/W ，如水相 直接加入油相，得到W/O型，如欲得O/W，继续加入至变型。该 法制成的乳剂，一般均匀颗粒直径在0.5µ m左右，比较稳定。
取氢氧化铝干粉 50 ～ 55kg ， 加入6万毫升沸水中，搅拌均 匀;倒入硫酸100kg，爆沸至棕 褐色，经30～60min后，加温 水，边加边搅拌约至总量为 35 万毫升；用前加水稀释至 100万毫升，温度约为80℃， 盛装在一个缸内
两液等量逐渐流入另一耐酸搪瓷缸 内，蒸汽吹沸熟化10min，调节pH 6.9土0.1，继续熟化3min，稳定pH 6.9土0.1
保护剂（protector）的分类
分类： •（根据其作用机理） ——渗透剂：如二甲基亚砜（DMSO）、甘油和蔗糖等 ——非渗透剂：如聚乙烯吡咯啶酮(PVP)和蛋白质等 •（根据其分子量大小）
——高分子物质、低分子物质。
•（按其化学性质） ——复合物、糖类、盐类、醇类、酸类和聚合物
一些常用的冷冻干燥保护剂
免疫实验动物用的佐剂配制:
(1)弗氏佐剂：矿物油75%~85％，乳化剂15％~25%，混合后经 除菌过滤而成为 FIA ；如向其中加入 0.5mg／ m1 死结核杆菌即 为FCA。使用时，将含抗原的水相，与上述任一佐剂等量混合， 用力振摇即可成为均匀的乳剂。
(2) 白油佐剂：9份油和 1份司本-80混合后加 2％吐温-80和1％
佐剂的分类
1. 按佐剂物理性质 • • 颗粒型佐剂 非颗粒型佐剂
2. 按佐剂的生物学性质（即Ballanti分类法）
•
•
微生物及其组分
非微生物物质
3. 按佐剂在体内存留的时间 • • 贮存型佐剂（depot type adjuvant） 非贮存型（non-depot type adjuvant）
（一）颗粒性佐剂
静置沉淀，弃上清后加入约5倍量软 化水，搅拌洗涤、弃上清，如此3～ 5次，检查至硫酸盐合格为止。
另一缸盛80kg烧碱，加水至 100万毫升，加温至75℃
用铜纱筛滤过，用布袋脱水过夜，收 存于容器内，可约得600kg铝胶。
注意事项
① 氢氧化铝吸附力较强，所以要用软化水或去离子水洗涤。 ② 氢氧化铝胶为两性化合物，过酸或过碱都会失去胶态。故要 掌握好化合时的pH值。
3．SPGA保护剂
蔗糖 76.62g、磷酸二氢钾0.52g、磷酸氢二钾1.64g、谷氨酸钠0.83g、牛血 清白蛋白10g、加去离子水至1000ml，混合溶解，过滤除菌。
免疫佐剂
一、佐剂概念与作用机理
1. 佐剂（新概念）：凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物 质称为佐剂。 佐剂（旧概念）：当一种物质先于抗原或与抗原混合或同 时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗 原的特异性免疫应答,发挥其辅佐作用的物质. 以前作为佐剂使用时没有免疫原性，但现在有所改变，如 IL-2是佐剂和IL-8一类细胞因子佐剂却不一样, 具有免疫调 节和免疫增强作用,单独使用时却具有免疫原性。
作用机理
① 抗原递呈（antigen presentation） ② 抗原寻的（antigen targeting）
③ 免疫调节（immune modulation）
①抗原递呈： 指抗原分子递呈给T细胞的方法。佐剂与疫苗联合使用，有
助于抗原性物质在胞内被加工，被MHC分子特异性的结合、保护、运输并递 呈给效应细胞。
期间的稳定性，如维生素C、维生素E和硫代硫酸钠等。
冻干保护剂作用机制
① 防止活性物质失去结构水及阻止结构水形成结晶而导致生 物活性物质的损伤； ② 降低细胞内外的渗透压差、防止细胞内结构水结晶，以保 持细胞的活力； ③ 保护或提供细胞复苏所需的营养物质，有利于生活力的复 苏和迅速修复自身。
二、影响保护剂效能的因素 1、保护剂种类: 根据微生物种类或者用途来添加不同种 类保护剂。 ２、保护剂浓度：严格按照配方执行。 ３、保护剂配制方法：糖类不能用121℃高压灭菌处理。
1．盐类佐剂 氢氧化铝胶、明矾、磷酸铝等。
2．油水乳剂佐剂
弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant, FCA）、弗 氏不完全佐剂（ FIA）和矿物油白油佐剂。 3．免疫刺激复合物佐剂（ISCOM） 4．蜂胶佐剂（propolis）
5．脂质体佐剂（liposomes）。
6．其他：MF59佐剂、微囊化佐剂（micro-encapsulation)、 硬脂酰酪氨酸佐剂和γ －菊粉等。