兽用疫苗保护剂和佐剂讲解

一些常用的冷冻干燥保护剂
分类
保护剂
复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物
脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) 等
? 注意:佐剂和免疫增强剂的关系 ?
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有时佐剂也是免疫增强剂 .
作用特点：
① 明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生 特异性免疫应答。
② 用最少的抗原和最少的接种次数，产生足 够的免疫应答。
免疫佐剂作用机理
作用方式
① 改变正常免疫机能，吸引大量巨噬细胞以吞噬抗原； ② 改变抗原的构型，使抗原物质降解，并加强其免疫原性； ③ 延长抗原在组织内的贮存时间，使抗原缓慢降解和缓释，
疫苗冻干保护剂组成
1. 营养液： ? 可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量水分； ? 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状， 增加溶解度 2. 赋形剂： ? 防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响 ? 使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度 3. 抗氧化剂： ? 抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性物质在冻干后贮存 期间的稳定性，如维生素C、维生素E和硫代硫酸钠等。
兽用疫苗冻干保护剂 和佐剂
冻干保护剂（稳定剂）
保护剂：又称稳定剂（stabilizer ） ，是指一类能防止生 物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。（指对疫 苗生产、血清制备等） 保护剂用途（不同用途加不同保护剂, 主要针对活的微生 物或细胞）
① 菌种或毒种保存：常用甘油作保护剂 ② 细胞株保存：常用二甲基亚砜(DMSO)
DMSO:二甲基亚砜，一种细胞的保护剂 ③ 疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二甲基亚
砜）和蔗糖等（不同国家有不同配方） ④ 干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖
保护剂 （protector ）的分类
分类： ?（根据其作用机理） ——渗透剂：如二甲基亚砜（DMSO ）、甘油和蔗糖等 ——非渗透剂：如聚乙烯吡咯啶酮(PVP) 和蛋白质等 ?（根据其分子量大小） ——高分子物质、低分子物质。 ?（按其化学性质） ——复合物、糖类、盐类、醇类、酸类和聚合物
2．明胶蔗糖保护剂
明胶 2%~3% （g/m1）、蔗糖5% （g/m1）、硫脲 1%~2% （g/m1）。先 将12%~18% 明胶液、 30% 蔗糖液和 6%~12% 硫脲液加热溶解， 116℃高压 灭菌30~40min ；
3．SPGA 保护剂
蔗糖 76.62g、磷酸二氢钾0.52g、磷酸氢二钾1.64g、谷氨酸钠0.83g、牛血 清白蛋白10g、加去离子水至1000ml，混合溶Baidu Nhomakorabea，过滤除菌。
２、保护剂浓度：严格按照配方执行。 ３、保护剂配制方法：糖类不能用121℃高压灭菌处理。 ４、保护剂酸碱度（PH 值）：主要对M的影响。
三、常用的冻干保护剂（稳定剂） 明确不同种类微生物需要添加不同保护剂
（一）细菌的保护剂 ① 需氧或兼氧厌氧菌：５％蔗糖脱脂乳或５％蔗糖、 1.5％明胶； ② 厌氧性细菌：含1.5％谷氨酸钠的１％乳糖或10％脱 脂乳或7.5％葡糖血清。 注：脱脂乳：20％脱脂奶粉溶于水配制而成。
助于抗原性物质在胞内被加工，被 MHC 分子特异性的结合、保护、运输并递 呈给效应细胞。
②抗原寻的（ antigen targeting ）
指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包括 吸引巨噬细胞到达组织部位、活化吞噬细胞、促进抗原 与细胞受体的结合等有重要作用。
③免疫调节（immune modulation ） 是指任何可以修饰的免疫效应细
胞对抗原或表位进行加工的机制。通过这种机制，可以改变特异性免疫应答 的本质或强度。 T细胞有Th1 和Th2 两个亚类。同一抗原和不同佐剂一起使用 能够引起不同的免疫反应。因此，通过筛选特定的佐剂，可以达到诱导正确
的免疫应答的目的。
佐剂的分类
1. 按佐剂物理性质 ? 颗粒型佐剂 ? 非颗粒型佐剂 2. 按佐剂的生物学性质（即Ballanti 分类法） ? 微生物及其组分 ? 非微生物物质 3. 按佐剂在体内存留的时间 ? 贮存型佐剂（depot type adjuvant ） ? 非贮存型（non-depot type adjuvant ）
免疫佐剂
一、佐剂概念与作用机理
1. 佐剂（新概念）：凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物 质称为佐剂。
佐剂（旧概念）：当一种物质先于抗原或与抗原混合或同 时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗 原的特异性免疫应答,发挥其辅佐作用的物质.
以前作为佐剂使用时没有免疫原性，但现在有所改变，如 IL-2是佐剂和IL-8一类细胞因子佐剂却不一样, 具有免疫调 节和免疫增强作用,单独使用时却具有免疫原性。
（二）病毒的保护剂 ① 5% 蔗糖 脱脂乳； ② 马立克814活细胞疫苗:保存液氮.稳定剂为10% 二 甲基亚砜和50% 犊牛血清的199液。 注意: 微生物保护剂缓冲液的组成比例，不同厂家有 不同的配方。
兽医生物制品常用的保护剂
1．5% 蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂
蔗糖（或乳糖） 5g，加脱脂乳至 100ml，充分溶解后， 110~116℃高压灭菌 30~40 min 。
冻干保护剂作用机制
① 防止活性物质失去结构水及阻止结构水形成结晶而导致生 物活性物质的损伤；
② 降低细胞内外的渗透压差、防止细胞内结构水结晶，以保 持细胞的活力；
③ 保护或提供细胞复苏所需的营养物质，有利于生活力的复 苏和迅速修复自身。
二、影响保护剂效能的因素
1、保护剂种类: 根据微生物种类或者用途来添加不同种 类保护剂。
并发挥免疫系统的细胞间协同作用（巨噬细胞与 T细胞， T细胞与B细胞）。
作用机理
① 抗原递呈（ antigen presentation ） ② 抗原寻的（ antigen targeting ） ③ 免疫调节（ immune modulation ）
①抗原递呈： 指抗原分子递呈给T细胞的方法。佐剂与疫苗联合使用，有